常用試劑的配制

1、常用溶液的配制信息來源：生物谷更新時(shí)間：2004-12-21 1:33:00 一、常規(guī)溶液(一)1/15mol/L PBS(磷酸緩沖液Phosphate Buffer Solution，PBS)甲液：1/15mol/L Na2HPO4溶液Na2HPO4                    9.465g蒸餾水         

2、          加至1000ml乙液：l/15mol/L KH2PO4溶液KH2P04                     9.07g蒸餾水            

3、0;       加至1000m1分裝在棕色瓶內(nèi)，于4冰箱中保存，用時(shí)甲、乙兩液各按不同比例混合，即可得所需pH的緩沖液,見下表:pH  甲液ml  乙液mI    pH  甲液ml  乙液mI    5.29    5.59    5.91    6.24    6.47    6.64

4、    2.5    5.0    10.0    20.0    30.0    40.0    97.5    95.0    90.0    80.0    70.0    60.0    6.81

5、60;   6.98    7.17    7.38    7.73    8.04    50.0    60.0    70.0    80.0    90.0    95.0    50.0    40.0

6、0;   30.0    20.0    10.0    5.0     (二)0.3臺(tái)盼蘭染液    稱取臺(tái)盼蘭(Trypan blue)粉0.3克，溶于100ml生理鹽水中，加熱使之完全溶解，用濾紙過濾除渣，裝入瓶內(nèi)室溫保存。    (三)0.5酚紅指示劑    酚紅       &#

7、160;              0.5g 0.1N(0.4)NaOH           15ml    雙蒸水                  

8、0; 85ml    將0.5克酚紅置研缽中，緩漫滴加0.1NNaOH溶液邊加邊磨，并不斷吸出已溶解的酚紅液，直至全部溶解，然后加入85ml雙蒸水，顏色為深紅，經(jīng)粗濾紙過濾后使用，室溫保存。    (四)5.6NaHCO3溶液    稱NaHCO35.6克，溶于100ml蒸餾水中，室溫保存即可(如需要也可10磅15分鐘高壓滅菌，4冰箱保存)    (五)10gml秋水仙素    秋水仙素     

9、               lOmg生理鹽水                    100ml裝入茶色瓶中，為貯備液，4冰箱中保存。甩時(shí)取貯備液1ml加生理鹽水9ml即可。    (六)0.4KCl-0.4檸檬酸鈉低滲液 

10、60;  將0.4KCl和0.4檸檬酸鈉兩液等量混合即可，室溫保存。    (七)2檸檬酸鈉    稱取檸檬酸鈉2克，加100ml雙蒸水即可，室溫保存。   （八）0.2次甲基蘭染液    稱次甲基蘭(Methylene blue)0.2克，加蒸餾水100ml，室溫保存。    (九)0.5醋酸洋紅(Aceio Carmine)染液    洋紅      &

11、#160;             lg    醋酸                    90ml    蒸餾水         

12、0;        110ml    將90ml醋酸加入110ml蒸餾水煮沸，然后將火焰移去，立即加入1克洋紅，使之迅速冷卻過濾，加飽和氫氧化鐵(媒染劑)水溶液數(shù)滴，直到呈葡萄酒色。室溫保存。加鐵使洋紅沉淀于組織而著色。此染液室溫存放時(shí)間越長效果越好，室溫保存。    (十)1甲苯胺蘭(Toluidine blue)    稱取甲苯胺蘭1克，加蒸餾水lOOml。    (十一)1/3000中性紅染液

13、0;   取中性紅(Neutral red)0.1克，加蒸餾水300ml。室溫保存。    (十二)Giemsa染液    1貯備液Giemsa粉                    1g        純甘油    

14、                   66ml        甲醇                       

15、0; 66ml    先將Giemsa粉置于研缽中加少量甘油，充分研磨，呈無顆粒的糊狀。再將全部甘油加入，放入56溫箱中2小時(shí)，然后加入甲醇，保存于茶色瓶中。一般兩周后使用為好。    2工作液    臨用時(shí)將貯備液與pH6.8的磷酸緩沖液按照1:20混合。    (十三)埃利希(Ehrlich)蘇木精染液    蘇木精          

