PCR實(shí)驗(yàn)室報(bào)批細(xì)節(jié)、注意事項(xiàng)、常見(jiàn)問(wèn)題問(wèn)答

1、時(shí)需Sr彳 報(bào)批細(xì)節(jié) 1、技術(shù)檔案： 技術(shù)人員簡(jiǎn)歷表、培訓(xùn)檔案、要求有實(shí)質(zhì)性文件如每人的學(xué)歷證書(shū)、上崗 證、科研成果（課題）、技術(shù)文章、獲獎(jiǎng)證書(shū)等的復(fù)印件 2、儀器檔案： 實(shí)驗(yàn)室所有儀器的購(gòu)買、使用、校正、放置地點(diǎn)、出廠編號(hào)、說(shuō)明書(shū)復(fù)印 件等 實(shí)驗(yàn)室所有儀器維護(hù)校正記錄如：加樣器、溫度計(jì)、溫濕度計(jì)需出具計(jì)量 局校正報(bào)告文件（可每種只校正一套作為標(biāo)準(zhǔn)）。 擴(kuò)增儀需有儀器廠家專業(yè)技術(shù)人員維護(hù)校正報(bào)告，和校正后的參數(shù)。 加樣器的出廠編號(hào)、使用時(shí)間、校正記錄。 5700維護(hù)后驗(yàn)證記錄一用同一公司或校準(zhǔn)試劑或用自制質(zhì)控血清并記錄 數(shù)值 3、其他細(xì)節(jié)： 垃圾處理：按生物污染性制品，交醫(yī)院統(tǒng)一處理。 儀器簡(jiǎn)

2、單操作流程 標(biāo)記筆、槍頭盒等一些小物品都要標(biāo)明分區(qū)。 儀器的申請(qǐng)、采購(gòu)、使用、驗(yàn)證程序 樣本采集（針對(duì)臨床醫(yī)護(hù)人員）、運(yùn)輸、收集程序 樣品的唯一編號(hào)原則一應(yīng)區(qū)分開(kāi)不同天、不同種類的標(biāo)本 標(biāo)本的保存程序一包括處理前、剛處理后、報(bào)告發(fā)放后的原始標(biāo)本（原則 上至少保留一周）應(yīng)有專人負(fù)責(zé)。 檢測(cè)結(jié)果的保存、備份記錄、質(zhì)控記錄保存，除電腦記錄外應(yīng)有相應(yīng)的手 抄記錄（類似于基因日檢測(cè)統(tǒng)計(jì)表類型的）。 抱怨記錄一應(yīng)有時(shí)間、事件（項(xiàng)目）、接待人、處理方法、處理結(jié)果、處 理人簽字確認(rèn) 時(shí)磊5說(shuō)- 注意事項(xiàng) 1、回答任何問(wèn)題都應(yīng)與自己寫(xiě)的 SOP文件相一致.寫(xiě)你所做的,做你所寫(xiě)的. 2、SOP文件不能寫(xiě)的太虛,無(wú)

3、法做到的東西不要寫(xiě),比如公司版的SOP文件里的 加樣器的校準(zhǔn)一般實(shí)驗(yàn)室就做不到.模棱兩可也不要寫(xiě)，比如消毒時(shí)間一到兩 小時(shí)不能這樣寫(xiě)，多少就是多少 3、處理標(biāo)本要在生物安全柜內(nèi)，而加樣則在柜外. 4、各區(qū)門(mén)口要貼有各區(qū)的工作制度，限入標(biāo)志.還要準(zhǔn)備兩個(gè)登記本，一個(gè)來(lái)記錄 紫外消毒,一個(gè)來(lái)記錄工作人員出入?yún)^(qū)內(nèi)還要有一個(gè)工作記錄本，用來(lái)記錄各 區(qū)每天的工作內(nèi)容，便于監(jiān)測(cè)每天的工作全過(guò)程. 5、每把槍的用途要清楚，不能弄亂.比如稀釋陽(yáng)模的槍和處理標(biāo)本的槍不可混用. 6普通離心機(jī)處理分泌物標(biāo)本時(shí)應(yīng)在離心后靜置 20分鐘才能開(kāi)蓋.（許斌這樣認(rèn) 為） 7、所有儀器、設(shè)備都要有檔案卡. 8、所有的清潔消毒要

