桔梗葉多糖的提取工藝師繪敏

1、桔梗葉多糖的提取工藝師繪敏：Inthisexperiment，takingleafofPlatycodongrandiflorumasmainrawmaterials，extractionprocessofleafpolysaccharidewasdeterminedmainlythroughthesinglefactortestandorthogonaltest.Theleafwasdried，grinded，andskimoffthemonosaccharideauxiliary，andafterthatleafpolysaccharidewasextractedbyultrasonict

2、echnology，thentheextractionyieldwascalculated.Theresultsshowedthattheoptimumextractingconditionsare70，60min，frequencyof100kHZ，power700W.Underthebestconditiontheyieldis4.27%.桔梗是桔?？浦参锝酃＃≒latycodongrandiflorum（Jacq.）的干燥的根部1-3，味苦、辛，性微溫。入肺經(jīng)能祛痰止咳，并有宣肺、排膿作用。其嫩莖葉和根均可供蔬食，為傳統(tǒng)的藥食同源物品4?，F(xiàn)代研究表明：桔梗含多種氨基酸、大量亞油酸等不飽和

3、脂肪酸和多種人體必需微量元素及三萜皂苷、多酚等5。桔梗葉中富含抗癌物質，營養(yǎng)物質以及多糖類。多糖是由多個單糖分子縮合失水而成，是一類分子結構復雜且龐大的糖類物質6。大量研究表明：多糖除具有免疫調節(jié)，抗腫瘤生物學效應外，還有抗衰老、降血糖、抗凝血等作用，且對機體的副作用小7。目前，對桔梗葉中多糖的提取工藝研究較多，比如水提醇沉、膜分離技術以及超聲波技術等；對桔梗葉的研究多集中在皂苷方面，但很少涉及對其多糖的研究8。因此，對于桔梗葉中多糖的提取工藝研究具有很高的價值和重要意義。1 材料和方法1.1 材料和儀器桔梗葉購于當?shù)刂兴幉呐l(fā)市場，烘干粉碎，過孔徑0.4mm篩，經(jīng)石油醚回流脫脂，再在80下用

4、乙醇脫單糖3h后抽濾干燥備用。電熱恒溫鼓風干燥箱：上海森信實驗儀器XX公司；粉碎機：天津市泰斯特儀器XX公司；電熱恒溫水浴鍋，北京科偉永興儀器XX公司；循環(huán)水式真空泵（SHZ-D:鞏義市英峪予華儀器廠；電子分析天平（AL204-IC型）：梅特勒-托利多儀器上海XX公司；722G可見分光光度計：上海精密科學儀器有限責任公司；三頻數(shù)控超聲波清洗器（KQ-700VD國）：昆山市超聲儀器XX公司；旋轉蒸發(fā)器：上海亞榮生化儀器廠。蒽酮、濃硫酸、石油醚、無水乙醇、氯仿、正丁醇、葡萄糖均為分析純，純凈水。1.2 試驗方法1.2.1 提取的工藝流程桔梗葉一陰干-粉碎一石油醴、乙醇熱回流脫脂脫單糖7超聲波提取一

5、蒸發(fā)濃縮一乙醇沉淀過夜（多次）-低溫干燥-多糖。1.2.2 原料預處理將烘干后的桔梗葉用單項異步電動機機粉碎，過孔徑0.4mm篩，經(jīng)石油醚回流脫脂，再在80下用乙醇脫單糖3h后抽濾干燥。1.2.3 對照品溶液的制備精密稱取經(jīng)50干燥至恒重的無水葡萄糖1.0003g，加純化水溶解于1000mL容量瓶中，定容，搖勻，即得濃度為1.0003g?L-1的對照品溶液。1.2.4 硫酸-蒽酮試劑的配制稱取蒽酮0.5005g，用濃硫酸于250mL容量瓶中配制成濃度為0.002002g?mL-1的溶液，邊加邊攪拌至黃色透明液，避光保存現(xiàn)用現(xiàn)配。1.2.5 標準曲線的繪制吸取1.0003g?L-1的葡萄，糖標準

6、液0.0,2.0,4.0,6.0,8.0,10.0mL分別置于50mL容量瓶中，加蒸儲水稀釋至50mL,即得葡萄糖標準溶液，分別取上述溶液1mL于10mL容量瓶中，快速加入0.2002%慈酮-硫酸試劑4mL,搖均，冷卻至室溫，以蒸儲水為空白，在620nm波長處測定吸光度9，根據(jù)所得吸光度和相應葡萄糖濃度得標準曲線回歸方程：A=3.5414x-0.0075，相關系數(shù)R2=0.9981.式中x為葡萄糖溶液的濃度（mg?mL-1），A為吸光度。1.2.6 桔梗葉中多糖含量的測定精密稱取經(jīng)50干燥至恒重的多糖1.0000g，加純化水溶解于1000mL容量瓶中，定容，搖勻，即得濃度為0.1000g?L-

