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1、選修一生物技術(shù)實(shí)踐知識(shí)點(diǎn)總結(jié)專(zhuān)題一1、發(fā)酵:利用微生物或其他生物的細(xì)胞在有氧或無(wú)氧條件下繁殖或積累其代謝產(chǎn)物的過(guò)程。 類(lèi)型:(1)根據(jù)是否需要氧氣分為:需氧發(fā)酵和厭氧發(fā)酵。(2)根據(jù)產(chǎn)生的產(chǎn)物可分為:酒精發(fā)酵、乳酸發(fā)酵、醋酸發(fā)酵等酵母菌是兼性厭氧微生物。在有氧條件下,酵母菌進(jìn)行有氧呼吸,大量繁殖QH12Q + 6Qt 6CQ+ 6H2O在無(wú)氧條件下,酵母菌能進(jìn)行酒精發(fā)酵GH2QT 20氣0卅2CO酵母菌有氧呼吸時(shí),產(chǎn)生能量多,可大量繁殖;無(wú)氧呼吸時(shí),產(chǎn)生能量少,僅能滿(mǎn)足自身代謝, 基本不繁殖;所以利用酵母菌進(jìn)行工業(yè)生產(chǎn)時(shí)先進(jìn)行通氣再密封。2、 20 C左右最適宜酵母菌繁殖酒精發(fā)酵時(shí)一般將溫度控
2、制在18 C -25 C3、 在葡萄酒自然發(fā)酵的過(guò)程中,起主要作用的是附著在葡萄皮表面的野生型酵母菌.在發(fā)酵過(guò)程中,隨著酒精濃度的提高,紅葡萄皮的色素也進(jìn)入發(fā)酵液,使葡萄酒呈現(xiàn)深紅色.在缺氧、呈酸性的發(fā)酵液中,酵母菌可以生長(zhǎng)繁殖,而絕大多數(shù)其他微生物都因無(wú)法適應(yīng)這一環(huán)境而受到制約。4、醋酸菌是一種好氧細(xì)菌。當(dāng)氧氣、糖源都充足時(shí),醋酸菌將葡萄汁中的糖分解成醋酸;當(dāng)缺少糖源 時(shí),醋酸菌將乙醇變?yōu)橐胰?,再將乙醛變?yōu)榇姿?。GHO卅QtCHCOOKfO5、 醋酸菌最適生長(zhǎng)溫度為3035C。6、酒精檢驗(yàn):果汁發(fā)酵后是否有酒精產(chǎn)生,可以用重鉻酸鉀來(lái)檢驗(yàn)。在酸性條件下,重鉻酸鉀與酒精反應(yīng)呈現(xiàn)灰綠 7、裝置各部
3、位的作用充氣口:在醋酸發(fā)酵時(shí)連接充氣泵進(jìn)行充氣。 排氣口:排出酒精發(fā)酵時(shí)產(chǎn)生的CO2。出料口:是用來(lái)取樣的。與瓶身相連的長(zhǎng)而彎曲的膠管:加水后防止空氣中微生物的污染。該裝置的使用方法:使用該裝置制酒時(shí),應(yīng)該關(guān)閉充氣口;留 1/3的空間的目的是防止發(fā)酵時(shí)汁液益出。制醋時(shí),應(yīng)將充氣口連接氣泵,輸入氧氣(無(wú)菌空氣)8、過(guò)程:宙料口9、多種微生物參與了豆腐的發(fā)酵,如青霉、酵母、曲霉、毛霉等,其中起主要作用的是毛霉。毛霉是二種絲狀真菌。10、 原理:毛霉等微生物產(chǎn)生的蛋白酶能將豆腐中的蛋白質(zhì)分解成小分子的肽和氨基酸;脂肪酶可將脂 _肪水解為甘油和脂肪酸。11、 制作泡菜所用微生物是乳酸菌,乳酸菌是厭氧細(xì)
