現(xiàn)代五分類(lèi)血細(xì)胞儀的原理及使用

1、現(xiàn)代五分類(lèi)血液分析儀現(xiàn)代五分類(lèi)血液分析儀原理及使用原理及使用 血液分析儀血液分析儀, ,臨床血液一般檢查最常用儀器。臨床血液一般檢查最常用儀器。5050年代，美國(guó)庫(kù)爾特（年代，美國(guó)庫(kù)爾特（W.H.CoulterW.H.Coulter）發(fā)明）發(fā)明電子血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀并申請(qǐng)專(zhuān)利。電子血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀并申請(qǐng)專(zhuān)利。 1982 1982 年，年，Technicon Technicon 公司生產(chǎn)了公司生產(chǎn)了 H6000 H6000 型血液細(xì)胞，分析儀器，應(yīng)該是首款具有型血液細(xì)胞，分析儀器，應(yīng)該是首款具有白細(xì)胞白細(xì)胞五分類(lèi)能力的儀器五分類(lèi)能力的儀器。同時(shí)代日本日。同時(shí)代日本日立公司推出圖像分析法的白細(xì)胞分析儀立公司

2、推出圖像分析法的白細(xì)胞分析儀HITACHI 8200 HITACHI 8200 型，僅僅是用于完成白細(xì)胞型，僅僅是用于完成白細(xì)胞血片分類(lèi)的儀器，沒(méi)有其他血細(xì)胞計(jì)數(shù)分血片分類(lèi)的儀器，沒(méi)有其他血細(xì)胞計(jì)數(shù)分析能力。析能力。血液分析儀優(yōu)勢(shì)血液分析儀優(yōu)勢(shì)檢測(cè)項(xiàng)目多檢測(cè)項(xiàng)目多 速度快速度快 精度高精度高 易操作易操作 血液細(xì)胞分析儀是醫(yī)院檢驗(yàn)科、化驗(yàn)室的常規(guī)設(shè)備之一，也是發(fā)展最快、應(yīng)用最普及的檢驗(yàn)儀器，當(dāng)前血液細(xì)胞分析儀分為三分群和五分類(lèi)兩種。國(guó)際市場(chǎng)上五分類(lèi)血液細(xì)胞分析儀已經(jīng)成為發(fā)達(dá)國(guó)家醫(yī)院血液臨床檢驗(yàn)的主流產(chǎn)品，但由于五分類(lèi)血液細(xì)胞分析儀需集光學(xué)、電子、氣路、液路、計(jì)算機(jī)等技術(shù)于一體，技術(shù)含量非常高，

3、縱觀(guān)全球，也僅有美國(guó)、法國(guó)、日本等國(guó)家的 6 個(gè)廠(chǎng)家能夠生產(chǎn)真正意義上的五分類(lèi)血液細(xì)胞分析儀。 2006年 4 月深圳邁瑞 BC-5500推出之前，由于國(guó)內(nèi)沒(méi)有掌握該類(lèi)產(chǎn)品生產(chǎn)制造的核心技術(shù)，因而在中國(guó)市場(chǎng)銷(xiāo)售的該類(lèi)產(chǎn)品由國(guó)外品牌所壟斷，價(jià)格都比較昂貴，導(dǎo)致該類(lèi)產(chǎn)品不能在中國(guó)醫(yī)院臨床檢驗(yàn)中大范圍推廣應(yīng)用，BC-5500 的推出推動(dòng)了五分類(lèi)血液細(xì)胞分析儀在國(guó)內(nèi)的臨床應(yīng)用，提高整個(gè)國(guó)內(nèi)血液細(xì)胞檢測(cè)的臨床應(yīng)用水平。一、常見(jiàn)血細(xì)胞分析儀品牌 1、庫(kù)爾特 2、希思美康 3、邁瑞 4、雅培 5、光電 6、拜耳 7、二、五分類(lèi)血細(xì)胞分析儀的檢測(cè)原理（一）、儀器基本結(jié)構(gòu)（一）、儀器基本結(jié)構(gòu)1 1、機(jī)械系統(tǒng)、機(jī)

4、械系統(tǒng) 2 2、電學(xué)系統(tǒng)、電學(xué)系統(tǒng) 3 3、光學(xué)系統(tǒng)、光學(xué)系統(tǒng) （二）、分類(lèi)計(jì)數(shù)的基本原理 1、電阻抗的利用 2、激光技術(shù)、射頻技術(shù)、組織化學(xué)技術(shù)的應(yīng)用 血細(xì)胞五分類(lèi)技術(shù)是一種綜合應(yīng) 用光學(xué)、機(jī)械學(xué)、流體力學(xué)、電子計(jì)算機(jī)、細(xì)胞生物 學(xué)、免疫學(xué)等學(xué)科技術(shù)，讓被測(cè)溶液流經(jīng)測(cè)量區(qū)域 并逐一檢測(cè)其中每一個(gè)細(xì)胞的物理和化學(xué)特性從而對(duì) 高速流動(dòng)的細(xì)胞或亞細(xì)胞進(jìn)行快速定量測(cè)定和分析的 方法。它一秒鐘能分析幾千個(gè)細(xì)胞，并同時(shí)測(cè)定細(xì)胞 的多個(gè)參數(shù)。阻抗法也在五分類(lèi)血細(xì)胞儀中被采用，即所謂的鞘流阻抗法。1、電阻抗原理，又稱(chēng)庫(kù)爾特原理、電阻抗原理，又稱(chēng)庫(kù)爾特原理 孔電流 真空 內(nèi)電極 外電極 - + 血細(xì)胞 懸液