4、在實(shí)驗(yàn)結(jié)束后馬上進(jìn)行，尤其是儀器、設(shè)備.像擴(kuò)增儀，每 天都要清潔，做完的反應(yīng)管決對(duì)不能留在樣品槽內(nèi)。 9、各區(qū)的拖把、抹布不得混用，標(biāo)記清楚. 10、 生物防護(hù)意識(shí)要強(qiáng)，手套要隨時(shí)更換.生物防護(hù)安全的保證要從三個(gè)方面：制 度、硬件、意識(shí)。 11、爆管如何處理：立即停止實(shí)驗(yàn)，水浴里的水要倒掉，沖洗.所有可能污染的地方 要用消毒液擦洗，紫外照射,通風(fēng)排風(fēng). 12、各區(qū)應(yīng)有日常工作核查表，做為每天工作記錄的補(bǔ)充. 13、 各區(qū)要有泡有消毒液的生物污物桶，用來(lái)處理生物垃圾. 14、驗(yàn)收組帶來(lái)的標(biāo)本要按平時(shí)對(duì)待臨床標(biāo)本一樣處理 ，要有接收記錄，結(jié)果登記 等. 15、拒絕電話或代領(lǐng)等非正常方式發(fā)放報(bào)告單.

5、 16、存放標(biāo)本的冰箱要上鎖，鑰匙及電腦資料的密碼要由本科室人員專人保管. 17、 報(bào)告單上要注明試劑的檢測(cè)下限，不能寫(xiě)成參考范圍.除了有操作者，還要有 核校者,且兩者姓名除了電子打印還要用手簽.定量結(jié)果不能有陰陽(yáng)性提示， 只能報(bào)數(shù)值 18、SOP文件中PE5700的溫濕度要求應(yīng)該為溫度 15-30C、濕度為 80 %。 19、SOP中 醫(yī)院申報(bào)實(shí)驗(yàn)室注意事項(xiàng) 專家組參觀實(shí)驗(yàn)室回答的問(wèn)題 1, “你們的冰箱的鐵鏈我可以從底下抽上來(lái)，實(shí)驗(yàn)室能做好保密性 嗎？ 可以的，你們能做到就行，注意保密！ 2, 實(shí)驗(yàn)室需要配置冷凍離心機(jī)，生物安全柜，如果做HCV時(shí),注意 重新添置新實(shí)驗(yàn)室。 3, 生物防護(hù)中

6、是否有銳器的防護(hù)注意事項(xiàng)？ 4, 實(shí)驗(yàn)室的溫濕度計(jì)的放置位置？ 最好放在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)。 5, 實(shí)驗(yàn)室中如何做好離心管抑制物的檢測(cè)？ 而非爆管、裂管的檢測(cè)！ 6, 在做HCV時(shí)規(guī)定從抽血化驗(yàn)到送達(dá)實(shí)驗(yàn)室要幾個(gè)小時(shí)要有明規(guī) 定！ 3小時(shí)左右！ 7, 溶血標(biāo)本有何具體的判斷標(biāo)準(zhǔn)？脂血呢？ 實(shí)驗(yàn)室末次會(huì)議的提問(wèn) 1, 你們單位（達(dá)安）試劑，當(dāng)我們新鮮標(biāo)本做HBV時(shí)，提取中40 微升+40微升提取液處理，待放置過(guò)夜后，第二天加樣時(shí)，有的標(biāo)本 特難取樣，有何處理辦法？ 2, 實(shí)驗(yàn)室中垃圾你們?nèi)绾翁幚淼模?3, 實(shí)驗(yàn)室中陰性標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)后變成陽(yáng)性你怎么辦？（我們實(shí)驗(yàn)室一共 有三管陰性陰性對(duì)照，第一個(gè)陰性檢測(cè)管是試劑

