體內(nèi)藥物分析

1、.體內(nèi)藥物分析Biopharmaceutical analysis.體內(nèi)藥物分析概述一、體內(nèi)藥物分析的定義 研究生物機(jī)體中藥物及其代謝物和內(nèi)源性物質(zhì)的質(zhì)和量變化規(guī)律的分析方法學(xué)。 藥物分析, 法醫(yī)鑒定, 毒物分析 .二、體內(nèi)藥物分析的意義（一）在新藥評(píng)價(jià)和開(kāi)發(fā)中的意義 1全面質(zhì)量控制 (毒奶粉事件) 藥品三原則藥品三原則: : 安全安全, ,合理和有效合理和有效 2新藥報(bào)批 3為設(shè)計(jì)新藥提供信息 從代謝產(chǎn)物中開(kāi)發(fā)新藥(保泰松和羥基保泰松) 前藥設(shè)計(jì) 新劑型的研究，緩控釋、經(jīng)皮制劑等 以上內(nèi)容必須通過(guò)測(cè)定體內(nèi)藥物濃度得以解決. 1血藥濃度與藥理作用 思考題:劑量增加劑量增加, , 藥效是否成正比

2、增加藥效是否成正比增加?（二）臨床合理用藥中的意義（二）臨床合理用藥中的意義 .2. 影響血藥濃度的因素（1）機(jī)體因素 a生理因素: 年齡、性別、生理狀況（妊娠期） b病理因素（胃腸道、肝臟、腎臟） c遺傳因素（乙?；D(zhuǎn)移酶代謝異煙肼、乙醇脫氫酶）（2）藥物因素 a劑型因素（生物利用度問(wèn)題） b藥物合并使用（酶抑、酶促） c環(huán)境因素（環(huán)境污染、食品、個(gè)人精神狀態(tài)）.分析目標(biāo)藥物在體內(nèi)的某藥物在體內(nèi)的某些代謝產(chǎn)物常具些代謝產(chǎn)物常具有一定的生理活有一定的生理活性性, ,它們?cè)隗w內(nèi)它們?cè)隗w內(nèi)的變化規(guī)律對(duì)母的變化規(guī)律對(duì)母體藥物的藥理學(xué)體藥物的藥理學(xué)與毒理學(xué)評(píng)價(jià)特與毒理學(xué)評(píng)價(jià)特別重要?jiǎng)e重要. .機(jī)體內(nèi)源

3、性生物機(jī)體內(nèi)源性生物活性物質(zhì)往往參活性物質(zhì)往往參與機(jī)體重要的生與機(jī)體重要的生理過(guò)程理過(guò)程, ,其變化其變化規(guī)律的異常改變規(guī)律的異常改變也與某些疾病的也與某些疾病的發(fā)病機(jī)制密切相發(fā)病機(jī)制密切相關(guān)關(guān)母藥母藥藥物特有藥物特有代謝產(chǎn)物代謝產(chǎn)物體內(nèi)內(nèi)源性體內(nèi)內(nèi)源性生物活性物生物活性物質(zhì)質(zhì).三、體內(nèi)藥物分析的對(duì)象人動(dòng)物鼠兔犬大鼠小鼠男女等等猴猩猩都是一些志愿者須動(dòng)物管理與使用委員會(huì)同意.分析對(duì)象.藥物在體內(nèi)的形態(tài)游離型代謝產(chǎn)物游離型原藥結(jié)合型原藥結(jié)合型代謝產(chǎn)物情形極為復(fù)雜綴合物分子間力結(jié)合化學(xué)共價(jià)結(jié)合稱為兩類.四、體內(nèi)藥物分析的特點(diǎn)1干擾雜質(zhì)多(內(nèi)源性物質(zhì), 分離純化)2樣品濃度低(富集,凈化)3取樣量少

4、4工作量大5時(shí)間短6有一定設(shè)備.五、體內(nèi)藥物分析方法n1.色譜分析法：TLC、GC、HPLC、HPCEn2.免疫分析法：放射免疫分析法、酶免疫分析法、熒光免疫分析法等n3.生物學(xué)方法：微生物學(xué)方法用于抗生素類藥物的體內(nèi)分析，如生物利用度，生物等效性或臨床TDM等體內(nèi)樣品測(cè)定.12 第一節(jié)第一節(jié) 常用體內(nèi)樣品的制備與貯藏常用體內(nèi)樣品的制備與貯藏一、生物樣品的采集與貯藏 體內(nèi)藥物分析常用的分析品種有血液、尿液、唾液，也可用乳汁、淚液、腦脊液、膽汁等。.（一）樣品的采集1血樣 血樣濃度與作用點(diǎn)的濃度密切相關(guān)，可以反映靶器官的濃度。 血細(xì)胞血漿（plasma）血小板血清（serum）血細(xì)胞測(cè)定血樣中平

