獸醫(yī)微生物學(xué)實驗

1、獸醫(yī)微生物學(xué)實驗獸醫(yī)微生物學(xué)實驗實驗一 顯微鏡的構(gòu)造和使用及細(xì)菌形態(tài)結(jié)構(gòu)的觀察進(jìn)入實驗室的注意事項1。穿工作服2。書本等物品放入抽屜3。樹立無菌觀念4。不能抽煙、吃零食5。愛護(hù)公物，注意節(jié)約一、目的要求1。了解顯微鏡的簡單構(gòu)造和原理2。學(xué)習(xí)掌握油鏡的使用技術(shù)3。觀察細(xì)菌的基本形態(tài)二、普通光學(xué)顯微鏡的簡單原理1。支持部分：鏡臂、鏡臺、鏡筒、粗細(xì)調(diào)節(jié)器2。放大部分：接目鏡、接物鏡3。照明部分：反光鏡、聚光器、濾光鏡三、幾種顯微鏡的簡單原理 1。暗視野 2。相差 3。熒光 4。電子四、油鏡的識別及使用原理五、使用完畢顯微鏡及標(biāo)本片的處理作 業(yè)1。普通顯微鏡與油鏡使用上有何區(qū)別？2。繪出你所觀察到的細(xì)

2、菌形態(tài)3。你最喜歡哪個細(xì)菌，為什么？枯草桿菌，革蘭氏染色，g+枯草桿菌，芽胞簡易染色金黃色葡萄球菌，革蘭氏染色， g+大腸桿菌，革蘭氏染色,g-破傷風(fēng)梭菌，芽胞染色實驗二實驗二 細(xì)菌的抹片制備及染色細(xì)菌的抹片制備及染色一、目的要求1。掌握細(xì)菌抹片的制備方法2。掌握幾種常用的染色方法和技術(shù)及無菌操作技術(shù)3。鞏固顯微鏡的使用，了解細(xì)菌的染色特性、形態(tài)二、材料大腸桿菌：斜面，肉湯金黃色葡萄球菌：斜面，肉湯枯草桿菌：斜面三、制片及染色步驟取干凈玻片-抹片-干燥-固定-染色-干燥鏡檢四、常用的幾種染色方法（一）革蘭氏染色法1。草酸銨結(jié)晶紫染色1-2，水洗2。革蘭氏碘液媒染1-2，水洗3。95%酒精脫色約

3、30-1，水洗4。沙黃水溶液復(fù)染10 -30 ，水洗5。吸干，鏡檢（二）姬姆薩染色法1。甲醇固定3 ，時間長短均可2。姬姆薩液足量30 或數(shù)小時至24h，水洗3。吸干鏡檢（三）瑞氏染色法抹片干燥無需固定，直接滴加染色1-3 ，再加等量中性蒸餾水，輕輕混勻，續(xù)染15 ，水洗，吸干鏡檢（四）美蘭染色法1。固定好抹片加上足量染液2-3 2。吸干鏡檢作業(yè)1。說說你的實驗結(jié)果2。根據(jù)實驗體會，你認(rèn)為制備染色標(biāo)本時應(yīng)注意哪些事項？3。作革蘭氏染色涂片為什么不能過于濃厚？其染色成敗關(guān)鍵一步是什么？實驗三 培養(yǎng)基的制備一、目的要求1。掌握基礎(chǔ)培養(yǎng)基制備的原則和要求2。掌握一般培養(yǎng)基的制備過程及ph測定二、實驗

4、材料（略）三、制作的一般要求 須含有細(xì)菌生長所需的營養(yǎng)物質(zhì) 盛器需無菌，且不含抑菌生長的物質(zhì) ph應(yīng)符合細(xì)菌生長的要求，一般在7.27.6 要過濾，應(yīng)為透明或半透明狀，以便觀察細(xì)菌生長變化 制好后需高壓滅菌四、步驟稱取 溶解調(diào)ph 過濾分 滅菌菌檢 普通肉湯的制備 蛋白胨 10g，牛肉膏 5g，nacl 5g k2hpo4 1g，蒸餾水 1000ml 分別稱取以上物品，置鋁鍋內(nèi)加熱溶解。取5ml肉湯于試管內(nèi)用0.1mol/l naoh校ph至7.4-7.6，根據(jù)其用量計算所配培養(yǎng)基需用的1mol/l naoh用量，用濾紙過濾，分裝至短試管所需1n naoh的量 培養(yǎng)基量 校正時所需0.1mol

5、/l naoh量 5 10 普通瓊脂培養(yǎng)基的制備 取已配好的肉湯500 ml于鋁鍋內(nèi)，加入瓊脂10g，加熱溶解，用紗布、棉花過濾、分裝 滅菌：將分裝好的培養(yǎng)基扎口后置高壓滅菌鍋內(nèi)121（15磅）20-30分鐘 菌檢：抽取樣品，置37 24h作 業(yè) 制作培養(yǎng)基時應(yīng)注意哪幾點？ 為什么肉湯培養(yǎng)基在高壓滅菌前ph要略調(diào)高一些？ 為什么校正ph時，調(diào)校少量培養(yǎng)基用0.1 mol/l naoh，而調(diào)校大量培養(yǎng)基時用1 mol/l naoh？ 說說你們組的產(chǎn)量和品質(zhì)實驗四 細(xì)菌分離培養(yǎng)及移植一、目的1. 掌握細(xì)菌分離培養(yǎng)的基本要領(lǐng)和常用方法2. 使被檢材料適當(dāng)稀釋，以求獲得獨立單在菌落二、需氧分離培養(yǎng)法1