7、1的多糖溶液。吸取1.0000g?L-1的多糖溶液0.0，2.0，4.0，6.0，8.0，10.0mL分別置于50mL容量瓶中，加蒸儲水稀釋至50mL,分別取上述溶液1mL于10mL容量瓶中，快速加入0.2002%!酮-硫酸試劑4mL搖均，冷卻至室溫，以蒸餾水為空白，在630nm波長處測定吸光度。1.2.7桔梗葉中多糖的測定方法及轉化因子的計算對比葡萄糖與多糖的濃度與吸光度值，由公式C2/C1=K（A2/A1）可以得出多糖的轉化因子K=3.085（C1為葡萄糖濃度；C2為多糖濃度；A1,A2分別對應為葡萄糖和多糖溶液的吸光度；K為葡萄糖和多糖之間的轉化因子）10-11。多糖的提取率=（多糖的濃

8、度X定容體積）/1000X預處理桔梗葉粉末重X100%2 結果與分析2.1 不同超聲功率對多糖提取的影響取大約1.0g桔梗葉粉末樣品加30mL蒸餾水，利用超聲波在超聲頻率100kHz、提取溫度60、提取時間40min的條件下，分別研究不同的超聲功率（280，420，560，700W）對桔梗葉多糖提取效果的影響，重復3次，計算提取率。從圖1可看出，在功率280700W之間，多糖提取率是隨功率的變大而略顯增加的趨勢，開始時增加的速度比較快，在420560W之間出現(xiàn)了一平臺，之后提取率又逐漸升高，增加速度略有降低，700W時的提取率又明顯較高，所以選用功率700W為最佳。2.2 不同溫度對多糖提取的

9、影響取大約1.0g桔梗葉粉末樣品加30mL蒸餾水，利用超聲波在超聲功率700W、超聲頻率100kHz、提取時間40min的條件下，分別研究不同的提取溫度(40，50，60，70，80)對桔梗葉多糖提取效果的影響，重復3次，計算提取率。由圖2可知，超聲波頻率對多糖提取率的影響度較低時多糖的提取率較小，開始階段隨著溫度的升高，多糖的提取率增大，當溫度為5060C時，提取率的值出現(xiàn)平緩的趨勢，而過后隨著溫度的升高，多糖的提取率開始減小，說明溫度越高對細胞的破壞作用越大，有利于多糖的浸出，但溫度過高可能會導致多糖的轉化，反而不利于提取。因此，超聲的最佳溫度選取70左右。2.3 不同提取時間對多糖提取的

10、影響取1.0g桔梗葉粉末樣品加30mL蒸餾水，利用超聲波在超聲功率700W超聲頻率100kHz、提取溫度60C的條件下，分別研究不同的提取時間(20,40,60,80min)對桔梗葉多糖提取效果的影響，重復3次，計算提取率。由圖3可見，開始階段多糖吸光度隨時間的延長而增大，直到時間為60min時桔梗葉多糖的提取率最大，再延長超聲提取時間，吸光度反而會出現(xiàn)下降的趨勢，說明提取時間過長，多糖可能發(fā)生轉化。因此，桔梗葉多糖的超聲提取時間選擇60min左右時效果較好。2.4 不同超聲頻率對多糖提取的影響取1.0g桔梗葉粉末樣品加30mL蒸餾水，利用超聲波在超聲功率700W、提取溫度60C、提取時間40

11、min的條件下，分別研究不同的超聲頻率（45，80，100kHz）對桔梗葉多糖提取效果的影響，重復3次，計算提取率。由圖4可知，多糖提取率隨著超聲波頻率的增大而顯著變大，100kHz時的多糖提取率遠遠高于45和80kHz的。因此，在本試驗的條件下（最大頻率為100kHz）超聲的最佳頻率選取100kHz為宜。2.5 不同料液比對多糖提取的影響取1.0g桔梗葉粉末樣品分別加20，25，30，35mL蒸儲水，利用超聲波在超聲功率700W超聲頻率100kHz、提取溫度60、提取時間40min的條件下，分別研究不同的料液比對桔梗葉多糖提取效果的影響，重復3次，計算提取率。料液比越小，提取越徹底，就越會增加濃縮的工作量、試劑用量和成本，由試驗結果可知（圖5），隨著料液比的減少，多糖的提取率會隨之增加，但是料液比低于1：30,提取率增加的并不明顯，因此，最佳料液比為1：30o2.6 正交試驗結果正交試驗因素水平如表1。由表2、表3可見，影響桔梗葉多糖提取的因素：頻率>溫度>提取時間>超聲波功率。其中頻率達到顯著水平