現(xiàn)代分子生物學(xué)筆記基礎(chǔ)理論部分匯總

1、 第二章 染色體與 DNA 第一節(jié) 染色體 1、真核細(xì)胞的染色體具有如下性質(zhì)：分子結(jié)構(gòu)相對(duì)穩(wěn)定；能夠自我復(fù)制，使親子代保持連續(xù)性；能指導(dǎo)蛋白質(zhì)的合成，從而控制生命過(guò)程；能產(chǎn)生可遺傳的變異。 2、染色體上的蛋白質(zhì)包括組蛋白和非組蛋白。組蛋白是染色體的結(jié)構(gòu)蛋白，它與 DNA 組成核小體。組蛋白分為 H、HA、HB、H、H 。 43212組蛋白：histones 真和生物體細(xì)胞染色質(zhì)中的堿性蛋白質(zhì)含精氨酸和賴(lài)氨酸等堿性氨基酸特別多，二者加起來(lái)約為所有氨基酸殘基的四分之一。 3、組蛋白的一般特性： 1 進(jìn)化上的極端保守：不同種生物組蛋白的氨基酸組成是十分相似的，特別是 H、H4 3 可能對(duì)穩(wěn)定真核生物

2、的染色體結(jié)構(gòu)起重要作用。 無(wú)組織特異性2 肽鏈上氨基酸分布的不對(duì)稱(chēng)性3 存在較普遍的修飾作用4 H 富含賴(lài)氨酸的組蛋白554、非組蛋白：主要包括與復(fù)制和轉(zhuǎn)錄有關(guān)的酶類(lèi)、與細(xì)胞分裂有關(guān)的蛋白等。 5、真核生物基因組 DNA： 真核細(xì)胞基因組的最大特點(diǎn)是它含有大量的重復(fù)序列，而且功能 DNA 序列大多被不編碼蛋白質(zhì)的非功能 DNA 所隔開(kāi)。人們把一種生物單倍體基因組 DNA 的總值稱(chēng)為 C 值。在真核生物中C 值一般是隨生物進(jìn)化而增加的，高等生物的 C 值一般大于低等生物，但某些兩棲類(lèi)的 C 值甚至比哺乳類(lèi)還大，這就是著名的“C 值反?，F(xiàn)象” 。 6、真核細(xì)胞 DNA 序列可分為三類(lèi)： 。總量的

3、40%80%不重復(fù)序列：在單倍體基因組里，一般只有一個(gè)或幾個(gè)拷貝，占 DNA1結(jié)構(gòu)基因基本上屬于不重復(fù)序列。 tRNArRNA、總量的 10%40%，各種中度重復(fù)序列：重復(fù)次數(shù)在 10104 之間，占 DNA2以及某些結(jié)構(gòu)基因（如組蛋白基因）都屬于此類(lèi)。 個(gè)堿 1060。只在真核生物中出現(xiàn)占基因組的 10%60%，由高度重復(fù)序列：如衛(wèi)星 DNA3基組成，在 DNA 鏈上串聯(lián)重復(fù)高達(dá)數(shù)百萬(wàn)次，這類(lèi) DNA 高度濃縮，是異染色質(zhì)的組成部分，可能與染色體的穩(wěn)定性有關(guān)。 7、染色質(zhì)與核小體：染色質(zhì)纖維細(xì)絲是由 DNA 和組蛋白構(gòu)成，DNA 和組蛋白構(gòu)成核小體，核小體連成念珠狀構(gòu)成染色質(zhì)。 核小體的裝配

4、過(guò)程：1兩分子的 H3 和兩分子的 H4 先形成四聚體，然后由 HA 和 HB 構(gòu)成的異二聚體在該四聚體22的兩側(cè)分別結(jié)合而形成八聚體。長(zhǎng) 146bp 的 DNA 按左手螺旋盤(pán)繞在八聚體上 1.8 圈，形成核小體的核心顆粒，每圈約 80bp。核心顆粒兩端的 DNA 各有 11bp 與 H1結(jié)合，形成完整的核小體。核小體的形成是染色體壓縮的第一個(gè)階段。 染色體的壓縮：2DNA 雙鏈以左手螺旋盤(pán)繞在組蛋白形成的八聚體核心上即核小體-念珠狀結(jié)構(gòu)-核小體結(jié)構(gòu)進(jìn)一步盤(pán)繞折疊形成染色質(zhì)絲-組成突環(huán)-玫瑰花結(jié)-螺線圈-由螺線圈組成染色單體。 8、真核生物基因組的特點(diǎn): 真核基因組龐大，一般都遠(yuǎn)大于原核生物的

5、基因組1 真核基因組存在大量的重復(fù)序列2以上，該特點(diǎn)是真核生物與真核基因組的大部分為非編碼序列，占整個(gè)基因組序列的 90%3 細(xì)菌和病毒之間最主要的區(qū)別 真核基因組的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為單順?lè)醋印? 真核基因是斷裂基因，有內(nèi)含子結(jié)構(gòu)。5 真核基因組存在大量的順式作用元件。包括啟動(dòng)子、增強(qiáng)子、沉默子等6 DNA 多態(tài)性。單核苷酸多態(tài)性和串聯(lián)重復(fù)序列多態(tài)性。真核基因組中存在大量的7 真核基因組具有端粒結(jié)構(gòu)。8模板只含有一個(gè)翻譯起始點(diǎn)和終單順?lè)醋樱赫婧嘶蜣D(zhuǎn)錄產(chǎn)物為單順?lè)醋?，即一條 mRNA RNA。止點(diǎn)，因而一個(gè)基因編碼一條多肽鏈或連在一起，相互之間由一條短的不編多順?lè)醋樱涸谠松镏?，通常是幾種不同的 m

6、RNA 鏈含有這樣的一條 mRNA 這種 mRNA叫做多順?lè)醋?mRNA。碼蛋白質(zhì)的間隔序列所隔開(kāi)， 指導(dǎo)合成幾種蛋白質(zhì)的遺傳信息。 9、原核生物基因組：含原核生物基因組很小，大多只有一條染色體，只有很少基因是以拷貝形式存在，且 DNA 量很少。 、原核生物基因組特點(diǎn)：10 結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)練：原核 DNA 分子的絕大部分是用來(lái)編碼蛋白質(zhì)的只有很少的一部分不轉(zhuǎn)錄1往往叢集在基因組和蛋白質(zhì)基因，原核生物 DNA 序列中功能相關(guān)的存在轉(zhuǎn)錄單元：RNA2的 mRNA 的一個(gè)或幾個(gè)特定部位，形成功能單元或轉(zhuǎn)錄單元，它們可被一起轉(zhuǎn)錄為含多個(gè) 。分子，稱(chēng)為多順?lè)醋?mRNA 有重疊基因：同一段 DNA 攜帶兩種或兩

