氣相與液相的區(qū)別

1、氣相色譜儀主要用來分析氣相樣品和易揮發(fā)的熱穩(wěn)定樣品，如弱極性小分子有機物；而液相色譜主要用來分析高沸點或若不穩(wěn)定樣品，如核酸等。兩種色譜方法，液相色譜儀用液體作流動相，氣相色譜儀用氣體作為流動相。進樣的話，液相色譜儀的液體樣品直接進入色譜柱，氣相色譜儀的液體樣品必須氣化才能進入。氣相色譜儀現(xiàn)在所用色譜柱一般是空心的毛細管色譜柱，檢測器也是破壞型的。液相色譜儀的色譜柱一般是填充柱，檢測器非破壞型。一、分離原理：1. 氣相：氣相色譜是一種物理的分離方法。利用被測物質(zhì)各組分在不同兩相間分配系數(shù)（溶解度）的微小差異，當兩相作相對運動時，這些物質(zhì)在兩相間進行反復多次的分配，使原來只有微小的性質(zhì)差異產(chǎn)生很

2、大的效果，而使不同組分得到分離。2. 液相：高效液相色譜法是在經(jīng)典色譜法的基礎上，引用了氣相色譜的理論，在技術上，流動相改為高壓輸送（最高輸送壓力可達4.9'107Pa；色譜柱是以特殊的方法用小粒徑的填料填充而成，從而使柱效大大高于經(jīng)典液相色譜（每米塔板數(shù)可達幾萬或幾十萬）；同時柱后連有高靈敏度的檢測器，可對流出物進行連續(xù)檢測。二、應用范圍：1. 氣相：氣相色譜法具有分離能力好，靈敏度高，分析速度快，操作方便等優(yōu)點，但是受技術條件的限制，沸點太高的物質(zhì)或熱穩(wěn)定性差的物質(zhì)都難于應用氣相色譜法進行分析。一般對500以下不易揮發(fā)或受熱易分解的物質(zhì)部分可采用衍生化法或裂解法。2. 液相：高效液

3、相色譜法，只要求試樣能制成溶液，而不需要氣化，因此不受試樣揮發(fā)性的限制。對于高沸點、熱穩(wěn)定性差、相對分子量大（大于400以上）的有機物（些物質(zhì)幾乎占有機物總數(shù)的75%80%）原則上都可應用高效液相色譜法來進行分離、分析。據(jù)統(tǒng)計，在已知化合物中，能用氣相色譜分析的約占20%而能用液相色譜分析的約占7080%三、儀器構(gòu)造：1. 氣相：由載氣源、進樣部分、色譜柱、柱溫箱、檢測器和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)組成。進樣部分、色譜柱和檢測器的溫度均在控制狀態(tài)。1.1 柱箱：色譜柱是氣相色譜儀的心臟，樣品中的各個組份在色譜柱中經(jīng)過反復多次分配后得到分離，從而達到分析的目的，柱箱的作用就是安裝色譜柱。由于色譜柱的兩端分別連

4、接進樣器和檢測器，因此進樣器和檢測器的下端（接頭）均插入柱箱。柱箱能夠安裝各種填充柱和毛細管柱，并且操作方便。色譜柱（樣品）需要在一定的溫度條件下工作，因此采用微機對柱箱進行溫度控制。并且由于設計合理，柱箱內(nèi)的梯度很小。對于一些成份復雜、沸程較寬的樣品，柱箱還可進行三階程序升溫控制。且程序設定后自動運行無需人工干預，降溫時還能自動后開門排熱。1.2 進樣器：進樣器的作用是將樣品送入色譜柱。如果是液體樣品，進樣器還必須將其汽化，因此采用微機對進樣器進行溫度控制。根據(jù)不同種類的色譜柱及不同的進樣方式，共有五種進樣器可供選擇：1. 填充柱進樣器2. 毛細管不分流進樣器附件3. 毛細管分流進樣器附件4

