蛋白酶K市場初步分析

1、蛋白酶K市場初步分析l 簡介蛋白酶K，是以絲氨酸為活性中心的蛋白分解酶，分解蛋白質(zhì)的活性較強。具有廣泛的底物特異性，特別優(yōu)先分解與疏水性氨基酸、含硫氨基酸、芳香族氨基酸的C末端鄰接的酯鍵和肽鍵。此酶經(jīng)純化去除了RNA酶和DNA酶活性。由于蛋白酶K在尿素和SDS中穩(wěn)定，還具有降解天然蛋白質(zhì)的能力，因而它應(yīng)用很廣泛。作為生化試劑，蛋白酶K一般以凍干粉或者酶溶液兩種形式提供產(chǎn)品。高端產(chǎn)品除了有較高的比活外還要求極高的純度并通過多種純度檢驗、底物專一性檢驗等分析，以滿足高精度實驗的要求。普通實驗一般要求電泳純和較高的蛋白水解活性。如果直接提供帶有蛋白酶成分的粗溶液作為產(chǎn)品則一般價格較低，可用于比較粗放

2、需求量又較大的實驗中。l 應(yīng)用蛋白酶K的應(yīng)用主要在實驗室，在生物學(xué)實驗中應(yīng)用廣泛。例如應(yīng)用于：（1） Particularly suitable for the proteolytic inactivation of nucleases during the isolation of DNA and RNA. 尤其適用于DNA、RNA 提取過程中抑制核酸酶； （2） Used to treat tissue sections to ensure efficient probe infiltration during in situ hybridization.用于原位雜交，處理組織碎片以保證高

3、效的探針篩選；（3） Used for the determination of enzyme localization on membranes by modifying proteins and glycoproteins on cell surfaces. 通過修飾細(xì)胞膜上的蛋白質(zhì)和糖蛋白以確定蛋白質(zhì)在膜上的位置；（4） Used to remove cellular debris during the preparation of colony lifts, 準(zhǔn)備菌落轉(zhuǎn)移時除去細(xì)胞碎屑；（5） The enzyme also promotes cell lysis by activat

4、ing a bacterial autolytic factor. 通過激活細(xì)菌自溶因子促進(jìn)細(xì)胞溶解；（6） Preparation of DNase free and RNase free samples for RT-PCR, PFGE etc.為脈沖電場凝膠電泳、RT-PCR等準(zhǔn)備無DNase、RNase的樣品；（7） Useful for the isolation of mitochondria from tissue.有助于從組織中線粒體提??；（8） Digestion of proteins from brain tissue samples for prions in Tran

5、smissible Spongiform Encephalopathies (TSE) research.傳染性海綿狀腦病的研究中用于分解腦組織樣品中的蛋白朊病毒；（9） Finger printing指紋印跡。l 用量以細(xì)菌中提取質(zhì)粒DNA為例，一般用量約0.5mg蛋白酶K/mL樣品（要求產(chǎn)品比活30U/mg）。l 成本生產(chǎn)蛋白酶K的成本主要包括三大塊：菌種保存和培養(yǎng)、產(chǎn)品分離純化和檢測。菌種保存所需成本較小以人力成本為主，培養(yǎng)所需的成本主要為培養(yǎng)基和發(fā)酵設(shè)備，培養(yǎng)基主要原料為麥芽和奶粉價格低廉，發(fā)酵設(shè)備則根據(jù)生產(chǎn)規(guī)模需要選擇，10L智能生物發(fā)酵罐價格約2.5萬元；產(chǎn)品分離純化方法目前仍在摸

6、索，成本無法精確估算，可能采用的方法包括鹽析、離子交換層析柱和分子篩，單套設(shè)備成本不超過0.5萬元；檢測包括活性檢測（Folin試劑），純度檢測（AKTA purifier），酶量檢測（卡馬斯亮藍(lán)染色法）和其它檢測等，所用試劑均為常規(guī)生化試劑，且隨著生產(chǎn)規(guī)模的擴(kuò)大檢測費用被均攤相對變小。目前階段初步估計，本實驗室每生產(chǎn)100mg蛋白酶K成本約￥80-150元（不計設(shè)備和人力成本）。方法成熟后成本還有下降空間。l 價格各大國際供應(yīng)商報價比較：Sigma公司的產(chǎn)品報價最高，其高端產(chǎn)品報價在￥2347.02/100mg （中國代理價格￥2100/100mg）。其它公司產(chǎn)品以中端產(chǎn)品為主，如NEB公司

7、報價￥1331/100mg， Amresco公司報價￥541.92/100mg（按照1美元=6.8310人民幣換算），Roche公司報價￥711.8/100mg（按照1歐元=9.7711人民幣換算）。當(dāng)然sigma公司也有相應(yīng)的中端產(chǎn)品，報價￥604.89/100mg。國內(nèi)有眾多生物公司代理銷售以上國際知名廠商的產(chǎn)品，以中端產(chǎn)品為主，目前價格約在￥350-450元/100mg之間。1美國Sigma：2英國New England Biolab (NEB)公司報價：http:/www.neb-3德國Merck（默克）化工，中國代理價格：4美國Invitrogen，中國代理價格：5瑞士Roche（羅氏）：https:/www.roche-applied-6美國Amresco報價：http:/www.amresco-l 產(chǎn)品研發(fā)和定位的建議直接從真菌中提取和基因重組后表達(dá)兩條途徑均值得嘗試，從長遠(yuǎn)發(fā)展和大規(guī)模生產(chǎn)的角度看還是重組表達(dá)的方式更有優(yōu)勢。直接提取所需周期較長，以目前的水平一個完整周期約20天；如果基因重組成功，則生產(chǎn)周期可減少至3-4天。然而基因重組所需的研發(fā)周期較長，因而我們首先開發(fā)直接提取的方法。目前已直接從真菌中誘導(dǎo)得到蛋白水解活性的培養(yǎng)基，但提取純化方法仍在摸索，基因重組工