5、均分布于細(xì)胞內(nèi)和細(xì)胞外的藥濃抗凝自然全血血液.2尿樣目的：藥物劑量回收，藥物清除，藥物代謝和生物利用度特點(diǎn)：濃度高，易于收集，體內(nèi)代謝研究，應(yīng)水解分 離優(yōu)點(diǎn)：易得，屬非損傷性取樣，樣品量大；尿中藥物濃度高，含有綴合物或代謝物，是研究代謝物結(jié)構(gòu)的首選樣品；蛋白含量極低，不需去蛋白處理。缺點(diǎn)： 與血藥濃度不相關(guān)，難以反映藥物作用過(guò)程；受腎功能、pH影響；難以定時(shí)定量取樣，易污染；所含成分復(fù)雜，已知其中有紫外吸收的化合物就達(dá)數(shù)十種。.3唾液 唾液是無(wú)損傷性采樣，易唾液是無(wú)損傷性采樣，易采集采集。一些藥物的唾液藥濃（一些藥物的唾液藥濃（S S）與）與血漿游離藥濃血漿游離藥濃(P)(P)密切相關(guān)，因此，

6、在密切相關(guān)，因此，在TDMTDM中可利用測(cè)定中可利用測(cè)定S S代替代替P P監(jiān)測(cè)；唾液樣品也可用于藥代動(dòng)力學(xué)研究。監(jiān)測(cè)；唾液樣品也可用于藥代動(dòng)力學(xué)研究。優(yōu)點(diǎn)：不受時(shí)間和地點(diǎn)的限制，可反復(fù)采集，采集時(shí)無(wú)痛苦、無(wú)感染危險(xiǎn)；唾液成分比血液、尿液簡(jiǎn)單，提取方便，有時(shí)可直接上樣測(cè)定；有些唾液中藥物濃度可以反映血漿中游離型藥物濃度。.16 缺點(diǎn)： 唾液是各腺體分泌的的混合液體，其組成發(fā)生經(jīng)時(shí)變動(dòng)。 S/P只有少數(shù)藥物是恒定值。 蛋白結(jié)合率較高的藥物，藥物在唾液中的濃度低。 對(duì)有些患者（昏迷）不能采集唾液樣品。.（二）樣品的貯藏1血樣（血漿、血清）及時(shí)分離冷藏， -70加入穩(wěn)定 劑NaF2尿樣 尿中水、無(wú)機(jī)

7、鹽、尿素等細(xì)菌的生長(zhǎng)， 4保存 加入防腐劑 a1%甲苯 b飽和氯仿 cpH改變3唾液：同血樣.18第二節(jié)第二節(jié) 生物樣品的預(yù)處理與制備生物樣品的預(yù)處理與制備30%以上工作和費(fèi)用用在樣品前處理上以上工作和費(fèi)用用在樣品前處理上.二、生物樣品的預(yù)處理（一）預(yù)處理的目的（一）預(yù)處理的目的n將藥物從綴合物（尿）或結(jié)合物中釋放出來(lái)，以測(cè)定藥物的總濃將藥物從綴合物（尿）或結(jié)合物中釋放出來(lái)，以測(cè)定藥物的總濃度度n將微量藥物從復(fù)雜的介質(zhì)中純化、富集出來(lái)將微量藥物從復(fù)雜的介質(zhì)中純化、富集出來(lái)（分離濃縮）n防止分析儀器的污染，提高測(cè)定靈敏度和選擇性等（防止分析儀器的污染，提高測(cè)定靈敏度和選擇性等（出現(xiàn)渾濁和沉淀，雜

8、質(zhì)多，與試劑起反應(yīng)，影響色譜柱壽命）.（二）處理方法選擇的一般原則1藥物理化性質(zhì) pKa 親脂性 揮發(fā)性 溶解度 光譜特征 穩(wěn)定性2濃度范圍 靈敏的方法3測(cè)定的目的 定性 定量 母體 代謝4生物樣品的種類5樣品處理與分析方法的選擇 專一性 靈敏性.處理步驟與方法處理步驟與方法全血/血漿，組織(1)蛋白沉淀(2)調(diào)節(jié)pH選擇性溶劑提取放射免疫分析殘?jiān)瘜W(xué)衍生化(提取烴基化)堿回提酸回提HPLCUV、FLD、ECDTLC分光光度法UV、FLDGCFIDECDN/P-FIDGC-MS.去除蛋白去除蛋白質(zhì)方法質(zhì)方法分離與富分離與富集方法集方法微透析微透析技術(shù)技術(shù)綴合物綴合物水解水解化學(xué)衍化學(xué)衍生化生化

