食品飼料中氨基酸的測(cè)定

1、食品飼料中氨基酸的測(cè)定目錄一、氨基酸分析儀簡(jiǎn)介一、氨基酸分析儀簡(jiǎn)介 二、氨基酸 三、氨基酸分析儀基本分析原理 四、氨基酸分析儀法與HPLC的比較 五、樣品的制備 六、影響氨基酸分析的各種因素 七、應(yīng)用日立氨基酸分析儀簡(jiǎn)介一、氨基酸分析儀：（一）氨基酸分析儀的構(gòu)成（見(jiàn)圖1)（二）氨基酸分析儀的流程圖（見(jiàn)圖2)（三）特點(diǎn)日立氨基酸分析儀的構(gòu)成、流程圖及特點(diǎn) （一）氨基酸分析儀的構(gòu)成 1、輸液?jiǎn)卧ū门c管路） 作用：輸送緩沖液、反應(yīng)液在流路系統(tǒng)中流動(dòng)。 2、進(jìn)樣單元（自動(dòng)進(jìn)樣器） 作用：將樣品在流動(dòng)相的帶動(dòng)下送入儀器體系中。 3、分離單元（離子交換柱、柱溫箱） 作用：主要是樣品的分離、將混合的樣品分

2、離成單一組分。 4、反應(yīng)單元（反應(yīng)柱、反應(yīng)溫度加熱設(shè)備） 作用：被分離的單一組分物質(zhì)與反應(yīng)液在反應(yīng)單元反應(yīng)、生成可檢測(cè)物質(zhì)。 5、檢測(cè)單元（分光光度計(jì)） 作用：準(zhǔn)確檢測(cè)單一組分物質(zhì)的電能信號(hào)（mv). 6、程序控制、數(shù)據(jù)處理（工作站）作用：儀器的運(yùn)行程序控制、檢測(cè)結(jié)果的處理。 從圖、表面看（1）自動(dòng)進(jìn)樣器（2）泵1、泵2單元（3）電磁閥（4）除氣（5）廢液槽（6）檢測(cè)器（7）氮?dú)鈫卧?）柱溫箱（9）過(guò)濾器（10）混合器（11）反應(yīng)柱單元（12）試劑和清洗液（13）保護(hù)罩。左側(cè)：電源開(kāi)關(guān)。后部 通訊接口、電源連接器、氮?dú)庠催B接器。(二）氨基酸分析儀流程圖 見(jiàn)圖（2）（三）日立氨基酸分析儀特點(diǎn)氨

3、基酸 二、氨基酸 （一）氨基酸的定義 （二）氨基酸的分類 （三）氨基酸的化學(xué)性質(zhì)自然界中的氨基酸種類很多，但組成蛋白質(zhì)的氨基酸只有20多種，從結(jié)構(gòu)式上來(lái)看組成蛋白質(zhì)的氨基酸除甘氨酸以外，都有一個(gè)不對(duì)稱碳原子、即a-碳原子，a-碳原子有四個(gè)不同的取代基：COOH羧基、NH2氨基、H氫原子、和R基團(tuán)，不同氨基酸的R基團(tuán)不同。氨基酸的R基團(tuán)又稱為側(cè)鏈，由于不同氨基酸的側(cè)鏈不同它們的分子量、解離程度和化學(xué)反應(yīng)、性能均不同。除甘氨酸外每種氨基酸都有L-構(gòu)型、D-構(gòu)型。蛋白質(zhì)中的氨基酸都是L-型的，從形狀上看氨基酸是無(wú)色的結(jié)晶物質(zhì)，它們?cè)谒芤褐酗@中性、微酸性或微堿性。蛋白質(zhì)成分中任何氨基酸均可用圖中的通

4、式來(lái)表示（脯氨酸除外）：見(jiàn)下圖（一）氨基酸的定義 （略）（二）氨基酸的分類 它的分類有兩種： 1.按氨基酸具有的酸性和堿性基團(tuán)的多少分類：2、按人體營(yíng)養(yǎng)的需求又可分為必需氨基酸、半必需氨基酸及非必需氨基酸（三）氨基酸的化學(xué)性質(zhì) 氨基酸分子中都具有氨基和羧基，因此它們都能產(chǎn)生氨基與羧基的一般反應(yīng)，如脂化、甲基化、乙?；约八釅A的中和作用等。有些氨基酸由于存在其它基團(tuán)而產(chǎn)生特殊反應(yīng)，如半胱氨酸的巰基（SH)氨基酸的化學(xué)反應(yīng) 與茚三酮反應(yīng)：茚三酮與氨基酸一起加熱，形成深蘭紫色復(fù)合物, 最大吸收波長(zhǎng)為570nm與茚三酮反應(yīng)氨基酸與水合茚三酮共同加熱被氧化分解產(chǎn)氨基酸與水合茚三酮共同加熱被氧化分解產(chǎn) 生

5、生CO2CO2、氨和比氨基酸少一個(gè)碳原子的醛，、氨和比氨基酸少一個(gè)碳原子的醛， 此時(shí)茚三酮被還原。在弱酸性溶液中，還此時(shí)茚三酮被還原。在弱酸性溶液中，還 原茚三酮與氨及另一分子茚三酮縮合成藍(lán)原茚三酮與氨及另一分子茚三酮縮合成藍(lán) 紫色化合物茚二酮胺（紫色化合物茚二酮胺（DYDADYDA）DYDADYDA在在570nm570nm 處有最大吸收。處有最大吸收。 脯氨酸、羥脯氨酸與茚三酮反應(yīng)生成黃色物 質(zhì)，在440nm處吸收峰最大。 除氨基酸以外，如NH2肽類也可與茚三酮反應(yīng) 生成有色物質(zhì)（這種反應(yīng)機(jī)理現(xiàn)應(yīng)用于我們 使用的氨基酸分析儀之中）。氨基酸分析儀分析原理三、氨基酸分析儀基本分析原理 （一）離子