5、標(biāo)本杯鞘流技術(shù)聯(lián)合電阻抗的應(yīng)用2、激光技術(shù)、射頻技術(shù)、組織化學(xué)技術(shù)的應(yīng)用五分類(lèi)儀器與三分類(lèi)儀器的主要區(qū)別在五分類(lèi)儀器與三分類(lèi)儀器的主要區(qū)別在于：白細(xì)胞不再粗略地以大小來(lái)進(jìn)行分群，于：白細(xì)胞不再粗略地以大小來(lái)進(jìn)行分群，而是采用激光技術(shù)、組織化學(xué)技術(shù)、射頻技而是采用激光技術(shù)、組織化學(xué)技術(shù)、射頻技術(shù)等等來(lái)對(duì)白細(xì)胞進(jìn)行分類(lèi)。根據(jù)儀器廠(chǎng)家術(shù)等等來(lái)對(duì)白細(xì)胞進(jìn)行分類(lèi)。根據(jù)儀器廠(chǎng)家的不同，不同品牌的儀器采用了不同的分類(lèi)的不同，不同品牌的儀器采用了不同的分類(lèi)計(jì)數(shù)。計(jì)數(shù)。 在激光技術(shù)中目前有半導(dǎo)體激光和氣體激光。半導(dǎo)體激光功率弱,但作為細(xì)胞分類(lèi)自己足夠;氣體激光功率強(qiáng)。二者比較半導(dǎo)體激光具有壽命長(zhǎng)(710年)體積

6、小,啟動(dòng)快,耗電小,對(duì)穩(wěn)壓要求低,更為經(jīng)濟(jì)適用等特點(diǎn)。 （1 1） 電阻抗、高頻電導(dǎo)及激光散射聯(lián)電阻抗、高頻電導(dǎo)及激光散射聯(lián)合檢測(cè)法合檢測(cè)法 即庫(kù)爾特公司的即庫(kù)爾特公司的VCS技術(shù)。技術(shù)。 V:代表體積容量。電阻法微孔技術(shù)應(yīng)用于計(jì)數(shù)血細(xì)胞和測(cè)代表體積容量。電阻法微孔技術(shù)應(yīng)用于計(jì)數(shù)血細(xì)胞和測(cè)定其體積的大小。定其體積的大小。 C:代表傳導(dǎo)性即電導(dǎo)代表傳導(dǎo)性即電導(dǎo)(conductivity),指一束電磁波或稱(chēng)射指一束電磁波或稱(chēng)射頻頻,穿透細(xì)胞的傳導(dǎo)性穿透細(xì)胞的傳導(dǎo)性,它取決于細(xì)胞的大小和內(nèi)部結(jié)構(gòu)它取決于細(xì)胞的大小和內(nèi)部結(jié)構(gòu);經(jīng)經(jīng)校正后的傳導(dǎo)性叫校正后的傳導(dǎo)性叫opacity即即“不透明性不透明性”,

7、這時(shí)不再反映這時(shí)不再反映細(xì)胞大小細(xì)胞大小,而是反映細(xì)胞內(nèi)部的結(jié)構(gòu)而是反映細(xì)胞內(nèi)部的結(jié)構(gòu),像核的大小像核的大小,核漿比例核漿比例和密度等。和密度等。 S:代表散射代表散射(scatter),指在不同角度測(cè)得的散射光強(qiáng)度。指在不同角度測(cè)得的散射光強(qiáng)度。由于各類(lèi)細(xì)胞的表面結(jié)構(gòu)不同和顆粒大小不同而對(duì)光的散由于各類(lèi)細(xì)胞的表面結(jié)構(gòu)不同和顆粒大小不同而對(duì)光的散射各異射各異,進(jìn)而區(qū)分各類(lèi)細(xì)胞。進(jìn)而區(qū)分各類(lèi)細(xì)胞。容 量 、 電 導(dǎo) 、 光 散 射容 量 、 電 導(dǎo) 、 光 散 射 （ v o l u m e ，conductivity， scatter, VCS）法法原理原理細(xì)胞體積技術(shù)細(xì)胞體積技術(shù)（測(cè)量細(xì)（測(cè)

8、量細(xì)胞大?。┌笮。╇妼?dǎo)性技術(shù)電導(dǎo)性技術(shù)（測(cè)量細(xì)胞（測(cè)量細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)）內(nèi)部結(jié)構(gòu)）光散射技術(shù)光散射技術(shù)（測(cè)量細(xì)（測(cè)量細(xì)胞形態(tài)、細(xì)胞核和細(xì)胞胞形態(tài)、細(xì)胞核和細(xì)胞顆粒）。顆粒）。 體積 電導(dǎo) 光散射VCSVCS可顯示可顯示3 3種細(xì)胞散點(diǎn)圖種細(xì)胞散點(diǎn)圖DF1DF1（體積值和散射光值）（體積值和散射光值）DF2DF2（體積值和電導(dǎo)值）（體積值和電導(dǎo)值）DF3DF3（體積值和電導(dǎo)值）（體積值和電導(dǎo)值） 儀器在單一通道上同時(shí)用這三種方法對(duì)同儀器在單一通道上同時(shí)用這三種方法對(duì)同一白細(xì)胞進(jìn)行測(cè)量一白細(xì)胞進(jìn)行測(cè)量,避免了有些血液分析儀避免了有些血液分析儀要設(shè)計(jì)好幾個(gè)通道或加染色試劑的麻煩。要設(shè)計(jì)好幾個(gè)通道或加染

9、色試劑的麻煩。 采用采用VCS技術(shù)的儀器主要是技術(shù)的儀器主要是Coulter公司的公司的STKS型、型、MAXM型以及型以及Gen.s型五分類(lèi)血型五分類(lèi)血液分析儀。液分析儀。MAXM型和型和Gen.s型可計(jì)數(shù)網(wǎng)織型可計(jì)數(shù)網(wǎng)織紅細(xì)胞紅細(xì)胞,Gen.s型可選配自動(dòng)制血片機(jī)。以型可選配自動(dòng)制血片機(jī)。以上幾種型號(hào)還可直接計(jì)數(shù)上幾種型號(hào)還可直接計(jì)數(shù)CD4和和CD8淋巴淋巴細(xì)胞細(xì)胞,并算出其比率。并算出其比率。（2）光散射和細(xì)胞化學(xué)染色聯(lián)合應(yīng)用 Bayer公司的的DVIA120型和2120型血細(xì)胞分析儀、Sysmex公司的SF-3000型、邁瑞的BC-5500血細(xì)胞分析儀均采用了該原理進(jìn)行工作。 利用激光

