蘆薈大黃素苷與DNA相互作用的研究

1、蘆薈大黃素苷與DNA相互作用的研究                         作者：韋欣煜,梅文杰,劉云軍   【摘要】  目的 探討蘆薈大黃素苷與DNA的相互作用。方法 采用電子吸收光譜，熒光發(fā)射光譜，粘度實(shí)驗(yàn)以及凝膠電泳實(shí)驗(yàn)進(jìn)行研究。結(jié)果與結(jié)論 蘆薈大黃素以插入方式與DNA分子結(jié)合；較高濃度的蘆薈大黃素苷能夠使Bel?

2、7402肝癌細(xì)胞DNA由超螺旋構(gòu)型轉(zhuǎn)化為缺刻構(gòu)型。 【關(guān)鍵詞】  蘆薈大黃素苷；分子識(shí)別；凝膠電泳；DNAAbstract:The binding properties of barbaloin to DNA were investigated by UV?visible electron absorption spectrum,fluorescence emission spectrum,viscosity measurement and gel electrophoresis,and insertion of barbaloin to DNA was identified.Hig

3、her concentration of barbaloin could convert DNA configuration of hepatoma carcinoma cell Bel?7402 from superhelix to indention.Keywords:barbaloin; molecular recognition; DNA蘆薈是一種傳統(tǒng)的常用中藥，用于治療如燒傷、燙傷等疾病并被廣泛應(yīng)用于食品和化妝品等行業(yè)，并被。蘆薈大黃素苷(圖1)是蘆薈塊莖的主要成分,異蘆薈大黃素苷是植物中的主要存在形式，通過(guò)非酶催化轉(zhuǎn)化為蘆薈大黃素苷，因此通常得到的是蘆薈大黃素苷和異蘆薈大黃素苷的混

4、合物1，2。論文論文參考網(wǎng)蘆薈的抗菌、抗炎、抗氧化作用等與蘆薈大黃素苷的存在密切相關(guān)3，4。在生物體內(nèi)蘆薈大黃素苷通過(guò)代謝轉(zhuǎn)化為蘆薈大黃素而發(fā)揮藥理作用5，6。圖1  蘆薈大黃素苷和異蘆薈大黃素苷的分子結(jié)構(gòu)（略）Fig.1  The molecular structure of barbaloin and isobarbaloin    近年來(lái)的研究表明，蘆薈大黃素具有抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的作用7-12。研究發(fā)現(xiàn)蘆薈大黃素能促進(jìn)人早幼粒HL?60白血病細(xì)胞P27基因過(guò)度表達(dá)，并誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡13。一般認(rèn)為DNA是抗腫瘤藥物的靶點(diǎn)之一14。藥物分子

5、可以通過(guò)共價(jià)結(jié)合、插入作用、溝結(jié)合方式或靜電結(jié)合方式與DNA分子締合，對(duì)DNA的構(gòu)象產(chǎn)生微擾，達(dá)到抑制腫瘤生長(zhǎng)的目的。     本文采用熒光光譜和流體力學(xué)方法研究了蘆薈大黃素苷與DNA分子的締合機(jī)理。結(jié)果表明蘆薈大黃素苷能夠以插入方式與DNA分子結(jié)合；凝膠電泳實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，光照下蘆薈大黃素苷能夠使Bel?7402肝癌細(xì)胞DNA的超螺旋構(gòu)型發(fā)生一定程度的轉(zhuǎn)化。1  實(shí)驗(yàn)部分1.1  儀器與試劑     蘆薈大黃素苷由中山大學(xué)化學(xué)與化學(xué)工程學(xué)院陸偉剛博士提供;Bel?7402肝癌細(xì)胞由中山大學(xué)腫瘤研

6、究所提供。所用化學(xué)試劑均為分析純，除非另有說(shuō)明，所有試劑未作任何處理。蘆薈大黃素苷用5 mmol/L Tris?HCl,50 mmol/L NaCl(pH=7.2)緩沖溶液配制。小牛胸腺DNA（華美公司）；電泳級(jí)瓊脂糖（Promega公司）。MPS?2000型紫外可見(jiàn)光譜計(jì)（Shimadzu）；RF?2000型熒光分光光度計(jì)（Shimadzu）；烏氏粘度計(jì)；DYY?并螵?4型穩(wěn)壓穩(wěn)流電泳儀（北京六一儀器廠）。1.2  實(shí)驗(yàn)方法2  結(jié)果與討論2.1  DNA對(duì)蘆薈大黃素苷電子吸收光譜的影響     電子吸收光譜是研究小分子化

