制作石蠟切片的常見問題及處理1(精)

1、制作石蠟切片的常見問題及處理石蠟切片是組織學和病理學的主要實驗方法,也是臨床中觀察病理變化的重要手段,為教學、科研和臨床診斷做出了卓越貢獻。實踐發(fā)現(xiàn),切片制作過程中常常由于多方面的原因遇到困難,甚至導致制片失敗。本文將對制作石蠟切片過程中的常見問題和處理方法作重點介紹。1 切片不成帶1常見原因 :切片刀不夠鋒利。切片刀與蠟塊的角度不當。蠟塊四周留蠟邊太少。石蠟硬度過大 ,黏度不夠。解決方法 :重新磨刀。調(diào)整切片刀的角度。可重新包埋或?qū)⑾瀴K四周熔化,再放入包埋框中補蠟,修理蠟塊時組織塊周圍保留的石蠟以2mm左右為宜。蠟塊過硬可適當加些蜂蠟,或更換熔點較低的石蠟重新包埋。將蠟塊放入冰箱內(nèi)延長冰凍時

2、間,然后迅速切片。2 切片彎曲常見原因:組織成分及形狀不規(guī)則。蠟塊上下或左右兩邊不平行。蠟塊與切片刀刀口不平行。切片刀各處的鋒利程度不一致。解決方法:修整組織塊時,注意修切整齊,切成方形或矩形,盡量不要切成三角形2將蠟塊四邊反復修平對稱。調(diào)節(jié)蠟塊夾持器,使其與切片刀平行。移動切片刀,更換刀口位置。使用負離子發(fā)生器直吹切片處可防切片卷曲3。3 切片上出現(xiàn)裂紋常見原因:切片刀上有小缺口,或刀口不平整。刀口上粘附有細微纖維（如毛發(fā)、紙或布絲等物。組織過硬變脆（如凝血塊、膠凍樣物質(zhì)、囊腺瘤、甲狀腺、腺瘤等4 。組織中可能含有較硬之物質(zhì),如固定液之結(jié)晶石灰質(zhì)。裱片的水溫太高。包埋時石蠟凍結(jié)太慢。解決方法

3、:切片刀某處有缺口,可調(diào)換刀口部位或重新磨刀。刀口上缺口過多且不平整,可先將刀鋒垂直在磨刀石上輕輕磨數(shù)次,然后按常規(guī)磨刀。擦凈刀口。適當減少脫水、透明、浸蠟時間。組織中硬性物質(zhì)太多,則不宜用。裱片的水溫以45左右為宜。包埋時待蠟塊周圍凝結(jié)一層,即放入冷水中。4 切片厚薄不均常見原因:脫水、透明、浸蠟過度、時間過長、溫度過高4。蠟塊太大,過硬,轉(zhuǎn)動時刀刃受震動。切片微動部分失靈,齒輪跳格。解決方法:調(diào)整脫水、透明、浸蠟時間和溫度。如蠟塊過大,以后取材時注意取材的大小。蠟塊組織過硬,可返回水中浸泡,再重新脫水和包埋。修理切片機失靈的部分,調(diào)整螺旋,加機油潤滑零件 ,必要時需請專業(yè)技術人員調(diào)整切片機

4、。5 切片皺褶常見原因:石蠟太軟或室溫過高。切片刀上粘有殘余的石蠟,刀口不干凈。組織浸蠟時間不夠,或脫水、透明不夠。切片刀不鋒利。裱片的水溫過高或過低。解決方法:可將蠟塊放入冰箱中冰凍后切片,并在切片時一邊切片一邊用冰塊冰凍或換蠟。如室溫過高,可開空調(diào)降低室溫。切片刀不干凈,可用棉花沾少許二甲苯將刀口拭干凈。重復浸蠟過程或延長脫水、透明時間。將切片刀磨銳利再行切片。裱片的水溫以45為宜。組織蠟帶先放入 35%的漂片酒精中,再撈出放入溫水中可預防皺褶 6 。6 切片粘刀常見原因:切片時有靜電作用,產(chǎn)生靜電吸引,在冬季或氣候干燥時常出現(xiàn)這種情況。解決方法:可用加濕器,以增加空氣中的水分 ,而減少靜