10、散射和過(guò)氧化物酶染色技術(shù)進(jìn)行細(xì)胞分類(lèi)。利用光散射的原理計(jì)數(shù)血細(xì)胞,因細(xì)胞表面結(jié)構(gòu)不同,在不同角度上散射光有差別,有助于對(duì)白細(xì)胞的區(qū)分。 白細(xì)胞化學(xué)染色 在稀釋液中加入過(guò)氧化酶(MPO)的底物及顯色劑,根據(jù)白細(xì)胞對(duì)MPO的反應(yīng)分類(lèi)。中性細(xì)胞MPO為強(qiáng)陽(yáng)性,嗜酸性細(xì)胞陽(yáng)性更強(qiáng),單核細(xì)胞為弱陽(yáng)性,淋巴細(xì)胞陰性,嗜堿性細(xì)胞亦為陰性,故綜合光散射和細(xì)胞化學(xué)染色的特點(diǎn), 可得到二維或三維圖像-不同顏色的散點(diǎn)圖。由于嗜堿性細(xì)胞不含此酶,不能被檢測(cè),因此一些儀器專(zhuān)門(mén)設(shè)置了嗜堿性細(xì)胞檢測(cè)系統(tǒng),它的測(cè)量通道采用時(shí)間差的方法,與RBC、PLT的測(cè)量系統(tǒng)共用一個(gè)通道。（3）電阻抗和射頻電導(dǎo)聯(lián)合檢測(cè)法 這種方法是分別采

11、用四個(gè)檢測(cè)系統(tǒng)來(lái)檢測(cè)不同類(lèi)型的細(xì)胞 淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞和中性粒細(xì)胞檢測(cè)系統(tǒng):在細(xì)胞懸浮液中加入溶血?jiǎng)┦辜t細(xì)胞溶解,而使白細(xì)胞保持完整細(xì)胞漿及核形態(tài)近似于生理狀態(tài),當(dāng)這些細(xì)胞通過(guò)檢測(cè)系統(tǒng)時(shí),對(duì)白細(xì)胞進(jìn)行電阻抗法(測(cè)量細(xì)胞體積)和射頻電導(dǎo)法(檢測(cè)細(xì)胞核和顆粒密度)的聯(lián)合檢測(cè),結(jié)果將細(xì)胞分成淋巴細(xì)胞、單核細(xì)和中性粒細(xì)胞三個(gè)群體。 嗜酸性細(xì)胞和嗜堿性細(xì)胞兩種檢測(cè)系統(tǒng):在細(xì)胞懸浮液中加入特殊的溶血?jiǎng)?除嗜酸性細(xì)胞和嗜堿性細(xì)胞外,其他細(xì)胞均被溶解或萎縮再對(duì)保持完整的嗜酸性細(xì)胞或嗜堿性細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)。 幼稚細(xì)胞檢測(cè)系統(tǒng):在細(xì)胞懸浮液中加入硫化氨基酸,由于占位不同,結(jié)合在幼稚細(xì)胞的氨基酸比成熟細(xì)胞多,且對(duì)溶血?jiǎng)?/p>

12、有抵抗作用,當(dāng)加入溶血?jiǎng)r(shí),成熟細(xì)胞被溶解,只保留著可能存在的幼稚細(xì)胞用來(lái)計(jì)數(shù)。Sysmex公司的SE-9000血細(xì)胞分析儀就是采用這種方法進(jìn)行五分類(lèi)的。電阻抗與射頻法能透入細(xì)胞內(nèi)，測(cè)量核的電阻抗與射頻法能透入細(xì)胞內(nèi)，測(cè)量核的大小及顆粒的多少。大小及顆粒的多少。RF:RF:射頻電流射頻電流 細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)信息細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)信息DC:DC:直流電直流電 細(xì)胞大小的信息細(xì)胞大小的信息 （4） 多角度激光偏振光散射檢測(cè)法 儀器使用鞘流液將標(biāo)本血稀釋,稀釋后白細(xì)胞的內(nèi)部結(jié)構(gòu)近似于自然狀態(tài),只有嗜堿性細(xì)胞由于其吸濕的特性而使細(xì)胞結(jié)構(gòu)有輕微改變。紅細(xì)胞內(nèi)的血紅蛋白在高滲透壓的作用下,從細(xì)胞中分離出來(lái)。而鞘流的

13、水分則進(jìn)入紅細(xì)胞內(nèi),使細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)仍然完整,它與鞘流的折光系數(shù)相同,不影響白細(xì)胞的檢測(cè)。儀器同時(shí)從四個(gè)角度來(lái)檢測(cè)通過(guò)激光束的細(xì)胞所產(chǎn)生的散射光,因?yàn)榧?xì)胞大小、折射指數(shù)、核形、核漿比率以及顆粒性質(zhì)等,均可影響在不同角度測(cè)得的散射光量。0 0：前角光散射：前角光散射（1 13 3），可粗略測(cè)），可粗略測(cè)定細(xì)胞大小。定細(xì)胞大小。 1010：狹角光散射：狹角光散射（7 71111），可測(cè)），可測(cè)定細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)相對(duì)特征。定細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)相對(duì)特征。 9090：垂直光散射：垂直光散射（7070110110），測(cè)），測(cè)定細(xì)胞核分葉情況。定細(xì)胞核分葉情況。 9090：消偏振光散射：消偏振光散射（7070110110

14、），），區(qū)分嗜酸性粒細(xì)胞與其他細(xì)胞。區(qū)分嗜酸性粒細(xì)胞與其他細(xì)胞。 值得一提的是市面上偶見(jiàn)假五分類(lèi)血球儀。假五分類(lèi)血球儀則不用上述原理分析血細(xì)胞成分,更多的使用電腦軟件的分析而得出五分類(lèi)結(jié)果。分辨是否真五分類(lèi)技術(shù)的血球儀，如果是試劑法,試劑不應(yīng)該少于四種,如果是激光法,試劑不少于三種。三、五分類(lèi)血細(xì)胞分析儀的使用 1、自動(dòng)進(jìn)樣 2、手工進(jìn)樣 3、末梢血、靜脈血的可選性 4、結(jié)果的判斷 5、質(zhì)量控制 6、儀器的校準(zhǔn) 準(zhǔn)品的來(lái)源、什么情況下需要校準(zhǔn)？如何校準(zhǔn)？ 7、儀器的維護(hù)標(biāo)本的重要性 1、高檔的儀器并不意味著結(jié)果一定可靠。 2、標(biāo)本的采集直接關(guān)系到結(jié)果的準(zhǔn)確性。 壓脈帶的使用時(shí)間、抗凝劑的影響、

