硝酸甘油注射液含量檢驗方法驗證定量限

1、驗證方案 編號：Z-V-AQ004-03 硝酸甘油注射液含量檢驗方法驗證方案目 錄1、起草、審核與批準22、目的23、范圍24、職責25、概述36、執(zhí)行標準和規(guī)范37、驗證前的支持性確認38、驗證內(nèi)容59、數(shù)據(jù)分析910、偏差911、確認結(jié)果評定與結(jié)論912、再驗證周期91、起草、審核與批準：所屬部門職務簽名日期起草 年 月 日審核 年 月 日審核 年 月 日批準 年 月 日2、目的： 硝酸甘油注射液在產(chǎn)品生產(chǎn)過程中，需用高效液相色譜法測定其含量，為確定其對含量測定檢驗方法的適用性，特制定本驗證方案。3、范圍：本方案適用于硝酸甘油注射液含量檢驗方法的驗證。4、 職責：組 長姓 名職務/職稱部

2、門職 責QC主管質(zhì)量檢驗室1.負責組織起草確認方案。2.負責協(xié)調(diào)、組織確認工作。成 員經(jīng)理質(zhì)量管理部1.負責確認方案的審核和監(jiān)督。2.負責確認方案的審核與批準。主管質(zhì)量管理部1.負責確認方案、報告的審核。2.負責起草確認合格證書。主管設備工程部1.負責儀器儀表均已校準合格，且在有效期內(nèi)。2.執(zhí)行安裝、運行和性能確認。確認專員質(zhì)量管理部1. 負責相關確認項目的測試。2. 保證測試數(shù)據(jù)的真實性。確認專員質(zhì)量管理部1.負責相關確認項目的測試。2.保證測試數(shù)據(jù)的真實性。5、概述： 高效液相色譜法(High Performance Liquid Chromatography，HPLC)系采用高壓輸液泵將

3、流動相泵入到裝有填充劑的色譜柱，對供試品進行分離測定的色譜方法。注入的供試品，由流動相帶入注內(nèi)，各組分在柱內(nèi)被分離，并依次進入檢測器，由積分儀或數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)記錄色譜圖并進行數(shù)據(jù)處理，得到測定結(jié)果。由于應用了各種特性的微粒填料和加壓的液體流動相，本法具有分離性能高、分析速度快的特點。硝酸甘油注射液的質(zhì)量標準中規(guī)定，在產(chǎn)品生產(chǎn)過程半成品和成品檢驗，需用高效液相色譜法測定其含量。6、執(zhí)行標準與規(guī)范：本方案以LC-20A高效液相色譜儀標準操作規(guī)程 、PC-2001高效液相色譜儀標準操作規(guī)程、硝酸甘油注射液質(zhì)量標準為依據(jù)，制定了硝酸甘油注射液驗證方案。7、驗證前的支持性確認： 儀器確認前應確認與本次確認

4、相關聯(lián)的完成情況。7.1 文件的檢查確認：序號文件名稱文件編號檢查結(jié)果1硝酸甘油注射液含量檢驗方法驗證方案Z-V-AQ004-03合格 不合格2硝酸甘油注射液檢驗標準操作規(guī)程SOP-3505合格 不合格3LC-20A型高效液相色譜儀標準操作規(guī)程SOPQ6115合格 不合格4PC-2001型高效液相色譜儀標準操作規(guī)程SOPQ6041 合格 不合格5高效液相色譜儀日常清潔維護與保養(yǎng)標準操作規(guī)程SOPQ6044 合格 不合格6玻璃儀器清洗與貯存標準操作規(guī)程SOP-Q0064合格 不合格7電子天平標準操作規(guī)程SOP-Q6017合格 不合格8電子天平日常清潔維護與保養(yǎng)標準操作規(guī)程SOP-Q6018 合格

5、 不合格檢查人/日期： 復核人/日期：7.2 儀器儀表的檢查確認：7.2.1 儀器儀表量程、規(guī)格必須符合測試及設計規(guī)范要求。7.2.2 儀器儀表使用前必須經(jīng)具有相應資質(zhì)機構校驗，且在有效期內(nèi)。7.3 公用工程系統(tǒng)的檢查確認：系統(tǒng)名稱文件編號檢查人檢查結(jié)果合格 不合格合格 不合格合格 不合格7.4 相關人員的培訓：7.4.1 文件培訓 文件培訓表序號文件名稱文件編碼檢查結(jié)果1硝酸甘油注射液含量檢驗方法驗證方案Z-V-AQ004-03是 否2硝酸甘油注射液檢驗標準操作規(guī)程SOP-3505是 否3LC-20A型高效液相色譜儀標準操作規(guī)程SOPQ6115是 否4PC-2001型高效液相色譜儀標準操作規(guī)