9、萃取萃取如何進(jìn)行？如何進(jìn)行？常用體內(nèi)樣品預(yù)處理方法常用體內(nèi)樣品預(yù)處理方法蛋白質(zhì)的去除加入與水混融的有機(jī)溶劑(乙腈、甲醇、丙酮、四氫呋喃)加入中性鹽(飽和硫酸銨、硫酸鈉、枸櫞酸鹽)加入強(qiáng)酸(三氯醋酸、高氯酸、偏磷酸)加入金屬沉淀劑(CuSO4-Na2WO4、ZnSO4-NaOH)綴合物的水解酸水解(鹽酸)酶水解(葡糖酸苷酶、硫酸酯酶、枯草菌溶素)有機(jī)破壞 (硝酸-高氯酸消化)分離、純化與濃集液-液萃取法 (Liquid-Liquid Extraction,LLE)液-固萃取法 (Liquid-Solid Extraction,LSE)溶解劑法 (硝酸-高氯酸消化)常用體內(nèi)樣品預(yù)處理方法常用體內(nèi)樣

10、品預(yù)處理方法.（三）生物樣品去蛋白處理目的： 去除蛋白質(zhì)可使結(jié)合型的藥物釋放出來(lái)，以便測(cè)定藥物的總濃度；去除蛋白質(zhì)也可預(yù)防提取過(guò)程中蛋白質(zhì)發(fā)泡，減少乳化的形成，以及可以保護(hù)儀器性能，延長(zhǎng)使用期限.1加入與水能混溶的有機(jī)溶劑及中性鹽 甲醇 乙腈 甲醇1:2 乙腈1:1.5 （NH4）2SO4 NaCl2加入酸性沉淀劑 三氯醋酸 高氯酸 苦味酸等 使蛋白質(zhì)分子的陽(yáng)離子形成不溶性鹽而，pH低于等電點(diǎn).3組織酶消化法加入酶使蛋白質(zhì)水解優(yōu)點(diǎn)：平衡條件下進(jìn)行，可避免反應(yīng)和降解 可改善對(duì)蛋白結(jié)合率強(qiáng)的藥物的回收率 不產(chǎn)生乳化4其他 加熱 超濾 .（四）生物樣品綴合物水解1酸水解 ： 0.1mol/L HCl

11、，100，30min， 條件較劇烈，易致藥物分解，空白值也高。2酶水解：葡萄糖醛酸苷酶或硫酸酯酶，也可用二者的混和物。一般在pH4.5-7，37數(shù)小時(shí)，條件溫和，選擇性強(qiáng)，但費(fèi)用較高。3溶劑解：綴合物（主要是硫酸酯）往往可通過(guò)加入的溶劑在萃取過(guò)程中被分解。為測(cè)定尿液中藥物總量，要將綴合物水解：為測(cè)定尿液中藥物總量，要將綴合物水解：.是以多孔半透膜（超濾膜）作為分是以多孔半透膜（超濾膜）作為分離介質(zhì)的一種膜分離技術(shù)，選用不離介質(zhì)的一種膜分離技術(shù)，選用不同的孔徑的不對(duì)稱膜，即可按照分同的孔徑的不對(duì)稱膜，即可按照分子量大小進(jìn)行分離子量大小進(jìn)行分離適合適合TDM血樣分析血樣分析Therapeutic

12、drug monitoring（五）超濾分離法why?某些藥物或者代謝產(chǎn)物極性大，揮某些藥物或者代謝產(chǎn)物極性大，揮發(fā)性低，或者對(duì)檢測(cè)器不夠靈敏，發(fā)性低，或者對(duì)檢測(cè)器不夠靈敏，難以滿足常規(guī)難以滿足常規(guī)HPLC及及GC檢測(cè)的檢測(cè)的需要，因此進(jìn)行衍生需要，因此進(jìn)行衍生How for GC?硅烷化硅烷化酰化?；榛榛粚?duì)稱化不對(duì)稱化（六）化學(xué)衍生法.why?某些藥物或者代謝產(chǎn)物極性大，揮某些藥物或者代謝產(chǎn)物極性大，揮發(fā)性低，或者對(duì)檢測(cè)器不夠靈敏，發(fā)性低，或者對(duì)檢測(cè)器不夠靈敏，難以滿足常規(guī)難以滿足常規(guī)HPLC及及GC檢測(cè)的檢測(cè)的需要，因此進(jìn)行衍生需要，因此進(jìn)行衍生How for LC?UVFL非對(duì)

