寨卡媒介伊蚊監(jiān)測指引

1、國境口岸伊蚊專項(xiàng)監(jiān)測方案為有效落實(shí)國家質(zhì)檢總局關(guān)于寨卡病毒病和黃熱病傳播媒介伊蚊及攜帶病原體專項(xiàng)監(jiān)測的要求， 標(biāo)準(zhǔn)國境口岸范圍內(nèi)及輸 入性伊蚊監(jiān)測操作，特制定本方案。一、監(jiān)測 目的一掌握國境口岸伊蚊種類構(gòu)成、 密度、分布及季節(jié)消長 和長期趨勢。二掌握國境口岸媒介伊蚊及輸入性伊蚊攜帶寨卡病毒、 黃熱病度的情況。三為寨卡病毒病和黃熱病風(fēng)險(xiǎn)評估、預(yù)測預(yù)警、控制規(guī) 劃提供科學(xué)依據(jù)。二、監(jiān)測對象國境口岸及輸入性伊蚊，以及所攜帶病原體。三、監(jiān)測范圍國境口岸及周邊 400 米環(huán)境范圍， 各檢驗(yàn)檢疫機(jī)構(gòu)可根據(jù)本 口岸實(shí)際適當(dāng)擴(kuò)大監(jiān)測范圍。 入境交通工具 包括船舶、 航空器、 列車等、集裝箱、貨物、快件及郵包等

2、。四、監(jiān)測時(shí)間2021 年 4 月-11 月，每月中旬監(jiān)測 1 次。五、監(jiān)測方法一誘卵器法1. 器具 ：無蓋黑色誘卵器、白色濾紙、標(biāo)簽紙等。2. 方法 ：每個(gè)監(jiān)測點(diǎn)放置 50 個(gè)誘卵器，各誘卵器間隔不少 于 10 米，連續(xù)放置 7 日，于第 4、 7 日分別檢查、收集誘到的 成蚊及蚊卵，記錄陽性容器數(shù)。3. 密度計(jì)算：誘蚊誘卵器指數(shù)=陽性容器數(shù)/回收有效的容器數(shù)X100%二BioDiVector BDV 帳誘法1. 器具：選用BDV蚊帳外層：長X寬X高：2.2m X1.9m x 1.8m ;內(nèi)層：長x寬x高：1.0m X0.7m xi.8m 該蚊帳可自制或 定制，見圖 1 、計(jì)數(shù)器、電動(dòng)吸蚊器

3、等。2. 方法：在上午 9 時(shí)和下午 4 時(shí)各 1 小時(shí)伊蚊活動(dòng)頂峰時(shí)段 內(nèi)，將蚊帳懸掛，誘集者位于內(nèi)部封閉蚊帳中，在誘蚊開始前， 誘集者通過操作裝置將外帳下擺降低至地面; 誘蚊開始時(shí)通過該 裝置將外帳下擺升至離地面 300mm 高，在監(jiān)測時(shí)間內(nèi)任由蚊蟲 飛入外帳內(nèi);誘蚊結(jié)束后再通過操作裝置將外帳下擺降低至地 面，阻止進(jìn)入帳內(nèi)的蚊蟲逃逸。 此時(shí)，誘集者可涂抹驅(qū)避劑或穿 戴防蚊設(shè)備， 出內(nèi)帳， 用普通電動(dòng)吸蚊器捕獲帳內(nèi)蚊蟲， 捕獲的 蚊蟲帶回實(shí)驗(yàn)室分類計(jì)數(shù)， 進(jìn)行種類鑒定和病原體檢測。 并記錄 誘蚊開始與結(jié)束的時(shí)間、地點(diǎn)、溫度、濕度和風(fēng)速。3. 密度計(jì)算：蚊密度【只/ 頂小時(shí)】=雌蚊數(shù)量/ 蚊帳

4、數(shù)誘蚊時(shí)間六 、 風(fēng)險(xiǎn)評估 根據(jù)國家標(biāo)準(zhǔn)和國家疾病預(yù)防控制中心的風(fēng)險(xiǎn)評估數(shù)據(jù)， 建 議誘蚊誘卵器指數(shù)大于 5，或 /和帳誘蚊密度大于 3 為有傳播風(fēng) 險(xiǎn);誘蚊誘卵器指數(shù)大于 10，或/和帳誘蚊密度大于 6 有爆發(fā)風(fēng)險(xiǎn) ; 誘蚊誘卵器指數(shù)大于 20，或 /和帳誘蚊密度大于 12 有區(qū)域流行 風(fēng)險(xiǎn)，需要持續(xù)去除孳生地和殺滅成蚊。七 、 輸入性伊蚊監(jiān)測 采集通過入境交通工具、集裝箱、貨物、行李、郵包等帶入 境內(nèi)的伊蚊， 分類計(jì)數(shù)，并送實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行種類鑒定和病原體檢測。 船舶輸入性伊蚊重點(diǎn)監(jiān)測的貨物為原木、 活動(dòng)物和廢舊物品， 重 點(diǎn)監(jiān)測的部位為舊輪胎、纜繩堆、絞纜機(jī)底座、溢油池、對外開 放的倉庫、 艙

