臨床檢驗(yàn)中心PCR實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)操作程序概要

*醫(yī)院臨床檢驗(yàn)中心臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室管理程序標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP）起草人：批準(zhǔn)人： 生效日期： 年 月 日目 錄臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室的設(shè)置3臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部管理規(guī)章11臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室人員管理、配置及培訓(xùn)15臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室的設(shè)施和環(huán)境18臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室清潔制度規(guī)章19臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室儀器設(shè)備管理規(guī)章21Roche 480II實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀操作規(guī)程、維護(hù)方法、校準(zhǔn)（SOP-1）未修改26Finnpipette 可調(diào)式移液器的使用與維護(hù)標(biāo)準(zhǔn)操作(SOP-2)35Finnpipette可調(diào)式移液器校準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)管理程序(SOP-3)39溫度計(jì)及濕溫度計(jì)的校正標(biāo)準(zhǔn)管理程序(SOP-4)40離心機(jī)使用與維護(hù)標(biāo)準(zhǔn)操作程序(SOP-5)41超凈工作臺(tái)使用與維護(hù)標(biāo)準(zhǔn)操作程序(SOP-6)45恒溫水浴箱使用、維護(hù)與校正（SOP-7）46旋渦振蕩器使用與維護(hù)標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP-8）49冰箱的使用與維護(hù)標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP-9）50可移動(dòng)紫外燈標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP-10）52儀器故障時(shí)標(biāo)記、放置標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP-11）53儀器設(shè)備發(fā)生故障時(shí)的應(yīng)急處理程序（SOP-12）54臨床標(biāo)本的收集管理標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP-13）57檢驗(yàn)標(biāo)本的驗(yàn)收和保存標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP-14）58樣本編號(hào)的標(biāo)準(zhǔn)操作程序(SOP-15)63PCR標(biāo)本管理標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP-16）65標(biāo)本前處理標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP-17）67核酸擴(kuò)增及產(chǎn)物分析檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP-18）68乙型肝炎病毒基因擴(kuò)增檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP-19）70基因擴(kuò)增檢測(cè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析標(biāo)準(zhǔn)操作程序(SOP-20)75實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性判斷標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP-21）78室內(nèi)質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)操作程序(SOP-22)79實(shí)驗(yàn)室試劑耗材購(gòu)買(mǎi)、驗(yàn)收和貯存的標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP-23）85試劑質(zhì)檢標