茚三酮比色法測定賴氨酸含量(共3頁)

1、精選優(yōu)質(zhì)文檔-傾情為你奉上茚三酮比色法測定賴氨酸含量一.  目的了解賴氨酸總含量的測定方法。掌握用比色法測定谷物類樣品中賴氨酸含量。二.  原理    蛋白質(zhì)中的賴氨酸殘基上具有一個游離的e-NH2，它與茚三酮起顏色反應(yīng)呈藍(lán)紫色，在波長570nm處其顏色的深淺在一定范圍內(nèi)與賴氨酸殘基的含量成線性關(guān)系。    亮氨酸與賴氨酸的碳原子數(shù)目相同，它僅有的一個氨基（a-NH2）相當(dāng)于蛋白質(zhì)中賴氨酸殘基上的e-NH2，因而可以用亮氨酸標(biāo)準(zhǔn)液制作標(biāo)準(zhǔn)曲線來測定蛋白質(zhì)中賴氨酸的含量。但計算濃度時必須乘上兩種氨基酸的分子量之比（賴

2、氨酸與亮氨酸分子量之比為1.11:1）。式中  W：樣品質(zhì)量      C ：樣品中游離氨基酸的量，各種作物種子中游離氨基酸的含量大約是：玉米：0.01%，高粱：0.04%，水稻：0.01%，小麥：0.05%      X ：從標(biāo)準(zhǔn)曲線查得的賴氨酸的質(zhì)量三.  實驗材料及設(shè)備    1.  材料    玉米粉    2.  儀器    分

3、光光度計  分析天平  恒溫水浴    3.  器材    刻度試管： 25mL×11    移 液 管： 1mL×1  2mL×2  20mL×1      燒    杯： 250mL×2  50mL×1    滴    管： 2 

4、60;  洗 耳 球： 2    濾    紙： f11cm    研缽、漏斗、洗瓶、試管架、移液管架、玻棒：各1四.  試劑的配制    1. 檸檬酸緩沖液（0.2mol/L，pH5.6）(參見附錄二)    2. 茚三酮試劑        稱3g茚三酮溶于100mL 95%乙醇中，溶解后加入160mg二氯化錫，攪拌溶解后加入100mL檸檬酸緩沖液中，攪勻

5、備用。    3. 亮氨酸標(biāo)準(zhǔn)液（50mg/mL）        準(zhǔn)確稱取5mg亮氨酸，用蒸餾水稀釋定容到100mL，則得濃度為50mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)液。五. 操作步驟    1.  樣品液的制備    (1) 取材：稱取烘干、粉碎（過80目篩）的玉米粉0.3g（油料種子須經(jīng)脫脂處理）。    (2) 提?。簩⒎Q取的樣品放入試管，準(zhǔn)確加入20mL蒸餾水，搖勻。讀取樣品懸液的總體積 

6、0;    mL，置于80恒溫水浴中提取20min。（可間歇搖動）    (3) 定容：冷卻后，用蒸餾水將試管中懸液定容至（2）中懸液總體積刻度        mL,，即最終樣品液總定容體積仍為20mL，搖勻。    (4) 過濾：將提取液用濾紙過濾，收集濾液作為待測樣(濾紙不能用蒸餾水濕潤)。    2.  標(biāo)準(zhǔn)曲線制作及樣品測定        取9支刻度試管，按下表所示順序操作。六. 結(jié)果處理    1. 由06號管的數(shù)據(jù)，以亮氨酸含量(mg)為橫坐標(biāo)，A570為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；    2. 求樣品管A570的平均值570；