5、口及生活區(qū)外圍、 大型設(shè)備包裝物和甲板的小型積 水、駕駛臺和底層的走廊及房間等。八、 種類鑒定捕獲到的成蚊均應(yīng)進(jìn)行種類鑒定， 具備條件的實(shí)驗(yàn)室應(yīng)對蚊 幼蟲進(jìn)行種類鑒定或?qū)ζ溆紫x進(jìn)行飼養(yǎng)， 待其羽化為成蟲后進(jìn)行 種類鑒定。九 、 病原體檢測一 生物平安病毒 RNA 提取和擴(kuò)增操作應(yīng)符合生物平安要求。二操作環(huán)境消毒實(shí)驗(yàn)完畢后， 所有可用高壓消毒的物品均應(yīng)在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)做高 壓消毒，不能用高壓消毒的物品及實(shí)驗(yàn)臺面和污染設(shè)備外表用有 效的消毒劑消毒，實(shí)驗(yàn)室用紫外線燈消毒。三病毒檢測1. 實(shí)時(shí)定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒错?RT-PCR 本方案病毒檢測采用 RT-PCR 法。2. 儀器設(shè)備熒光定量PCR儀，生物平

6、安柜，普通冰箱， -70 C超低溫冰 箱，普通臺式離心機(jī)，高速冷凍離心機(jī)轉(zhuǎn)速可達(dá) 20000g ，微 量可調(diào)移液器10 d、100山、1000 M及配套帶濾芯吸頭， EP 管 1.5mL ，渦旋器。3. 試劑各檢驗(yàn)檢疫機(jī)構(gòu)可根據(jù)本口岸實(shí)際選取適宜的 RNA 保存液、 病毒核酸提取試劑盒和 RT-PCR試劑盒。MEM和Hank '液可采 用商業(yè)化產(chǎn)品，也可自行配制參見表 1 。標(biāo)本處理液：在新鮮配制的 95mL MEM中參加56 C熱滅活 30min 的胎牛血清 2mL、 1mL 慶大霉素 5000dg/mL、 1mL 兩 性霉素B 250 pg/mL 和1mL青鏈霉素青霉素 G 100

7、00U/mL、 鏈霉素10000 pg/mL ，用7.5%碳酸氫鈉溶液調(diào)至 pH7.2.4. 檢測程序 1 標(biāo)本保存和運(yùn)輸?shù)蜏胤ǎ簩⒉杉幕铙w蚊蟲直接放入-20 C冰箱凍死后取出，在冰盤上分類，編號，按 30 只一份，裝入 2mL 螺口塑料管內(nèi)， 用耐低溫油性記號筆記上編號，于-70 C以下保存待檢。已死亡蚊蟲必須要在 4 小時(shí)以內(nèi)完成上述操作。 樣 本使用液氮或干冰運(yùn) 送，干冰需完全覆蓋送檢樣本。RNA保存液法：將采集的活體蚊蟲直接放入 -20 C冰箱凍死 后取出，在冰盤上分類，編號，按 30 只 1份，裝入盛有 RNA 保 存液的 2mL 螺口塑料管內(nèi)，用耐低溫油性記號筆記上編號，于 -2

8、0 C或以下溫度保存待檢。已死亡蚊蟲必須要在4小時(shí)以內(nèi)完成上述操作。 RNA 保存液中的蚊蟲樣本可使用常規(guī)冰袋運(yùn)送。2標(biāo)本處理在冰上操作。從-70 C容器或RNA保存液中取出蚊蟲標(biāo)本， 倒入研磨器中，參加 Hank 's 液 1mL 吹洗，棄去液體后參加 1mL 標(biāo)本處理液，反復(fù)研磨至組織碎片根本消失，隨后將研磨液吸入 1.5mL EP離心管，配平后置預(yù)冷 4 C離心機(jī)上，20000g離心 10min 。取上清液進(jìn)行核酸提取，剩余的蚊標(biāo)本研磨液需保存在 -70 C冰箱以備復(fù)查。3病毒核酸提取 直接采用病毒核酸提取試劑盒，按照說明書操作。4實(shí)時(shí)熒光 RT-PCR 檢測實(shí)時(shí)熒光 RT-PCR 的檢測操作和結(jié)果的判讀按照相應(yīng)商品試劑盒說明書進(jìn)行表1. MEM配方成分用量 / mg/L氯化鈣200氯化鉀400無水硫酸鎂97.67氯化鈉6800無水磷酸二氫鈉121.74L-精氨酸鹽酸鹽126L-胱氨酸鹽酸鹽31L-谷氨酰胺292L-組氨酸鹽酸鹽42L-異亮氨酸52L-亮氨酸52L-賴氨酸鹽酸鹽72.5L-蛋氨酸15L-苯丙氨酸32成分用量 / mg/LL-蘇氨酸48L-色氨酸10L-酪氨酸36L-纈氨酸46D-葡萄糖1000酚紅6D-泛酸