實(shí)驗(yàn)三果蠅唾腺染色體

1、實(shí)驗(yàn)三實(shí)驗(yàn)三 果蠅唾腺染色果蠅唾腺染色體體 一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模阂?、?shí)驗(yàn)?zāi)康模?三、實(shí)驗(yàn)材料：三、實(shí)驗(yàn)材料：四、操作步驟：四、操作步驟：五、結(jié)果分析：五、結(jié)果分析：二、實(shí)驗(yàn)原理：二、實(shí)驗(yàn)原理：一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模阂?、?shí)驗(yàn)?zāi)康模?. 練習(xí)并掌握解剖果蠅三齡幼蟲(chóng)的唾腺以及制備多線染色體的方法和程序;2. 根據(jù)唾腺染色體的形態(tài)大小,橫紋特征識(shí)別不同的多線染色體并討論其意義。二、實(shí)驗(yàn)原理：二、實(shí)驗(yàn)原理： 雙翅目昆蟲(chóng)的幼蟲(chóng)唾液腺細(xì)胞含有特別巨大的、多帶紋的、多線染色體,它的最大特點(diǎn)是體細(xì)胞同源染色體配對(duì), 這些染色體由核內(nèi)有絲分裂形成，染色體（染色體線）重復(fù)地復(fù)制，但不分離進(jìn)入子核，核內(nèi)有絲分裂形成了特別大的，帶狀

2、的，多線染色體（圖3.1）。這些條帶在染色體上很明顯，被認(rèn)為是分離的染色體條帶的染色粒側(cè)向聯(lián)合的結(jié)果。這些帶富含DNA，現(xiàn)代遺傳學(xué)和細(xì)胞技術(shù)的結(jié)合已經(jīng)證明一定的基因座落在一定的帶紋上, 染色體上的泡是基因活性轉(zhuǎn)錄的地方（圖3.1）。而且由于同源染色體的體細(xì)胞配對(duì),所以染色體上的缺失、重復(fù)、倒位等結(jié)構(gòu)變異都可以在顯微鏡下識(shí)別(圖3.2)。圖3.1 果蠅的多線染色體。左: 染色體的一部分, Puff(泡)示活性轉(zhuǎn)錄區(qū); 右: 表示多線染色體由多個(gè)DNA鏈聚合而成, B: 表示帶紋 .IB:表示帶間區(qū)。二、實(shí)驗(yàn)原理：二、實(shí)驗(yàn)原理：圖 3 . 2 擬 暗 果 蠅(D.pseudoobscura)唾腺染

3、色體的結(jié)構(gòu)變異。A: 第三染色體上雜合缺失: B: 擬暗果蠅(D.pseudoobscura)第三染色體的雜合倒位;C: D.melanogaster第2染色體右臂(2R)和第3染色體左臂易位(箭頭處)。二、實(shí)驗(yàn)原理：二、實(shí)驗(yàn)原理：二、實(shí)驗(yàn)原理：二、實(shí)驗(yàn)原理： 在實(shí)驗(yàn)中，將要用醋酸洋紅或醋酸地衣紅或改良酚紅壓片技術(shù)制備果蠅唾腺染色體的裝片。出于這個(gè)目的，將使用最常見(jiàn)的黑腹果蠅(D.melanogaster)。但是，最理想的是維里果蠅(D.virilis), 因?yàn)镈.virilis比較大，可以比較容易進(jìn)行解剖出這個(gè)種的幼蟲(chóng)的唾液腺。 唾液腺染色體不斷地進(jìn)行自我復(fù)制而不分開(kāi)，經(jīng)過(guò)許多次的復(fù)制形成約

4、10004000拷貝的染色體絲，合起來(lái)達(dá)5mm寬，400mm長(zhǎng)，比普通中期相染色體大得多（約100150倍），所以又稱(chēng)為多線染色體。三、實(shí)驗(yàn)材料：三、實(shí)驗(yàn)材料：雙目體視顯微鏡 普通顯微鏡 解剖針 解剖刀 顯微鏡載玻片 蓋玻片改良酚紅 滴瓶（帶滴管） 生理鹽水溶液(0.7%Nacl)滴瓶（帶滴管） 酒精燈果蠅三齡幼蟲(chóng) 四、操作步驟：四、操作步驟：I. 解剖幼蟲(chóng)的唾腺：解剖幼蟲(chóng)的唾腺： 1. 在干凈載玻片上滴一滴生理鹽水。 2.用解剖針從培養(yǎng)瓶中取出一頭三齡幼蟲(chóng)，大的幼蟲(chóng)容易解剖。然而，注意不要選擇開(kāi)始蛹化的幼蟲(chóng)。 3.把幼蟲(chóng)放在滴有生理鹽水的載玻片上。 4.把載有幼蟲(chóng)生理鹽水的載玻片放在體視顯微

