臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室管理暫行辦法

1、臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)試驗(yàn)室管理暫行方法第一章 總 則      第一條 為規(guī)范臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)試驗(yàn)室管理，保證臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量，使臨床診斷和治療更為科學(xué)、合理，特制定本方法。     其次條 臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)技術(shù)指以臨床診斷治療為目的，以擴(kuò)增檢測(cè)DNA或RNA為方法的檢測(cè)技術(shù)，如聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）、連接酶鏈反應(yīng)（LCR）、轉(zhuǎn)錄依靠的放大系統(tǒng)（TAS）自主序列復(fù)制系統(tǒng)（3SR）和鏈替代擴(kuò)增（SDA）等。     第三條 本方法適用于開(kāi)展臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)的試驗(yàn)室。臨床基因擴(kuò)增

2、檢驗(yàn)試驗(yàn)室設(shè)立在二級(jí)以上醫(yī)院。     第四條 臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)試驗(yàn)室必需使用經(jīng)國(guó)家藥品監(jiān)督管理局批準(zhǔn)的臨床檢驗(yàn)試劑開(kāi)展臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)項(xiàng)目。     第五條 衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心（以下簡(jiǎn)稱(chēng)衛(wèi)生部臨檢中心）和省、自治區(qū)、直轄市臨床檢驗(yàn)中心（以下簡(jiǎn)稱(chēng)省臨檢中心）負(fù)責(zé)對(duì)所轄行政區(qū)域內(nèi)臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)試驗(yàn)室的質(zhì)量監(jiān)督管理工作。其次章 試驗(yàn)室設(shè)置和驗(yàn)收      第六條 擬設(shè)置臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)試驗(yàn)室的醫(yī)療機(jī)構(gòu)依據(jù)臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)試驗(yàn)室基本設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)（見(jiàn)附件）籌建試驗(yàn)室；籌建完成后，由法定

3、代表人向衛(wèi)生部臨檢中心提出技術(shù)驗(yàn)收申請(qǐng)。申請(qǐng)時(shí)需提交以下材料：     （一）醫(yī)療機(jī)構(gòu)執(zhí)業(yè)許可證復(fù)印件；     （二）可行性爭(zhēng)辯報(bào)告；     1、 擬設(shè)臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)試驗(yàn)室機(jī)構(gòu)的所在地醫(yī)療衛(wèi)生資源狀況、本機(jī)構(gòu)的基本狀況、對(duì)臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)的需求以及臨床基因擴(kuò)增試驗(yàn)室運(yùn)行的猜測(cè)分析；     2、 擬設(shè)臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)試驗(yàn)室的設(shè)置平面圖；     3、 擬設(shè)臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)試驗(yàn)室將開(kāi)展的檢驗(yàn)項(xiàng)

4、目、試驗(yàn)設(shè)備條件和有關(guān)技術(shù)人員資料     第七條 衛(wèi)生部臨檢中心和省臨檢中心共同組織相關(guān)專(zhuān)業(yè)的專(zhuān)家組（以下簡(jiǎn)稱(chēng)專(zhuān)家組），依據(jù)臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)試驗(yàn)室基本設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)對(duì)提出申請(qǐng)的臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)試驗(yàn)室進(jìn)行技術(shù)驗(yàn)收。驗(yàn)收完成后，在20日內(nèi)將驗(yàn)收?qǐng)?bào)告寄送至申請(qǐng)機(jī)構(gòu)。     第八條 經(jīng)專(zhuān)家組技術(shù)驗(yàn)收合格的醫(yī)療機(jī)構(gòu)將本方法第六條規(guī)定的材料及專(zhuān)家組驗(yàn)收?qǐng)?bào)告送至省級(jí)行政部備案。在將符合規(guī)定的全部材料送達(dá)省級(jí)衛(wèi)生行政部門(mén)后15日內(nèi)未收到省級(jí)衛(wèi)生行政部門(mén)不同意的意見(jiàn)，方可開(kāi)展專(zhuān)家組技術(shù)驗(yàn)收合格的臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)項(xiàng)目。 