5、電作用。把衛(wèi)生紙用涼水浸濕后圍在切片機操作臺,可以在切片機臺周圍形成靜電屏蔽 7 。把展片時所用毛筆在濕紙上進行蠟屑清理。7 切片脫落常見原因 :取材太厚或組織含血成分多、脂肪多 8 。組織固定不佳,脫水、透明不徹底,致使石蠟無法浸入組織內(nèi)。組織脫水透明過度,浸蠟時間過長或溫度過高,引起組織收縮硬脆。載玻片清洗得不潔凈。用急水沖洗或震蕩過于劇烈。染液或試劑的酸堿度不適宜或停留時間較久9。烤片時間過短、溫度過低或時間長、溫度過高10 。石蠟、二甲苯使用時間過久11。解決方法 :取材不能太厚,載玻片下2/3處用右手的大魚際肌均勻涂擦蛋白甘油,厚薄適中。按組織大小厚薄選擇固定、脫水、透明時間?；蛘咴?/p>

6、不影響診斷的原則下將組織重新脫水,透明浸蠟,包埋蠟熔度要比浸蠟熔點高35。先用溫水潤澤 ,再用冰硬化,然后再切片。徹底清潔載玻片,使之成中性。切片不能直接放于水流下沖洗或者改為浸泡 12。同時經(jīng)過煮沸,再次凈化和蒸餾處理后的水可增加了蠟片與載玻片之間的吸引力,冷開水作為漂片用水既方便又經(jīng)濟應首選13。染液或試劑的酸堿度適宜、停留時間合理。一般在60 ,2小時為宜。二次浸蠟、更換二甲苯。8 切片灰染常見原因:固定液濃度太低14或者組織固定不及時、不徹底15。取材太厚。水洗不夠。脫蠟不充分16。解決方法:固定及時徹底。脫盡原染色,復染時延長蘇木精的染色時間來補救。取材不宜太厚。水洗充分。脫蠟徹底。

7、石蠟切片是組織學和病理學的主要實驗方法,也是臨床中觀察病理變化的重要手段,為教學、科研和臨床診斷做出了卓越貢獻。實踐發(fā)現(xiàn),切片制作過程中常常由于多方面的原因遇到困難,甚至導致制片失敗。本文將對制作石蠟切片過程中的常見問題和處理方法作重點介紹。1 切片不成帶1常見原因:切片刀不夠鋒利。切片刀與蠟塊的角度不當。蠟塊四周留蠟邊太少。石蠟硬度過大,黏度不夠。解決方法:重新磨刀。調(diào)整切片刀的角度?？芍匦掳窕?qū)⑾瀴K四周熔化,再放入包埋框中補蠟,修理蠟塊時組織塊周圍保留的石蠟以2mm左右為宜。蠟塊過硬可適當加些蜂蠟,或更換熔點較低的石蠟重新包埋。將蠟塊放入冰箱內(nèi)延長冰凍時間,然后迅速切片。2 切片彎曲常見

8、原因:組織成分及形狀不規(guī)則。蠟塊9 染色淺、深、不均、色素沉著常見原因:固定液久存或者脫蠟不干凈。蘇木精過染或伊紅過染。切片不均勻。封固時二甲苯已揮發(fā)完畢3。福爾馬林色素17。解決方法:在備用的甲醛中放入適量大理石或白色粉筆作為中和劑,或經(jīng)常更換脫蠟劑18。蘇木精過染使組織呈深紫色可延長分化和返藍時間;伊紅過染可通過水洗減輕伊紅顏色19。切片均勻。封固前當二甲苯揮發(fā)后應重新放入到二甲苯中透明。在脫蠟水洗后可用10%飽和苦味酸無水乙醇溶液處理30min20。10 切片褪色21-22常見原因:染色前脫蠟不徹底。染色過程中脫水不干凈。蘇木精染液PH 值過小,或者伊紅染液加促染劑冰醋酸過多。載玻片和蓋

9、玻片不呈中性。在潮濕多雨時封閉切片,導致濕氣進入。二甲苯被氧化,生成苯甲酸和鄰苯二甲酸而成酸性,可使堿性燃料褪色。切片在陽光下爆曬。解決方法:染色前徹底脫蠟。染色過程中脫水時間要充足。徹底清洗載玻片和蓋玻片,使之呈中性。最好在干燥季節(jié)制作切片。切片復染。封固劑和切片避免陽光直射,以免氧化變酸。避光保存。11 切片封固不良23-24常見原因:封固時二甲苯已揮發(fā)完畢。封固劑過稀或太稠。切片厚薄不勻。切片未展開。封固方法不當。組織脫水不徹底。解決方法:封固前當二甲苯揮發(fā)后應重新放入到二甲苯中透明。封固劑濃度要適當。切片完全展開,無皺褶、無氣泡。封固時先將蓋玻片一側(cè)放置于滴有樹膠的組織切片上,然后緩慢放下將空氣完全排除避免產(chǎn)生