梅毒血清學檢測策略及影響因素

1、梅毒血清學檢測策略梅毒血清學檢測策略及影響因素及影響因素 重慶市涪陵中心醫(yī)院重慶市涪陵中心醫(yī)院 涂涂偉偉2021-11-16梅毒概述梅毒概述u梅毒是由蒼白螺旋體引起的一種慢性、系統(tǒng)性性傳播疾病。人體受感染后，幾乎可侵犯全身各組織與器官，臨床表現(xiàn)多種多樣，且時顯時隱，病程較長。u中華人民共和國傳染病防治法規(guī)定要管理的主要性病之一。u早期主要侵犯皮膚及粘膜，晚期除侵犯皮膚、粘膜外，還可侵犯心臟血管系統(tǒng)及中樞神經(jīng)系統(tǒng)；另一方面，梅毒又可多年無癥狀呈潛伏狀態(tài)。u梅毒主要通過性接觸傳染，亦可通過血液和母嬰垂直傳播。梅毒螺旋體梅毒螺旋體梅毒是一種性傳播疾病，病原體為梅毒螺旋體，屬于密螺旋體屬，蒼白密螺旋體

2、蒼白亞種(Treponema pallidum subspecies pallidum) 極細亞種 雅司病地方亞種 地方性梅毒蒼白亞種 梅毒蒼白螺旋體品他螺旋體品他病 密螺旋體屬我國基本消滅基本消滅（1950-1964年）現(xiàn)在呈逐年增加逐年增加的趨勢我國政府針對梅毒控制的相關(guān)政相關(guān)政策策 中國預防與梅毒規(guī)劃（2010-2020年） 性病管理辦法（2013年） 預防艾滋病、梅毒和乙肝母嬰傳播工作實施方案 梅毒分期梅毒分期時間 一期梅毒 二期梅毒 三期梅毒 隱形梅毒 胎傳梅毒梅毒是一個可以臨床治愈的傳染病病例診斷依據(jù)（病例診斷依據(jù)（ws273-2007ws273-2007）u病史u癥狀u實驗室檢查

3、實驗室檢查結(jié)果對梅毒診斷及判愈有決定性意義梅毒實驗室檢測方法梅毒實驗室檢測方法p病原學檢測p梅毒血清學檢測梅毒血清學檢測p組織病理學檢測p白細胞檢測p蛋白檢測病原學檢測病原學檢測 暗視野顯微鏡檢查 鍍銀染色法 核酸檢測（血液標本？）梅毒血清學檢測方法梅毒血清學檢測方法 （1）梅毒非特異性抗體檢測（非梅毒螺旋體抗原血清學試驗）（2）梅毒特異性抗體檢測（梅毒螺旋體抗原血清學試驗）梅毒非特異性抗體檢測原理梅毒非特異性抗體檢測原理梅毒螺旋體一旦感染人體，宿主可對螺旋體表面的脂質(zhì)做出免疫應答，產(chǎn)生抗類脂抗原的抗體（即非特異性抗體）。未經(jīng)治療的患者，其血清內(nèi)的非特異性抗體可長期存在。經(jīng)過正規(guī)治療后，非特異

4、性抗體可以逐漸減少滴度或直至轉(zhuǎn)為陰性。 反應原理反應原理 抗原抗體結(jié)合形成復合物，凝集成網(wǎng)狀沉淀顆粒被肉眼所見 抗原基本成分抗原基本成分 心磷脂、卵磷脂和膽固醇 方法包括：方法包括： 快速血漿反應素環(huán)狀卡片試驗(RPR) 不加熱血清反應素(USR) 甲苯胺紅不加熱血清試驗（TRUST） 性病研究實驗室試驗(VDRL)等。中華人民共和國衛(wèi)生行業(yè)標準WS/T WS/T 491-2016491-2016梅梅毒非特異性抗毒非特異性抗體檢體檢測操作指南測操作指南常見的測定影響因素常見的測定影響因素 水平旋轉(zhuǎn)儀（100+2r/min） 反應時間 專用抗原滴針的加樣量要求，抗原量每滴為17ul左右 反應板的