5、60;   第九條 未經(jīng)專(zhuān)家組驗(yàn)收合格并報(bào)省級(jí)衛(wèi)生行政部門(mén)備案的醫(yī)療機(jī)構(gòu)不得擅自開(kāi)展臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)項(xiàng)目。第三章 試驗(yàn)室監(jiān)督管理      第十條 臨床基因檢驗(yàn)試驗(yàn)室必需依據(jù)臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)試驗(yàn)室工作規(guī)范（另發(fā)）開(kāi)展臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)工作。     第十一條 臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)試驗(yàn)室技術(shù)人員必需進(jìn)行上崗培訓(xùn)。經(jīng)培訓(xùn)合格者，由培訓(xùn)單位發(fā)給合格證書(shū)，并將培訓(xùn)合格人員名單報(bào)衛(wèi)生部臨檢中心備案。獲得培訓(xùn)合格證書(shū)者方可從事臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)工作。     培訓(xùn)單位為衛(wèi)生部

6、臨檢中心，或由省級(jí)衛(wèi)生行政部門(mén)指定并經(jīng)衛(wèi)生部臨檢中心認(rèn)定的機(jī)構(gòu)。培訓(xùn)時(shí)使用規(guī)定的統(tǒng)一教材。     第十二條 以科研為目的的基因擴(kuò)增檢驗(yàn)項(xiàng)目。不得向臨床出具檢驗(yàn)報(bào)告，不得向病人收取任何費(fèi)用。     第十三條 臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)試驗(yàn)室必需依據(jù)臨床基因擴(kuò)增試驗(yàn)室工作規(guī)范開(kāi)展室內(nèi)質(zhì)量把握，并參與衛(wèi)生部臨檢中心組織的室內(nèi)質(zhì)量評(píng)價(jià)。第十四條 衛(wèi)生部臨檢中心依據(jù)本方法和臨床基因擴(kuò)增試驗(yàn)室工作規(guī)范協(xié)調(diào)、組織省臨檢中心對(duì)臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)試驗(yàn)室的檢驗(yàn)質(zhì)量進(jìn)行監(jiān)測(cè)。監(jiān)測(cè)結(jié)果報(bào)省級(jí)衛(wèi)生行政部門(mén)，同時(shí)抄送被監(jiān)測(cè)的臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)試驗(yàn)室所在

7、醫(yī)療機(jī)構(gòu)。      第十五條 衛(wèi)生部臨檢中心或省級(jí)臨檢中心受省級(jí)以上衛(wèi)生行政部門(mén)托付可對(duì)臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)試驗(yàn)室進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)檢查，現(xiàn)場(chǎng)檢查工作人員在履行職責(zé)時(shí)應(yīng)出示證件。在進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)檢查時(shí)，檢查人員有權(quán)調(diào)閱有關(guān)資料，被檢查機(jī)構(gòu)不得拒絕或隱瞞。     第十六條 衛(wèi)生部臨檢中心對(duì)在室間質(zhì)量評(píng)價(jià)中不合格的臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)試驗(yàn)室提出警告，對(duì)連續(xù)二次或三次中有二次發(fā)覺(jué)臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)結(jié)果不合格的臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)試驗(yàn)室，衛(wèi)生部臨檢中心報(bào)省級(jí)以上衛(wèi)生行政部門(mén)由省級(jí)以上衛(wèi)生行政部門(mén)責(zé)令其暫停有關(guān)臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)項(xiàng)目，限期整改。經(jīng)專(zhuān)家組

8、進(jìn)行再次技術(shù)驗(yàn)收并合格，并報(bào)省級(jí)衛(wèi)生行政部門(mén)核準(zhǔn)后，方可重新開(kāi)展臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)項(xiàng)目。     第十七條 對(duì)于未經(jīng)衛(wèi)生部臨檢中心組織的專(zhuān)家組技術(shù)驗(yàn)收合格并報(bào)省級(jí)衛(wèi)生部門(mén)備案，擅自開(kāi)展臨床基因檢驗(yàn)項(xiàng)目的醫(yī)療機(jī)構(gòu)，由省級(jí)衛(wèi)生行政部門(mén)依據(jù)醫(yī)療機(jī)構(gòu)管理?xiàng)l例第四十七條和醫(yī)療機(jī)構(gòu)管理?xiàng)l例實(shí)施細(xì)則第八十條予以懲罰，并予以公告。公告所需費(fèi)用由被公告機(jī)構(gòu)支付。     第十八條 消滅下列狀況之一的臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)試驗(yàn)室，由省級(jí)衛(wèi)生行政部門(mén)責(zé)令其停止開(kāi)展臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)，并對(duì)其所在醫(yī)療機(jī)構(gòu)予以公告。公告所需費(fèi)用由被公告機(jī)構(gòu)支付：