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP-24）91實(shí)驗(yàn)室耗材質(zhì)檢標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP-25）94手套使用及左右手分開(kāi)的原則（SOP-26）97實(shí)驗(yàn)室化學(xué)試劑貯存使用、廢棄物處理及生物防護(hù)（SOP-27）98抱怨的處理程序（SOP-28）101實(shí)驗(yàn)室記錄管理規(guī)章標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP-29）105檢驗(yàn)報(bào)告單管理標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP-30）108實(shí)驗(yàn)室臺(tái)面擺放順序程序（SOP-31）112實(shí)驗(yàn)室常用溶液配置標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP-32）113*醫(yī)院臨床檢驗(yàn)中心SOP文件實(shí)驗(yàn)室操作規(guī)程 文件編號(hào)： 版本：2013第三版 生效日期：2013/01/01臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)操作程序 第 12 頁(yè) 共 119 頁(yè)臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室的設(shè)置1目的：依照實(shí)驗(yàn)室設(shè)置規(guī)范實(shí)現(xiàn)核酸擴(kuò)增熒光檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室配置合理，以保證實(shí)驗(yàn)工作健康有序及實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性2 范圍：臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室及相關(guān)工作人員，并明確各項(xiàng)規(guī)章制度3 操作人：* *4 實(shí)驗(yàn)室設(shè)置規(guī)章： 4.1 依據(jù)：本實(shí)驗(yàn)室按臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室管理暫行辦法（衛(wèi)醫(yī)發(fā)200210號(hào)）中臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室基本設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)結(jié)合本實(shí)驗(yàn)室的條件進(jìn)行設(shè)置，并嚴(yán)格按照臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室工作規(guī)范（衛(wèi)檢字2002第8號(hào)）的要求開(kāi)展臨床基因擴(kuò)增工作(擬開(kāi)展基因擴(kuò)增檢驗(yàn)項(xiàng)目見(jiàn)附表1)4.2 實(shí)驗(yàn)室設(shè)置:4.2.1實(shí)驗(yàn)室主要由試劑儲(chǔ)存和準(zhǔn)備區(qū)（PCR-）、標(biāo)本制備區(qū)（PCR-）、PCR擴(kuò)增及產(chǎn)物分析區(qū)(PCR-）三個(gè)工作室組成。這三區(qū)各自獨(dú)立，每個(gè)區(qū)設(shè)有緩沖間。其布局見(jiàn)實(shí)驗(yàn)室平面圖（見(jiàn)附圖1）。4.2.2設(shè)立各區(qū)的門(mén)牌，分別是：“試劑儲(chǔ)存和準(zhǔn)備區(qū)（PCR-）”、“標(biāo)本制備區(qū)（PCR-）”、“PCR擴(kuò)增及產(chǎn)物分析區(qū)(PCR-）”，并在各區(qū)門(mén)上貼有“非本室工作人員不得進(jìn)入”標(biāo)記。4.2.3建立實(shí)驗(yàn)室內(nèi)務(wù)管理，并放在進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室的明顯位置（如置于緩沖區(qū)的墻上；內(nèi)務(wù)管理應(yīng)有進(jìn)入實(shí)驗(yàn)的工作流程、進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室的要求、實(shí)驗(yàn)前的準(zhǔn)備及清潔等）。4.2.4三個(gè)工作區(qū)各配備專用的設(shè)備、儀器、輔助設(shè)施、耗材、清潔用品、辦公用品、專用工作服，并有明顯的區(qū)分標(biāo)識(shí)：試劑準(zhǔn)備區(qū)藍(lán)色，標(biāo)本制備區(qū)紫色，PCR擴(kuò)增及產(chǎn)物分析區(qū)黑色。各區(qū)的實(shí)驗(yàn)物品不得混用（實(shí)驗(yàn)室主要設(shè)備一覽表見(jiàn)表3）。