15、真空管的使用、血量的控制、標(biāo)本放置的溫度和時(shí)間、標(biāo)本的混勻等等。檢驗(yàn)報(bào)告的審核 1、當(dāng)日質(zhì)控是否在控。 2、比較報(bào)告各參數(shù)之間是否有矛盾。 3、注意觀(guān)察多個(gè)測(cè)定標(biāo)本相關(guān)參數(shù)是否有一致的系統(tǒng)誤差。 4、報(bào)告與臨床是否符合，不符合時(shí)可能存在的原因。如PLT過(guò)低、過(guò)高。 5、什么樣的結(jié)果必須手工復(fù)查？如何復(fù)查？復(fù)查完畢后的報(bào)告簽發(fā)模式。 6、直方圖、散點(diǎn)圖的利用。血細(xì)胞自動(dòng)分析異常結(jié)果人工顯微鏡復(fù)檢 1、鏡檢復(fù)核的現(xiàn)狀、鏡檢復(fù)核的現(xiàn)狀 血細(xì)胞分析儀仍只能作為CBC 分析的一種過(guò)篩手段 ，當(dāng)遇到可疑情況 ，尤其是在病理?xiàng)l件下 ，其測(cè)定結(jié)果并不可靠 ，需要人工以顯微鏡復(fù)查 ，這已是不爭(zhēng)的事實(shí) 。但是 ，

16、國(guó)內(nèi)目前各醫(yī)院檢驗(yàn)科對(duì)CBC異常結(jié)果基不或很少進(jìn)行人工顯微鏡復(fù)查 ，這種現(xiàn)象在經(jīng)濟(jì)發(fā)達(dá)的沿海地區(qū)更是普遍 。有資料顯示 ，國(guó)內(nèi)各醫(yī)院 CBC實(shí)際鏡檢率在0% 15% ，大部分醫(yī)院鏡檢率 5%或者不鏡檢 。這種現(xiàn)象引發(fā)了不少的醫(yī)療投訴 、糾紛或事故 。分析這類(lèi)題出現(xiàn)的原因可能有 : (1)認(rèn)識(shí)不夠 ，認(rèn)為血細(xì)胞分析儀尤其是五分群的血細(xì)胞分析儀的檢測(cè)結(jié)果可靠 ，不需要復(fù)查 ； ( 2)工作量大 ； ( 3 )怕麻煩 ，圖省事 ； ( 4 )目前沒(méi)有一個(gè)可參照的執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn) ，即對(duì)CBC結(jié)果的人工復(fù)查的標(biāo)準(zhǔn) 、內(nèi)容 、方法及程序尚無(wú)明確的規(guī)定 。需要鏡檢的標(biāo)準(zhǔn) 目前即使是最先進(jìn)的血細(xì)胞分析儀也不能完全取

17、代人工鏡下白細(xì)胞分類(lèi)。因此，各實(shí)驗(yàn)室應(yīng)根據(jù)所使用的儀器型號(hào)、性能和實(shí)驗(yàn)室條件，制定出手工復(fù)檢方案，建立涂片復(fù)檢制度。只有在WBC、Hb、Plt均在正常范圍內(nèi)，細(xì)胞散點(diǎn)圖和直方圖均正常，儀器無(wú)報(bào)警顯示情況下，儀器分類(lèi)結(jié)果才可作為篩選數(shù)據(jù)報(bào)告。 通過(guò)鏡檢達(dá)到的目的 通過(guò)顯微鏡檢查，核實(shí)儀器出現(xiàn)的各類(lèi)報(bào)警是否真實(shí)存在，有無(wú)原始及幼稚細(xì)胞，有無(wú)血細(xì)胞形態(tài)異常，有無(wú)小紅細(xì)胞、紅細(xì)胞碎片、微小血凝塊、巨大血小板、血小板聚集等，并估計(jì)白細(xì)胞、血小板數(shù)量，必要時(shí)對(duì)結(jié)果進(jìn)行校正后才能發(fā)出報(bào)告（如有核紅細(xì)胞存在時(shí)對(duì)白細(xì)胞計(jì)數(shù)進(jìn)行校正）。 血細(xì)胞自動(dòng)分析與臨床的緊密結(jié)合 CBC檢測(cè)結(jié)果最終是用于臨床患者的診斷 、治

18、療 、預(yù)后監(jiān)測(cè)或用于受檢者的健康狀況的評(píng)估 。因此 ，當(dāng)遇檢測(cè)結(jié)果異常時(shí) ，一方面可咨詢(xún)受檢者當(dāng)事人 /親屬或通過(guò)實(shí)驗(yàn)室信息系統(tǒng) (L IS)查受檢者檢測(cè)記錄外 ；另一方面與臨床聯(lián)系非常重要 ，因?yàn)榕R床醫(yī)生更加了解受檢者 /患者的病情與實(shí)際情況 ，通過(guò)與臨床的聯(lián)系 ，可了解并證實(shí)異常 CBC結(jié)果與患者病情的符合程度或因其他原因如輸液或患者標(biāo)本張冠李戴引起的CBC結(jié)果異常 ?？傊?，與臨床聯(lián)系可起到事半功倍的效果 。 1 1、血細(xì)胞直方圖、血細(xì)胞直方圖 橫坐標(biāo)為血細(xì)胞體積大小橫坐標(biāo)為血細(xì)胞體積大小 縱坐標(biāo)為不同體積細(xì)胞的相對(duì)頻率?？v坐標(biāo)為不同體積細(xì)胞的相對(duì)頻率。結(jié)果的判斷白細(xì)胞直方圖白細(xì)胞直方圖