9、60;    （一） 開(kāi)展超出衛(wèi)生部臨檢中心組織的技術(shù)驗(yàn)收合格并報(bào)省級(jí)衛(wèi)生行政部門(mén)備案 臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)項(xiàng)目的；     （二） 使用未經(jīng)國(guó)家藥品監(jiān)督管理局批準(zhǔn)的試劑開(kāi)展臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)的；     （三） 在臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)中未開(kāi)展室內(nèi)質(zhì)量把握的；     （四） 在臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)中未參與室間質(zhì)量評(píng)價(jià)的；     （五） 在臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)中弄虛作假的；    

10、（六） 以科研為目的的基因擴(kuò)增檢驗(yàn)項(xiàng)目向病人收取費(fèi)用的；     （七） 使用未經(jīng)培訓(xùn)合格的專(zhuān)業(yè)技術(shù)人員從事臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)的；第四章 附 則      第十九條 對(duì)采供血機(jī)構(gòu)的基因擴(kuò)增檢驗(yàn)試驗(yàn)室開(kāi)展基因擴(kuò)增檢驗(yàn)項(xiàng)目的管理，參照本方法執(zhí)行。     其次十條 衛(wèi)生部臨檢中心組織的專(zhuān)家組對(duì)申請(qǐng)開(kāi)展臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)的試驗(yàn)室進(jìn)行技術(shù)驗(yàn)收所需費(fèi)用按國(guó)家有關(guān)規(guī)定執(zhí)行。     其次十一條 本方法由衛(wèi)生部負(fù)責(zé)解釋。   

11、;  其次十二條 本方法自發(fā)布之日起施行。     附：臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)試驗(yàn)室基本設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)臨床檢驗(yàn)擴(kuò)增檢驗(yàn)試驗(yàn)室管理暫行方法，制定本標(biāo)準(zhǔn)      一、 臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)試驗(yàn)室區(qū)域設(shè)置原則     （一） 臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)試驗(yàn)室區(qū)域設(shè)置原則     1、 試劑儲(chǔ)存和預(yù)備區(qū)     2、 標(biāo)本制備區(qū)     3、 擴(kuò)增反應(yīng)混合物配制和擴(kuò)增區(qū)

12、60;    4、 擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)     如使用全自動(dòng)分析儀，區(qū)域可適當(dāng)合并。（二） 各工作區(qū)域必需有明確的標(biāo)記，避開(kāi)不同工作區(qū)域內(nèi)的設(shè)備、物品混用。     （三） 進(jìn)入各工作區(qū)域必需嚴(yán)格依據(jù)單一方向進(jìn)行，即試劑儲(chǔ)存和預(yù)備區(qū) >標(biāo)本制備區(qū)>擴(kuò)增反應(yīng)混合物配制和擴(kuò)增區(qū)>擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)。     （四） 不同的工作區(qū)域使用不同的工作服（例如不同的顏色）。工作人員離開(kāi)各工作區(qū)域時(shí)，不得將工作服帶出。  

13、0;  二、 工作區(qū)域儀器設(shè)備配置標(biāo)準(zhǔn)     （一） 試劑儲(chǔ)存和預(yù)備區(qū)     1、2-8C和-15C冰箱     2、混勻器     3、微量加樣器（掩蓋1-1000ul）     4、移動(dòng)紫外燈（近工作臺(tái)面）     5、消耗品：一次性手套、一次性吸水紙、耐高壓處理的離心管和加樣器吸頭（帶濾心）    

14、 6、專(zhuān)用工作服和工作鞋     7、專(zhuān)用辦公用品     （二） 標(biāo)本制備區(qū)     1、2-8C冰箱、-20C或-80C冰箱     2、高速臺(tái)式冷凍離心機(jī)     3、混允器     4、水浴箱或加熱模塊     5、微量加樣器（掩蓋1-1000ul）     6、可移動(dòng)紫

15、外燈（近工作臺(tái)面）     7、超凈工作臺(tái)     8、消耗品：一次性手套、一次性吸水紙、耐高壓處理的離心管和加樣器吸頭（帶濾心）     9、專(zhuān)用工作服和工作鞋     10、專(zhuān)用辦公用品     如需處理大分子DNA，應(yīng)具有超聲波水浴儀。     （三） 擴(kuò)增反應(yīng)混合物配制和擴(kuò)增區(qū)     1、 核酸擴(kuò)增儀

16、0;    2、 微量加樣器（掩蓋1-1000ul）     3、 可移動(dòng)紫外燈（近工作臺(tái)面）     4、 消耗品：一次性手套、一次性吸水紙、耐高壓處理的離心管和加樣器吸頭（帶濾心）     5、 專(zhuān)用工作服和工作鞋     6、 專(zhuān)用辦公用品     (四)擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)     視檢驗(yàn)方法不同而定?；緝x器設(shè)備如下：