6、程SOPQ6041 是 否5高效液相色譜儀日常清潔維護與保養(yǎng)標準操作規(guī)程SOPQ6044 是 否6玻璃儀器清洗與貯存標準操作規(guī)程SOP-Q0064是 否7電子天平標準操作規(guī)程SOP-Q6017是 否8電子天平日常清潔維護與保養(yǎng)標準操作規(guī)程SOP-Q6018 是 否偏差說明/結(jié)論：檢查人日期復核人日期 7.4.2 人員培訓 人員培訓表序號姓名是否培訓健康狀況1是 否是 否2是 否是 否3是 否是 否4是 否是 否偏差說明/結(jié)論： 檢查人 日期 復核人 日期8、驗證內(nèi)容：8.1 硝酸甘油注射液含量測定方法8.1.1 儀器與用具：電子天平、高效液相色譜儀、容量瓶、移液管。8.1.2 試劑與試液： 乙

7、腈-水（50：50）、硝酸甘油對照品。 條件：照高效液相色譜法測定。 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-水（5050）為流動相；檢測波長為215nm。 取硝酸甘油對照品約1.25g，置25ml量瓶中，加0.1mol/L鹽酸溶液溶解并稀釋至刻度，即得（每1ml中約含0.5mg的溶液）。置水浴中加熱10分鐘，放冷，用0.1mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至中性，取20µl，注入液相色譜儀中，記錄色譜圖，在相對保留時間約0.4處應出現(xiàn)兩個降解產(chǎn)物峰（1,2-二硝酸甘油和1,3-二硝酸甘油峰），兩峰之間的分離度應大于1.0。理論板數(shù)按硝酸甘油峰計算不低于200

8、0。 樣品溶液制備：精密量取本品1ml，置50ml量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，即得（每1ml中約含硝酸甘油0.1mg的溶液）。 對照溶液制備：取硝酸甘油對照品約0.5g，置50ml量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，即得。 測定方法：精密量取樣品溶液與對照溶液各20ul注入液相色譜儀，記錄色譜圖。按外標法以峰面積計算，即得。計算公式： 含量（） 式中： Ax -表示供試品溶液所得色譜圖中主成分的峰面積； AR -表示對照品溶液的峰面積； CR -表示對照品的濃度。 判定標準：本品含硝酸甘油（C3H5N3O9）應為標示量的90.0110.0。 8.2 重復性試驗： 8.2.1 取同一批硝酸甘

9、油注射液樣品，按硝酸甘油注射液含量測定方法同一人共制備6份供試液測定，所得結(jié)果的相對標準偏差2.0。 重復性試驗記錄名稱 硝酸甘油注射液批號：儀器型號： 對照品批號來源含量： 配制日期 年 月 日 有效期至 年 月 日 系統(tǒng)性試驗分離度：理論板數(shù)：對照品稱樣量對1： 對2： 樣品取樣量樣品1: 150ml樣品2: 150ml對照1峰面積平均值：對照2峰面積 平均值： 樣品序號 1 23456 峰面積 含量% RSD% （應2.0%） 結(jié)論 檢驗人 日期 復核人 日期8.3 中間精密度試驗8.3.1 同一批硝酸甘油注射液，由2個不同的人在不同時間不同儀器分別測定2次的結(jié)果，所得結(jié)果的相對標準偏差

10、2.0。 表1 中間精密度試驗記錄 名稱 硝酸甘油注射液批號：儀器型號： 對照品批號來源含量： 配制日期 年 月 日 有效期至 年 月 日 系統(tǒng)性試驗分離度：理論板數(shù)：對照品稱樣量對1： 對2： 樣品取樣量樣品1: 150ml樣品2: 150ml對照1峰面積平均值：對照2峰面積 平均值： 樣品序號1-11-2平均值含量1含量2 峰面積 樣品序號2-12-2平均值含量1含量2 峰面積 平均含量 RSD% （應2.0%） 檢驗人 日期 復核人 日期表2 中間精密度試驗記錄 名稱 硝酸甘油注射液批號：儀器型號： 對照品批號來源含量： 配制日期 年 月 日 有效期至 年 月 日 系統(tǒng)性試驗分離度：理論

