日本藥典中心靜脈營養(yǎng)輸液中微量鋁元素的檢出方法介紹

1、發(fā)布日期 20090728 欄目 化藥藥物評價>>化藥質(zhì)量控制 標(biāo)題 日本藥典中心靜脈營養(yǎng)輸液中微量鋁元素的檢出方法介紹 作者 張星一 部門 審評三部 正文內(nèi)容       近年來,隨著一些重大藥害事件的逐漸披露,公眾對于注射劑的質(zhì)量問題越來越關(guān)注。藥品監(jiān)管部門也出臺了一些列措施來提高注射劑的安全性控制標(biāo)準(zhǔn)。在國外出現(xiàn)了使用TbrN制劑的腎功能障礙患者出現(xiàn)鋁毒性(中樞神經(jīng)系統(tǒng)或骨)的報道1,日本藥典附錄中收載了中心靜脈腸外營養(yǎng)輸液(Total brarenteral Nutrition, TbrN) 中微量鋁元素的測定方法的內(nèi)容。從

2、2004年7月起2,FDA要求生產(chǎn)廠家對大多數(shù)腸外營養(yǎng)液中的鋁進行定量。大容積的注射用溶液,如葡萄糖、氨基酸、脂肪乳和注射用蒸餾水,要求其鋁含量低于25g/L;但對小溶劑的注射用溶液,如電解質(zhì)、維生素和微量元素,則沒有規(guī)定鋁含量的上限。腸外營養(yǎng)液中的鋁腸外營養(yǎng)液中并沒有補入鋁的要求,其中存在的鋁屬于一種藥品污染3。      鑒于目前國內(nèi)營養(yǎng)輸液在外科術(shù)后康復(fù)和腫瘤輔助治療中應(yīng)用越來越廣泛,而相關(guān)“微量鋁污染”的質(zhì)量控制手段尚未見報道,故將日本藥局方第十五改正版(日文版)(以下簡稱:日本藥典)中“參考情報:16 中心靜脈栄養(yǎng)剤中微量試験法”相關(guān)

3、內(nèi)容翻譯介紹,供國內(nèi)同行參考,以進行相關(guān)的防治和檢控工作。一、日本藥典微量鋁檢測方法1      現(xiàn)有的微量鋁分析方法主要有:1)熒光檢測HbrLC法,2)電感耦合等離子體發(fā)射光譜法(ICbr-AES)和3)ICbr-MS等。熒光檢測HbrLC法的檢測靈敏度約為1g/L(ppb)。如使用特別的附屬裝置ICbr-AES法和ICbr-MS法可以得到更高的檢測靈敏度。由于TbrN是營養(yǎng)劑,含有糖類、氨基酸類、電解質(zhì)等多樣的營養(yǎng)成分,組成很復(fù)雜。由于這些成分對測定有著很大的影響,所以要特別注意根據(jù)產(chǎn)品的情況選擇合適的分析方法。  &

4、#160;   考慮到作為分離分析方法的高效液相色譜目前應(yīng)用很普及,日本藥典選用了使用2種熒光性螯和試劑的熒光檢測HbrLC法作為TbrN微量鋁檢測方法:1)羥基喹啉(quinolinol)螯合物法,和2)熒光鎵(lumogallion)螯合物法。(1)羥基喹啉螯合物法在供試液中形成鋁離子的羥基喹啉螯合物,采用熒光誘導(dǎo)的液體高效液相法進行試驗。供試液的配制正確量取試驗樣品液(TbrN制劑)1mL,加水10L,再加流動相至10mL,作為供試品溶液。標(biāo)準(zhǔn)曲線系列標(biāo)準(zhǔn)液的配制分別正確量取鋁試驗用水1mL,正確加入鋁標(biāo)準(zhǔn)溶液(1)(5)各10L,加流動相至10mL,作為標(biāo)準(zhǔn)曲線系列