4.2.5進(jìn)入各區(qū)的工作流程為：試劑儲(chǔ)存和準(zhǔn)備區(qū)標(biāo)本制備區(qū)PCR擴(kuò)增及產(chǎn)物分析區(qū)。4.2.6進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室必須更換有本室標(biāo)識(shí)的工作服及清潔鞋套，工作人員離開(kāi)某一工作區(qū)時(shí)，該區(qū)物品不得帶出本區(qū)（包括工作服等）。4.3各區(qū)實(shí)驗(yàn)設(shè)備及用品配置：4.3.1試劑儲(chǔ)存和準(zhǔn)備區(qū)：冰箱（28和-15）、可調(diào)式移液器（覆蓋0.51000ul）、紫外消毒車、固定紫外線燈，混勻器，專用工作服，一次性用品（手套、帶濾心的吸頭、鞋套、吸水紙、耐高壓處理的離心管），專用實(shí)驗(yàn)記錄本及記號(hào)筆等。4.3.2 標(biāo)本制備區(qū)：冰箱（28和-15）、臺(tái)式高速離心機(jī)、水浴鍋、凈化工作臺(tái)、混勻器、可調(diào)式移液器（覆蓋11000ul）、紫外消毒車、固定紫外線燈，專用工作服，一次性用品（手套、帶濾心的吸頭、鞋套、吸水紙、耐高壓處理的離心管），專用實(shí)驗(yàn)記錄本及記號(hào)筆等。4.3.3 PCR擴(kuò)增及產(chǎn)物分析區(qū)：Line-Gene全自動(dòng)熒光定量PCR核酸擴(kuò)增儀、紫外消毒車、固定紫外線燈，專用工作服，一次性用品（手套、鞋套、吸水紙等），專用實(shí)驗(yàn)記錄本及記號(hào)筆等。4.4實(shí)驗(yàn)室人員設(shè)置：實(shí)驗(yàn)室人員配置：我院PCR實(shí)驗(yàn)室配備有3名工作人員，其中1人具檢驗(yàn)師職稱，2人具主管檢驗(yàn)師職稱。已全部經(jīng)過(guò)安徽省臨床檢驗(yàn)中心培訓(xùn)，并取得培訓(xùn)合格證（實(shí)驗(yàn)室工作人員一覽表見(jiàn)表2）。起 草 人批 準(zhǔn) 人生 效 日 期年 月 日附表1 擬開(kāi)展臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)項(xiàng)目一覽表項(xiàng) 目方 法備 注HBV DNAPCR熒光實(shí)時(shí)擴(kuò)增Line-Gene擴(kuò)增儀表2 臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室工作人員一覽表序號(hào)姓名性別年齡學(xué)歷職務(wù)職稱所學(xué)專業(yè)畢業(yè)時(shí)間從事本專業(yè)時(shí)間培訓(xùn)合格證號(hào)備注1中專主管檢驗(yàn)827422002000*2中專主管檢驗(yàn)817442003000*3中專檢驗(yàn)師檢驗(yàn)957312003000*表3 臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室儀器設(shè)備一覽表序號(hào)儀器設(shè)備名稱生產(chǎn)廠家儀器型號(hào)儀器序號(hào)接收日期接收狀態(tài)啟用日期放置地點(diǎn)接受人簽字備注1紫外線消毒車江陰市光電儀器有限公司ZXC類B型2003-4-18全新2002-5-9試劑準(zhǔn)備區(qū)2美菱電冰箱美菱股份有限公司BCD-109624172003-4-19全新2003-4-19試劑準(zhǔn)備區(qū)3可調(diào)式移液器上海雷勃分析儀器有限公司4500120Y557772003-4-19全新2003-5-9試劑準(zhǔn)備區(qū)4可調(diào)式移液器上海雷勃分析儀器有限公司4500020Y500412003-4-19全新2003-5-9試劑準(zhǔn)備區(qū)5可調(diào)式移液器上海雷勃分析儀器有限公司4500100Y458492003-4-19全新2003-5-9試劑準(zhǔn)備區(qū)6可調(diào)式移液器上海雷勃分析儀器有限公司4500090Y567342003-4-19全新2003-5-9試劑準(zhǔn)備區(qū)7光學(xué)讀數(shù)分析天平湘儀天平儀器廠TG3282003-5-8調(diào)撥2003-5-8試劑準(zhǔn)備區(qū)8無(wú)菌凈化工作臺(tái)浙江大學(xué)凈化設(shè)備廠GEM-SHGEM-SH-012003-4-16全新2003-5-9樣本準(zhǔn)備區(qū)9紫外線消毒車江陰市光電儀器有限公司械廠ZXC類B型2003-4-18全新2003-5-9樣本準(zhǔn)備區(qū)10高速離心機(jī)上海安亭科學(xué)儀器廠TGL-16B172003-3-1全新2003-3-19樣本準(zhǔn)備區(qū)11美菱電冰箱美菱股份有限公司BCD-109624222003-4-19全新2003-4-19樣本準(zhǔn)備區(qū)12三用電熱恒溫水浴箱上海躍進(jìn)醫(yī)療器械廠S.HH.W21.420010062003-2-15全新2003-3-30樣本準(zhǔn)備區(qū)13微型混勻器上海醫(yī)科大學