13、映衍非對(duì)映衍生化生化.31（五）分離、純化與濃集（五）分離、純化與濃集 有有差別差別才有可能分離！才有可能分離！ 生物樣品含有大量可影響測(cè)定的內(nèi)源生物樣品含有大量可影響測(cè)定的內(nèi)源性雜質(zhì)，加上服用的藥物、代謝物、同時(shí)性雜質(zhì)，加上服用的藥物、代謝物、同時(shí)服用的其他藥物，組成一個(gè)極其復(fù)雜的混服用的其他藥物，組成一個(gè)極其復(fù)雜的混合物。合物。 如何將微量的藥物從如此復(fù)雜的混合如何將微量的藥物從如此復(fù)雜的混合物中分離出來(lái)？物中分離出來(lái)？.生物樣品的萃取優(yōu)點(diǎn)：與雜質(zhì)分離簡(jiǎn)便 濃集 提取率高1、液液萃取法、液液萃取法原理：多數(shù)藥物是親脂性的原理：多數(shù)藥物是親脂性的，在適當(dāng)?shù)挠?，在適當(dāng)?shù)挠袡C(jī)溶劑中的溶解度大于在

14、水相中的溶解度，機(jī)溶劑中的溶解度大于在水相中的溶解度，而生物樣品中的大多數(shù)而生物樣品中的大多數(shù)內(nèi)源性雜質(zhì)是強(qiáng)極內(nèi)源性雜質(zhì)是強(qiáng)極性的水溶性物質(zhì)（性的水溶性物質(zhì)（差別）差別）。因而用有機(jī)溶。因而用有機(jī)溶劑萃取一次即可除去大部分雜質(zhì)，從大量劑萃取一次即可除去大部分雜質(zhì)，從大量的樣品中提取藥物經(jīng)濃集后測(cè)定。的樣品中提取藥物經(jīng)濃集后測(cè)定。.33采用采用LLE要考慮的幾個(gè)問(wèn)題要考慮的幾個(gè)問(wèn)題（1）溶劑的選擇與純度要求）溶劑的選擇與純度要求 純度純度AR以上以上 了解藥物與溶劑的化學(xué)結(jié)構(gòu)與性質(zhì)，按相似相了解藥物與溶劑的化學(xué)結(jié)構(gòu)與性質(zhì)，按相似相溶原則選用對(duì)藥物的未電離分子可溶，而對(duì)電溶原則選用對(duì)藥物的未電離分

15、子可溶，而對(duì)電離形式的分子不溶（光譜分析法）沸點(diǎn)低、易離形式的分子不溶（光譜分析法）沸點(diǎn)低、易揮發(fā)、濃集與水不相混溶無(wú)毒，不易燃燒揮發(fā)、濃集與水不相混溶無(wú)毒，不易燃燒不易形成乳化（氯仿易乳化，毒性大）具有較不易形成乳化（氯仿易乳化，毒性大）具有較高的化學(xué)穩(wěn)定性和惰性不影響紫外測(cè)定高的化學(xué)穩(wěn)定性和惰性不影響紫外測(cè)定毒性大的盡量不用毒性大的盡量不用.34（3）水相的）水相的PH值值 主要由藥物的主要由藥物的pKa決定！決定?。?）有機(jī)溶劑相和水相的體積比）有機(jī)溶劑相和水相的體積比 1 1或或2 1 由實(shí)際情況決定，文獻(xiàn)中有的由實(shí)際情況決定，文獻(xiàn)中有的10 1以上以上生物樣品一般多在堿性下提??！生物

