萬孚RDT瘧疾檢測

1、江蘇省寄生蟲病防治研究所江蘇省寄生蟲病防治研究所 顧亞萍顧亞萍 一、瘧疾檢測方法學(xué)一、瘧疾檢測方法學(xué) 二、萬孚瘧疾快速試劑介紹二、萬孚瘧疾快速試劑介紹 三、注意事項及異常情況三、注意事項及異常情況顯微鏡鏡檢PCR檢測儀膠體金檢測試劑檢測方法檢測方法優(yōu)點優(yōu)點缺點缺點顯微鏡鏡檢技術(shù)特異高；分期，計數(shù)，區(qū)分蟲種；1小時內(nèi)能完成診斷程序密度低時易漏檢（惡性瘧）；費時、費力PCR技術(shù)敏感性和特異性（最高）能鑒定4種瘧原蟲產(chǎn)物的污染易致假陽性；或操作不當(dāng)易致假陰性;需特殊設(shè)備，不能用于現(xiàn)場；費時，成本高 RDT簡便快速，適用性廣對于原蟲密度小于100個瘧原蟲/l血樣本，出現(xiàn)漏檢情況。原原 理理l利用膠體金

2、免疫層析技術(shù)，采用雙抗體夾心法檢利用膠體金免疫層析技術(shù)，采用雙抗體夾心法檢測抗原。測抗原。l檢測抗原為瘧原蟲乳酸脫氫酶（檢測抗原為瘧原蟲乳酸脫氫酶（PLDH）。）。l產(chǎn)品為三線聯(lián)檢卡，可檢測出瘧原蟲感染和區(qū)分產(chǎn)品為三線聯(lián)檢卡，可檢測出瘧原蟲感染和區(qū)分惡性瘧感染。惡性瘧感染。PANPAN，為泛瘧原蟲，為泛瘧原蟲，包括了瘧疾包括了瘧疾4 4個型個型PFPF，為惡性瘧，為惡性瘧性能指標(biāo)性能指標(biāo)l最低檢出量：最低檢出量：100 個瘧原蟲個瘧原蟲/l 血血對不同原蟲密度的檢測結(jié)果研究如下：對不同原蟲密度的檢測結(jié)果研究如下：原蟲密度原蟲密度（parasites/l）數(shù)量數(shù)量陽性陽性陰性陰性靈敏度（靈敏度（

3、%）01002632311.51002002018290.02005003735294.650030300100l樣本收集樣本收集l用全血來進行檢測。用全血來進行檢測。l全血收集：采用抗凝管采血，或在采血管里先加全血收集：采用抗凝管采血，或在采血管里先加入抗凝劑（抗凝劑種類可為肝素、入抗凝劑（抗凝劑種類可為肝素、EDTA、檸檬、檸檬酸鈉或草酸鉀），將采集血樣加入并搖勻備用。酸鈉或草酸鉀），將采集血樣加入并搖勻備用。l指尖、耳垂末梢或靜脈樣本采集后立即使用；指尖、耳垂末梢或靜脈樣本采集后立即使用；檢驗步驟檢驗步驟 1 測試前仔細閱讀使用說明書，測試應(yīng)在測試前仔細閱讀使用說明書，測試應(yīng)在室溫下進行

4、室溫下進行. 2 沿鋁箔袋切口部位撕開，取出試紙卡平沿鋁箔袋切口部位撕開，取出試紙卡平放于臺面上，并做好標(biāo)記。放于臺面上，并做好標(biāo)記。 3 3 將將5l5l全血加入樣本加樣孔全血加入樣本加樣孔( (A A孔孔) )中中 , ,再往稀釋液加再往稀釋液加樣孔樣孔( (B B孔孔) )中滴加稀釋液中滴加稀釋液4 4滴滴( (100 100 120l 120l) )。 4. 15分鐘內(nèi)觀察顯示結(jié)果；分鐘內(nèi)觀察顯示結(jié)果；30分鐘后顯示的結(jié)果分鐘后顯示的結(jié)果無臨床意義。無臨床意義。結(jié)果判讀結(jié)果判讀l一一 注意事項注意事項l試劑試劑 1.本品為一次性體外診斷試劑，過期產(chǎn)品請勿使用；本品為一次性體外診斷試劑，