7、什么都不加， 直接上 機(jī)，第二個(gè)陰性檢測(cè)管是試劑中加入在實(shí)驗(yàn)開(kāi)始時(shí)打開(kāi)蓋的 1.5離心 管帶有蒸餾水的，第三個(gè)陰性檢測(cè)管是與實(shí)驗(yàn)一起提取的陰性血清。） 4, 實(shí)驗(yàn)中如果陽(yáng)性質(zhì)控，陽(yáng)性梯度，標(biāo)本呈陰性請(qǐng)分別解釋？ 5, 實(shí)驗(yàn)室必須配置生物安全柜，高速離心機(jī)！ 臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室技術(shù)驗(yàn)收現(xiàn)場(chǎng)問(wèn)卷 （口試和/或筆試） 一. 現(xiàn)有一個(gè)患者向你提出：“我在你們醫(yī)院檢測(cè)HBV DNA為陽(yáng)性，但在另 一家醫(yī)院檢測(cè)為陰性，你們醫(yī)院是怎么做的檢測(cè)？”，此時(shí)，你怎么辦？ （該題主要是考實(shí)驗(yàn)室人員是否知道并遵守所制定的抱怨處理程序） 二. 現(xiàn)有一個(gè)臨床大夫拿著幾張 HBVDNA定量PCR僉驗(yàn)報(bào)告單找到PCF實(shí)驗(yàn)

8、 室，說(shuō)：“你們的PCR吉果到底準(zhǔn)不準(zhǔn)，我這個(gè)病人剛開(kāi)始檢測(cè)，HBV DNA是 5 x 107拷貝數(shù)/ml，用了拉米呋啶治療后二周，再檢測(cè)結(jié)果為3X 107拷貝數(shù)/ml， 降了不少，但再過(guò)二周檢測(cè)，又變成了 6X107拷貝數(shù)/ml，升高不少，這到底是 怎么回事？”，如果這個(gè)大夫剛好問(wèn)的是你，你怎么辦？并如何解釋其提出的問(wèn) 題？ （該題除了考實(shí)驗(yàn)室人員是否知道并遵守所制定的抱怨處理程序外，還要求 其對(duì)特定PCR僉驗(yàn)的批間變異有充分的認(rèn)識(shí)） 回答思路： 這兩題分別對(duì)應(yīng)患者和臨床醫(yī)生提出的抱怨。考點(diǎn)為你是否按照所制定的程 序來(lái)處理：無(wú)論是患者還是醫(yī)生提出抱怨，我們都應(yīng)該“按照”程序先記錄抱 怨人姓名

9、、抱怨內(nèi)容等，然后等問(wèn)題解決后記錄處理結(jié)果等，最后記錄反饋意 見(jiàn)等。 注意：一般問(wèn)題中出現(xiàn)“此時(shí)，你怎么辦？” ，其考核的重點(diǎn)均為“形式” 而非“內(nèi)容”。所以題目中無(wú)論病人抱怨的是服務(wù)態(tài)度不好還是結(jié)果報(bào)告不準(zhǔn)， 時(shí)需Sr彳 醫(yī)生抱怨的是檢測(cè)結(jié)果和臨床診斷不符還是報(bào)告發(fā)放不及時(shí)，回答的方向都應(yīng)該 是：“我們接待他們后，先在登記表上記錄抱怨的什么什么相關(guān)信息，做相應(yīng)處 理，解決后記錄處理結(jié)果，最后填反饋表，歸檔總結(jié)，跟著以后改進(jìn)等等等等”。 對(duì)各種具體問(wèn)題的處理就按照實(shí)際情況來(lái)回答就行。 如果題目中出現(xiàn)要你具體“解釋某某提出的問(wèn)題”時(shí)，這時(shí)是具體考察某一 “內(nèi)容細(xì)節(jié)”了。第二題中看你對(duì) PCR檢驗(yàn)

10、的批間變異有否充分的認(rèn)識(shí)：一般 PCF檢測(cè)試劑盒存在著一定的批間甚至批內(nèi)差異，而且PCF檢測(cè)前處理也存在著 一定的誤差，分析軟件相關(guān)參數(shù)的選擇也會(huì)使定量結(jié)果發(fā)生變動(dòng)，這是方法學(xué)造 成的不可避免的事實(shí)。同一操作人、同一儀器、同一批號(hào)試劑、同一份標(biāo)本同時(shí) 做多份平行管，得到的結(jié)果都會(huì)不盡相同。所以我們都會(huì)允許結(jié)果存在一定范圍 的偏差，一般為一個(gè)數(shù)量級(jí)的拷貝數(shù)。5X107、3X107和6X 107均在允許的誤差 范圍內(nèi)，排除了各種影響因素后，出現(xiàn)這種情況很正常，這說(shuō)明了該病人用藥效 果不佳。若定量結(jié)果有12個(gè)數(shù)量級(jí)甚至更大的變化才能反映用藥療效。 三. 現(xiàn)有一人打電話到科室，說(shuō)：“我孩子在你們醫(yī)院做