16、樣品一般多在堿性下提??！.35由于血藥濃度較低，提取時(shí)需濃集由于血藥濃度較低，提取時(shí)需濃集 傳統(tǒng)的濃集方法主要有兩種：一種是在傳統(tǒng)的濃集方法主要有兩種：一種是在末次提取時(shí)加入的提取液盡量少，使被測(cè)組末次提取時(shí)加入的提取液盡量少，使被測(cè)組分提取到小體積溶劑中，然后直接吸出適量分提取到小體積溶劑中，然后直接吸出適量供測(cè)定。供測(cè)定。 另一種是揮去提取溶劑后，再用少量適另一種是揮去提取溶劑后，再用少量適合的溶劑溶解后測(cè)定。合的溶劑溶解后測(cè)定。.36 衡量提取方法優(yōu)劣的一個(gè)重要指標(biāo)就衡量提取方法優(yōu)劣的一個(gè)重要指標(biāo)就是提取回收率，它是指藥物從生物樣品中是提取回收率，它是指藥物從生物樣品中被分離出來(lái)用于測(cè)定

17、的比例，一般應(yīng)高于被分離出來(lái)用于測(cè)定的比例，一般應(yīng)高于60%-乙酸乙酯、叔丁基甲基醚可用于乙酸乙酯、叔丁基甲基醚可用于80%藥物的萃取藥物的萃取.37文獻(xiàn)上常提到的文獻(xiàn)上常提到的LLE的缺點(diǎn)的缺點(diǎn) 傳統(tǒng)萃取方式回收率低、樣品用傳統(tǒng)萃取方式回收率低、樣品用量大、繁瑣費(fèi)時(shí)、溶劑用量大、溶劑量大、繁瑣費(fèi)時(shí)、溶劑用量大、溶劑毒性大、易乳化、不能自動(dòng)化操作毒性大、易乳化、不能自動(dòng)化操作.38 關(guān)于固相萃取小柱：a.常見(jiàn)的固相萃取柱分為三部分：醫(yī)用聚丙烯柱管，多孔聚丙烯篩板(20m)和填料(多為40-60m，80-100m)。b.常用規(guī)格：100mg/1ml，200mg/3ml，500mg/3ml，1g/

18、6ml等。以100mg/1ml為例： 其中100mg為填料的質(zhì)量，1ml是空柱管的體積。c.一次性使用：為避免交叉污染，保證檢測(cè)可靠性，SPE柱通常是一次性使用的。2.固相萃取(Solid Phase Extraction，簡(jiǎn)稱，簡(jiǎn)稱SPE)法.39SPE填料填料親脂型親脂型:大孔吸附樹(shù)脂，親脂性鍵合硅膠。大孔吸附樹(shù)脂，親脂性鍵合硅膠。親水型：硅膠、硅藻土。親水型：硅膠、硅藻土。離子交換：苯磺酸基，羧基等。離子交換：苯磺酸基，羧基等。.40固相萃取操作一般有五步：固相萃取操作一般有五步：活化活化甲醇潤(rùn)濕小柱，活化填料，除去雜質(zhì)并創(chuàng)造一甲醇潤(rùn)濕小柱，活化填料，除去雜質(zhì)并創(chuàng)造一定的溶劑環(huán)境。定的溶

19、劑環(huán)境。平衡平衡水或適當(dāng)緩沖液沖洗小柱。水或適當(dāng)緩沖液沖洗小柱。上樣上樣將樣品用一定的溶劑溶解，轉(zhuǎn)移入柱并使組分將樣品用一定的溶劑溶解，轉(zhuǎn)移入柱并使組分保留在柱上。棄去廢液保留在柱上。棄去廢液淋洗淋洗水或緩沖液最大程度除去干擾物。水或緩沖液最大程度除去干擾物。洗脫洗脫用小體積的溶劑將被測(cè)物質(zhì)洗脫下來(lái)并收集。用小體積的溶劑將被測(cè)物質(zhì)洗脫下來(lái)并收集。親脂性親脂性鍵合相硅膠鍵合相硅膠SPE柱的實(shí)驗(yàn)步驟：柱的實(shí)驗(yàn)步驟：.41.42親水型填料親水型填料 用作用作SPE的親水型填料有硅藻土、硅膠、棉纖的親水型填料有硅藻土、硅膠、棉纖維等，其原理為分配作用。填料為支持物，水基維等，其原理為分配作用。填料為支