5、過期產(chǎn)品請勿使用； 2.如試劑包裝鋁袋破損，干燥劑變紅，建議不要使用；如試劑包裝鋁袋破損，干燥劑變紅，建議不要使用；l實驗和保存環(huán)境：實驗和保存環(huán)境：1. 應(yīng)避免實驗環(huán)境溫度過低或過高；應(yīng)避免實驗環(huán)境溫度過低或過高；2.低溫保存的測試卡需要恢復(fù)至室溫后再打開，以免吸潮；低溫保存的測試卡需要恢復(fù)至室溫后再打開，以免吸潮；3.試劑應(yīng)保存在陰涼干燥的環(huán)境中；試劑應(yīng)保存在陰涼干燥的環(huán)境中；4.不要混合使用來自不同批次的試條不要混合使用來自不同批次的試條/試卡和裂解液。試卡和裂解液。5.當(dāng)瘧原蟲密度很高時檢測線很明顯，質(zhì)控線可能變得很弱，當(dāng)瘧原蟲密度很高時檢測線很明顯，質(zhì)控線可能變得很弱，為正常結(jié)果。為

6、正常結(jié)果。二、異常情況二、異常情況-假陽性假陽性l對于個別情況導(dǎo)致的假陽性，可能為以下原因引對于個別情況導(dǎo)致的假陽性，可能為以下原因引起。起。1 血液樣本為高血脂、高血紅蛋白、高度乳糜血等血液樣本為高血脂、高血紅蛋白、高度乳糜血等異常血樣，可能會引起非特異性吸附，以致出現(xiàn)異常血樣，可能會引起非特異性吸附，以致出現(xiàn)細線或假陽。細線或假陽。2 操作時，加樣后應(yīng)能自然流過膜部分，如樣本在操作時，加樣后應(yīng)能自然流過膜部分，如樣本在膜部位凝固，易導(dǎo)致誤判假陽。膜部位凝固，易導(dǎo)致誤判假陽。3 觀察時間的延長，導(dǎo)致金標(biāo)物質(zhì)的持續(xù)釋放，過觀察時間的延長，導(dǎo)致金標(biāo)物質(zhì)的持續(xù)釋放，過量的抗原抗體造成假陽情況。量的

7、抗原抗體造成假陽情況。三、異常情況三、異常情況-假陰性假陰性1. 檢查試劑包裝內(nèi)干燥劑有無吸潮，試劑條質(zhì)控檢查試劑包裝內(nèi)干燥劑有無吸潮，試劑條質(zhì)控線顯色是否正常。線顯色是否正常。2.試劑應(yīng)該保存于試劑應(yīng)該保存于4-30,如放于冰箱保存，檢測如放于冰箱保存，檢測標(biāo)本和試劑盒應(yīng)復(fù)溫再檢測。標(biāo)本和試劑盒應(yīng)復(fù)溫再檢測。3. 如果樣本中抗原含量少，因其反應(yīng)時間較長，如果樣本中抗原含量少，因其反應(yīng)時間較長，判讀時間最好不要提前，應(yīng)在判讀時間最好不要提前，應(yīng)在15min后。后。4. 注意，全血加樣量和滴加稀釋液的量，若全血注意，全血加樣量和滴加稀釋液的量，若全血量少，稀釋液多，易導(dǎo)致低濃度陽性漏檢。量少，稀釋液多，易導(dǎo)致低濃度陽性漏檢。四、異常情況四、異常情況-無效情況無效情況1.1. 運輸過程導(dǎo)致包裝破損，試劑失效；運輸過程導(dǎo)致包裝破損，試劑失效；2. 2. 操作失