兔肝脫氧核糖核酸的提取

1、現(xiàn)在學習的是第一頁，共13頁w掌握從動物組織中提取DNA的原理和方法?，F(xiàn)在學習的是第二頁，共13頁現(xiàn)在學習的是第三頁，共13頁(一)脫氧核糖核蛋白的制備w10ml刻度離心管取8ml兔肝勻漿，3000轉(zhuǎn)10分鐘；（取試管標號，加試劑）w 棄上清后，沉淀 + 0.15M氯化鈉-0.10M乙二胺四乙酸鈉8ml ，攪勻后3000轉(zhuǎn)10分鐘。棄上清所得即脫氧核糖核蛋白。（加DNA標準液和蒸餾水，二苯胺試劑，加二苯胺試劑的試管不能放在試管架上）現(xiàn)在學習的是第四頁，共13頁w 沉淀 + 0.15M氯化鈉-0.10M乙二胺四乙酸鈉（終體積為4ml）；w 攪勻后 ，逐滴 + 0.5ml 15SDS，攪拌3-5m

2、in ，溶液粘稠略帶透明。（DNA與蛋白分離）w + 1.0ml5M NaCl（終濃度1M），輕攪3-5min；w + 等體積氯仿-異丙醇，加塞（塞緊防漏）振蕩3-5min， 3000轉(zhuǎn)10分鐘； （實驗二的試管放沸水?。┈F(xiàn)在學習的是第五頁，共13頁w 吸管取上清于一10ml的刻度離心管中，+ 等體積氯仿-異丙醇，加塞（塞緊防漏）振蕩3-5min，3500轉(zhuǎn)15分鐘；（取出實驗二的試管室溫放冷并595nm比色，注意添水到水浴鍋中）w 吸管取上清于一10ml的刻度離心管中，+ 兩倍體積的95的乙醇抽提；w DNA析出，棄乙醇后則得到白色DNA粗制品。*進行實驗二的第二步現(xiàn)在學習的是第六頁，共13

3、頁現(xiàn)在學習的是第七頁，共13頁w熟悉751型分光光度計的使用。w掌握DNA純度測定的原理和方法現(xiàn)在學習的是第八頁，共13頁w DNA在的-脫氧核糖在酸性條件下轉(zhuǎn)變成-羥基-r酮基戊醛，與二苯胺共熱后形成藍色化合物，該化合物在595nm處最大吸收。w 每ml含2040ug范圍內(nèi)光密度與DNA的濃度成正比。反應液中加入少量乙醛，可提高反應的靈敏度?，F(xiàn)在學習的是第九頁，共13頁w 一、 DNA標準曲線的制定 0號管調(diào)0，以A為縱坐標，DNA含量（ug/ml)為橫坐標，繪制標準曲線。w 二、樣品含量測定 沸水浴10min，冷卻后595nm比色，并從標準曲線上讀數(shù)。 U B所提DNA 1ml + 1ml NaOH H2O 2ml 二苯胺4ml二苯胺4ml現(xiàn)在學習的是第十頁，共13頁w 原理：核酸在220-320nm處呈特征性吸收，260nm處有最大吸收，測260/280可得知核酸的大致純度。 260/280 1.6 1.8 表示純 1.8 含RNA 1.6 蛋白含量高現(xiàn)在學習的是第十一頁，共13頁w 有兩個光源：紫外和可見光w 使用石