實驗一巨噬細胞吞噬功能實驗

1、實驗一巨噬細胞吞噬功能實驗1 、【實驗原理】(1)巨噬細胞作為單核吞噬細胞系統(tǒng)的主要細胞，具有活躍的吞噬功能。能清除體內抗原物質及變性的細胞，在特異性及非特異性免疫中均起重要作用。M受抗原刺激后活化，可使其吞噬功能明顯增強。(2)此實驗采用體內法，即：在小鼠體內誘導腹腔巨噬細胞產生后，再給小鼠腹腔注射雞紅細胞30min后處死小鼠，取出腹腔液，以冷美藍染色，油鏡下計數吞噬雞紅細胞的百分 數，及觀察巨噬細胞中內因被殺死而染為藍色的雞紅細胞的形態(tài)、數目，以判 斷巨噬細胞中的殺傷能力，由此間接地測定機體的非特異免疫水平。2、【實驗步驟】(1)試驗前3d,小白鼠腹腔注射6%無菌淀粉液1ml,誘導巨噬細胞

2、滲出 至腹腔中。(2)實驗時，每只小鼠腹腔注射雞紅細胞液 1ml,輕揉腹部，使紅細胞在 腹腔中分布均勻，利于吞噬( 3) 30min 后，將小鼠拉頸處死，固定，打開腹腔暴露腸管，用吸管取出腹腔液，均勻涂布于載玻片上，然后再滴一小滴0.03%xx溶液，蓋上蓋玻片。（ 4)低倍鏡下找到觀察區(qū)域后，換高倍鏡下進行觀察，計數3、【實驗結果】4、【結果分析】（ 1)如圖所示，在小鼠體內誘導腹腔巨噬細胞產生后，再給小鼠注射雞紅細胞后鏡檢腹腔液，可觀察到巨噬細胞吞噬雞紅細胞的現象，并且可以看到部分雞紅細胞聚集到吞噬細胞附近。（ 2）鏡下可見吞噬細胞核呈藍色，被吞噬的雞紅細胞呈橢圓形，其胞漿呈紅色而核被染成藍

3、色。（3）由于未將腹腔液和冷美藍溶液充分混合均勻，使得視野中出現大片深染區(qū)域?？傮w實驗結果較好，視野中央可見清晰的吞噬了雞紅細胞的巨噬細胞。5、【注意事項】（ 1）涂片的薄厚要適當，否則影響計數。（ 2）小鼠腹腔注射時不要刺傷內臟。（ 3）如小鼠腹腔液過少，可注入適量生理鹽水。（ 4）剪開小鼠腹腔時應避免出血，否則將影響試驗結果。（ 5）被吞噬的雞紅細胞時間過長可被消化，時間過短未被吞噬，必須掌握好吞噬作用時間。實驗二雙向瓊脂擴散實驗1 、【實驗原理】（ 1）可溶性抗原與相應抗體特異性結合，兩者比例適當并有電解質存在及一定的溫度條件下，經一定的時間，可形成肉眼可見的沉淀線/ 環(huán)的現象，稱為沉淀

4、反應。（ 2）瓊脂擴散是指為可溶性抗原與抗體在瓊脂凝膠中所呈現的一種沉淀反應。當對應的抗原、抗體在半固體瓊脂終相遇，且二者比例適當時，便出現可見的白色沉淀線，這組沉淀線是一組抗原、抗體的特異性復合物。當瓊脂中有多組不同的抗原、抗體存在時，便各自依其擴散速度的差異，再適當的部位形成獨立的沉淀線。因此，瓊脂擴散不僅用于疾病的診斷，更廣泛地用于抗原成分的分析。（ 3）雙向瓊脂擴散試驗是定性實驗。將可溶性抗原與相應抗體分別加人瓊脂板上的孔內，兩者均可擴散，在抗原抗體比例適宜處形成可見的沉淀線。如果不是相應的抗原與抗體，就不出現沉淀線。本試驗常用于分析抗原抗體的純度及相互關系。2、【實驗步驟】（ 1）制

5、板：將熔化的1%瓊脂加在玻片上，3ml/ 板。（ 2）打孔：待 xx 凝固后，在板上打孔。（ 3）加樣：在空中加入相應抗原、抗體。（ 4）結果觀察將瓊脂板放入濕盒內置37c溫箱中24小時后取出觀察結果。3、【實驗結果】4、【結果分析】（ 1）如圖所示，在中央孔與添加抗原1 的孔之間出現沉淀線，有抗原抗體反應，為陽性反應，說明抗原1 與抗體相對應。中央孔與添加抗原2 的孔之間沒有沉淀線，說明抗原2 與抗體之間不相對應。（ 2）抗體與抗原發(fā)生擴散時，隨擴散距離的增大濃度降低，在抗原抗體比例適宜處形成可見的沉淀線。當有沉淀線出現時，說明有抗原抗體反應。5、【注意事項】（ 1）加樣時不要將瓊脂劃破，以免影響沉淀線的形成。（ 2）反應時間要適宜