16、0;         1.0g    乙醇                      50ml    醋酸            

17、          5ml    甘油                      50ml    硫酸鋁鉀           &

18、#160;        5g    蒸餾水                      50ml    將蘇木精溶于少量的乙醇中，再加醋酸并攪拌，以加速其溶解。當(dāng)蘇木精溶解后將甘油加入并搖動(dòng)容器，同時(shí)加入其余的乙醇；硫酸鋁鉀需研磨并加熱，然后溶解于蒸餾水中，將

19、其一滴滴地加入上邊的溶液，并不斷搖動(dòng)，此液配好后，將瓶口用紗布蓋好，置通風(fēng)處，經(jīng)常搖動(dòng)以加速其成熟，成熟約需4周左右，成熟的染液為深紅色。    二、細(xì)胞化學(xué)和細(xì)胞組分分離溶液    (一)M一緩沖液     瞇唑(Imidazole)                    3.404g  

20、0; KCI                                3.7g    MgCl2·6H2O            &#

21、160;            101.65mg    ECTA                               380.35mg

22、0;   EDTA                               29.224mg    巰基乙醇           

23、60;               0.07ml    甘油                               297m

24、l    蒸餾水                             加至1000ml    用lNHCl調(diào)pH至7.2室溫保存。    (二)2Triton X一100溶液    量取2mlTr

25、iton X一100(聚乙二醇辛基苯基醚)液，加M緩沖液98ml即可。   （三）0.2考馬斯亮蘭R-250染液    甲醇                               46.5ml    醋酸 

26、;                              7.0ml    考馬斯亮蘭                

27、;         0.2g蒸餾水                             加至100ml(四)A0.1堿性固綠染液(pH8.08.5)    10.1固綠水溶液  

28、0; 固綠(Fast green)                    0.1g    蒸餾水                       

29、0;      100ml    20.05Na2C03溶液    Na2C03                               50mg蒸餾水   

30、;                           100ml用時(shí)按1:1體積混合即可。    B0.1酸性固綠染液(pH2.2)    10.1固綠水溶液。    2molL×75鹽酸液    鹽酸(比重

31、1.19)0.109ml加蒸餾水至100ml    用時(shí)按l:1混合。    (五)甲基綠一哌咯寧染液    1.1molL醋酸緩沖液(pH4.8)：        (1)醋酸                      

32、   17ml        蒸餾水                          加至200ml        (2)醋酸水     

33、                  13.5g    蒸餾水                            &#

34、160; 加至lOOml用時(shí)分別取兩液40ml、60ml混勻即可。    2甲基綠一哌咯寧(methyl greenPyrcnln)        5哌咯寧水溶液                 6ml        2甲基綠水溶液    

35、             6ml        蒸餾水                          16ml   

36、     lmol/L醋酸緩沖液               16ml    lmol/L醋酸緩沖液臨用時(shí)才可加入染液中。    (六)Schiff試劑    將堿性品紅0.5克加入lOOml沸水，持續(xù)煮沸5分鐘，并隨時(shí)攪拌，待冷卻到50時(shí)過濾到棕色瓶中，加1N HC11O毫升，冷卻至25時(shí)加入1克NaHSO3，此時(shí)需很好的振蕩

37、，避光過夜。次日取出(呈淡黃色)加0.25克活性炭劇烈振蕩1分鐘。過濾后即得Schiff試劑。避光低溫保存。    (七)聯(lián)苯胺混合液    聯(lián)苯胺(4.4 Diamino benzidine)       0.2g    95乙醇                  &

38、#160;         lOOml    3過氧化氫                         2滴    此液臨用時(shí)配制。    (八)l番紅水溶液  

39、60; 番紅(Safranin)                      1.0g    蒸餾水                      

40、;        100ml    (九)1SDS(十二烷基硫酸鈉Sodium dodecyl sulfate,SDS)     SDS                            

41、;     10g    45乙醇                            100ml    (十)1molLTris(三羥甲基氨基甲烷/鹽酸緩沖液Trihydroxy methylaminomethane Tris

42、/HCL)pH7.8    Tris                                 12.114g    蒸餾水       

43、60;                       lOOml    先將Tris溶于少量蒸餾水，用HCI調(diào)pH至7.8，然后加水至100ml  (十一)Ringer Solution氯化鈉(冷血?jiǎng)游镉?65克)           0.9

44、克氯化鉀                               0.042克氯化鈣                 

45、0;             0.025克蒸餾水                               100ml(十二)淀粉肉湯培養(yǎng)基蛋白   

46、;                              2g淀粉                    

47、             6g牛肉湯                               100ml用10NaHCO3調(diào)pH至7.07.2(十三)0.25molL蔗糖一0.