19、 %35 90 160 300 400 450(fl)紅細(xì)胞直方圖紅細(xì)胞直方圖 100 200 300 400 (fl)%血小板直方圖血小板直方圖直方圖在228fl（不同儀器不一）。 10 20 30(fl)10 20 30(fl)%散點(diǎn)圖1 1、白細(xì)胞直方圖、白細(xì)胞直方圖正常白細(xì)胞直方圖正常白細(xì)胞直方圖異常白細(xì)胞直方圖異常白細(xì)胞直方圖2 2、紅細(xì)胞直方圖、紅細(xì)胞直方圖（1 1）正常紅細(xì)胞分布：）正常紅細(xì)胞分布：5050200fl 200fl （2 2）異常紅細(xì)胞直方圖）異常紅細(xì)胞直方圖3 3、血小板直方圖、血小板直方圖正常血小板直方圖呈左偏態(tài)分布：正常血小板直方圖呈左偏態(tài)分布：2 230fl

20、30fl分布，主要在分布，主要在2 215fl15fl。 異常血小板直方圖血液分析儀血液分析儀江蘇大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與醫(yī)學(xué)技術(shù)學(xué)院江蘇大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與醫(yī)學(xué)技術(shù)學(xué)院朱偉朱偉血細(xì)胞分析儀血細(xì)胞分析儀教學(xué)要求教學(xué)要求 掌握血細(xì)胞分析儀的概念、庫(kù)爾特原理、掌握血細(xì)胞分析儀的概念、庫(kù)爾特原理、儀器的基本結(jié)構(gòu)。儀器的基本結(jié)構(gòu)。 熟悉聯(lián)合檢測(cè)型血細(xì)胞分析儀器的檢測(cè)原熟悉聯(lián)合檢測(cè)型血細(xì)胞分析儀器的檢測(cè)原理，網(wǎng)織紅細(xì)胞檢測(cè)原理，血紅蛋白檢測(cè)理，網(wǎng)織紅細(xì)胞檢測(cè)原理，血紅蛋白檢測(cè)原理、儀器性能評(píng)價(jià)和維護(hù)。原理、儀器性能評(píng)價(jià)和維護(hù)。 了解血細(xì)胞分析儀的分類(lèi)、性能指標(biāo)、常了解血細(xì)胞分析儀的分類(lèi)、性能指標(biāo)、常見(jiàn)故障和排除及進(jìn)展。

21、見(jiàn)故障和排除及進(jìn)展。一、血細(xì)胞分析儀概述一、血細(xì)胞分析儀概述血細(xì)胞分析儀血細(xì)胞分析儀(Blood cell analyzer,BCA)是是指對(duì)一定體積全血內(nèi)血細(xì)胞異質(zhì)性進(jìn)行自動(dòng)分析指對(duì)一定體積全血內(nèi)血細(xì)胞異質(zhì)性進(jìn)行自動(dòng)分析的臨床檢驗(yàn)常規(guī)儀器。又稱(chēng)血細(xì)胞自動(dòng)計(jì)數(shù)儀的臨床檢驗(yàn)常規(guī)儀器。又稱(chēng)血細(xì)胞自動(dòng)計(jì)數(shù)儀(ABCC)、血液學(xué)自動(dòng)分析儀、血液學(xué)自動(dòng)分析儀(AHA)。ABCC代表代表早期的低檔次早期的低檔次BCA，AHA外延過(guò)大。外延過(guò)大。發(fā)發(fā) 展展 史史 手工計(jì)數(shù)手工計(jì)數(shù)儀器簡(jiǎn)單計(jì)數(shù)儀器簡(jiǎn)單計(jì)數(shù)兩分群兩分群三分群三分群五分群五分群五分群網(wǎng)織紅五分群網(wǎng)織紅 20世紀(jì)世紀(jì)40年代末，年代末， 電阻抗法微

22、粒子計(jì)數(shù)專(zhuān)利電阻抗法微粒子計(jì)數(shù)專(zhuān)利 50年代，年代， Coulter Model A型用于臨床型用于臨床 60年代，年代， 測(cè)定參數(shù)達(dá)測(cè)定參數(shù)達(dá)7項(xiàng)項(xiàng) 70年代，年代， 全血細(xì)胞計(jì)數(shù)（全血細(xì)胞計(jì)數(shù)（CBC） 80年代，年代， 雙通道、白細(xì)胞雙通道、白細(xì)胞23分群、五分群分群、五分群 90年代以來(lái)，多功能、多參數(shù)、流水線(xiàn)年代以來(lái)，多功能、多參數(shù)、流水線(xiàn)血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀（Blood cell counter)lCoulter principle ：微小粒子通過(guò)特殊的小孔時(shí)可產(chǎn)生電阻變化，并根據(jù)這種電阻變化特點(diǎn)將其應(yīng)用于微小粒子的粒度測(cè)量和計(jì)數(shù)上。l1953 年獲得美國(guó)發(fā)明專(zhuān)利 Wallance H.

23、Coulter 昨天昨天血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀 1958年，庫(kù)爾特電子（Coulter Electronics ）公司成立 電阻式血細(xì)胞計(jì)數(shù)原理。 單參數(shù)測(cè)定儀器，只能對(duì)血液中的紅細(xì)胞和白細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)，并且需人工切換。 昨天昨天日本東亞公司（SYSMEX）CC-1001日本TOY公司1962 年生產(chǎn)的CC-1001 型血球計(jì)數(shù)儀昨天昨天血紅蛋白檢測(cè)功能的增加具有單獨(dú)的血紅蛋白比色計(jì)，將加入專(zhuān)用的溶血?jiǎng)┖蟮臉颖具M(jìn)行白細(xì)胞計(jì)數(shù)后再將其倒入血紅蛋白比色計(jì)， 即可得到比色法測(cè)定的血紅蛋白結(jié)果。當(dāng)時(shí)國(guó)內(nèi)使用最多的血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀是Coulter ZF 型和血紅蛋白計(jì)。此時(shí)就能檢測(cè)MCV、HCT、MCH、M

