中藥尿酸利仙含藥血清對(duì)TNF

1、中藥尿酸利仙含藥血清對(duì)TNF a誘導(dǎo)的人血管內(nèi)皮細(xì)胞VCAM ImRNA表達(dá)的影響一【摘要】目的：觀察中藥尿酸利仙含藥血清對(duì)腫瘤壞死因子 ctTNF ct誘導(dǎo)的人血管內(nèi)皮細(xì)胞ECV血管細(xì)胞黏附分子 1VCAM lmRNA表達(dá)的影響。方法：體外培養(yǎng)人血管內(nèi)皮細(xì)胞，分別用不同濃度12.5、25、50卩g/ml的 TNF d刺激；體外培養(yǎng)人血 管內(nèi)皮細(xì)胞，培養(yǎng)液中參加TNF Q至終濃度為25 a g/m,分別孵育細(xì) 胞& 16、24、48小時(shí)。用25 a g/ml的TNF Q孵育細(xì)胞16小時(shí)， 同時(shí)用含不同濃度2.5% 5%、10%中藥尿酸利仙含藥血清的培養(yǎng)液進(jìn) 行干預(yù)，用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒?/p>

2、響RT PCR技術(shù)測(cè)定血管內(nèi)皮細(xì)胞VCAM ImRNA表達(dá)。結(jié)果：低、中、高濃度TNF q刺激均可顯著上 調(diào)血管內(nèi)皮細(xì)胞VCAM ImRNA表達(dá)po.o1,各刺激組間差異無統(tǒng)計(jì) 學(xué)意義P>0.05o 25 a g/ml的TNF Q在16、24和48小時(shí)均可顯著上調(diào) 血管內(nèi)皮細(xì)胞VCAM ImRNA表達(dá)po.o1,各干預(yù)組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué) 意義P>0.05>低、中、高濃度的中藥尿酸利仙含藥血清干預(yù)均可顯著 降低VCAM ImRNA表達(dá)po.o5, po.01。結(jié)論：中藥尿酸利仙含藥血 清可抑制VCAM ImRNA過度表達(dá)，可能是減輕TNF q誘導(dǎo)的人血管 內(nèi)皮細(xì)胞炎癥損傷及抑制炎

3、癥反響的機(jī)制之一?！娟P(guān)鍵詞】中藥尿酸利仙血管細(xì)胞黏附分子1TNF Q人血管內(nèi)皮細(xì)胞AbstractObjective:Toi nv estigatetheeffectofNiaoSua nLiXia neon tai nin gserumonexpressionofvascularcelladhesionmolecule(VCAM l)mRNAinvasculare ndothelialcellsinducedbyTNF a.Methods:Vascularendothelialcellswascult uredandstimulatedwithdifferentdensityfn.SS.an

4、dSOg/mlJofTNF ainvi tro,.Atthesametime,theceiiswe reco incubatedwith25pg/iriIdensityofTNF afor8J16/24/and48hours.Theywereintervedbydifferentdensity(2.5%;5%Ja ndlO%)oflliaoSuanLiXiancontainingserum.TheexpressionofVCAM ImRN AinvascularendothelialcellswasdetectedbyRT PCR.Results:Theexpression ofVCAM Im

5、RNAinvascula rendothelialcellsinducedbyTNF aincreasedsig ni fica ntly(P0.01),but no differe ncewas no tedbetwee ndiffere ntde nsitygroups. TheexpressionofVCAM lmRNAinvascularendothelialcellsinducedbythe25 pg/mldensityofTNF aincreasedsignificantlyafterl6,24;and48hourincubati on (P0.01).NiaoSua nLiXia

6、 neon tai nin gserumatallexperime ntalde nsitysig nific antlydown regulatedtheexpressionofVCAM lmRNA(P0.05,P0.01)<onclusion:Down regulatingtheexpressionofVCAM linvasculare n dothelialcellsmaybe on eofthemecha nismsofNiaoSua nLiXia nreduci ngthei n flammatoryinjures.KeywordsherbalNiaoSuanLiXianvas

7、cularcelladhesionmoleculeTNF avascu laren dothelialcells高尿酸血癥是除高膽固醇血癥、高血壓、糖尿病、吸煙等冠心病 (coroaryheartdisease,CHD主要危險(xiǎn)因素外的又一被公認(rèn)的高危因子。 如今控制高危因素的意義不僅在于調(diào)控目標(biāo)值，而是通過抗血管壁的炎癥來控制動(dòng)脈粥樣硬化atherosclerosis,As,減少心臟事件的發(fā)生。 筆者用中藥尿酸利仙顆粒劑治療高尿酸血癥，在臨床應(yīng)用多年取得較 好的效果。本文旨在探討中藥尿酸利仙含藥血清抗黏附、抗血管壁慢 性炎癥的分子機(jī)制。1實(shí)驗(yàn)材料1.1主要試劑RPMI1640培養(yǎng)液、胎牛血清F

8、CS和青霉素、鏈霉素為英國(guó) GibcoBrl公 司產(chǎn)品;二性霉素B、胰蛋白酶均為美國(guó)Sigma公司產(chǎn)品;RNA提取試劑 Trizol、逆轉(zhuǎn)錄和PCR擴(kuò)增試劑盒、引物合成均購自上海生物工程公司。1.2內(nèi)皮細(xì)胞株血管內(nèi)皮細(xì)胞株endotholialcellofvessels,ECV由浙江中醫(yī)藥大學(xué)友情提 供。1.3內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)將細(xì)胞復(fù)蘇后，用含10%胎牛血清的RPMI 1640培養(yǎng)液內(nèi)含青鏈霉 素各100u/ml培養(yǎng)，消化傳代采用0.25%胰酶，0.02%EDTA培養(yǎng)條件 為 5%CO2 37C。1.4人血清制備正常人血清制備選擇體檢合格的年輕志愿者 4名，晨各抽空腹血15ml,共60ml,離心，

9、 取血清，超濾，置-40 C冰箱保存?zhèn)溆谩：幯逯苽?以上4名志愿者，給服尿酸利仙顆粒劑，每天 2次定點(diǎn)、定時(shí)服用， 第5天晨空腹將2次的藥并一次服下，2小時(shí)后抽血各15ml,共60ml。 離心，取血清，超濾，置-40C冰箱保存?zhèn)溆谩?實(shí)驗(yàn)方法2.1不同濃度TNFQ對(duì)人血管內(nèi)皮細(xì)胞VCAM linRNA表達(dá)的影響分為4組，空白對(duì) 照組用io%正常人血清的RPMI 1640培養(yǎng)液培養(yǎng)，TNF q低、中、 高濃度刺激組在空白對(duì)照組根底上分別參加TNF Q,濃度分別為12.5、 25、50 卩 g/ml2.2不同時(shí)間TNFQ對(duì)人血管內(nèi)皮細(xì)胞VCAM lrnRNA表達(dá)的影響分為5組，空白對(duì) 照組10%正常人血清的RPMl 1640培養(yǎng)液培養(yǎng)，8、16、24、48小時(shí) TNF Q刺激組培養(yǎng)液中參加TNF Q至終濃度為25 a g/ml，分別孵育 細(xì)胞& 16、24、48小時(shí)。2.3中藥尿酸利仙含藥血清對(duì) TNFQ誘導(dǎo)的人血管內(nèi)皮細(xì)胞VCAM ImRNA表達(dá)的影響分為5組，空 白對(duì)照組用