7、種以上不同蛋白質(zhì)的編碼基因。3 的結(jié)構(gòu) DNA 第二節(jié) 分子中核苷酸的排列順序。DNA 的一級(jí)結(jié)構(gòu)：指 DNA1、 一級(jí)結(jié)構(gòu)特征：DNA 分子是由兩條互相平行的脫氧核苷酸鏈盤(pán)繞而成；DNA 分子中的脫氧核糖和磷酸交替連接，排在外側(cè)，構(gòu)成基本骨架，堿基排在內(nèi)側(cè)；DNA 兩條鏈上的堿基互補(bǔ)配對(duì)通常情況下分指兩條多核苷酸鏈反向平行盤(pán)繞所生成的雙螺旋結(jié)構(gòu)。DNA 的二級(jí)結(jié)構(gòu)：2、Z-DNA B-DNA 和左手螺旋為兩大類(lèi)：右手螺旋 A-DNA、鏈之間形成氫鍵；雙螺旋內(nèi)部形成的疏水區(qū)，消除了介質(zhì)中雙螺旋結(jié)構(gòu)：兩條 DNADNA 鏈水分子對(duì)堿基之間氫鍵的影響；介質(zhì)中的陽(yáng)離子中和了磷酸基團(tuán)的負(fù)電荷，降低了

8、DNA 之間的排斥力、范德華力。 。指左手螺旋 Z-DNADNA 雙螺旋進(jìn)一步扭曲盤(pán)繞所形成的特定空間結(jié)構(gòu)。DNA 的高級(jí)結(jié)構(gòu)：指 DNA3、 （拓?fù)洚悩?gòu)酶或溴乙啶）正超螺旋負(fù)超螺旋（拓?fù)洚悩?gòu)酶或溴乙啶）松弛 DNA 第三節(jié) DNA 的復(fù)制 1、半保留復(fù)制：DNA 在復(fù)制過(guò)程中，堿基間的氫鍵首先斷裂，雙螺旋被分開(kāi)，每條分子分別做模版合成新鏈，產(chǎn)生互補(bǔ)的兩條鏈。每個(gè)子代 DNA 分子的一條鏈來(lái)自親代 DNA，另一條是新合成的。 2、半不連續(xù)復(fù)制：DNA 在復(fù)制時(shí)，在一個(gè)復(fù)制叉上同時(shí)進(jìn)行兩個(gè)方向的 DNA 復(fù)制，一條鏈的合成是連續(xù)的，另一條是不連續(xù)的先合成一系列的 53的短片段，然后在 DNA 連

9、接 鏈DNA 酶作用下連接成完整的 、復(fù)制的起點(diǎn)、方向和速度 3 要解開(kāi)成兩股鏈分別進(jìn)行；所以這個(gè)復(fù)制起點(diǎn)成叉子形式，被稱(chēng)為復(fù)制 DNA 復(fù)制時(shí)，雙鏈復(fù)制是從固定起點(diǎn)開(kāi)始的。一般把生物的復(fù)制單位稱(chēng)為復(fù)制子。一個(gè)復(fù)制子只含 DNA 叉。分子都是作為單個(gè)復(fù)制子完成復(fù)制的。而 DNA 有一個(gè)復(fù)制起點(diǎn)。通常細(xì)菌、病毒和線粒體真核生物的基因組可以同時(shí)在多個(gè)復(fù)制起點(diǎn)上進(jìn)行雙向復(fù)制，即基因組中包含多個(gè)復(fù)制子。 復(fù)制主要是從固定起點(diǎn)雙向等速?gòu)?fù)制方式進(jìn)行。原核生物和真核生物的DNA 、幾種主要的復(fù)制方式：4 雙鏈的復(fù)制(1)線性 DNA 型 型、滾環(huán)型、D(2)環(huán)狀 DNA雙鏈的復(fù)制： DNA 復(fù)制的特點(diǎn) 原核

10、生物和真核生物第四節(jié) 復(fù)制的特點(diǎn)：DNA1、原核生物聚合酶都只能延長(zhǎng) DNA 所有的 DNA 復(fù)制都是從一個(gè)固定的起點(diǎn)開(kāi)始的，而目前所知的模版上合成 DNA 復(fù)制時(shí)，往往先由 RNA 聚合酶在 DNA 鏈而不能從頭合成 DNA 鏈。DNA 對(duì)于前導(dǎo)鏈，鏈。3末端開(kāi)始合成新的 DNA 再由 DNA 聚合酶從 RNA 引物一段 RNA 引物，聚合酶就能以此為起點(diǎn)一直合成下去，DNA 這個(gè)引發(fā)過(guò)程比較簡(jiǎn)單只要有一段 RNA 引物，需要多種蛋白質(zhì)和酶的協(xié)同作用還涉及到崗崎片這個(gè)引發(fā)過(guò)程就非常復(fù)雜，但對(duì)于滯后鏈， 段的形成和連接。滯后鏈的引發(fā)由引發(fā)體來(lái)完成。 。獲得能量來(lái)解開(kāi)雙鏈 DNADNA 解鏈酶：

11、DNA 解鏈酶能水解 ATP 它以四作用是保證被解鏈酶解開(kāi)的單鏈在復(fù)制完成前能保持單鏈結(jié)構(gòu)，SSB：?jiǎn)捂溄Y(jié)合蛋白 聚體形式存在于復(fù)制叉處，待單鏈復(fù)制完成后才離開(kāi)。 復(fù)制的特點(diǎn)、真核生物 DNA2 真核生物的染而原核生物只有一個(gè)復(fù)制起點(diǎn)；真核生物每條染色體上可以有多個(gè)復(fù)制起點(diǎn)，不能再開(kāi)始，而在快速生長(zhǎng)的原核生物中，復(fù)色體在全部完成復(fù)制前，各個(gè)起點(diǎn)上的 DNA DNA 復(fù)制，表現(xiàn)為雖有一個(gè)復(fù)制單元，但卻可有多個(gè)復(fù)制叉。制起點(diǎn)可以連續(xù)開(kāi)始新的 第五節(jié) DNA 的修復(fù) 1、錯(cuò)配修復(fù)：一旦復(fù)制叉通過(guò)復(fù)制起點(diǎn)，母鏈就會(huì)在開(kāi)始 DNA 合成前的幾秒至幾分鐘內(nèi)被甲基化。此后只要兩條 DNA 鏈上堿基配對(duì)出現(xiàn)錯(cuò)