4、菌。在無(wú)氧條件下,將葡萄糖分解為乳酸 。常見(jiàn)的乳酸菌有乳酸鏈球菌和乳酸而。乳酸桿菌常用于生產(chǎn)酸奶。12、亞硝酸鹽檢測(cè):在鹽酸酸化條件下,亞硝酸鹽與對(duì)氨基苯磺酸發(fā)生重氮化反應(yīng)后,與N - 1 -萘基乙二胺鹽酸鹽結(jié)合形成玫瑰紅色染料。專(zhuān)題二1、培養(yǎng)基按照物理性質(zhì)可分為 液體培養(yǎng)基和固體培養(yǎng)基。在液體培養(yǎng)基中加入凝固劑瓊脂后,制成瓊脂 固體培養(yǎng)基。微生物在固體培養(yǎng)基表面生長(zhǎng),可以形成肉眼可見(jiàn)的菌落。根據(jù)菌落的特征可以判斷是哪一種菌。2、按照培養(yǎng)基的 用途,可將培養(yǎng)基分為 選擇培養(yǎng)基 和鑒別培養(yǎng)基。在微生物學(xué)中,將允許特定種類(lèi)的微生物生長(zhǎng),同時(shí)抑制或阻止其他種類(lèi)微生物生長(zhǎng)的培養(yǎng)基,稱(chēng)做 選擇培養(yǎng)基 。
5、鑒別培養(yǎng)基 是根據(jù)微生物的特點(diǎn),在培養(yǎng)基中加入某種指示劑或化學(xué)藥品(如剛果紅)配制而成的, 用以鑒別不同類(lèi)別的微生物。3、 培養(yǎng)基的化學(xué)成分包括水、碳源、氮源和無(wú)機(jī)鹽 。4、 培養(yǎng)基還要滿(mǎn)足微生物生長(zhǎng)對(duì)pH、特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣的要求。5、 無(wú)菌技術(shù):獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵是防止外來(lái)雜菌的入侵,要注意以下幾個(gè)方面(選修一教材P15)6、 消毒是指使用較為溫和的物理或化學(xué)方法殺死物體表面或內(nèi)部的咅B(yǎng)分微牛物(不包括芽孢和孢子 )。消毒方法常用煮沸消毒法,巴氏消毒法還有化學(xué)藥劑消毒(如酒精、氯氣、石炭酸等)、紫外線消毒。7、 滅菌則是指使用強(qiáng)烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所有的微生物,包括芽孢和孢子。滅菌
6、方法有灼燒滅菌、干熱滅菌、高壓蒸汽滅菌。 接種環(huán)、接種針、試管口等使用灼燒滅菌法; 玻璃器皿、金屬用具等使用干熱滅菌法,所用器械是干熱滅菌箱; 培養(yǎng)基、無(wú)菌水等使用高壓蒸汽滅菌法,所用器械是高壓蒸汽滅菌鍋。 表面滅菌和空氣滅菌等使用紫外線滅菌法,所用器械是紫外燈。8、微生物接種的方法最常用的是 平板劃線法 和稀釋涂布平板法。9、 尿素是一種重要的農(nóng)業(yè)氮肥,尿素并不能直接被農(nóng)作物吸收。只有當(dāng)土壤中的細(xì)菌將尿素分解成氨之后,才能被植物利用。土壤中的細(xì)菌之所以能分解尿素,是因?yàn)樗麄兡芎铣呻迕浮?0、 纖維素酶是一種復(fù)合酶,一般認(rèn)為它至少包括三種組分,即Ci酶、Cx酶和葡萄糖苷酶,前兩種酶使纖維素分解
7、成纖維二糖,第三種酶將纖維二糖分解成葡萄糖。纖維素最終被水解成葡萄糖,為微生物的生長(zhǎng)提供營(yíng)養(yǎng)。11、分離分解纖維素的微生物的實(shí)驗(yàn)流程土壤取樣t選擇培養(yǎng)(此步是否需要,應(yīng)根據(jù)樣品中目的菌株數(shù)量的多少來(lái)確定)t梯度稀釋t將樣品涂布到鑒別(剛果紅)纖維素分解菌的培養(yǎng)基上t挑選產(chǎn)生透明圈的菌落12、剛果紅(選修一 P28)專(zhuān)題三1、植物組織培養(yǎng)原理:植物細(xì)胞的全能性由高度分化的植物組織或細(xì)胞產(chǎn)生愈傷組織的過(guò)程,稱(chēng)為植物細(xì)胞的脫分化,或者叫做去分化 。脫分化產(chǎn)生的愈傷組織繼續(xù)進(jìn)行培養(yǎng),又可以重新分化成根或芽等器官,這個(gè)過(guò)程叫做再分化。再分化形成的試管苗,移栽到地里,可以發(fā)育成 完整的植物體。2、 植物組