5、要求：無污染、試劑打開后不可冷藏保存局限性假陰性反應假陰性反應 感染梅毒螺旋體后，機體免疫應答需要一定過程，抗類脂質(zhì)的抗體濃度尚處于實驗方法的檢測限之下，稱為窗口期，可發(fā)生假陰性反應。 少數(shù)早期梅毒和神經(jīng)梅毒以及部分晚期梅毒，可發(fā)生定性試驗假陰性反應。前帶現(xiàn)象前帶現(xiàn)象 部分早期梅毒（1%-2%的二期梅毒，0.5%-1%的一期梅毒）的樣品可出現(xiàn)前帶現(xiàn)象 樣品類型血漿中抗體濃度顯著高于血清，同一患者的血清和血漿檢測結(jié)果不可直接比較。雖然VDRL、RPR、TRUST的檢測原理基本相同，但因采用的抗原原料和生產(chǎn)工藝的不同，各種方法和試劑之間可能存在一定范圍的敏感性和特異性的系統(tǒng)性差異。任何任何2 2中

6、方法的定性和半定量結(jié)果，相互之間不中方法的定性和半定量結(jié)果，相互之間不可直接比較?？芍苯颖容^。當采用梅毒非特異性抗體作梅毒篩查用途時，應選擇敏感性高的方法或試劑。假陽性問題假陽性問題假陽性：非梅毒患者的血清反應呈陽性技術(shù)性假陽性技術(shù)性假陽性由于標本的保存不當（如細胞污染或溶血）、試劑質(zhì)量差或過期、或?qū)嶒炇也僮麇e誤所造成。生物學假陽性生物學假陽性是由于患者有其他疾病或生理狀態(tài)發(fā)生變化，使梅毒血清試驗出現(xiàn)陽性。急性生物學假陽性反應的疾病急性生物學假陽性反應的疾病風疹水痘傳染性單核細胞增多癥傳染性肝炎上呼吸道感染肺炎球菌性肺炎病毒性肺炎牛痘疹慢性生物學假陽性反應的疾病慢性生物學假陽性反應的疾病 系統(tǒng)

7、性紅斑狼瘡 自身免疫性溶血性貧血 盤狀紅斑狼瘡 結(jié)節(jié)性多動脈炎 類風濕性關(guān)節(jié)炎 橋本氏甲狀腺炎 風濕性心臟病 干燥綜合征 毒品癮者 慢性腎炎 肝硬化 老年 麻風 (是唯一產(chǎn)生慢性生物學假陽性的感染性疾病)梅毒特異性抗體檢測梅毒特異性抗體檢測 抗原為梅毒螺旋體特異蛋白（包括螺旋體重組特異性抗原），檢測梅毒患者血中特異性抗梅毒螺旋體抗原的抗體。 感染梅毒螺旋體后，一旦梅毒螺旋體抗體試驗呈陽性，則該患者基本終生陽性終生陽性。梅毒螺旋體的抗原結(jié)果梅毒螺旋體的抗原結(jié)果l外膜脂蛋白抗原外膜脂蛋白抗原47、44.5、43、36、34、17、15KDa成分，其中47含量高，免疫原性強，為主要抗原，但與其他兩種

8、致病性螺旋體有交叉反應）l軸絲抗軸絲抗原原軸絲為運動器官，37、35.5、33KDal4D4D抗抗原原為梅毒螺旋體特異性表面抗原，均勻分布在梅毒螺旋體表面。梅毒特異性抗體檢測技術(shù)梅毒特異性抗體檢測技術(shù) 梅毒螺旋體明膠顆粒凝集試驗（TPPA） 梅毒螺旋體血球顆粒凝集試驗（TPHA） 酶聯(lián)免疫試驗（ELISA） 化學發(fā)光免疫分析法（CLIA） 免疫層析法梅毒快速檢測（RT） 熒光螺旋體抗體吸收試驗（FTA-ABS） 蛋白印跡試驗（WB）TPPA/TPHATPPA/TPHA原理原理 TPPA試驗原理與TPHA試驗基本相同 TPPA試驗用梅毒螺旋體致敏明膠顆粒 TPHA試驗中梅毒螺旋體致敏羊紅細胞 特

