微生物限度驗(yàn)證范例(中檢所)

1、復(fù)方磷酸可待因(歐博士止咳露)溶液微生物限度檢查法驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)1. 樣品復(fù)方磷酸可待因(歐博士止咳露) ，批號(hào) 309315 、402021 ，生產(chǎn)廠家為香港歐化 藥業(yè)有限公司。2. 驗(yàn)證用菌種 枯草桿菌 CMCC (B) 63501、金黃色葡萄球菌 CMCC ( B) 26003、大腸 埃希菌 CMCC(B) 44102、白色念珠菌 CMCC (F) 98001、 黑曲霉 CMCC(F)98003 。3. 方法 中國藥典有關(guān)微生物限度檢查法方法驗(yàn)證試驗(yàn)。4. 具體操作方法4.1 菌液制備：(1) 取經(jīng)37C培養(yǎng)1824h,金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草桿菌的肉湯培養(yǎng)物1ml+9ml 鹽水， 1

2、0 倍稀釋至 10-5 10-7，細(xì)菌數(shù)約為 50100cfu/ml ，做活菌計(jì)數(shù)備用。(2) 經(jīng)25 C培養(yǎng)1824小時(shí)的白色念珠菌霉菌液體培養(yǎng)物1ml+9 ml鹽水10倍稀釋至10-5 10-7，細(xì)菌數(shù)約為 50100cfu/ml ，做活菌計(jì)數(shù)備用。(3) 取經(jīng)25 C培養(yǎng)1周的黑曲霉斜面培養(yǎng)物，加35ml鹽水洗下霉菌孢子，吸取出菌液，用標(biāo)準(zhǔn)比濁管比濁，然后取 1 ml +9 ml 鹽水，逐管 10倍稀釋為 10-4，細(xì)菌數(shù)約為 50100cfu/ml ，做活菌計(jì)數(shù)備用。4.2 供試液制備 吸取樣品 10 ml ，加 0.1%蛋白胨水氯化鈉稀釋液 90ml 濃度均為 1：10 供試液，分別

3、人工污染上述 5 種代表試驗(yàn)菌株。4.3 培養(yǎng)基稀釋法： 采用加 0.5 ml、 0.2 ml、 0.1 ml /皿供試液，再加 1520 ml 瓊脂培 養(yǎng)基，待凝固后，置規(guī)定溫度培養(yǎng) 2448 小時(shí)觀察結(jié)果細(xì)菌計(jì)數(shù)，測(cè)定回收率。結(jié)果見表：4.4 回收率測(cè)定：(1) 試驗(yàn)組: 分別取不同品種的 1：10供試液 1 ml、 50100 個(gè)/ ml 試驗(yàn)菌株同時(shí)加入平皿中，立即傾注瓊脂培養(yǎng)基，待凝固后，置規(guī)定溫度培養(yǎng)2472 小時(shí)觀察結(jié)果。薄膜過濾法以最后一次的沖洗液加入試驗(yàn)菌 .(2) 活菌組 測(cè)定每一菌株的試驗(yàn)菌數(shù)(3) 供試液對(duì)照 測(cè)定供試品本底菌數(shù)(4) 稀釋劑對(duì)照組5 結(jié)果 菌落計(jì)數(shù)結(jié)果

4、、常規(guī)法和培養(yǎng)基稀釋法在復(fù)方磷酸可待因微生物限度檢查法的驗(yàn)證結(jié)果 見表 1 、 2 和表 3。表1菌落計(jì)數(shù)（cfu/ml）實(shí)驗(yàn)次數(shù)金葡菌10-5枯草桿菌10-5白色念珠菌10-5黑曲霉10-4大腸埃希菌10-7194、90130、 8073、72110、9014、15280、7445、23128、108110、12054、343153、15078、7773、74110、10030、27從表2結(jié)果可以看出：（1）采用常規(guī)方法檢驗(yàn)復(fù)方磷酸可待因溶液供試品，人工污染5株代表菌株，該供試品對(duì)大腸埃希菌、白色念珠菌、黑曲霉的回收率試驗(yàn)均高于70%，可采用常規(guī)方法檢驗(yàn)。（2）復(fù)方磷酸可待因?qū)瘘S色葡萄球菌

5、、枯草桿菌有不同程度的抗菌活性， 供試品回收率為 0.0229.2%，均低于70%。表2復(fù)方磷酸可待因微生物限度檢查方法驗(yàn)證（常規(guī)法）實(shí)驗(yàn)次數(shù)人工染菌回收率%金葡菌枯草桿菌白色念珠菌黑曲霉大腸埃希菌10.0271.481.1100.0100.0229.229.4100.0100.0100.03抑菌抑菌100.0100.0100.0表3培養(yǎng)基稀釋法（1ml加2個(gè)平皿）復(fù)方磷酸可待因微生物限度檢查驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)次數(shù)人工染菌回收率%金葡菌枯草桿菌180.7100.0291.4100.0表3中的結(jié)果證明，采用培養(yǎng)基稀釋法可消除供試品對(duì)人工污染金黃色葡萄球菌和枯草桿菌的抑菌作用?；厥章蔬_(dá)到70%以上。因此，培養(yǎng)基稀釋法（0.5ml/皿）可用于復(fù)方磷酸可待因（歐博士止咳露）的微生物限度檢查。6結(jié)論根據(jù)驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果，確定復(fù)方磷可待因（歐博士止咳露）溶液微生物限度檢查法為細(xì)菌數(shù)測(cè)定可采用培養(yǎng)基稀釋法（0.5ml/皿）測(cè)定，霉菌數(shù)可采用常規(guī)法測(cè)定。注：常規(guī)法為1ml供試液加1