12、誤錯(cuò)配修復(fù)系統(tǒng)就會(huì)根據(jù)“保存母鏈，修復(fù)子鏈”的原則，找出錯(cuò)誤堿基所在的 DNA 鏈，并在對(duì)應(yīng)于母鏈甲基化腺苷酸上游鳥(niǎo)苷酸的 5位置切開(kāi)自戀，再根據(jù)錯(cuò)配堿基相對(duì)于 DNA 切口的方位啟動(dòng)修復(fù)途徑，合成子鏈。 首先由核酸內(nèi)切酶識(shí)別 DNA2、切除修復(fù)：包括堿基切除修復(fù)和核苷酸切除修復(fù)。步驟：1由 DNA 解鏈酶將有損傷的 DNA 片段解離的損傷位點(diǎn)，在損傷部位的 5側(cè)切開(kāi)磷酸二酯鍵2鏈，填補(bǔ)已切 DNA53方向合成在 DNA 聚合酶的催化下，以完整的互補(bǔ)鏈為模板，按3由DNA 鏈連接酶新合成的 DNA 片段與原來(lái)的 DNA 斷鏈連接起來(lái)。 除的空隙43、重組修復(fù)（復(fù)制后修復(fù)）： 在損傷的對(duì)應(yīng)部位出

13、現(xiàn)缺口鏈復(fù)制時(shí)，產(chǎn)生的子代受損傷的 DNADNA1上相應(yīng)片段填補(bǔ)母鏈 DNADNA 進(jìn)行重組交換，將母鏈與有缺口的子鏈另一條母鏈 DNA2DNA 的缺口，而母鏈DNA 出現(xiàn)缺口 的缺 DNA 聚合酶催化合成一新的 DNADNA 片段填補(bǔ)母鏈以另一條子鏈 DNA 為模板經(jīng)3口，最后 DNA 連接酶連接，完成修補(bǔ)。 4、DNA 的直接修復(fù) 5、SOS 反應(yīng)：包括誘導(dǎo) DNA 損傷修復(fù)、誘變效應(yīng)、細(xì)胞分裂的抑制以及溶原性細(xì)菌釋放 的修復(fù)和產(chǎn)生變異。DNA 噬菌體等。包括兩個(gè)方面 DNA 的轉(zhuǎn)座第六節(jié) 上可自主復(fù)制和移位的基本單位。插入序列是最簡(jiǎn)單的、轉(zhuǎn)座子：是存在于染色體 DNA1 DNA的正常組成

14、成分。轉(zhuǎn)座子，它不含任何宿主基因，它們是細(xì)菌染色體或質(zhì)粒 RNA 到從 DNA 生物信息的傳遞-第三章 轉(zhuǎn)錄的基本過(guò)程 RNA 第一節(jié) 中的反義鏈 DNA5-3 方向進(jìn)行的；以 RNA 鏈的合成都包括以下幾個(gè)特點(diǎn)：RNA 是按照 1、聚合酶催化下；以四種三磷酸核苷為原料，根據(jù)堿基配對(duì)原則，各個(gè)核苷 RNA 為模版；在有意義鏈 DNARNA 帶有與酸之間通過(guò)形成磷酸二酯鍵相連，不需要引物的參與，合成的 轉(zhuǎn)錄起始、通過(guò)啟動(dòng)子及轉(zhuǎn)錄的延伸和終止。相同的序列。轉(zhuǎn)錄的基本過(guò)程包括：模版識(shí)別、雙鏈相互作用并與之相結(jié)合的過(guò)程。真聚合酶與啟動(dòng)子 DNA2、模版的識(shí)別：主要是 RNA 聚合酶不能直接識(shí)別基因的啟

15、動(dòng)子區(qū)，所以，需要一些被稱(chēng)為轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子核生物的 RNA 聚合酶才能與之結(jié)合并形成復(fù)雜的轉(zhuǎn)錄的輔助蛋白質(zhì)按特定的順序結(jié)合在啟動(dòng)子上，RNA PIC，以保證有效的起始轉(zhuǎn)錄。起始前復(fù)合物鏈上第一個(gè)核苷酸鍵的產(chǎn)生。轉(zhuǎn)錄起始、起始轉(zhuǎn)錄：不需要引物。轉(zhuǎn)錄的起始就是 RNA3 聚合酶一直處于啟動(dòng)子區(qū)，此時(shí) RNA 后直到形成 9 個(gè)核苷酸短鏈的過(guò)程是通過(guò)啟動(dòng)子階段，鏈上掉下來(lái)并導(dǎo)致轉(zhuǎn)錄重新開(kāi)模版鏈的結(jié)合不夠牢固，很容易從 dnaRN 鏈與DNA 新生的個(gè)以上核苷酸并離開(kāi)啟動(dòng)子區(qū)，轉(zhuǎn)錄就進(jìn)入正常的延聚合酶成功的合成了 9 始。一旦 RNA 伸階段。一般來(lái)說(shuō)，通過(guò)啟動(dòng)子的時(shí)間越短，該基因轉(zhuǎn)錄起始的頻率也越高。

16、鏈移動(dòng)并使新因子離開(kāi)啟動(dòng)子后，核心酶沿模版 DNARNA 聚合酶釋放 4、轉(zhuǎn)錄的延伸： RNA 鏈不斷延長(zhǎng)的過(guò)程就是轉(zhuǎn)錄的延伸。生聚合酶不在形成新的磷酸二酯鍵，RNARNA 轉(zhuǎn)錄的終止：當(dāng)鏈延伸到轉(zhuǎn)錄終止位點(diǎn)時(shí)，5、雜合物分離，轉(zhuǎn)錄泡瓦解，DNA 恢復(fù)成雙鏈狀態(tài)，而 RNA 聚合酶和 RNA-DNARNA 鏈都被從模版上釋放出來(lái)，這就是轉(zhuǎn)錄的終止。 第二節(jié) 轉(zhuǎn)錄機(jī)器主要成分 1、RNA 聚合酶： 在細(xì)菌中，一種 RNA 聚合酶幾乎負(fù)責(zé)所有的 mRNA 聚合酶：、rRNA、tRNA 原核生物RNA1的合成。大多數(shù)原核生物的 RNA 聚合酶的組成是相同的，大腸桿菌 RNA 聚合酶首先由2亞基和一個(gè)