5、標(biāo)準(zhǔn)液(鋁離子濃度:0,1.25,2.5,5.0及10.0ppb)。標(biāo)準(zhǔn)試驗法分別正確取供試品溶液和標(biāo)準(zhǔn)曲線系列標(biāo)準(zhǔn)液0.1mL,按照以下條件進行高效液相法試驗。采用標(biāo)準(zhǔn)曲線法,計算供試品溶液中的鋁濃度。試驗條件檢測器:熒光光度計(激發(fā)波長:380nm,熒光波長520nm)色譜柱:內(nèi)徑4.6mm,長度15cm的不銹鋼管,填充物為液相色譜用苯基鍵合硅膠。柱溫:40附近恒定流動相:8-羥基喹啉的乙腈溶液(3100)/稀釋的0.5mol/L醋酸胺試液(25)混合溶液(1:1)流速:調(diào)整使鋁/羥基喹啉螯合物的峰保留時間約為9分鐘。系統(tǒng)適用性采用標(biāo)準(zhǔn)曲線系列標(biāo)準(zhǔn)液做成的標(biāo)準(zhǔn)曲線的相關(guān)系數(shù)在0.99以上。

6、      也可以采用不在流動相中加入8-羥基喹啉,而在供試品溶液配制階段加入8-羥基喹啉,使生成鋁/羥基喹啉螯合物之后,再進行熒光檢測的液體高效液相色譜試驗。由于流動相中不含有螯合試劑,必須要預(yù)先生成更穩(wěn)定的鋁/羥基喹啉螯合物。還有,由于熒光檢測的分析波長不同(激發(fā)波長:370nm,熒光波長504nm),測定的靈敏度也有所差異,檢測用標(biāo)準(zhǔn)曲線應(yīng)在025ppb的范圍內(nèi)適當(dāng)選擇。另外,由于色譜柱的尺寸、柱溫以及流動相的組成也不相同,為了正確測定供試品溶液中的微量的鋁,一定要認(rèn)真選擇適當(dāng)?shù)脑囼灄l件。(2)熒光鎵(lumogallion)螯合物法在供

7、試液中形成鋁離子的熒光鎵螯合物,采用熒光誘導(dǎo)的液體高效液相法進行試驗。供試液的配制正確量取試驗樣品液(TbrN制劑)70l,正確加入鹽酸熒光鎵溶液0.15mL之后,正確加入鋁試驗用pH緩沖液0.6ml。混合液在40放置4小時后,作為供試品溶液。標(biāo)準(zhǔn)曲線系列標(biāo)準(zhǔn)液的配制分別正確量取鋁標(biāo)準(zhǔn)溶液(1)(5)各1mL,加入稀釋后的鋁試驗用硝酸(1100)至100mL。從中正確量取70L,正確加入鹽酸熒光鎵溶液0.15mL和pH7.2的鋁試驗用緩沖液0.6mL,混合后,在40放置4小時,作為標(biāo)準(zhǔn)曲線系列標(biāo)準(zhǔn)液(鋁離子濃度:0,1.07,2.13,4.27及8.54ppb)。標(biāo)準(zhǔn)試驗法分別正確取供試品溶液

8、和標(biāo)準(zhǔn)曲線系列標(biāo)準(zhǔn)液0.1mL,按照以下條件進行液體高效液相法試驗,采用標(biāo)準(zhǔn)曲線法,計算供試品溶液中的鋁濃度。試驗條件檢測器:熒光光度計(激發(fā)波長:505nm,熒光波長574nm)色譜柱:內(nèi)徑6.0mm,長度10cm的不銹鋼管,填充物為液相色譜用辛烷基鍵合硅膠。柱溫:40附近恒定流動相:向100mL 2-丙醇中加入稀釋的pH5.0的1mol/L醋酸·醋酸鈉緩沖液(110)到1000mL。流速:調(diào)整使鋁/熒光鎵螯合物的峰保留時間約為5分鐘。系統(tǒng)適用性采用標(biāo)準(zhǔn)曲線系列標(biāo)準(zhǔn)液做成的標(biāo)準(zhǔn)曲線的相關(guān)系數(shù)在0.99以上。二、相關(guān)注意事項11)實驗中使用的水以及其他的試驗用溶媒、試劑、器具等,均應(yīng)

9、選擇鋁污染小的產(chǎn)品,除此之外,也應(yīng)注意實驗室環(huán)境中的塵埃的鋁污染。2)檢測前一定要注意檢測樣品的自身特性對鰲合物的形成不存在影響。3)日本分析化學(xué)協(xié)會目前可以提供已知鋁濃度的金屬成分分析用河川水標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì),在試驗方法和實驗結(jié)果的適用性評價時,可以使用這些標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。三、標(biāo)準(zhǔn)溶液及試劑、試液的配制1本實驗中,除日本藥典規(guī)定試劑之外,應(yīng)使用以下的標(biāo)準(zhǔn)溶液和試劑、試液。鋁標(biāo)準(zhǔn)溶液  取一定量的鋁試驗用水或鋁標(biāo)準(zhǔn)原液,用稀釋后的鋁試驗用硝酸(1100)稀釋,分別配制鋁濃度為0,1.25,2.5,5.0及10.0ppm的鋁標(biāo)準(zhǔn)溶液(1)(5)。鋁試驗用水  除滿足“精制水”的要求外,鋁濃