7、合物與生物大分子相互作用的常用方法之一。室溫下Tris?HCl(pH=7.2)緩沖溶液中，蘆薈大黃素苷在300400 nm之間有一個(gè)強(qiáng)的?靚?*躍遷，其電子吸收峰的最大值為359 nm。當(dāng)向溶液中加入小牛胸腺DNA以后，蘆薈大黃素苷的電子吸收光譜出現(xiàn)明顯減色效應(yīng)，其電子吸收降低約5(1 nm)，見(jiàn)圖2。圖2  蘆薈大黃素苷與DNA作用的紫外可見(jiàn)光譜變化圖（略）Fig.2  The electronic spectra of barbaloin in the absence and in presence of CT?DNA2.2  DNA對(duì)蘆薈大黃素苷熒光發(fā)射光譜

8、的影響     室溫下，Tris?HCl緩沖溶液中，當(dāng)用260 nm波長(zhǎng)激發(fā)，蘆薈大黃素苷在360440 nm之間有一個(gè)熒光發(fā)射峰，其熒光發(fā)射峰的最大位置在372 nm。當(dāng)向溶液中加入小牛胸腺DNA后，蘆薈大黃素苷的熒光發(fā)射峰明顯增強(qiáng)，見(jiàn)圖3。這可能是蘆薈大黃素與DNA分子結(jié)合后，由于DNA雙螺旋鏈具有疏水性作用，能夠保護(hù)蘆薈大黃素分子不受水分子的淬滅作用。論文論文參考網(wǎng)圖3  蘆薈大黃素苷與DNA作用的熒光發(fā)射光譜變化圖（略）Fig.3  The emission spectra of barbaloin in absence an

9、d in presence of CT?DNA2.3  蘆薈大黃素苷對(duì)DNA粘度的影響     當(dāng)小分子化合物與DNA分子作用后，由于其作用模式的不同，對(duì)DNA的粘度將產(chǎn)生不同的影響。一般來(lái)說(shuō)，當(dāng)化合物以插入方式與DNA分子作用后，由于化合物分子嵌入到DNA的堿基對(duì)中，使DNA雙螺旋鏈拉張，將導(dǎo)致DNA的粘度上升；而以溝面結(jié)合方式與DNA作用的化合物，由于使DNA雙螺旋鏈發(fā)生不同程度的折疊和扭曲，將使其粘度下降；以靜電作用方式與DNA分子結(jié)合的化合物，對(duì)其粘度的影響則出現(xiàn)無(wú)規(guī)律的變化。蘆薈大黃素苷對(duì)小牛胸腺DNA的粘度的影響見(jiàn)圖4。從圖中可以看

10、到，當(dāng)DNA溶液中加入蘆薈大黃素苷后，DNA的粘度明顯增強(qiáng)，表明蘆薈大黃素苷是以插入方式與DNA分子結(jié)合。圖4  DNA溶液粘度變化圖（略）Fig.4  The viscosity of CT?DNA in presence of barbaloin.EB()；barbaloin ()2.4  蘆薈大黃素苷對(duì)Bel?7402肝癌細(xì)胞DNA的光裂解作用     一般來(lái)說(shuō)，不同構(gòu)型DNA在電場(chǎng)中遷移速率不同。具有超螺旋結(jié)構(gòu)的DNA分子由于結(jié)構(gòu)緊密，在電場(chǎng)中遷移速率最快，而缺刻構(gòu)型的DNA破壞了DNA的雙螺旋結(jié)構(gòu)，在電場(chǎng)中的遷移速

11、率最慢，線性構(gòu)型DNA分子在電場(chǎng)中遷移的速率居于兩者之間。蘆薈大黃素苷對(duì)Bel?7402肝癌細(xì)胞DNA的影響見(jiàn)圖5。從圖中可見(jiàn)，當(dāng)體系中未加入蘆薈大黃素苷時(shí)(Lane 1),Bel?7402肝癌細(xì)胞DNA主要是以超螺旋構(gòu)型存在(Form I)；當(dāng)向體系中加入低濃度的蘆薈大黃素(Lane 2-4),Bel?7402肝癌細(xì)胞DNA構(gòu)型無(wú)明顯變化；但是在高濃度蘆薈大黃素作用下(Lane 5),Bel?7402肝癌細(xì)胞DNA構(gòu)型發(fā)生變化，其缺刻構(gòu)型（Form）的比例明顯增加，表明蘆薈大黃素以插入方式嵌入到Bel?7402肝癌細(xì)胞DNA中。1. DNA  2.DNA+蘆薈大黃素(25 mol/

12、L)  3.DNA+蘆薈大黃素(50 mol/L)  4. DNA+蘆薈大黃素(75 mol/L)  5.DNA+蘆薈大黃素(100 mol/L)圖5  磷酸緩沖溶液(pH 7.4)中蘆薈大黃素對(duì)Bel?7402旰癌細(xì)胞DNA的光裂解作用（略）Fig.5  Electrophorogram of liver cancer cells Bel?7402 DNA in absence and in presence of barbaloin in phosphate buffer (pH 7.4) solutions3  結(jié)論