17、 亞基組成的核心酶，加上一個(gè) 亞基、一個(gè) 亞基后則成亞基、一個(gè)個(gè) 為聚合酶全酶。轉(zhuǎn)錄的起始過(guò)程需要全酶，由 因子辨認(rèn)起始點(diǎn)，延長(zhǎng)過(guò)程僅需要核心酶的催化。 大腸桿菌 RNA 聚合酶的組成分析 亞基 相對(duì)分子質(zhì)量 亞基數(shù) 組分 功能 43.65x10 2 核心酶核心酶組裝，啟動(dòng)子識(shí)別 51.51x10 1 核心酶 共同組成 RNA 合成的活性中心和 51.55x10 1 核心酶 411x10 1 核心酶 47.0 x10 1 因子 存在多種 因子，用于識(shí)別不同的啟動(dòng)子 聚合酶：真核生物的 RNA2 酶 細(xì)胞內(nèi)定位 轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物 相對(duì)活性 鵝膏堿的敏感程度對(duì) -RNA 聚合酶 核仁 rRNA 70% 5

18、0%不敏感 RNA 聚合酶 核質(zhì) hn RNA 40% 20%敏感 聚合酶RNA 核質(zhì)t RNA 10% 約 存在物種特異性聚合酶全酶對(duì)啟動(dòng)子的識(shí)別，聚合酶與啟動(dòng)子 RNA2、轉(zhuǎn)錄復(fù)合物：模版的識(shí)別階段包括序列中有一小段雙鏈被解開(kāi)。對(duì)強(qiáng) DNA 可逆性結(jié)合形成封閉復(fù)合物，聚合酶全酶所結(jié)合的開(kāi)放復(fù)合物與最初是快反應(yīng)。啟動(dòng)子來(lái)說(shuō)，從封閉復(fù)合物到開(kāi)放復(fù)合物的轉(zhuǎn)變是不可逆的，DNA 聚合酶、NTP 相結(jié)合并在兩個(gè)核苷酸之間形成磷酸二酯鍵后即轉(zhuǎn)變成包括 RNA 的兩個(gè) 的三元復(fù)合物。和新生 RNA 啟動(dòng)子與轉(zhuǎn)錄起始 第三節(jié) 、啟動(dòng)子區(qū)的基本結(jié)構(gòu)：1聚合酶，使之與模版 DNA 序列，能活化 RNA 啟動(dòng)子

19、：是一段位于結(jié)構(gòu)基因 5端上游的1鏈準(zhǔn)確的結(jié)合并具有轉(zhuǎn)錄起始的特異性。因?yàn)榛虻奶禺愋赞D(zhuǎn)錄取決于酶與啟動(dòng)子能 DNA 聚合酶的親和力，從而影響了基 RNA 否有效的形成二元復(fù)合物。啟動(dòng)子的結(jié)構(gòu)影響了它與 因的表達(dá)水平。10bp 其中央大約位于起點(diǎn)上游個(gè)核苷酸 TATTAPribnow區(qū)：組成的保守序列，是一個(gè)由 53 區(qū)。處，所以又稱(chēng)-10TTGACA -35 區(qū)域也有一段保守序列，共同序列是-35 區(qū)：在轉(zhuǎn)錄開(kāi)始位點(diǎn)上游4因子 RNA 聚合酶與啟動(dòng)子的結(jié)合位點(diǎn)，能與-35 位的 TTGACA 區(qū)是區(qū)和-10 位的 TATA 相互識(shí)別而具有很高的親和力。聚合酶并不直接識(shí)別堿基對(duì)本身，而是通過(guò)氫

20、鍵互補(bǔ)的方式加以識(shí) RNA2、啟動(dòng)子的識(shí)別： 別。相結(jié)合，形聚合酶首先與啟動(dòng)子區(qū)閉合雙鏈 DNA、RNA 聚合酶與啟動(dòng)子區(qū)的結(jié)合：RNA3 酶分子能以正確然后經(jīng)過(guò)解鏈得到二元開(kāi)鏈復(fù)合物。一旦開(kāi)鏈區(qū)解鏈，成二元閉合復(fù)合物， 的取向與解鏈后的有關(guān)單鏈相互作用，形成開(kāi)鏈復(fù)合物。 ，區(qū)之間的距離大約是 1619bp-35 區(qū)與-10、4-10 區(qū)與-35區(qū)的最佳間距：在原核生物中， 20bp 都會(huì)降低啟動(dòng)子活性。小于 15bp 或大于 5 可位于轉(zhuǎn)錄起始點(diǎn)的增強(qiáng)子是 DNA 上能提高轉(zhuǎn)錄起始效率的序列，5、增強(qiáng)子及其功能： 端，而且一般與所調(diào)控的靶基因的距離無(wú)關(guān)，其特點(diǎn)如下：或 310kb 遠(yuǎn)距離效應(yīng)

21、：一般位于上游-200bp 處，但可增強(qiáng)遠(yuǎn)處啟動(dòng)子的轉(zhuǎn)錄，即使相距大于1 也能發(fā)揮作用。無(wú)方向性：無(wú)論位于靶基因的上游還是位于靶基因的下游或內(nèi)部都可發(fā)揮增強(qiáng)轉(zhuǎn)錄的作2 用。 順式調(diào)節(jié)：只調(diào)節(jié)位于同一染色體上的靶基因，而對(duì)其他染色體上的基因沒(méi)有作用。3 無(wú)物種和基因的特異性：可以連接到異源基因上發(fā)揮作用。4 具有組織特異性：增強(qiáng)子的作用需要特定的蛋白質(zhì)因子參與。5 的構(gòu)象有關(guān)。有相位性：其作用和 DNA6 有的增強(qiáng)子可以對(duì)外部信號(hào)產(chǎn)生反應(yīng)。7結(jié)合而改變模版 DNA、轉(zhuǎn)錄的抑制：分為兩類(lèi)：第一類(lèi)是 DNA 模版功能抑制劑，通過(guò)與 6 聚合酶結(jié)合而抑制其活力。RNA 聚合酶的抑制物，它們與 RNA