48、003molL氯化鈣溶液蔗糖                                 85.5g氯化鈣              &

49、#160;                0.33g蒸餾水                               1000ml(十四)1詹納斯綠

50、B染液取詹納斯綠(Janus green B)1.0g Ringer氏液100ml(十五)1剛果紅染液剛果紅                              1g蒸餾水           

51、                   100ml(十六)Gomori硝酸鉛作用液0.05molL醋酸緩沖液(pH5)          lOOml0.6醋酸加蒸餾水200ml、取其         42ml醋酸鈉1.36g加蒸餾水200ml，取其15

52、8ml共200ml B-甘油磷酸鈉                        2g醋酸鉛                       &

53、#160;      2g5氯化鎂                           5ml以上作用液在臨用時(shí)配制，最終在pH55.2，過濾使用。(王世藩  匯編)三、細(xì)胞培養(yǎng)和細(xì)胞融合溶液(一)0.01molLPBS(磷酸鹽緩沖液Phosphate Buffer Saline

54、，PBS)pH7.2。0.2molL磷酸氫二鈉液(甲液)：  NaH2PO4·12H2O                       35.814g雙蒸水                 &

55、#160;            加至500ml0.2molL磷酸二氫鈉液(乙液):    NaH2PO4·12H2O                       15.601g    雙蒸水

56、0;                             加至500ml    取甲液36ml，乙液14ml和NaCl8.2克，加雙蒸水至1000ml?；靹虼耆芙夥盅b，經(jīng)高壓滅菌后保存于4冰箱備用。    (二)50PEG(聚乙二醇Polyethyle

57、neglycol mwl500)    稱取0.5克PEG，用前放入試管中在酒精燈火焰上熔化，加入等量37予熱的MEM培養(yǎng)液，混勻，保溫在37水浴中待用。    (三)MEM培養(yǎng)液(含10小牛血清)    MEM培養(yǎng)液(日本制藥株式會(huì)社)        9.4g    雙蒸水           &

58、#160;                 1000ml    NaHCO3                            

59、0; 1.5g    谷氨酰胺(L-glutamin)               0.292g    56滅活30分鐘的小牛血清110ml    MEM粉末加水溶解后，用NaHCO3調(diào)pH到7.1(因在抽濾過程中pH升高0.20.3)，然后加滅活的小牛血清和谷氨酰胺，待完全溶解后，立即用G6抽濾除菌，分裝，置4冰箱保存?zhèn)溆谩?#160; 

60、0; (四)0.25胰蛋白酶一0.02EDTA混合消化液    胰蛋白酶(Trypsin)粉                 0.25g    EDTA粉                   

61、;          20.0mg    0.01molL PBS                      100ml    先用少量PBS溶解胰蛋白酶，然后將EDTA粉末和剩下的液體加入混合，置37水浴中1小時(shí)左右(待徹底溶解，液體呈透

62、明為止)，用G5抽濾，分裝置4冰箱中保存。    (五)Hanks液    1原液甲    NaCl                                 160g &#

63、160;  KCl                                  8g    MgSO4·7H2O        

64、60;                  2g    MgCI2·6H2O                           2

65、g    溶于800ml餾水中。    CaCl2(無水)                           2.8g    溶于100ml蒸餾水中。    將兩種液體混合后，加水至1000ml用濾紙濾過，再加2ml氯

66、仿防腐，置4冰箱備用。    原液乙    Na2HPO4·12H2O                         3.04g    KH2PO4         &

67、#160;                       1.2g    葡萄糖                      

68、0;         20.0g    溶于800ml蒸餾水中，用濾紙過濾，然后加0.5酚紅80ml，再加水至1000ml，最后加入2ml氯仿防腐，置4冰箱備用。    2使用液    甲乙兩液各1份，雙蒸水18份，混勻分裝包扎好瓶口，經(jīng)10磅15分鐘高壓滅菌后置4冰箱中保存。使用時(shí)用5.6NaHCO3調(diào)pH值到所需要求。    (六)1640培養(yǎng)液(含lO小牛血清)  