11、板數(shù)：對照品稱樣量對1： 對2： 樣品取樣量樣品1: 150ml樣品2: 150ml對照1峰面積平均值：對照2峰面積 平均值： 樣品序號1-11-2平均值含量1含量2 峰面積 樣品序號2-12-2平均值含量1含量2 峰面積 平均含量 RSD% （應2.0%） 檢驗人 日期 復核人 日期 名 稱 硝酸甘油注射液 批號 含量測定結(jié)果 結(jié)果 RSD% （應2.0%）結(jié)論檢驗人日期復核人日期 表3 中間精密度驗證結(jié)果（兩人）8.4. 定量限確認8.4.1. 定義定量限是指樣品中被測物質(zhì)能被定量測定的最低量，其測定結(jié)果應具有一定準確度和精密度。8.4.2. 方法色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗：用十八烷基硅烷鍵

12、合硅膠為填充劑；以乙腈-水（5050）為流動相；檢測波長為215nm。 取硝酸甘油對照品約1.25g，置25ml量瓶中，加0.1mol/L鹽酸溶液溶解并稀釋至刻度，即得（每1ml中約含0.5mg的溶液）。置水浴中加熱10分鐘，放冷，用0.1mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至中性，取20µl，注入液相色譜儀中，記錄色譜圖，在相對保留時間約0.4處應出現(xiàn)兩個降解產(chǎn)物峰（1，2-二硝酸甘油和1，3-二硝酸甘油峰），兩峰之間的分離度應大于1.0。理論板數(shù)按硝酸甘油峰計算不低于2000。 對照品溶液制備：取硝酸甘油對照品約0.5g，置50ml量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，即得。 供試品溶液

13、制備：精密量取硝酸甘油對照品 g，置 ml量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，即得（每1ml中約含硝酸甘油0.1mg的溶液）。 測定法：精密量取上述兩種溶液各20µl，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標法以峰面積計算，即得。計算公式： 含量（）式中： Ax -表示供試品溶液所得色譜圖中主成分的峰面積； AR -表示對照品溶液的峰面積； CR -表示對照品的濃度。8.4.3. 可接受標準以 S / N 10 時的相應濃度作為本品含量檢測的定量限。8.4.4. 定量限確認記錄見附表5。附表5 定量限確認記錄色譜條件使用儀器對照品批號來源色譜柱型號品牌流動相試劑名稱批 號生產(chǎn)廠家檢測波長

14、流 速柱 溫進樣量初始濃度（mg/ml）信噪比(X)稀釋濃度(mg/ml)（初始濃度*X/10）信噪比稀釋濃度(mg/ml)（初始濃度*X/10）標準要求以信噪比S / N 10 時的相應濃度作為本品含量檢測的定量限。結(jié) 論確認人日 期復核人日 期 9、數(shù)據(jù)分析： 通過對硝酸甘油注射液含量檢驗方法學試驗，重復性相對標準偏差2.0；中間精密度相對標準偏差（RSD）2.0；以上試驗均應符合驗證合格標準。 10、偏差：10.1 在確認過程中有無偏差，如有偏差應找出原因，并通知被檢測部門進行調(diào)查處理。10.2 偏差調(diào)查記錄應由質(zhì)量管理部存檔。11、驗證結(jié)果評定與結(jié)論：質(zhì)量管理部負責收集各項確認、試驗結(jié)果記錄，根據(jù)確認、試驗結(jié)果起草驗證報告，報驗證委員會。驗證委員會負責對結(jié)果進行綜合評審，作出確認結(jié)論，發(fā)放證書，確認硝酸甘油注射液含量檢驗方法的各項結(jié)果達到合格標準。并對確認結(jié)果進行評審，內(nèi)容包括： 確認結(jié)果評審表評審項目評審結(jié)果試驗是否有遺漏？是 否 N/A實施過程中對驗證方案有無修改？ 是 否 N/A修改原因、依據(jù)以及是否經(jīng)過批準？是 否 N/A記錄是否完整？是 否 N/A試驗結(jié)果是否符合標