22、的功能；第二類(lèi)是 第四節(jié) 原核與真核生物 mRNA 的特征比較 1、原核生物 mRNA 的特征： 半衰期短1 多以多順?lè)醋拥男问酱嬖? A 端也沒(méi)有多聚尾巴或者很短 35 端沒(méi)有帽子結(jié)構(gòu)，3 的特征 mRNA、真核生物 2 5端有帽子結(jié)構(gòu)1 絕大多數(shù) 3端有 poly A 尾巴2聚合酶進(jìn)行轉(zhuǎn)錄，真核基因幾乎都是單順?lè)醋臃彩蔷幋a功能的真核基因都能通過(guò) RNA3 ，只包含一個(gè)蛋白質(zhì)信息。mRNA 終止和抗終止第五節(jié) 因子的終止：（1）依賴(lài)于 RNA 的水解促使新生 因子能水解各種核苷三磷酸，實(shí)際是一種 NTP 酶，通過(guò)催化 NTP 鏈從三元轉(zhuǎn)錄復(fù)合物中解離出來(lái)，從而終止轉(zhuǎn)錄。 因子的終止：（2）不

23、依賴(lài)于 終止終止子，模板上存在終止轉(zhuǎn)錄信號(hào)每個(gè)基因或操縱子都有一個(gè)啟動(dòng)子和一個(gè)終止子。容易形堿基的二重對(duì)稱(chēng)區(qū)，由這段 DNA 轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的 RNA 位點(diǎn)上游一般存在一個(gè)富含 GC，3端為寡聚 U 因此轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的成發(fā)卡式結(jié)構(gòu)。在終止位點(diǎn)前面有一段 4-8 個(gè) A 組成的序列， 這種結(jié)構(gòu)特征的存在決定了轉(zhuǎn)錄的終止 的莖-環(huán)結(jié)構(gòu)的抗終止和依賴(lài)于蛋白質(zhì)因子的轉(zhuǎn)錄終止。 （3）抗終止：破壞終止位點(diǎn)的 RNA 從 mRNA 到蛋白質(zhì)第四章 生物信息的傳遞 個(gè)核苷酸代表一按 3mRNA1、翻譯是指將鏈上的核苷酸序列從一個(gè)特定的起始位點(diǎn)開(kāi)始， 個(gè)氨基酸的原則，依次合成一條多肽鏈的過(guò)程。 三聯(lián)子-第一節(jié) 遺傳密碼

24、 1、遺傳密碼的性質(zhì)： 密碼的連續(xù)性：一個(gè)密碼子接一個(gè)密碼子連續(xù)的閱讀直至終止密碼1密碼的簡(jiǎn)并性：由一種以上密碼子編碼同一種氨基酸的現(xiàn)象稱(chēng)為簡(jiǎn)并，對(duì)應(yīng)于同一氨基酸2 的密碼子稱(chēng)為同義密碼子。密碼的通用性和特殊性：遺傳密碼無(wú)論在體內(nèi)還是在體外，也無(wú)論是對(duì)病毒、細(xì)菌、動(dòng)物3 被用來(lái)編碼色氨酸。還是植物而言都是通用的。特殊性，支原體中終止密碼子 UGA的反密碼子在核糖體內(nèi)密碼子與反密碼子的相互作用：在蛋白質(zhì)生物合成過(guò)程中，tRNA4在密碼子與反密碼子配對(duì)過(guò)程中，上的密碼子相互作用的。是通過(guò)堿基的反向配對(duì)與 mRNAtRNA，因而使某些“第三對(duì)堿基有一定的自由度，可以擺動(dòng)”前兩對(duì)嚴(yán)格遵守堿基配對(duì)原則，

25、 1 個(gè)以上的密碼子?？梢宰R(shí)別 第二節(jié) tRNA 1、tRNA 在蛋白質(zhì)合成過(guò)程中處于關(guān)鍵地位，它不但為每個(gè)三聯(lián)密碼子翻譯成氨基酸提供了接合體，還為準(zhǔn)確無(wú)誤的將所需的氨基酸運(yùn)送到核糖體上提供了運(yùn)送載體，所以，它又被稱(chēng)為 第二遺傳密碼。 的結(jié)構(gòu)：tRNA、2 端，7 個(gè)堿基長(zhǎng)的臂，其中包含 5受體臂（accept stem，也被稱(chēng)作 amino acid stem）是一個(gè)所 3端。受體臂有可能含有非 Watson-Crick3端羥基（OH） （能結(jié)合氨基酸于其上）的與有序列，在翻譯時(shí)，幫助酶識(shí)端的 CCACCA tail）是 tRNA 分子 3尾（發(fā)現(xiàn)的堿基對(duì)。.CCA tRNA。別個(gè)堿基的臂，

26、通常含有二氫尿嘧啶）的端部 4D arm）是在一個(gè)環(huán)（D loopD 臂（ ） 。（dihydrouridine 包括一 tRNA 個(gè)堿基，包括反密碼子（anticodon） 。每一 5 反密碼子臂（anticodon arm）有）lysine 個(gè)特異的三聯(lián)反密碼子序列，能夠與氨基酸的一個(gè)或者多個(gè)密碼子匹配。例如賴(lài)氨酸（一些反密碼子可以與多于一 UUUAAA，相應(yīng)的 tRNA 的反密碼子可能是的密碼子之一是 。擺動(dòng)” ）個(gè)的密碼子匹配被稱(chēng)為“ 個(gè)堿基的莖，包括序列 5TC。T 臂（T arm）是 的功能：運(yùn)輸?shù)墓ぞ咿D(zhuǎn)運(yùn)氨基酸；解讀 mRNA 的信息。3、tRNA 、tRNA 種類(lèi)：4其 tRN

27、A，能特異性的識(shí)別 mRNA 模板上起始密碼子的 tRNA 起始 tRNA 和延伸 tRNA：叫1tRNA 他的統(tǒng)稱(chēng)為延伸tRNA tRNA：代表同一種氨基酸的 tRNA 叫同工同工2 校正 tRNA：分為無(wú)義突變和錯(cuò)義突變校正。3結(jié)合的特異性酶，由它決定氨基酸能否 tRNA 合成酶：是一類(lèi)催化氨基酸與 tRNA、氨酰 5 結(jié)合，既能識(shí)別 tRNA，又能識(shí)別氨基酸，對(duì)兩者都具有高度的專(zhuān)一性。與對(duì)應(yīng)的 tRNAAA+tRNA+ATP 催化反應(yīng)：AA-tRNA+AMP+PPi 第三節(jié) 核糖體 1、核糖體的結(jié)構(gòu)： 和許多不同 tRNA 核糖體由大小兩個(gè)亞基組成。每個(gè)亞基都含有一個(gè)相對(duì)分子質(zhì)量較大的1