11、了一項(xiàng)丙肝的 PCR 檢測(cè)，名字叫XXX請(qǐng)你告訴我檢測(cè)結(jié)果好嗎？” 。如果是你剛好接了這個(gè)電話， 你會(huì)怎樣去做？ （該題考的是實(shí)驗(yàn)室人員在患者要求以電子郵件、電話、傳真等方式傳遞 報(bào)告時(shí)，是否能按相應(yīng)的程序去做） 回答思路： 也是考形式?！皩?duì)于這種非正常的報(bào)告發(fā)放形式，我們按照程序，是這樣 這樣處理的?！币?yàn)楦鱾€(gè)醫(yī)院實(shí)際情況不同，所以無(wú)論你怎樣處理，只要程序中 體現(xiàn)了對(duì)患者結(jié)果的保密原則，具體細(xì)節(jié)不會(huì)太要求。 在程序中按以下幾個(gè)方式寫(xiě)都是可以的： 1、 我們均不以任何非正常形式發(fā)放報(bào)告。（最干脆！就是有點(diǎn)不近人情， 不過(guò)對(duì)我們來(lái)說(shuō)省事） 2、實(shí)在有特殊情況，可以電話查結(jié)果，其它發(fā)放形式不行。但

12、必須確認(rèn) 身份，包括核對(duì)其所查詢的患者姓名、 性別、年齡、檢測(cè)項(xiàng)目、送檢醫(yī)生、 送檢日期、病區(qū)床號(hào)等情況，并提供患者 ID號(hào)。 3、可以通過(guò)電話、圖文傳真、電子郵件等形式傳送結(jié)果，和上面一樣， 需要核實(shí)身份。（最寬松了，不過(guò)麻煩了很多） 要注意的是：這些情況均應(yīng)明確告知查詢者，這幾種非正常形式發(fā)放的報(bào) 告均僅為臨床提供參考，實(shí)驗(yàn)的最終結(jié)果以正式檢測(cè)報(bào)告單為準(zhǔn)。特殊情 況報(bào)告發(fā)放后需詳細(xì)登記，簽署報(bào)告人姓名，實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人簽字。 “報(bào)告的正確發(fā)放”為考核重點(diǎn)，一般可能還會(huì)引申出“你們是如何發(fā)放 檢測(cè)結(jié)果報(bào)告？”之類的問(wèn)題，按照程序中寫(xiě)的實(shí)際情況回答就行的了。 只要遵 循保密原則就0K 最簡(jiǎn)單的無(wú)非

13、把事情都推給醫(yī)院：說(shuō)門(mén)診患者報(bào)告單送至服務(wù)臺(tái)門(mén)診報(bào)告 發(fā)放處，由那里的醫(yī)生確認(rèn)身份后發(fā)放。（具體她們是怎么確認(rèn)、確不確認(rèn)這已 經(jīng)不關(guān)我們的事了）。 若寫(xiě)病人到科室領(lǐng)報(bào)告也行，只是“我們?cè)趺创_認(rèn)病人身份”要在程序中 體現(xiàn)：詢問(wèn)相關(guān)信息、根據(jù)收費(fèi)單或病歷唯一條形碼（若醫(yī)院采用計(jì)算機(jī)網(wǎng)絡(luò)系 統(tǒng)）確認(rèn)等等。 四現(xiàn)有你科室同事，拿了一份血清標(biāo)本給你，說(shuō)：“這是我一個(gè)熟人的標(biāo) 本，他要做HCVRNA僉測(cè)，剛好他還做生化和免疫檢測(cè)，我從生化標(biāo)本分了一些 出來(lái)，給你做HCV RNA”你覺(jué)得這樣行嗎？為什么？ （該題主要是考實(shí)驗(yàn)室人員對(duì)有關(guān)標(biāo)本的收集程序是否清楚并遵守） 回答思路： 問(wèn)到了 “為什么？”表示具體