8、織培養(yǎng)常用的培養(yǎng)基是 MS培養(yǎng)基,其中含有的大量元素,微量元素,有機(jī)物等。在配制好的 MS培養(yǎng)基中,常常需要添加 植物激素。接種前培養(yǎng)基需要用 高壓蒸汽滅菌,外植體 需要消毒(常用酒精 和氯化汞)消毒時(shí)既要考慮藥劑的消毒效果,又要考慮植物的耐受性。3、植物激素中生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素 是啟動(dòng)細(xì)胞分裂、脫分化和再分化的關(guān)鍵性激素。在生長(zhǎng)素存在的情 況下,細(xì)胞分裂素的作用呈現(xiàn) 加強(qiáng)趨勢(shì)。使用順序?qū)嶒?yàn)結(jié)果先生長(zhǎng)素, 后細(xì)胞分裂素有利于分裂但不分化先細(xì)胞分裂素, 后生長(zhǎng)素細(xì)胞既分裂也分化同時(shí)使用分化頻率提高生長(zhǎng)素/細(xì)胞分裂素比值與結(jié)果比值高時(shí)促根分化, 抑制芽形成比值低時(shí)促芽分化, 抑制根形成比值適中廠促
9、進(jìn)愈傷組織生長(zhǎng)4、 講行菊花的組織培養(yǎng),每日用日光燈照射12h。5、 被子植物花粉的發(fā)育要經(jīng)歷小孢子四分體時(shí)期、單核期(花藥離體培養(yǎng)選擇該時(shí)期)和雙核期等階段。6、通過(guò)花藥培養(yǎng)產(chǎn)生花粉植株(即單倍體植株)一般有兩種途徑,這兩種途徑之間并沒(méi)有絕對(duì)的界限,主要取決于培養(yǎng)基中激素的種類(lèi)及其濃度配比(見(jiàn)第3條表格)。7、不同植物的誘導(dǎo)成功率很不相同。親本的生理狀況: 花期早期時(shí)的花藥比后期的更容易產(chǎn)生花粉植株,選擇月季的初花期。合適的花粉發(fā)育時(shí)期:一般來(lái)說(shuō),在 單核期靠邊期,花藥培養(yǎng)成功率最高?;ɡ伲哼x擇完全未開(kāi)放的花蕾8、選擇花藥時(shí),一般要通過(guò) 鏡檢來(lái)確定其中的花粉是否處于 單核期。確定花粉發(fā)育時(shí)期
10、的最常用的方法是醋酸洋紅法,花粉細(xì)胞核染成紅色。某些植物的花粉細(xì)胞核不易著色,需采用焙花青-鉻磯法,這種方法能將花粉細(xì)胞核染成藍(lán)黑色9、培養(yǎng)過(guò)程不需要光照,幼小植株形成后才需要光照。專(zhuān)題四1、果膠是植物細(xì)胞壁以及胞間層的主要組成成分之一,不溶于水,在果汁加工中不僅會(huì)影響出汁率還會(huì) 使果汁渾濁。2、果膠酶是一類(lèi)酶的總稱(chēng),包括多聚半乳糖醛酸酶,果膠分解酶和果膠酯酶等。果膠酶能夠分解果膠,瓦解植物的細(xì)胞壁及胞間層使榨取果汁變得更容易,也使得渾濁的果汁變得澄清 。3、 酶的活性與影響酶活性的因素(參考必修一P78-85注意實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的一般原則,注意自變量、因變 量、無(wú)關(guān)變量。選修一 P43-44)4、探