28、的蛋白質(zhì)分子。 核糖體蛋白。核糖體上有多個(gè)活性中心，每個(gè)中心都由一組特殊的核糖體蛋白質(zhì)構(gòu)成，形2成一個(gè)多種酶的結(jié)合體，單個(gè)酶或蛋白質(zhì)只有在這個(gè)總體結(jié)構(gòu)上才擁有催化性質(zhì)，他們共同承擔(dān)了蛋白質(zhì)生物合成的任務(wù)。 。RNA 核糖體3 、核糖體的功能：2 ；合成的場(chǎng)所，選擇對(duì)信息專(zhuān)一的 AA-tRNA-tRNA ，既肽基同時(shí)容納另一種攜帶肽鏈的tRNA: 核糖體包括至少五個(gè)活性中心的部位、肽基轉(zhuǎn)移部-tRNA 結(jié)合部位、結(jié)合或接受 AA-tRNA 部位、結(jié)合或接受肽基 mRNA 位及形成肽鍵的部位。 第四節(jié) 蛋白質(zhì)合成的生物學(xué)基質(zhì) 1、氨基酸的活化：氨基酸必須在氨酰-tRNA 合成酶的作用下生成活化氨基

29、酸-AA-tRNA 2、翻譯的起始： 原核生物翻譯的起始：1fMet、三個(gè)翻譯起始因子 IF-1fMet-tRNA 、IF-2、 、需要的 7 種成分：30S 小亞基、模版 mRNA2+ 大亞基、Mg、GTP、50SIF-3 第一步：30S 小亞基首先與翻譯起始因子 IF-1、IF-3 結(jié)合，通過(guò) SD 序列與 mRNA 模版結(jié)合； fMet進(jìn)入小亞基的 P 位 tRNA 上的反密碼子與在第二步：IF-2 和 GTP 的幫助下，fMet-tRNA mRNA 上的起始密碼子配對(duì)； 第三步：帶有 tRNA、mRNA 三個(gè)翻譯起始因子的小亞基復(fù)合物與 50S 大亞基結(jié)合，GTP 水解，釋放翻譯起始因

30、子。 3、肽鏈的終止： 肽鏈延伸過(guò)程中，當(dāng)終止密碼子 UAA、UAG、UGA 出現(xiàn)在核糖體的 A 位時(shí)，沒(méi)有相應(yīng)的 AA-tRNA 能與其結(jié)合，而釋放因子能識(shí)別這些密碼子并與之接合，水解 P 位上的多肽鏈與 tRNA之間的二酯鍵，然后，新生成的肽鏈和 tRNA 從核糖體上釋放，核糖體大小亞基解體，蛋白質(zhì)合成結(jié)束。 4、蛋白質(zhì)前體的加工：新生的多肽鏈大多是沒(méi)有功能的，必須經(jīng)過(guò)加工修飾才能轉(zhuǎn)變?yōu)橛谢钚缘牡鞍踪|(zhì)：N 端 fMet 或 Met 的切除、二硫鍵的形成、特定氨基酸的修飾、切除新生肽鏈中的非功能片段 5、蛋白質(zhì)的折疊：新生肽鏈在細(xì)胞內(nèi)的特定部位，在多種蛋白質(zhì)的幫助下卷曲成正確構(gòu)象，大多數(shù)蛋白

31、質(zhì)的折疊是邊翻轉(zhuǎn)邊折疊的。至少兩類(lèi)因子參與了折疊過(guò)程：酶、分子伴侶。 6、蛋白質(zhì)合成抑制劑：主要是一些抗生素，如嘌呤霉素、鏈霉素、四環(huán)素、氯霉素、紅霉素?？股貙?duì)蛋白質(zhì)合成的作用可能是阻止 mRNA 與核糖體結(jié)合(氯霉素)或阻止 AA-tRNA 與核糖體結(jié)合（四環(huán)素）或干擾 AA-tRNA 與核糖體結(jié)合而產(chǎn)生錯(cuò)讀（鏈霉素） 。 專(zhuān)題七、雙向電泳與質(zhì)譜檢測(cè) SDS-掌握雙向電泳中等電聚焦電泳和聚丙烯酰胺凝膠電泳的原理； 掌握雙向電泳的步驟； 掌握質(zhì)譜分析的基本原理； 掌握質(zhì)譜儀的基本結(jié)構(gòu)； 掌握質(zhì)譜技術(shù)在蛋白質(zhì)研究中的應(yīng)用領(lǐng)域； 了解蛋白質(zhì)電泳凝膠染色的方法； 了解雙向電泳的應(yīng)用及優(yōu)缺點(diǎn)。 3、

32、雙向電泳聚丙烯酰胺凝膠電泳 2、等電聚焦蛋白質(zhì)電泳技術(shù)：1、SDS- SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳 1、通過(guò)附加電場(chǎng)使 利用聚丙烯酰胺形成的凝膠對(duì)大分子生物物質(zhì)（如核酸、蛋白質(zhì)） 分子不同的按照分子量大小在凝膠中得到分離。 變性電泳和非變性電泳變性電泳和非變性電泳蛋白質(zhì)的聚丙烯凝膠電泳類(lèi)型： 按蛋白質(zhì)變性與否分為 2、 。 、蛋白質(zhì)變性：打開(kāi)二硫鍵，蛋白質(zhì)失去生物活性，故稱(chēng)變性（denature）3）保分鐘。為避免復(fù)性常使用 -巰基乙醇或二硫蘇糖醇（954、變性的方法：DTT加熱 5 護(hù)自由的半胱氨酸巰基。SDS-PAGE 5、變性電泳的方法：十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳， 原理：蛋白質(zhì)在