24、CHC。昨天昨天 1975 年日本東亞公司（TOA， Sysmex 的前身） 推出了包含以上7 個(gè)參數(shù)的全自動(dòng)血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀器CC710 和CC 720 型。 昨天昨天血小板自動(dòng)計(jì)數(shù)儀器使用特殊離心速度將紅細(xì)胞和白細(xì)胞進(jìn)行沉淀，使上層血漿中盡量保存最為豐富的血小板，然后應(yīng)用這種PRP 血漿進(jìn)行血小板計(jì)數(shù)。如Sysmex PA-701 型和CONTRAVE 1000 型，此類(lèi)儀器多配有專(zhuān)用PRP 離心機(jī)。右圖為T(mén)OA PLT-100 型血小板計(jì)數(shù)儀和離心機(jī)。昨天昨天血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀血小板計(jì)數(shù)功能的增加血細(xì)胞分析儀將血小板計(jì)數(shù)這一重要功能合并到全血細(xì)胞計(jì)數(shù)（CBC） 范圍內(nèi)。將血小板按體積大小劃分到64

25、 個(gè)通道，分別累加體積大小不同的血小板數(shù)量。除了給出血小板數(shù)量外，還提供了兩個(gè)新的參數(shù)，平均血小板體積(MPV) 和血小板體積分布寬度（PDW）。昨天昨天Sysmex CC-800 白細(xì)胞分類(lèi)功能的增加 二分類(lèi) 1970 年起Coulter 公司首先推出了兩分類(lèi)的S-PLUS 系列儀器。1980年又推出了T系列，都是可進(jìn)行白細(xì)胞兩分類(lèi)的儀器。 Sysmex F800 和F820 型也是根據(jù)白細(xì)胞體積分布直方圖進(jìn)行粗略?xún)煞秩旱膬x器。昨天昨天Sysmex F820三分群時(shí)代 經(jīng)過(guò)特殊溶血?jiǎng)┨幚淼陌准?xì)胞，在白細(xì)胞分布直方圖上出現(xiàn)兩個(gè)明顯的細(xì)胞分布峰。 體積較小的一群細(xì)胞稱(chēng)為淋巴細(xì)胞群（LYM）。 右

26、側(cè)體積較大的稱(chēng)為粒細(xì)胞群（GRAN）。 位于兩者之間的稱(chēng)為中間細(xì)胞群（MID）， 中間細(xì)胞群一般指含有嗜酸粒細(xì)胞，嗜堿粒細(xì)胞和單核細(xì)胞的細(xì)胞群。今天今天五分類(lèi)血液分析儀 BECKMEN COULTE：VCS ABBOTT：MAPSS(多角度偏振光散射多角度偏振光散射) ADVIA：POX SYSMEX：核酸熒光染色：核酸熒光染色今天今天 血液細(xì)胞分析儀是醫(yī)院檢驗(yàn)科、化驗(yàn)室的常規(guī)設(shè)備之一，也是發(fā)展最快、應(yīng)用最普及的檢驗(yàn)儀器，當(dāng)前血液細(xì)胞分析儀分為三分群和五分類(lèi)兩種。國(guó)際市場(chǎng)上五分類(lèi)血液細(xì)胞分析儀已經(jīng)成為發(fā)達(dá)國(guó)家醫(yī)院血液臨床檢驗(yàn)的主流產(chǎn)品，但由于五分類(lèi)血液細(xì)胞分析儀需集光學(xué)、電子、氣路、液路、計(jì)算

27、機(jī)等技術(shù)于一體，技術(shù)含量非常高，縱觀(guān)全球，也僅有美國(guó)、法國(guó)、日本等國(guó)家的 6 個(gè)廠(chǎng)家能夠生產(chǎn)真正意義上的五分類(lèi)血液細(xì)胞分析儀。2006年 4 月深圳邁瑞 BC-5500推出之前，由于國(guó)內(nèi)沒(méi)有掌握該類(lèi)產(chǎn)品生產(chǎn)制造的核心技術(shù)，因而在中國(guó)市場(chǎng)銷(xiāo)售的該類(lèi)產(chǎn)品由國(guó)外品牌所壟斷，價(jià)格都比較昂貴，導(dǎo)致該類(lèi)產(chǎn)品不能在中國(guó)醫(yī)院臨床檢驗(yàn)中大范圍推廣應(yīng)用，BC-5500 的推出推動(dòng)了五分類(lèi)血液細(xì)胞分析儀在國(guó)內(nèi)的臨床應(yīng)用，提高整個(gè)國(guó)內(nèi)血液細(xì)胞檢測(cè)的臨床應(yīng)用水平。一、常見(jiàn)血細(xì)胞分析儀品牌 1、庫(kù)爾特 2、希思美康 3、邁瑞 4、雅培 5、光電 6、拜耳 7、庫(kù)爾特COULTER GEN.S System庫(kù)爾特5-dif

28、f 系統(tǒng)COULTER HmX血液分析儀SYSMEX XE-5000型五分類(lèi)血細(xì)胞分析儀XT-1800i五分類(lèi)血液細(xì)胞分析儀ABBOTT CELL-DYN3200五分類(lèi)血液分析光電8222k血細(xì)胞分析儀DIANA-5儀器BC-5500五分類(lèi)血液細(xì)胞分析儀二、儀器分型檢測(cè)原理二、儀器分型檢測(cè)原理（一）血細(xì)胞分析儀分型（一）血細(xì)胞分析儀分型 按自動(dòng)化程度按自動(dòng)化程度 按檢測(cè)原理按檢測(cè)原理 按對(duì)白細(xì)胞的分類(lèi)水平按對(duì)白細(xì)胞的分類(lèi)水平嗜酸性細(xì)胞嗜酸性細(xì)胞淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞單核細(xì)胞單核細(xì)胞中性粒細(xì)胞中性粒細(xì)胞血小板血小板嗜堿性細(xì)胞嗜堿性細(xì)胞 請(qǐng)記住哦請(qǐng)記住哦！電電 阻阻 抗抗 法法 血血 細(xì)細(xì) 胞胞 檢檢