11、討加酶洗衣粉的洗劑效果(1) 加酶洗衣粉是指含有 酶制劑的洗衣粉,目前常用的酶制劑有四類(lèi):蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶和纖維素酶,其中,應(yīng)用最廣泛、效果最明顯的是堿性蛋白酶和堿性脂肪酶。加酶洗衣粉可以降低表面活性劑和三聚磷酸鈉的用量,使洗滌劑朝低磷無(wú)磷方向發(fā)展,減少對(duì)環(huán)境的污染。4、酵母細(xì)胞的固定化(1) 使用固定化酶技術(shù),將這種酶固定在一種顆粒狀的載體上,再將這些酶顆粒裝到一個(gè)反應(yīng)柱內(nèi),柱子底端裝上分布著許多小孔的篩板。酶顆粒無(wú)法通過(guò)篩板的小孔,而反應(yīng)溶液卻可以自由出入。反應(yīng)柱能連續(xù)使用半年, 大大降低了生產(chǎn)成本,提高了果糖的產(chǎn)量和質(zhì)量。(2) 固定化酶和固定化細(xì)胞 是利用物理或化學(xué)方法將酶或細(xì)胞
12、固定在一定空間內(nèi)的技術(shù),包括包埋法、化學(xué)結(jié)合法和物理吸附法。酶更適合采用化學(xué)結(jié)合法和物理吸附法固定,而細(xì)胞多采用包埋法固定化。固定化酶優(yōu)點(diǎn): 酶能與反應(yīng)物接觸,又能與產(chǎn)物分離,還可以被反復(fù)利用。固定化細(xì)胞優(yōu)點(diǎn): 成本更低,操作更容易,可以催化一系列的化學(xué)反應(yīng)。專(zhuān)題五提取生物大分子的基本思路:是選用一定的物理或化學(xué)方法分離具有不同物理或化學(xué)性質(zhì)的生物大 分子。一、DNA的粗提取1、 原理:(1)思路:DNA與 RNA蛋白質(zhì)和脂質(zhì)在物理和化學(xué)性質(zhì)方面的差異,提取DNA去除其它雜 質(zhì)。(2) DNA的溶解性:DNA和蛋白質(zhì)等其它成分在不同的NaCI溶液中溶解度不同,利用這一特點(diǎn),選 用適當(dāng)?shù)臐舛染湍?/p>
13、使 DNA充分溶解,而使雜質(zhì)沉淀,或者相反,以達(dá)到分離目的。(3) DNA對(duì)酶、高溫和洗滌劑的耐受性原理(選修一P54)2、DNA的鑒定:在沸水浴的條件下, DNA與二苯胺反應(yīng)呈現(xiàn)藍(lán)色。3、過(guò)程(選修一教材 P55-P56)二、多聚鏈?zhǔn)椒磻?yīng)擴(kuò)增 DNA片段1. PCR全稱(chēng)為多聚鏈?zhǔn)椒磻?yīng),它是指一種體外迅速擴(kuò)增 DNA片段的技術(shù) 的實(shí)驗(yàn)技術(shù)。2. PCR擴(kuò)增是在PCR自動(dòng)擴(kuò)增儀中進(jìn)行的,具體反應(yīng)過(guò)程包括3個(gè)反應(yīng)步驟即 變性,復(fù)性,和延伸。3. PCR體外擴(kuò)增 DNA的過(guò)程類(lèi)似細(xì)胞內(nèi)DNA的復(fù)制的過(guò)程,兩者都需要 DNA模板,引物,四種脫氧核苷 酸,DNA聚合酶 都需要能量,所不同的是體內(nèi)解鏈?zhǔn)强?/p>
14、 DNA聚合酶,體外解鏈?zhǔn)强?變性,引物是一小段 DNA或 RNA它能與DNA母鏈的一段堿基序列互補(bǔ)配對(duì)三、血紅蛋白的提取和分離蛋白質(zhì)的物化理性質(zhì):形專(zhuān)此提取和分離各種蛋白質(zhì)。1凝膠色譜法(分配色譜法):(1) 原理:是根據(jù)相對(duì)分子質(zhì)量的大小分離蛋白質(zhì)的有效方法,所用的凝膠實(shí)際上是一些微小的多孔性 球體,分子質(zhì)量 大的蛋白質(zhì)分子通過(guò) 多孔凝膠顆粒的間隙,路程短,流動(dòng)快;分子量 小的蛋白質(zhì)分子穿 過(guò)多孔凝膠顆粒內(nèi)部,路程長(zhǎng),流動(dòng)慢。相對(duì)分子質(zhì)量不的蛋白質(zhì)分子因此得以分離。(2) 分離過(guò)程:混合物上柱t洗脫t大分子流動(dòng)快、小分子流動(dòng)慢t收集大分子t收集小分子(3) 作用:分離蛋白質(zhì),測(cè)定生物大分子