6、交換柱 （二）離子交換樹(shù)脂 （三）離子交換原理 （四）氨基酸分析儀洗脫過(guò)程氨基酸分析儀與HPLC法的比較四、氨基酸分析儀與HPLC法的比較 （一）OPA法（鄰苯二甲醛） （二）PITC法 （三）DCL法 （四）2-4二硝基氟苯法 氨基酸分析儀與HPLC常規(guī)比較樣品的制備五、樣品的制備 （一）蛋白質(zhì)的水解 （二）游離氨基酸樣品的制備 （三）生理體液樣品的前處理（一）蛋白質(zhì)的水解： 用于全氨基酸測(cè)定的樣品，凡是以蛋白質(zhì)形式存在的都要進(jìn)行水解處理，水解方法有三種： 1、酸水解法：標(biāo)準(zhǔn)水解法，是普遍采用的水解方法，此方法的特點(diǎn)是水解徹底，但色氨酸遭破壞。（6N HCL、110真空水解24小時(shí)） 優(yōu)點(diǎn)：

7、HCL本身加熱可以蒸發(fā)除掉。缺點(diǎn)：溶液顯黒褐色、與含醛基化合物作用的結(jié)果。 2、堿水解法：用NaOH(LiOH、Ba(OH)2)作為水解劑，色氨酸不被破壞，但有消旋作用，絲氨酸、蘇氨酸、精氨酸、胱氨酸遭不同程度的破壞。 優(yōu)點(diǎn)：水解液清亮。缺點(diǎn)：放出氨氣和硫化氫.3、酶水解法：酶是有機(jī)催化劑，它不需要高溫高壓，而是在常溫常壓下即可催化有機(jī)物質(zhì)的合成與分解。特點(diǎn)是水解條件溫和，無(wú)需特殊設(shè)備，氨基酸不受破壞；產(chǎn)物中除氨基酸外尚有較多肽類；此方法主要用于生產(chǎn)水解蛋白及蛋白肽。缺點(diǎn)：水解時(shí)間長(zhǎng)、而且不易水解完全。 目前日本、歐洲和我國(guó)植物蛋白水解生產(chǎn)上采用的工藝均為酸水解法。（二）游離氨基酸樣品的制備

8、游離氨基酸的樣品在分析前必需進(jìn)行磨碎、脫脂、提取、脫鹽、去蛋白、脫色等處理。在進(jìn)行分析前建議使用C18過(guò)濾柱處理一下為好。（三）生理體液樣品的處理： 生理體液的樣品首先要除去樣品中的蛋白質(zhì)，獲得游離氨基酸。除去蛋白質(zhì)化學(xué)方法為： 1、苦味酸法 用1%的苦味酸沉淀，然后過(guò)柱子除苦味酸，在把氨基酸從柱子上洗脫下來(lái)進(jìn)行分析。2、三氯醋酸法 生物堿沉淀劑醫(yī)院臨床生化、常用此類試劑沉淀血漿中的蛋白質(zhì)。 3、乙醇沉淀法 當(dāng)乙醇加入含蛋白質(zhì)的水溶液中，可使蛋白質(zhì)表面失去水膜，并增大顆粒間的引力，引起蛋白質(zhì)沉淀。 4、磺基水楊酸法（常用的方法）影響氨基酸分析的各種因素六、影響氨基酸分析的各種因素 （一）樣品中

9、氨基酸濃度的影響 （二）緩沖液PH值、鈉離子濃度的影響 （三）柱溫的影響 （四）氨的影響 （五）氧存在的影響 （六）光源的影響（鎢燈） 應(yīng)用七、應(yīng)用 （一）醫(yī)學(xué)上的應(yīng)用 （二）飼料上的應(yīng)用 （三）農(nóng)業(yè)、食品、飲料及其它氨基酸自動(dòng)分析儀法測(cè)定食品（飼料）氨基酸含量 1. 原理 食品（飼料）蛋白質(zhì)經(jīng)鹽酸水解成為游離氨基酸，經(jīng)氨基酸分析儀的離子交換柱分離后，與茚三酮溶液產(chǎn)生顏色反應(yīng)，再通過(guò)分光光度計(jì)比色測(cè)定氨基酸含量。 2. 試劑3. 儀器4. 測(cè)定方法5. 結(jié)果計(jì)算酸水解原理與步驟酸水解原理與步驟氧化水解原理與步驟堿水解原理與步驟水解技術(shù)水解方式： 真空（充N）封管法 開(kāi)放式回流水解法 培養(yǎng)管水解法培養(yǎng)管水解法氮吹儀水解液蒸干技術(shù)冷井杜瓦瓶-196液氮氨基酸標(biāo)準(zhǔn)溶液譜圖Minutes0.02.55.07.510.012.515.017.520.022.525.027.530.0mV0102030405060mV01020304050604.607 Asp5.267 Thr5.840 Ser6.467 Glu7.147 9.293 Gly9.873 Ala1