10、度應(yīng)低于1ppb。鋁試驗用硝酸  硝酸中的鋁濃度應(yīng)低于1ppb。鋁試驗用緩沖液  取pH7.2的N,N-bis(2-羥基乙基)-2-氨基乙基亞磺酸106.6g,溶解于鋁試驗用水800mL后,加入鋁試驗用氫氧化四甲基銨調(diào)節(jié)pH至7.2,加鋁試驗用水至1000mL。N,N-bis(2-羥基乙基)-2-氨基乙基亞磺酸  C6H15NO5S 白色結(jié)晶或粉末。鋁試驗用氫氧化四甲基銨  (CH3)4NOH 鋁試驗用約為25%的水溶液,但鋁濃度應(yīng)在10ppb以下。熒光鎵鹽酸溶液  取熒光鎵0.86g溶解于2-丙醇 300mL中,正確加入稀釋的鋁試驗用鹽酸(9

11、50)350mL和鋁試驗用水至1000mL。熒光鎵(2,2",4"-Trihydroxy-5-chloroazobenzene-3-sulfonic Acid4-Chloro-6-(2,4-dihydroxyphenylazo)-1-phenol-2-sulfonic Acid,譯者注)C12H9ClN2O6S 紅褐色暗褐色的粉末。其中鋁濃度應(yīng)低于1ppm。鋁試驗用鹽酸  鹽酸中的鋁濃度應(yīng)低于1ppb。四、小結(jié)與展望      FDA確定攝入鋁5g/(kg·d)是安全的,腸外營養(yǎng)液中的鋁毒性是因使用含鋁的

12、腸外營養(yǎng)成分,最終造成鋁在人體內(nèi)蓄積引起的4。Smith等進行的研究表明,腸外營養(yǎng)液中鋁的主要來源為鈣和磷酸鹽,如葡萄糖酸鈣、磷酸氫二鉀、醋酸鈉中的鋁占到了腸外營養(yǎng)液樣品中鋁總量的90%5。對國外通常使用的腸外營養(yǎng)輸液的研究顯示,不同廠家的同一產(chǎn)品的鋁含量是不同的,同一廠家的不同規(guī)格的產(chǎn)品鋁含量也是不同的5。有文獻報道,更換腸外營養(yǎng)液的包裝,減少玻璃容器的使用,可以起到預(yù)防的作用。1999年7月在德國上市的聚乙烯安瓿裝葡萄糖酸鈣可明顯降低腸外營養(yǎng)液中鋁的含量。使用聚乙烯安瓿替代玻璃容器分裝葡萄糖酸鈣,可使葡萄糖酸鈣中平均鋁濃度減少了96%(從5000g/L降到195g/L)6。目前,聚乙烯安瓿

13、裝的葡萄糖酸鈣只有德國使用。      對注射液中鋁的安全性控制,目前國內(nèi)藥學(xué)領(lǐng)域報道較少,微量鋁的測定研究多見于環(huán)境水體監(jiān)測,國家藥典標(biāo)準(zhǔn)尚未收載注射劑中微量鋁的檢查方法。希望國內(nèi)醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)界和監(jiān)管部門聯(lián)合起來,從外科大容量營養(yǎng)注射液產(chǎn)品的原料藥質(zhì)控、包材選擇和質(zhì)檢方法等領(lǐng)域著手,進一步提升此類藥品的整體品質(zhì)。參考文獻1、日本藥局方第十五改正版(日文版). 2、Food and Drug Administration. Aluminum in large and small volume parenterals used in total parenteral nutrition. Fed Regist,2000,65(17):4103-4111.3、Hewitt CD,Savory J,Wills MR,Aspects of aluminum toxicity J.Clin Lab Med,1990,10(2):403-422.4、樊新星,徐廷,金朝暉等.腸外營養(yǎng)液中的鋁污染J. 華西醫(yī)學(xué),2008,23(1):203-204.5、Smith BS,Kothari H,Hayes BD,et al. Effect of additive selection on calculated aluminum con