33、SDS 凝膠電場(chǎng)中的運(yùn)動(dòng)速度和距離完全取決于其分子量。分子量。 、6SDS-PAGE 7、SDS-PAGE 操作程序：濃縮膠、樣品上樣、電泳、凝膠染色、脫色、電泳結(jié)蛋白質(zhì)樣品制備、凝膠制備：分離膠 果分析 ，Tris-HCl 緩沖系統(tǒng)，濃縮膠是 pH6.8SDS-PAGE 凝膠的工作原理：制膠緩沖液使用的是 Tris-甘氨酸甘氨酸緩沖系統(tǒng)。分離膠 pH8.8；而電泳緩沖液使用卻很高，兩者之間 pH 呈弱酸性，甘氨酸解離很少，在電場(chǎng)中泳動(dòng)效率低；而 Cl-濃縮膠中，這由于導(dǎo)電性與電場(chǎng)強(qiáng)度成反比，形成導(dǎo)電性較低的區(qū)帶，蛋白分子就介于二者之間泳動(dòng)。 一區(qū)帶便形成了較高的電壓梯度，壓著蛋白質(zhì)分子聚集到

34、一起，濃縮為一狹窄的區(qū)帶。增加，呈堿性，甘氨酸大量解離，泳動(dòng)速率增加，直接緊隨氯離子 pH 進(jìn)入分離膠后，膠中蛋白分子根據(jù)其固有的帶電性和分子在電場(chǎng)的作用下，之后，同時(shí)由于分離膠孔徑的縮小， 大小進(jìn)行分離。 電泳凝膠染色：考馬斯亮藍(lán)染色、銀染 SDS-PAGE 、等電聚焦、等電聚焦 2 由于其分辨率 pH 梯度的介質(zhì)分離等電點(diǎn)不同的蛋白質(zhì)的電泳技術(shù)。 是利用有 0.01pH 單位，因此特別適合于分離分子量相近而等電點(diǎn)不同的蛋白質(zhì)組分。可到達(dá) 研究蛋白質(zhì)微觀不均一性適用: 1. 2.測(cè)定蛋白質(zhì)等電點(diǎn) pH 梯度構(gòu)建：固相 pH 梯度(IPG)：將緩沖基團(tuán)共價(jià)鍵合在介質(zhì)上成為凝膠介質(zhì)的一部分而建立

35、pH 梯度（線性和非線性） ，分辨率比前者高一個(gè)數(shù)量級(jí)。 ）應(yīng)具備的條件 CA 載體兩性電解質(zhì)（ 在等電點(diǎn)處必需有足夠的緩沖能力 在等電點(diǎn)必需有足夠高的電導(dǎo) 分子量要小，便于與被分離的高分子物質(zhì)用透析或凝膠過(guò)濾法分開(kāi)。 化學(xué)組成應(yīng)不同于被分離物質(zhì)，不干擾測(cè)定。 應(yīng)不與分離物質(zhì)反應(yīng)或使之變性。 、雙向電泳 3 蛋白質(zhì)組學(xué)包括闡明各種生物基因組在細(xì)胞中表達(dá)的全部蛋白質(zhì)的表達(dá)模式及功能模式的學(xué)科。 、結(jié)構(gòu)、功能和相互作用等。鑒定蛋白質(zhì)的表達(dá)、存在方式(修飾形式) ）和基因組）和基因組（genome）研究在形式和內(nèi)容兩方面的組合是蛋白質(zhì)（蛋白質(zhì)（protein 蛋白質(zhì)組學(xué)關(guān)鍵技術(shù)關(guān)鍵技術(shù)的進(jìn) 由于蛋白

36、質(zhì)分離（雙向電泳和高效液相層析技術(shù)）和鑒定技術(shù)（現(xiàn)蛋白質(zhì)分離（雙向電泳和高效液相層析技術(shù)）和鑒定技術(shù)（現(xiàn)代質(zhì)譜）代質(zhì)譜） 步，以及基因組學(xué)和生物信息學(xué)的交叉滲透，蛋白質(zhì)組學(xué)研究已經(jīng)獲得了長(zhǎng)足的發(fā)展。 雙向電泳技術(shù)：）雙向電泳技聚丙烯酰胺凝膠（SDS-PAGE（等電聚焦（Isoelectric focusing，IEF）及 SDS- 術(shù)。 ） ， （按照分子大小）pI 分離） ，然后再進(jìn)行再進(jìn)行 SDS-PAGE 即先進(jìn)行等電聚焦電泳（按照 經(jīng)染色得到的電泳圖是個(gè)二維分布的蛋白質(zhì)圖。 雙向電泳的實(shí)驗(yàn)流程：樣品制備、蛋白質(zhì)定量、上樣、第一向等電聚焦電泳、膠條的平衡、 、生物信息學(xué)分析第二向 SDS

37、-PAGE 電泳、蛋白質(zhì)點(diǎn)檢測(cè)（染色） ）和數(shù)據(jù)，PMF 肽質(zhì)譜指紋圖肽質(zhì)譜指紋圖（peptide mass fingerprinting 鑒定和注釋蛋白質(zhì)的路線 ：通過(guò) 庫(kù)搜尋匹配 雙向電泳技術(shù)的優(yōu)缺點(diǎn)： 優(yōu)點(diǎn)： 可以從復(fù)雜蛋白質(zhì)得到單一蛋白質(zhì) 可以觀察到同一蛋白質(zhì)的異構(gòu)體和不同的修飾 和質(zhì)譜技術(shù)兼容 分辨率較高 信息化程度高 缺點(diǎn)：低拷貝蛋白、過(guò)大過(guò)小蛋白、極酸極堿蛋白、疏水性膜蛋白等檢測(cè)苦難；穩(wěn)定性差。 分離復(fù)雜組分蛋白質(zhì)、蛋白質(zhì)表達(dá)譜研究、差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究:雙向電泳技術(shù)的應(yīng)用 生物質(zhì)譜技術(shù) 質(zhì)譜的基本原理：質(zhì)譜分析法是通過(guò)對(duì)被測(cè)樣品離子的質(zhì)荷比的測(cè)定來(lái)進(jìn)行分析的一種方法。 被分析的樣

38、品首先要離子化離子化，然后利用不同離子在電場(chǎng)或磁場(chǎng)的運(yùn)動(dòng)行為的不同，把，通過(guò)樣品的質(zhì)量圖譜和相關(guān)信息，可以得到樣質(zhì)量圖譜質(zhì)量圖譜）分開(kāi)而得到 m/z（質(zhì)荷比質(zhì)荷比離子按品的定性定量結(jié)果。 質(zhì)譜儀是一個(gè)用來(lái)測(cè)量單個(gè)分子質(zhì)量的儀器，實(shí)際上質(zhì)譜儀提供的是分子的質(zhì)量與電荷比實(shí)際上質(zhì)譜儀提供的是分子的質(zhì)量與電荷比(m/z or m/e). 生物質(zhì)譜:不僅可以測(cè)定生物大分子的質(zhì)量生物大分子的質(zhì)量，還可以解析其分子結(jié)構(gòu)、修飾位點(diǎn)和修飾類(lèi)型分子結(jié)構(gòu)、修飾位點(diǎn)和修飾類(lèi)型等屬性，是蛋白質(zhì)組學(xué)研究最有力和最重要的工具之一。 質(zhì)譜儀的基本結(jié)構(gòu)：進(jìn)樣系統(tǒng)、離子源、質(zhì)量分析器、離子檢測(cè)器、串聯(lián)質(zhì)譜 三、常見(jiàn)生物質(zhì)譜離子源