5、鏡有黑色背景的載物臺(tái)上，白色的幼蟲(chóng)和它無(wú)色的內(nèi)部器官將非常明顯地和黑色背景形成對(duì)比。 5.在適當(dāng)?shù)姆糯蟊稊?shù)下（例如：15X25X）解剖幼蟲(chóng), 放一根解剖針在幼蟲(chóng)中部,另一根插在前端，靠近嘴的黑色部位。四、操作步驟：四、操作步驟：唾液腺唾液腺解剖針解剖針?biāo)?、操作步驟：四、操作步驟： 6. 第一根針固定幼蟲(chóng)時(shí)，把插在頭部的針往外拉，這會(huì)將幼蟲(chóng)的內(nèi)部器官拉出體壁。 7. 這兩個(gè)唾腺是透明的，位于頭部（圖3.3）,在較低放大倍率下，唾腺的巨大細(xì)胞表現(xiàn)出特征性的顆粒。一條窄的、不透明的脂肪帶通常連在腺體的邊緣，用解剖針盡可能地移去它。 圖3.3 果蠅幼蟲(chóng)前端解剖,可以看見(jiàn)附有不透明脂肪體的兩條唾腺。 四

6、、操作步驟：四、操作步驟：. 染色：染色： 1.用針把沒(méi)有脂肪的腺體轉(zhuǎn)移到滴有一滴改良酚紅的干凈載玻片上, 蓋上蓋玻片。 2.在酒精燈的火焰上緩緩加熱，注意不要加熱過(guò)度，否則會(huì)破壞唾腺。 3.在蓋玻片上蓋上吸水紙，并用解剖針的柄或者鉛筆的橡皮頭往下壓蓋玻片。在壓片的時(shí)候不要使蓋玻片滑動(dòng)。壓力會(huì)使腺體破碎，核膜破裂，釋放出染色體。四、操作步驟：四、操作步驟：. 鏡檢鏡檢: 在普通顯微鏡下觀察裝片，先用低倍物鏡找到目標(biāo),再用高倍物鏡觀察染色體。在已制備好的裝片中，染色體已經(jīng)破核而出，所以可以很容易觀察到(圖3.4)。圖3.4 黑 腹 果 蠅(D.melanogaster)的多 線 染 色體四、操作

7、步驟：四、操作步驟：五、結(jié)果分析：五、結(jié)果分析： 1. 你能看到多線染色體的帶紋嗎？ 2. 你能看到染色體上泡(Puff)嗎？ 3. 如果你找到了Drosophila染色體，你觀察到他們聚集在一個(gè)中心位點(diǎn)了嗎？這樣染色體的著絲粒區(qū)聚集術(shù)語(yǔ)叫做什么？ 4. 你能由你制備的裝片確定D.melanogaster的染色體數(shù)目嗎？你期望唾腺染色體是單倍體還是二倍體，為什么？5. 聯(lián)會(huì)意味著什么？通常在哪種細(xì)胞中會(huì)發(fā)生聯(lián)會(huì)？為什么聯(lián)會(huì)的發(fā)生與Drosophila唾腺染色體有關(guān)？ 6. 制作永久裝片。用Conger and Fairchild的碳酸鈣干冰技術(shù)，用改良酚紅制作Drosophila唾腺染色體永久

8、裝片。 7.染色體的結(jié)構(gòu)變化觀察。如果時(shí)間允許，并且有合適的Drosophila種，這個(gè)品種染色體有諸如缺失、倒位、易位等異常，請(qǐng)你制作裝片并試圖鑒別這些染色體的結(jié)構(gòu)變化。五、結(jié)果分析：五、結(jié)果分析： 8.確保讓指導(dǎo)老師看到你制備的唾腺染色體裝片,繪制染色體圖,根據(jù)染色體各臂末端56條帶紋特征(圖3.5)注明染色中心和第幾染色體及左右臂。五、結(jié)果分析：五、結(jié)果分析：圖3.5 黑腹果蠅(D.melanogaster)的多線染色體： X(1)染色體, 左側(cè)為端點(diǎn)五、結(jié)果分析：五、結(jié)果分析：圖3.5 黑腹果蠅(D.melanogaster)的多線染色體： 第2染色體左臂端(L), 左側(cè)為端點(diǎn)五、結(jié)果分析：五、結(jié)果分析：圖3.5 黑腹果蠅(D.melanogaster)的多線染色體： 第2染色體右臂端(R), 右側(cè)為端點(diǎn)五、結(jié)果