14、考到細(xì)節(jié)了。按照我們的收集程序，做PCR 尤其是RNA項(xiàng)目需要獨(dú)立取血，不能從其它檢測(cè)的標(biāo)本中分出一些來(lái)做。 而且對(duì) RNA標(biāo)本的采集、保存、運(yùn)輸都有嚴(yán)格的要求。 一般驗(yàn)收組會(huì)對(duì)這類問(wèn)題加以引申。問(wèn)你每天標(biāo)本在哪兒采集？采血的人員 有否經(jīng)過(guò)專門(mén)培訓(xùn)？采集的標(biāo)本如何保存？ 還可以順便冋你結(jié)果發(fā)放后的標(biāo)本如何保存、 保存在哪兒？保存多久？甚至 要你把這多久多久前的標(biāo)本拿出來(lái)給他們看。 五某一天，你在做 HBV DNA熒光定量PCR檢測(cè)（方法的定量測(cè)定范圍為 103107拷貝數(shù)/ml ）中，發(fā)現(xiàn)有1份標(biāo)本的測(cè)定Ct值超出方法的測(cè)定上限，此 時(shí)你怎么辦？對(duì)于沒(méi)有特異擴(kuò)增曲線的標(biāo)本你又怎么報(bào)告結(jié)果？ 回

15、答思路： 此為具體問(wèn)題：題目已經(jīng)假設(shè)了方法的定量測(cè)定范圍為 103107拷貝數(shù)/ml， 我們就按照這個(gè)假設(shè)來(lái)考慮。先看是否為特異擴(kuò)增的曲線（即看曲線是否為標(biāo)準(zhǔn) 的S形曲線），若為標(biāo)準(zhǔn)S形曲線表示的確為陽(yáng)性標(biāo)本，Ct值超出檢測(cè)上限，表 示未知標(biāo)本HBV DNA濃度過(guò)大，不在檢測(cè)線性范圍內(nèi)，應(yīng)該進(jìn)行濃度梯度稀釋 （1/10、1/100、1/1000），重做實(shí)驗(yàn)，看哪個(gè)梯度處于線性范圍內(nèi)，得到原 始濃度乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)即得。 若不是特異擴(kuò)增的曲線（也就是常見(jiàn)的那種前面翹、與閾值線有交點(diǎn)的陰性 曲線，計(jì)算機(jī)不會(huì)具體分析，見(jiàn)有交點(diǎn)就給 Ct值，而且Ct值還很小，小于測(cè)定 上限的Cycle數(shù)），按陰性報(bào)。

16、 六.在PCR僉測(cè)的核酸提取離心中，如發(fā)現(xiàn)有一管離心管出現(xiàn)破裂，此時(shí)你 怎么辦？ （該題是考實(shí)驗(yàn)室人員對(duì)于其制定的實(shí)驗(yàn)室及儀器設(shè)備消毒清潔程序是否知道 并遵守） 回答思路： 按照離心機(jī)的消毒清潔程序：必須先停止實(shí)驗(yàn)，將破裂管密封放入生物垃圾 桶，再用75%酒精擦拭離心室消毒，用移動(dòng)紫外燈照射 3060分鐘后才能開(kāi)始 實(shí)驗(yàn)。 可以引申出：離心管破裂，可能質(zhì)量有問(wèn)題，為防止以后同類事情的發(fā)生， 按照耗材質(zhì)檢程序進(jìn)行離心管質(zhì)檢實(shí)驗(yàn)，若不合格停止使用，重新購(gòu)買并進(jìn)行質(zhì) 檢，合格的耗材才能使用。 時(shí)磊忖呎 七有一個(gè)PCR實(shí)驗(yàn)室的熒光定量PCR儀如ABI 7000因某種原因搬動(dòng)到了 另一個(gè)實(shí)驗(yàn)臺(tái)面，實(shí)驗(yàn)室只是將儀器外表面擦了擦，即用于常規(guī)擴(kuò)增檢測(cè)工作， 你覺(jué)得該實(shí)驗(yàn)室做得對(duì)嗎？為什么？ （該題是考實(shí)驗(yàn)室人員對(duì)于其制定的 PCR儀校準(zhǔn)程序是否知道并遵守） 回答思路： 考核實(shí)驗(yàn)室人員對(duì)于其制定的PCR儀校準(zhǔn)程序是否知道并遵守。儀器移動(dòng)應(yīng) 該按照程序進(jìn)行校準(zhǔn)后才能重新用于常規(guī)擴(kuò)增檢測(cè)工作，以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果。 7000型核酸擴(kuò)增熒光檢測(cè)儀為復(fù)雜精密儀器，其校準(zhǔn)工作