17、60;    1、 微量加樣器（掩蓋1-1000ul）     2、 可移動(dòng)紫外燈（近工作臺(tái)面）     3、 消耗品：一次性手套、一次性吸水紙、加樣器吸頭（帶濾心）     4、 專(zhuān)用工作服和工作鞋     5、 專(zhuān)用辦公用品    為了對(duì)以個(gè)特定序列進(jìn)行PCR做重復(fù)檢測(cè),需要三個(gè)不同的區(qū)域,每一個(gè)區(qū)域的具體技術(shù)操作和試劑在下面具體列出.  1、樣品預(yù)備區(qū)

18、    這個(gè)區(qū)域特地用作樣品的預(yù)備，在制備和操作用于核酸提取的試劑時(shí)應(yīng)當(dāng)采    取預(yù)防措施：    1）PCR產(chǎn)物和帶有要擴(kuò)增序列的DNA克隆不能在這個(gè)房間操作。    2）組織培育物、組織標(biāo)本和血清樣品都帶進(jìn)樣品預(yù)備間處理，以依據(jù)應(yīng)用的需要提取DNA或RNA。    3）用于樣品處理的工具不能被用作一般分子克隆的工具，也不能用作操作靶序列。    4）D

19、NA樣品應(yīng)當(dāng)用有特地的防護(hù)或正壓活塞式移液管操作，以防止在吸取樣品時(shí)有氣溶膠遺留。    5）大體積樣品應(yīng)當(dāng)用單獨(dú)包裝的無(wú)菌一次性移液管吸取。    6）管子打開(kāi)前都要簡(jiǎn)短離心以削減氣溶膠的產(chǎn)生，而且管子不能用力崩開(kāi)，這樣會(huì)產(chǎn)生氣溶膠。    7）任何時(shí)候都應(yīng)當(dāng)穿試驗(yàn)服和帶手套，手套要經(jīng)常更換，尤其在抽提過(guò)程中每一步之間都要更換。試驗(yàn)服要特地用于樣品預(yù)備間，經(jīng)常清洗。    2、樣品預(yù)備和RNA-PCR   

20、0; RNA-PCR的額外步驟需要額外的樣品操作，這樣增加了樣品之間污染的機(jī)會(huì)。為了避開(kāi)這一問(wèn)題，反轉(zhuǎn)錄一步可以在樣品預(yù)備區(qū)進(jìn)行。在RNA-PCR中應(yīng)用UNG以防止污染的方法也有報(bào)道。    3、前PCR區(qū)    必需有特地用于預(yù)備各種反應(yīng)的區(qū)域，這個(gè)區(qū)域必需保持潔凈，而且沒(méi)有來(lái)自克隆和樣品預(yù)備的污染。前PCR區(qū)必需要有試劑和預(yù)備，特殊是特地用于前PCR區(qū)的正壓活塞式移液管。    4、PCR試驗(yàn)室試劑的操作    1）所用的

21、全部溶液都應(yīng)當(dāng)沒(méi)有核酸和（或）核酸酶（DNase和RNase）污染。    2）全部PCR試劑中使用的水都應(yīng)當(dāng)是高質(zhì)量的新穎蒸餾的去離子水，用0.22m過(guò)濾的，并且是高壓滅菌。    3）在20到25貯存的試劑建議加點(diǎn)像疊氮鈉一類(lèi)的抗微生物劑，在擴(kuò)增試劑或樣品制備試劑中加入0.025%的疊氮鈉不抑制擴(kuò)增反應(yīng)。    4）所用試劑都應(yīng)當(dāng)以大體積配制，試驗(yàn)一下看試劑是否滿足，然后分裝成僅夠一次使用的量進(jìn)行貯存。    5）全部試劑和樣品預(yù)備過(guò)程中都要使用一次性滅菌的瓶子和管子。    6）新配制的試劑在用于預(yù)備新的標(biāo)本之前應(yīng)當(dāng)加以檢驗(yàn)。    7）樣品預(yù)備和前PCR區(qū)所使用的移液管在不使用時(shí)都應(yīng)當(dāng)當(dāng)心保存。    5、在前PCR區(qū)建立PCR混合物    1）可以把即刻可用的“主混合物”溶液配好、分裝并保存在-20或4，在試驗(yàn)室只涉及到擴(kuò)增一種或少數(shù)幾種特異序列時(shí)這樣做很有用。   &