39、：基質(zhì)輔助的激光解析質(zhì)譜（MALDI） 、電噴霧質(zhì)譜（ESI-MS） MALDI-TOF 的工作原理：將蛋白質(zhì)酶解成小肽段后與基質(zhì)（主要是有機(jī)酸）混合，將樣品混合物點(diǎn)到金屬靶表面上并使之干燥結(jié)晶，然后用激光轟擊，將呈離子化氣體狀態(tài)的待分析物從靶表面噴射出去。離子化氣體肽段在電場(chǎng)中被加速后到達(dá)檢測(cè)器的時(shí)間由肽段的質(zhì)量和其所帶電荷數(shù)的比值（m/z）決定。 四、與生物質(zhì)譜聯(lián)用的分離技術(shù) 氣相色譜/質(zhì)譜聯(lián)用 高效液相色譜/質(zhì)譜聯(lián)用 毛細(xì)管電泳/質(zhì)譜聯(lián)用 五、質(zhì)譜在蛋白質(zhì)組學(xué)中的應(yīng)用 蛋白質(zhì)鑒定 蛋白質(zhì)突變的檢測(cè)與鑒定 驗(yàn)證重組蛋白或重組肽的結(jié)構(gòu)和純度 翻譯后修飾的檢測(cè) 1、蛋白質(zhì)鑒定的路線 :I、通過(guò)

40、肽質(zhì)量指紋圖（peptide mass fingerprinting，PMF）和數(shù)據(jù)庫(kù)搜尋匹配 。II、通過(guò)測(cè)出樣品中部分肽段部分肽段二級(jí)質(zhì)譜信息或氨基酸序列標(biāo)簽和數(shù)據(jù)庫(kù)搜尋匹配。 2 肽指紋圖譜（PMF）鑒定:原理就是利用了蛋白序列數(shù)據(jù)庫(kù)中的多肽質(zhì)量的信息與實(shí)際測(cè)得的質(zhì)量信息進(jìn)行對(duì)比而實(shí)現(xiàn)鑒定。 PMF 鑒定的優(yōu)點(diǎn)與缺點(diǎn) 優(yōu)點(diǎn)： 是用一級(jí)質(zhì)譜鑒定蛋白質(zhì)的經(jīng)典方法，算法簡(jiǎn)單，速度快 缺點(diǎn)： 質(zhì)量相近的多肽增加匹配難度 無(wú)法實(shí)現(xiàn)混合蛋白的鑒定 二級(jí)質(zhì)譜鑒定質(zhì)譜儀選擇一級(jí)質(zhì)譜中的一個(gè)峰一級(jí)質(zhì)譜中的一個(gè)峰，讓這些峰所代表的離子高速撞擊質(zhì)譜儀中的惰性氣體，使其肽鍵斷裂，并對(duì)庫(kù)搜索鑒定蛋白質(zhì)。 優(yōu)點(diǎn)：

41、鑒定準(zhǔn)確度更高，可以得到蛋白的序列 可以實(shí)現(xiàn)多個(gè)蛋白的鑒定 缺點(diǎn)： 增加了一步操作 算法更復(fù)雜，而且需要更多的操作經(jīng)驗(yàn) 翻譯后修飾的檢測(cè)：糖基化修飾、磷酸化修飾 練習(xí)題 ）進(jìn)行分離。 C 在雙向電泳技術(shù)中，SDS-PAGE 電泳是按照蛋白質(zhì)的（ 結(jié)構(gòu)類(lèi)型 D. C. 分子量 A. 等電點(diǎn) B. 電荷數(shù) Y 。雙向電泳研究時(shí)，先進(jìn)行等電聚焦，再進(jìn)行 SDS-PAGE Y 雙向電泳可用于差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究。 Y 雙向電泳研究時(shí)，蛋白樣品制備時(shí)要盡量避免蛋白質(zhì)的降解。 Y 對(duì)于雙向電泳所得到的差異蛋白點(diǎn)，需要利用質(zhì)譜技術(shù)進(jìn)行鑒定。 Y 生物質(zhì)譜既可以測(cè)定生物大分子的質(zhì)量，還可以解析其分子結(jié)構(gòu)。 A）

42、下列哪個(gè)不是質(zhì)譜儀的基本結(jié)構(gòu)成分？ （ 離子檢測(cè)器 D. B. 離子源 C. 質(zhì)量分析器生物傳感器 A. Y 質(zhì)譜用于蛋白質(zhì)鑒定時(shí)，一般先通過(guò)肽質(zhì)量指紋圖，如果得不到結(jié)果再利用二級(jí)質(zhì)譜。 Y 質(zhì)譜技術(shù)可用于驗(yàn)證重組蛋白或重組肽的結(jié)構(gòu)和純度。 Y 質(zhì)譜技術(shù)可用于檢測(cè)蛋白質(zhì)突變。 專(zhuān)題八、基因功能研究方法 掌握定點(diǎn)突變技術(shù)的定義和方法； 掌握基因敲除的定義； 掌握哺乳動(dòng)物基因敲除的步驟； 掌握 RNA 干擾的定義； 了解 RNA 干擾的原理和研究方法。 了解什么是基因過(guò)量表達(dá)？ (site-directed mutagenesis) 一、基因定點(diǎn)突變 通過(guò)改變基因特定位點(diǎn)核苷酸序列來(lái)改變所編碼的氨基酸序列，用于研究某個(gè)（些）氨基酸殘基對(duì)蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)、催化活性以及結(jié)合配體能力的影響，也可用于改造 DNA 調(diào)控元件特征序列、修飾表達(dá)載體、引入新的酶切位點(diǎn)等。 主要采用兩種 PCR 方法，重疊延伸技術(shù)重疊延伸技術(shù) (gene splicing by overlap extension PCR) 和大引物誘變大引物