29、測(cè)測(cè) 原原 理理二、儀器分型檢測(cè)原理二、儀器分型檢測(cè)原理聯(lián)合檢測(cè)型原理聯(lián)合檢測(cè)型原理 主要體現(xiàn)在白細(xì)胞分類(lèi)，實(shí)質(zhì)是選用較特異的方法將血中主要體現(xiàn)在白細(xì)胞分類(lèi)，實(shí)質(zhì)是選用較特異的方法將血中含量較少的嗜酸、嗜堿性粒細(xì)胞檢出，發(fā)現(xiàn)異常細(xì)胞。含量較少的嗜酸、嗜堿性粒細(xì)胞檢出，發(fā)現(xiàn)異常細(xì)胞。共共有特點(diǎn)是有特點(diǎn)是：均使用了鞘流技術(shù)。：均使用了鞘流技術(shù)。 前前 鞘鞘 流流后后 鞘鞘 流流檢檢 測(cè)測(cè) 窗窗容量、電導(dǎo)、光散射檢測(cè)技術(shù)容量、電導(dǎo)、光散射檢測(cè)技術(shù)光散射光散射電導(dǎo)性電導(dǎo)性電阻抗電阻抗每個(gè)細(xì)胞接受三維分析每個(gè)細(xì)胞接受三維分析定義到三維散點(diǎn)圖的相應(yīng)位置定義到三維散點(diǎn)圖的相應(yīng)位置 電導(dǎo)性電導(dǎo)性(conduc

30、tivity，C) 高頻電磁探針，測(cè)量細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)，細(xì)胞內(nèi)核漿比例。高頻電磁探針，測(cè)量細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)，細(xì)胞內(nèi)核漿比例。體積體積(volume，V) 電阻抗原理測(cè)定細(xì)胞體積和數(shù)量。電阻抗原理測(cè)定細(xì)胞體積和數(shù)量。光散射光散射(scatter，S)細(xì)細(xì) 胞內(nèi)粗顆粒的光散射強(qiáng)胞內(nèi)粗顆粒的光散射強(qiáng) 度要比細(xì)顆粒更強(qiáng)。度要比細(xì)顆粒更強(qiáng)。光散射與細(xì)胞化學(xué)聯(lián)合檢測(cè)技術(shù)光散射與細(xì)胞化學(xué)聯(lián)合檢測(cè)技術(shù) 這類(lèi)儀器是應(yīng)用激光散射與細(xì)胞化學(xué)染色技術(shù)對(duì)這類(lèi)儀器是應(yīng)用激光散射與細(xì)胞化學(xué)染色技術(shù)對(duì)白細(xì)胞進(jìn)行分類(lèi)計(jì)數(shù)。白細(xì)胞進(jìn)行分類(lèi)計(jì)數(shù)。 返回本節(jié)目錄白細(xì)胞分類(lèi)散射圖白細(xì)胞分類(lèi)散射圖 聯(lián)合使用多項(xiàng)技術(shù)聯(lián)合使用多項(xiàng)技術(shù)(流式、激光、

31、射頻、電導(dǎo)、電阻抗、流式、激光、射頻、電導(dǎo)、電阻抗、細(xì)胞化學(xué)染色細(xì)胞化學(xué)染色)同時(shí)分析一個(gè)細(xì)胞，綜合分析實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，從而同時(shí)分析一個(gè)細(xì)胞，綜合分析實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，從而得出較為準(zhǔn)確的白細(xì)胞得出較為準(zhǔn)確的白細(xì)胞“五分群五分群”結(jié)果。結(jié)果。 返回本節(jié)目錄網(wǎng)織紅細(xì)胞檢測(cè)原理網(wǎng)織紅細(xì)胞檢測(cè)原理 網(wǎng)織紅細(xì)胞中嗜堿性物質(zhì)網(wǎng)織紅細(xì)胞中嗜堿性物質(zhì)RNA，在活體狀態(tài)下與，在活體狀態(tài)下與特殊的熒光染料結(jié)合特殊的熒光染料結(jié)合 熒光強(qiáng)度與熒光強(qiáng)度與RNA含量成正比含量成正比 用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè) 網(wǎng)織紅細(xì)胞大小和網(wǎng)織紅細(xì)胞大小和 RNA含量及血紅蛋含量及血紅蛋 白的含量白的含量二、儀器分型檢測(cè)原理二、儀器分型檢測(cè)原

32、理（五）血紅蛋白測(cè)定原理（五）血紅蛋白測(cè)定原理 除干式、無(wú)創(chuàng)型外，各型除干式、無(wú)創(chuàng)型外，各型BCA對(duì)血紅蛋白測(cè)對(duì)血紅蛋白測(cè)定都采用光電比色原理。定都采用光電比色原理。 血細(xì)胞懸液中加入溶血?jiǎng)┖螅t細(xì)胞溶解釋放出血細(xì)胞懸液中加入溶血?jiǎng)┖?，紅細(xì)胞溶解釋放出血紅蛋白，后者與溶血?jiǎng)┲杏嘘P(guān)成分結(jié)合形成血血紅蛋白，后者與溶血?jiǎng)┲杏嘘P(guān)成分結(jié)合形成血紅蛋白衍生物，進(jìn)入血紅蛋白測(cè)試系統(tǒng)。紅蛋白衍生物，進(jìn)入血紅蛋白測(cè)試系統(tǒng)。 特定波長(zhǎng)特定波長(zhǎng)(530550nm)下進(jìn)行光電比色。下進(jìn)行光電比色。二、儀器分型檢測(cè)原理基本結(jié)構(gòu)二、儀器分型檢測(cè)原理基本結(jié)構(gòu)溶血素的作用原理 細(xì)胞膜表面脂質(zhì)成分的差異 紅細(xì)胞膜表面含有較多的