5、. 毛細管分流/不分流進樣器5. 六通閥氣體進樣器1.3 檢測器:檢測器的作用是將樣品的化學信號轉(zhuǎn)化為物理信號（電信號）。檢測器也需要在一定的溫度條件下才能正常工作，因此采用微機對檢測器進行溫度控制。根據(jù)各種樣品的化學物理特性，共有五種檢測器可供選擇：1. 氫火焰離子化檢測器（FID）2. 熱導檢測器（TCD）3. 電子捕獲檢測器（ECD）4. 氮磷檢測器（NPD）5. 火焰光度檢測器（FPD）1.4 數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)該系統(tǒng)可對測試數(shù)據(jù)進行采集、貯存、顯示、打印和處理等操作，使樣品的分離、制備或鑒定工作能正確開展。2. 液相：高效液相色譜儀主要有進樣系統(tǒng)、輸液系統(tǒng)、分離系統(tǒng)、檢測系統(tǒng)和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)

6、組成。2.1 進樣系統(tǒng)一般采用隔膜注射進樣器或高壓進樣間完成進樣操作，進樣量是恒定的。這對提高分析樣品的重復性是有益的。2.2 輸液系統(tǒng)該系統(tǒng)包括高壓泵、流動相貯存器和梯度儀三部分。高壓泵的一般壓強為l.474.4X107Pa,流速可調(diào)且穩(wěn)定，當高壓流動相通過層析柱時，可降低樣品在柱中的擴散效應，可加快其在柱中的移動速度，這對提高分辨率、回收樣品、保持樣品的生物活性等都是有利的。流動相貯存錯和梯度儀，可使流動相隨固定相和樣品的性質(zhì)而改變，包括改變洗脫液的極性、離子強度、PH值，或改用競爭性抑制劑或變性劑等。這就可使各種物質(zhì)（即使僅有一個基團的差別或是同分異構(gòu)體）都能獲得有效分離。3.3 分離系

7、統(tǒng)該系統(tǒng)包括色譜柱、連接管和恒溫器等。色譜柱一般長度為1050cm（需要兩根連用時，可在二者之間加一連接管），內(nèi)徑為25mm由"優(yōu)質(zhì)不銹鋼或厚壁玻璃管或鈦合金等材料制成，住內(nèi)裝有直徑為510Rm粒度的固定相（由基質(zhì)和固定液構(gòu)成）固定相中的基質(zhì)是由機械強度高的樹脂或硅膠構(gòu)成，它們都有惰性（如硅膠表面的硅酸基因基本已除去）、多孔性（孔徑可達1000?）和比表面積大的特點，加之其表面經(jīng)過機械涂漬（與氣相色譜中固定相的制備一樣），或者用化學法偶聯(lián)各種基因（如磷酸基、季胺基、羥甲基、苯基、氨基或各種長度碳鏈的烷基等）或配體的有機化合物。因此，這類固定相對結(jié)構(gòu)不同的物質(zhì)有良好的選擇性。例如，在多

8、孔性硅膠表面偶聯(lián)豌豆凝集素（PSA后，就可以把成纖維細胞中的一種糖蛋白分離出來。另外，固定相基質(zhì)粒小，柱床極易達到均勻、致密狀態(tài)，極易降低渦流擴散效應?；|(zhì)粒度小，微孔淺，樣品在微孔區(qū)內(nèi)傳質(zhì)短。這些對縮小譜帶寬度、提高分辨率是有益的。根據(jù)柱效理論分析，基質(zhì)粒度小，塔板理論數(shù)N就越大。這也進一步證明基質(zhì)粒度小，會提高分辨率的道理。再者，高效液相色譜的恒溫器可使溫度從室溫調(diào)到60C,通過改善傳質(zhì)速度，縮短分析時間，就可增加層析柱的效率。3.4 檢測系統(tǒng)高效液相色譜常用的檢測器有紫外檢測器、示差折光檢測器和熒光檢測器三種。（1）紫外檢測器該檢測器適用于對紫外光（或可見光）有吸收性能樣品的檢測。其特點