69、60; RPMI-1640粉                           10.39g    雙蒸水                 

70、;                加至1000ml    通入適量的C02氣體，邊通入CO2邊慢慢攪拌，使其(呈透明)完全溶解。用NaHCO31.5克調(diào)pH值到7.2。    雙抗1萬u/ml                 &#

71、160;        10ml    滅活小牛血清                           110ml    混勻上述液體，立即用G6抽濾除菌分裝，置4冰箱備用。  

72、  (七)青、鏈霉素溶液    青霉素鈉鹽(40萬u瓶)                 5瓶鏈霉素(100萬u瓶)                    2瓶將兩者溶于200ml0.9的無菌生理鹽水，分裝小瓶

73、，-30保存。雙抗在培養(yǎng)基中的終濃度為各lOOu為宜。    (八)二甲基亞砜誘導(dǎo)HL-60細(xì)胞分化使用的終濃度為1。4。    (九)BrdU溶液(200ug/m1)    用無菌青霉素瓶，在室溫下稱取1.0mg，在無菌條件下加入滅菌生理鹽水9.0ml，溶解，混勻，用黑紙包嚴(yán)，避光置冰箱冰格中保存。最好用時(shí)現(xiàn)配。    (十)2×SSC溶液用分析天平稱取氯化鈉17.53克，檸檬酸鈉8.82克溶于蒸餾水中，加蒸餾水至1000毫升。  （十一）3瓊脂：取瓊脂

74、粉3克，加入雙蒸水到100毫升，攪勻，高壓消毒后(15磅20分鐘)，冷藏備用，使用前重新加熱煮沸(貯存時(shí)間不宜過長)。四、制備電鏡標(biāo)本的溶液(一)2.5戊二醛溶液25戊二醛                    lOml    0.1molL二甲砷酸鈉緩沖液    裝入茶色瓶中，保存于4冰箱備用。    (二)0.1m

75、olL二甲砷酸鈉緩沖液    二甲砷酸鈉                    10.70g    蒸餾水                    &#

76、160;    500ml    將二甲砷酸鈉置于500ml容量瓶中，先加水約400ml，震蕩使其溶解，用HCl調(diào)pH到7.4，加入剩余蒸餾水，4冰箱保存。    (三)包埋劑環(huán)氧樹脂Epon812                56.30g   DDSA(十二烷基琥珀酸酐Dodecenyl succinic  

77、60; anhydride，DDSA)                14.60g    MNA(甲基內(nèi)次甲基鄰苯二甲酸酐Methyl Nadic)    anhydride，MNA                  2

78、9.00g    混合上述三種包埋劑成分，攪拌30分鐘使其充分混勻。再加加速劑2,4,6一三(二甲氨基甲基)苯酚(2，4，6-tridimethyl aminomethylphenol，DMP-30)1.5ml，繼續(xù)攪拌30分鐘，置于干燥罐中(室溫)備用。    (四)2單寧酸    單寧酸                  &

79、#160;        2g    雙蒸水                           100ml溶解后過濾裝茶色瓶中，4冰箱保存。(五)高錳酸鉀固定劑 檸檬酸三鈉     

80、60;                 60mmol/L氯化鉀                           25mmol/L氯化鎂   

81、60;                       35mmol/L    高錳酸鉀                      &

82、#160;  125mmol/LpH為7.4-7.8，裝茶色瓶中，4冰箱中保存，有效期2個(gè)月左右。(六)1OsO4溶液 OsO4                             0.5g 0.1mol/L二甲砷酸鈉緩沖液。     

83、 50ml     OsO4一般為0.5或1克安瓶中封閉包裝，配制時(shí)剝?nèi)ド虡?biāo)，用自來水洗凈，放洗滌液中泡412小時(shí)后用水沖洗，在安瓶上劃痕，用蒸餾水洗凈，投入茶色瓶中，加緩沖液，用玻璃棒在瓶中搗碎，輕輕搖動(dòng)放冰箱中，48小時(shí)后完全溶解。此藥蒸氣對(duì)人眼、角膜、鼻腔和口腔粘膜有固定作用，用時(shí)特別小心，在通風(fēng)櫥內(nèi)操作。五、顯影、定影溶液(一)D-72顯影液                  溫

84、水(52)                        750ml米吐爾                            3g無水亞硫酸鈉