20、持物，水基質(zhì)中極性強(qiáng)的成分與填料結(jié)合牢固，流動(dòng)相為與質(zhì)中極性強(qiáng)的成分與填料結(jié)合牢固，流動(dòng)相為與水不相混溶的有機(jī)溶劑，較親脂的藥物易分布于水不相混溶的有機(jī)溶劑，較親脂的藥物易分布于流動(dòng)相，從而達(dá)到萃取的目的。流動(dòng)相，從而達(dá)到萃取的目的。 親水型填料親水型填料SPE有較高的萃取回收率（大于有較高的萃取回收率（大于80%），但洗脫劑用量較大（一般大于），但洗脫劑用量較大（一般大于5ml），），無(wú)濃集作用，萃取液較干凈。無(wú)濃集作用，萃取液較干凈。.43SPE優(yōu)點(diǎn)：優(yōu)點(diǎn)：1、不發(fā)生乳化；、不發(fā)生乳化；2、適應(yīng)的極性范、適應(yīng)的極性范圍較廣；圍較廣；3、提取效率高；、提取效率高；4、方便快速；、方便快速；5

21、、溶劑用量少；、溶劑用量少；6、易于自動(dòng)化；、易于自動(dòng)化；7、室、室溫下操作，尤其適于處理?yè)]發(fā)性及對(duì)熱不溫下操作，尤其適于處理?yè)]發(fā)性及對(duì)熱不穩(wěn)定的藥物。穩(wěn)定的藥物。 目前，商品化固相提取小柱目前，商品化固相提取小柱（cartridge）的應(yīng)用已比較普遍。）的應(yīng)用已比較普遍。最大的缺點(diǎn)：最大的缺點(diǎn)： 貴貴 20多元多元/支支.44三種方法的優(yōu)缺點(diǎn)比較三種方法的優(yōu)缺點(diǎn)比較.第三節(jié) 體內(nèi)藥物分析方法的建立與評(píng)價(jià)一、分析方法根據(jù)藥物理化性質(zhì)，結(jié)構(gòu)特征，藥物濃度，干擾成分大小，實(shí)驗(yàn)?zāi)康撵`敏度專屬性色譜法+HPLC GC免疫法+免疫交叉反應(yīng)，重現(xiàn)性生物學(xué)方法+特異性較差，需與色譜法平行使用.二、分析方法的

22、設(shè)計(jì)依據(jù)方法的建立原始方法改進(jìn)創(chuàng)新創(chuàng)立方法.1做好文獻(xiàn)總結(jié)2充分了解藥物特征及體內(nèi)狀況 pH、親脂性、溶解度、極性、光譜特征、藥動(dòng)學(xué)參數(shù)、體內(nèi)代謝情況3明確測(cè)定目的、要求目的4結(jié)合實(shí)驗(yàn)室條件 設(shè)備條件 預(yù)處理方法藥濃監(jiān)測(cè)藥代動(dòng)力學(xué)研究母體藥物和代謝物.三、分析方法的建立方法方法的驗(yàn)證的驗(yàn)證特異性特異性標(biāo)準(zhǔn)曲線與定量范圍標(biāo)準(zhǔn)曲線與定量范圍定量下限定量下限準(zhǔn)確度與精密度準(zhǔn)確度與精密度穩(wěn)定性穩(wěn)定性回收率回收率分析過(guò)程的分析過(guò)程的質(zhì)量控制質(zhì)量控制未知樣品濃度超未知樣品濃度超出范圍的處理出范圍的處理相關(guān)物質(zhì)相關(guān)物質(zhì)測(cè)定測(cè)定其它方法其它方法驗(yàn)證驗(yàn)證.四、體內(nèi)樣品分析方法與方法驗(yàn)證四、體內(nèi)樣品分析方法與方法

23、驗(yàn)證 （一)、特異性 所測(cè)的物質(zhì)是原型藥物或特定的活性代謝物，內(nèi)源性物質(zhì)和響應(yīng)的其他代謝物及其他藥物不影響樣品的測(cè)定。.(二)、標(biāo)準(zhǔn)曲線與線性范圍6.412.8 19.225.6 3232.41.81.20.60isHH茶堿(g/ml)Y=9.56610-2X+6.15310-3 r=0.9995u至少6個(gè)濃度點(diǎn)建立標(biāo)準(zhǔn)曲線u線性范圍必須覆蓋全部待測(cè)濃度，不得外推u最低濃度點(diǎn)偏差在20%u其余濃度點(diǎn)的偏差在 15%。四、體內(nèi)樣品分析方法與方法驗(yàn)證四、體內(nèi)樣品分析方法與方法驗(yàn)證.四、分析方法的評(píng)價(jià)可行性和可靠性 1準(zhǔn)確度 accuracy 測(cè)定結(jié)果與真實(shí)性的差異 用回收率表示 接近100% 相對(duì)恒定.絕對(duì)回收率絕對(duì)回收率絕對(duì)回收率=提取回收率提取回