9、：使用面廣（如蛋白質(zhì)、核酸、氨基酸、核苷酸、多肽、激素等均可使用）；靈敏度高（檢測下限為10-10gml）；線性范圍寬；對溫度和流速變化不敏感；可檢測梯度溶液洗脫的樣品。（2）示差折光檢測器凡具有與流動相折光率不同的樣品組分，均可使用示差折光檢測器檢測。，糖類化合物的檢測使用此檢測系統(tǒng)。這一系統(tǒng)通用性強、操作簡單，但靈敏度低（檢測下限為10-7gml），流動相的變化會引起折光率的變化，因此，它既不適用于痕量分析，也不適用于梯度洗脫樣品的檢測。（3）熒光檢測器凡具有熒光的物質(zhì)，在一定條件下，其發(fā)射光的熒光強度與物質(zhì)的濃度成正比。因此，這一檢測器只適用于具有熒光的有機化合物（如多環(huán)芳燒、氨基酸、胺

10、類、維生素和某些蛋白質(zhì)等）的測定，其靈敏度很高（檢測下限為10-1210-14gml），痕量分析和梯度洗脫作品的檢測均可采用。3.5 數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)該系統(tǒng)可對測試數(shù)據(jù)進行采集、貯存、顯示、打印和處理等操作，使樣品的分離、制備或鑒定工作能正確開展。各類儀器分析實驗室要求表實驗室名稱?所屬各室的要求氣相色譜分析室?主要是對容易轉(zhuǎn)化為氣態(tài)而不分解的液態(tài)有機化合物及氣態(tài)樣品的分析。儀器設備主要有氣相色譜儀，具有計算機控制系統(tǒng)及數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)，自動化程度很高，對有機化合物具有高效的分離能力，所用載氣主要有：H2、N2、Ar、He、CO2等。但對高沸點化合物，難揮發(fā)的及熱不穩(wěn)定的化合物、離子化合物、高聚物的分

11、離卻無能為力。要求局部排風及避免陽光直射在儀器上，避免影響電路系統(tǒng)正常工作的電場及磁場存在，一般設計：儀器臺（應離墻以便儀器維修）、萬向排氣罩、電腦臺（一般在儀器臺旁配置）、邊臺、洗滌臺、試劑柜等液相色譜分析室?主要體現(xiàn)在高效率分離，對復雜的有機化合物分離制取純凈化合物，定量分析和定性分析，儀器設備主要有：高效液相色譜儀，適宜于高沸點化合物、難揮發(fā)化合物、熱不穩(wěn)定化合物、離子化合物、高聚物等，彌補氣相色譜儀的不足。環(huán)境和實驗室基礎裝備設計要求與氣相色諳室相近。質(zhì)譜分析室?主要是對純有機物的定性分析，實現(xiàn)對有機化合物的分子量、分子式、分子結(jié)構(gòu)的測定，分析樣品可以是氣體、液體、固體，主要設備有質(zhì)譜儀、氣-質(zhì)聯(lián)用儀。質(zhì)譜儀是利用電磁學的原理，使物質(zhì)的離子按照基特征的質(zhì)荷比（即質(zhì)量m與電荷e之比一m/e）來進行分離并進行質(zhì)譜分析的儀器，缺點是對復雜有機混合物的分離無能為力。氣相色譜分離效率高，定量分析簡便的特點，結(jié)合質(zhì)譜儀靈敏度高，定性分析能力強的特點，兩種儀器聯(lián)用為氣-質(zhì)聯(lián)用儀。可以取長補短，提高分析質(zhì)量和效率。質(zhì)譜儀可能有汞蒸汽逸出，要考慮局部排風。光譜分析室?主要是根據(jù)物質(zhì)對光具有吸收、散射的物理特征及發(fā)射光的物理特性，在分析化學領域建立化學分析。主要