9、點 梅毒螺旋體(Nichols株)全抗原Serodia TPPA的操作步驟的操作步驟6、結(jié)果判讀1、加入樣品稀釋液100l25l25l 25l孔號143212、加入測試樣品25l孔號14321致敏顆粒4、加入明膠顆粒最終稀釋倍數(shù)孔號143211:401:8025l25l未致敏顆粒5、混勻，加蓋，孵育2個小時3、樣品的倍比稀釋孔號14321最終稀釋倍數(shù)1:201:4025l25l25l25l棄去判斷標準判斷標準粒子光滑覆蓋整個孔底，有時邊緣有折疊粒子光滑覆蓋大部分孔底粒子光滑覆蓋孔底，周圍有一細胞環(huán)粒子光滑覆蓋孔底，周圍有一明顯細胞環(huán)粒子沉積孔底，中央形成一小點粒子緊密沉積孔底中央ELISA/C

10、LIAELISA/CLIA 原理原理用重組梅毒螺旋體抗原包被固相板條，加上梅毒血清和單克隆抗體酶標記物，形成抗原抗體復合物與酶標記物結(jié)合，用酶標儀判定試驗陽性反應。 特點特點本法可用于大規(guī)模血清檢測?；瘜W發(fā)光法的臨床應用意義基本同ELISA?；瘜W發(fā)光的敏感性？免疫層析免疫層析梅毒梅毒IgMIgM抗體抗體uIgM抗體的產(chǎn)生是感染后的早期體液免疫應答反應。IgM抗體不能通過胎盤屏障和血腦屏障，而母體的IgG抗體可以通過胎盤屏障傳給胎兒，血液中的IgG抗體也可以通過血腦屏障進入腦脊液中，因此若在新生兒血中檢測到IgG抗體不能作為先天梅毒的診斷依據(jù)，而IgM抗體可作為先天梅毒的診斷依據(jù)。u同時，梅毒I

11、gM抗體檢測還可以用于神經(jīng)梅毒、早期梅毒的診斷依據(jù)。梅梅毒毒各各類抗體出現(xiàn)時間類抗體出現(xiàn)時間先天梅毒的診斷先天梅毒的診斷先天梅毒的診斷標準必須具備以下條件之一必須具備以下條件之一：1.暗視野顯微鏡鏡檢梅毒螺旋體陽性；2.梅毒螺旋體IgM抗體陽性；3.RPR/TRUST檢測陽性，滴度比母親分娩前最近一次滴度高4倍以及上；4.RPR/TRUST檢測隨訪中，任何一次滴度不下降或反而上升；5.滿18月齡后，TPPA檢測仍為陽性。梅毒的血清固定梅毒的血清固定梅毒血清學實驗室檢測策略梅毒血清學實驗室檢測策略梅毒血清學檢測目的與策略的關(guān)系傳統(tǒng)策略傳統(tǒng)策略逆向策略逆向策略雙檢策略雙檢策略試驗結(jié)果試驗結(jié)果參考結(jié)果解釋參考結(jié)果解釋梅毒特異性抗體梅毒特異性抗體檢測檢測梅毒非特異性抗梅毒非特異性抗體檢測體檢測陽性陽性可能為現(xiàn)癥梅毒陰性陽性非梅毒螺旋體血清學試驗假陽性陽性陰性臨床治愈的早期梅毒（既往感染者）或極早期梅毒陰性陰性排除梅毒感染或極早期梅毒總結(jié)總結(jié) 非特異性和特異性兩類抗體檢測均可作為梅毒初篩