6、. 平板分離培養(yǎng)法2. 芽胞需氧分離培養(yǎng)法3. 化學(xué)藥品分離培養(yǎng)法4. 實驗動物分離培養(yǎng)法三、實驗內(nèi)容1. 平板劃線2. 肉湯培養(yǎng)3. 斜面移植接種完畢標(biāo)明細(xì)菌、日期、姓名，置37培養(yǎng)24h四、作業(yè)1. 何謂純培養(yǎng)？分離培養(yǎng)的目的何在？2. 在挑取固體培養(yǎng)物上的細(xì)菌作平板劃線時，為什么每次都要將接種環(huán)上剩余的細(xì)菌燒掉？3. 為什么要把培養(yǎng)皿倒置培養(yǎng)？實驗五 藥敏試驗一、目的要求學(xué)會藥敏試驗的操作方法及觀察抑菌圈的范圍二、試驗材料菌種：金黃色葡萄球菌、大腸桿菌藥敏紙片：卡那霉素，阿米卡星，紅霉素，復(fù)方新諾明，呋喃妥因，慶大霉素，鏈霉素鑷子、酒精燈等三、操作步驟1. 每人取平板接種細(xì)菌，致密劃線2

7、. 以無菌鑷子將各種藥敏紙片分別是貼于培養(yǎng)基表面3. 倒置，37培養(yǎng)24h，觀察結(jié)果四、結(jié)果判定 根據(jù)藥敏紙片周圍有無抑菌圈及其大小，來判斷該菌對各種藥物的敏感程度，分為：高度敏感、中度敏感、低度敏感、不敏感五、作業(yè)1. 什么叫細(xì)菌對抗菌藥物的敏感度？了解它有何實際意義？2. 寫出你所做的藥敏試驗結(jié)果。實驗六 細(xì)菌的生化試驗一、目的要求1。了解細(xì)菌生化試驗在細(xì)菌學(xué)診斷上的重要意義2。掌握幾種生化試驗的方法二、實驗材料大腸桿菌產(chǎn)氣桿菌變形桿菌兔沙門氏菌三、實驗內(nèi)容及操作1。糖或醇發(fā)酵試驗2。靛基質(zhì)（吲哚）試驗3。甲基紅（mr）試驗4。vp二氏試驗5。枸椽酸鹽利用試驗6。硫化氫試驗7。尿素試驗8。

8、細(xì)菌運動力試驗作業(yè)1。生化反應(yīng)記錄表2。解說你所做的生化反應(yīng)各種原理3。以上生化反應(yīng)試驗?zāi)膸讉€是分解糖？哪幾個是分解蛋白質(zhì)？1. 靛基質(zhì)實驗（蛋胨水）取出試管 乙醚1ml，振蕩靜置，待分層后沿管壁加入對二甲基氨基苯甲醛45滴 陽性者在分界處出現(xiàn)玫瑰吲哚2. 葡胨水一分為二2。1 甲基紅試驗取出試管甲基紅35滴，搖勻紅色為陽性，黃色為陰性，橙色為可疑2。2 vp試驗取出試管vp甲液0.6ml，再加vp乙液0.2ml，充分混勻靜置，15分鐘后看結(jié)果，紅色為陽性，不變?yōu)殛幮詫嶒炂?病毒雞胚培養(yǎng)（一）一、目的要求掌握雞胚接種技術(shù)和收獲病毒方法二、實驗材料9-10日齡雞胚新城疫病毒滅菌注射器棉球（酒精、

9、碘酊）三、內(nèi)容及操作1。絨毛尿囊腔接種選9-10日齡雞胚，先觀察雞胚發(fā)育情況劃出氣室，離氣室邊緣5mm處作一記號消毒打孔：記號處和頂端各打一孔吸取病料，由注射孔刺入3-5mm，注射0.1-0.2ml病料撥出針頭，石蠟封閉兩孔（先下后上）蛋殼注明日期，學(xué)號以及病毒名稱置37培養(yǎng)，24h內(nèi)死亡或血管不清者棄去以后每日照蛋2次，死胚置4 保存，96h不死者將其凍死6h冷凍后可收獲尿囊液檢查實驗八 病毒雞胚培養(yǎng)（二）收獲尿囊液氣室消毒 擊破氣室、卵殼并棄去 無菌小鑷撕支殼膜再撕去絨尿膜和羊膜 無菌吸管吸取尿囊液置無菌瓶中 待檢測ha及hi試驗掌握ha和hi的基本操作技術(shù)，了解其實用價值血球凝集試驗（h

10、a）孔號123456789101112病毒稀釋度1：21：41：81：16 1：32 1：64 1：128 1：256 1：5121：1024 1：2048紅細(xì)胞對照生理鹽水（l）505050505050505050505050病毒（l）5050505050505050505050-1%雞紅細(xì)胞（l）50505050505050505050505037 1530min判定結(jié)果# # # # # # # +-棄去血球凝集抑制試驗（hi）孔號123456789101112病毒稀釋度1：21：41：81：16 1：32 1：64 1：128 1：256 1：5121：1024病毒對照血清對照生理鹽水（l）50505050505050505050-新城疫抗體(l