33、脂質(zhì) 磷脂 膽固醇 成熟白細(xì)胞膜磷脂類(lèi)成分相對(duì)較少 幼稚粒細(xì)胞膜磷脂類(lèi)成分更少 溶血素的主要成分 表面活性劑 主要攻擊細(xì)胞膜的磷脂類(lèi)成分儀器基本結(jié)構(gòu)儀器基本結(jié)構(gòu) 機(jī)械系統(tǒng)機(jī)械系統(tǒng) 電學(xué)系統(tǒng)電學(xué)系統(tǒng) 血細(xì)胞檢測(cè)系統(tǒng)血細(xì)胞檢測(cè)系統(tǒng) 血紅蛋白測(cè)定系統(tǒng)血紅蛋白測(cè)定系統(tǒng) 計(jì)算機(jī)計(jì)算機(jī) 鍵盤(pán)控制系統(tǒng)鍵盤(pán)控制系統(tǒng)三、儀器的性能指標(biāo)、評(píng)價(jià)與調(diào)校三、儀器的性能指標(biāo)、評(píng)價(jià)與調(diào)校（一）血細(xì)胞分析儀的性能指標(biāo)（一）血細(xì)胞分析儀的性能指標(biāo) 1.測(cè)試參數(shù)測(cè)試參數(shù) 2.細(xì)胞形態(tài)學(xué)分析細(xì)胞形態(tài)學(xué)分析 3.測(cè)試速度測(cè)試速度 4.樣本量樣本量 5.精密度與示值范圍精密度與示值范圍 6.打印打印 血細(xì)胞分析儀的評(píng)價(jià)血細(xì)胞分析儀的評(píng)

34、價(jià) ICSH公布了電子血細(xì)胞分析儀的公布了電子血細(xì)胞分析儀的評(píng)價(jià)方案：在細(xì)胞計(jì)數(shù)、血紅蛋白測(cè)評(píng)價(jià)方案：在細(xì)胞計(jì)數(shù)、血紅蛋白測(cè)定方面，要評(píng)價(jià)儀器測(cè)試樣本的總變定方面，要評(píng)價(jià)儀器測(cè)試樣本的總變異、攜帶污染率、線(xiàn)性范圍、可比性異、攜帶污染率、線(xiàn)性范圍、可比性和準(zhǔn)確性等和準(zhǔn)確性等三、儀器的性能指標(biāo)、評(píng)價(jià)與調(diào)校三、儀器的性能指標(biāo)、評(píng)價(jià)與調(diào)校四、儀器的維護(hù)與常見(jiàn)故障四、儀器的維護(hù)與常見(jiàn)故障 （一）儀器的維護(hù)（一）儀器的維護(hù) 1.安裝：安裝： 潔凈的環(huán)境、穩(wěn)定的電源、潔凈的環(huán)境、穩(wěn)定的電源、可靠的接地、適宜的溫度和濕度是保證可靠的接地、適宜的溫度和濕度是保證BCA正常工作的前提。正常工作的前提。 2.維護(hù)：

35、良好的工作環(huán)境是儀器正常維護(hù)：良好的工作環(huán)境是儀器正常工作的前提，精心細(xì)致的維護(hù)是儀器處工作的前提，精心細(xì)致的維護(hù)是儀器處于良好工作狀態(tài)的保證。做好儀器的維于良好工作狀態(tài)的保證。做好儀器的維護(hù)保養(yǎng)，有助于提高儀器測(cè)量的準(zhǔn)確性，護(hù)保養(yǎng)，有助于提高儀器測(cè)量的準(zhǔn)確性，減少故障的發(fā)生，延長(zhǎng)儀器的使用壽命。減少故障的發(fā)生，延長(zhǎng)儀器的使用壽命。四、儀器的維護(hù)與常見(jiàn)故障四、儀器的維護(hù)與常見(jiàn)故障檢測(cè)器的維護(hù)檢測(cè)器的維護(hù) 采血順利采血順利防止纖維絲堵孔防止纖維絲堵孔關(guān)機(jī)前對(duì)檢測(cè)器的微孔進(jìn)行清理沖洗關(guān)機(jī)前對(duì)檢測(cè)器的微孔進(jìn)行清理沖洗計(jì)數(shù)期間，及時(shí)按計(jì)數(shù)期間，及時(shí)按 “反沖反沖”鍵，沖掉沉積鍵，沖掉沉積變性的蛋白質(zhì)變

36、性的蛋白質(zhì)定期卸下檢測(cè)器，用定期卸下檢測(cè)器，用5%次氯酸鈉浸泡清洗次氯酸鈉浸泡清洗儀器的維護(hù)與常見(jiàn)故障儀器的維護(hù)與常見(jiàn)故障三、五分類(lèi)血細(xì)胞分析儀的使用 1、自動(dòng)進(jìn)樣 2、手工進(jìn)樣 3、末梢血、靜脈血的可選性 4、結(jié)果的判斷 5、質(zhì)量控制 6、儀器的校準(zhǔn) 準(zhǔn)品的來(lái)源、什么情況下需要校準(zhǔn)？如何校準(zhǔn)？ 7、儀器的維護(hù)標(biāo)本的重要性 1、高檔的儀器并不意味著結(jié)果一定可靠。 2、標(biāo)本的采集直接關(guān)系到結(jié)果的準(zhǔn)確性。 壓脈帶的使用時(shí)間、抗凝劑的影響、真空管的使用、血量的控制、標(biāo)本放置的溫度和時(shí)間、標(biāo)本的混勻等等。檢驗(yàn)報(bào)告的審核 1、當(dāng)日質(zhì)控是否在控。 2、比較報(bào)告各參數(shù)之間是否有矛盾。 3、注意觀(guān)察多個(gè)測(cè)定標(biāo)本相關(guān)參數(shù)是否有一致的系統(tǒng)誤差。 4、報(bào)告與臨床是否符合，不符合時(shí)可能存在的原因。如PLT過(guò)低、過(guò)高。 5、什么樣的結(jié)果必須手工復(fù)查？如何復(fù)查？復(fù)查完畢后的報(bào)告簽發(fā)模式。 6、直方圖、散點(diǎn)圖的利用。血細(xì)胞自動(dòng)分析異常結(jié)果人工顯微鏡復(fù)檢1、鏡檢復(fù)核的現(xiàn)狀、鏡檢復(fù)核的現(xiàn)狀血細(xì)胞分析儀仍只能作為CBC 分析的一種過(guò)篩手段 ，當(dāng)遇到可疑情況 ，尤其是在病理?xiàng)l件下 ，其測(cè)定結(jié)果并不可靠 ，需要人工以顯微鏡復(fù)查 ，這已是不爭(zhēng)的事實(shí) 。但是 ，國(guó)內(nèi)目前各醫(yī)院檢驗(yàn)科對(duì)CBC異常結(jié)果基不或很