15、分子量,蛋白質(zhì)的脫鹽等。2、凝膠電泳法:(1)原理:許多重要的生物大分子如蛋白質(zhì)、核酸等,具有可解離的基團(tuán),在一定的PH下,這些基團(tuán)會(huì)帶上正電或負(fù)電。在電場(chǎng)的作用下這此帶電分子會(huì)向著與其所帶電荷相反的電極移動(dòng)。電泳利用了待分離樣品中不同蛋白質(zhì)所 帶電荷性質(zhì)、電量、形狀和大小不同,在電場(chǎng)中受到的作用力大小、方向、阻 力不同,導(dǎo)致不同蛋白質(zhì)在電場(chǎng)中的運(yùn)動(dòng)方向和運(yùn)動(dòng)速度不同。(2) 分離方法: 瓊脂糖凝膠電泳、聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS)。SDS,形成“蛋白質(zhì)(3) 分離過(guò)程:使蛋白質(zhì)基團(tuán)帶上正電或負(fù)電;加入帶負(fù)電荷多的-SDS復(fù)合物”,使蛋白質(zhì)遷移速率僅取決于分子大小。專(zhuān)題六1、植物芳香油的提取方
16、法有蒸餾、壓榨和萃取。2、水蒸氣蒸餾法是植物芳香油提取的常用方法。它的原理是利用水蒸汽將揮發(fā)性較強(qiáng)的芳香油攜帶出來(lái)形成油水混合物,冷卻后,混合物又會(huì)重新分出油層和水層??煞譃樗姓麴s有些原料不適宜于水中蒸餾,如柑橘、檸檬等易焦糊,有效成分容易水解。通常用壓榨法。萃取法是將 粉碎、干燥 的植物原料用 有機(jī)溶劑 浸泡,使芳香油溶解在有機(jī)溶劑中的方法。芳香油溶解于有機(jī)溶劑后,只需蒸發(fā)出有機(jī)溶劑,就可以獲得純凈的植物芳香油。有機(jī)溶劑必須事先精制,除去雜質(zhì),否則會(huì)影響芳香油的品質(zhì)3、玫瑰精油的提取過(guò)程:玫瑰精油的化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定,難溶于水,易溶于有機(jī)溶劑,能隨水蒸汽一同蒸餾,可用水汽蒸餾法和萃取法提取。用于
17、提煉玫瑰精油的玫瑰花要在花開(kāi)的盛花期采收,在此階段花朵 含油最高。加入NaCI :使油水混合物中油和水的分離,可用分液漏斗分離油層和水層。 無(wú)水NaSO4 :吸收油層中殘留的水分。4、橘皮精油的提?。洪倨ぞ偷闹饕煞质菣幟氏?,由于橘皮精油的有效成分在用水蒸汽蒸餾時(shí)會(huì)發(fā)生部分水解,使用水中蒸餾法又會(huì)產(chǎn)生原料含糊的問(wèn)題,所以一般用壓柞法。操作流程見(jiàn)(選修一 P74)石灰水:能夠破壞細(xì)胞結(jié)構(gòu),分解果膠,防止壓榨時(shí)滑脫,提高出油率。5、胡蘿卜素的提取見(jiàn)(選修一 P77-79)胡蘿卜素化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定,不溶于水,微溶于酒精 易溶于石油醚等有機(jī) 溶劑,因此可用萃取法提取。萃取的效率主要取決于萃取劑的性質(zhì)和使用 量,同量受到原料顆粒的大小,緊密程度、含水量、萃取的溫度和時(shí)間等的影響。過(guò)濾:除去萃取液中的不
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