(xué)儀器廠XW-80AQ/DAALC2-20002003-2-15全新2003-3-30樣本準(zhǔn)備區(qū)14可調(diào)式移液器上海雷勃分析儀器有限公司4500020Y500402003-4-19全新2003-5-9樣本準(zhǔn)備區(qū)15可調(diào)式移液器上海雷勃分析儀器有限公司4500100Y458502003-4-19全新2003-5-9樣本準(zhǔn)備區(qū)16可調(diào)式移液器上海雷勃分析儀器有限公司4500090Y567332003-4-19全新2003-5-9樣本準(zhǔn)備區(qū)17可調(diào)式移液器上海雷勃分析儀器有限公司4500050F599682003-4-19全新2003-5-9樣本準(zhǔn)備區(qū)18Line-Gene擴(kuò)增儀杭州DaheThermo-Magnetic有限公司FGD-33ABYQ6079-2442003-4-16全新2003-5-9PCR擴(kuò)增區(qū)19紫外線消毒車江陰市光電儀器有限公司械廠ZXC類B型2003-4-19全新2003-5-9PCR擴(kuò)增區(qū)圖1 基 因 擴(kuò) 增 實(shí) 驗(yàn) 室 平 面 圖*醫(yī)院臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室*醫(yī)院臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室- 119 -*醫(yī)院臨床檢驗(yàn)中心SOP文件實(shí)驗(yàn)室操作規(guī)程 文件編號(hào)： 版本：2013第三版 生效日期：2013/01/01臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部管理規(guī)章標(biāo)準(zhǔn)操作程序 第 16 頁(yè) 共 119 頁(yè)臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部管理規(guī)章1目的：依照實(shí)驗(yàn)室管理規(guī)范實(shí)現(xiàn)全面質(zhì)量管理，實(shí)現(xiàn)核酸擴(kuò)增熒光檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室有專人負(fù)責(zé)，以保證實(shí)驗(yàn)工作健康有序及實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性2 范圍：臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室及相關(guān)工作人員，并明確了各項(xiàng)規(guī)章制度3 操作人：*4 規(guī)章：4.1實(shí)驗(yàn)室內(nèi)務(wù)管理規(guī)章：4.1.1標(biāo)本的接收設(shè)在三個(gè)區(qū)以外的區(qū)域（與生化專用標(biāo)本接收區(qū)合用），在標(biāo)本接收時(shí)同時(shí)進(jìn)行以下記錄：在標(biāo)本與化驗(yàn)單上同時(shí)進(jìn)行標(biāo)本的唯一性編號(hào)，在標(biāo)本接收登記本上記錄患者的姓名、年齡，標(biāo)本接收日期，標(biāo)本的特性、狀態(tài)，接收者簽名。經(jīng)驗(yàn)收合格后接收的標(biāo)本直接運(yùn)送至標(biāo)本制備區(qū)。4.1.2實(shí)驗(yàn)過(guò)程中須嚴(yán)格遵守實(shí)驗(yàn)的工作流程：試劑準(zhǔn)備區(qū)標(biāo)本制備區(qū)擴(kuò)增及產(chǎn)物分析區(qū)的唯一流向制度。4.1.3開(kāi)啟實(shí)驗(yàn)區(qū)前逐一打開(kāi)設(shè)在緩沖區(qū)外墻上的紫外線燈開(kāi)關(guān)（控制實(shí)驗(yàn)區(qū)的固定紫外燈），照射30分鐘。4.1.4工作開(kāi)始前，在緩沖區(qū)換好本實(shí)驗(yàn)區(qū)工作衣，戴上一次性口罩、帽子，套上一次鞋套，關(guān)閉紫外燈。打開(kāi)緩沖的排風(fēng)裝置，開(kāi)啟實(shí)驗(yàn)區(qū)門(mén)鎖，工作時(shí)反鎖隔離門(mén)。4.1.5進(jìn)行測(cè)定前的準(zhǔn)備和工作記錄（實(shí)驗(yàn)前的準(zhǔn)備和工作記錄見(jiàn)表4）：a)記錄冰箱溫度、紫外線消毒時(shí)間；b)消毒液、清潔液、75%酒精配制；c)查看加樣器、擴(kuò)增儀、離心機(jī)、滅菌的吸頭等是否在有效期限內(nèi)；d)校正水浴鍋溫度；e)試劑準(zhǔn)備：試劑是否在有效期范圍內(nèi)，根據(jù)標(biāo)本量確定準(zhǔn)備模板的數(shù)量及陰陽(yáng)性對(duì)照數(shù)量；4.1.6實(shí)驗(yàn)過(guò)程的記錄（見(jiàn)SOP文件）。4.1.7檢測(cè)結(jié)果的記錄（見(jiàn)SOP文件）。4.1.8實(shí)驗(yàn)完成后實(shí)驗(yàn)室清潔消毒處理及記錄：實(shí)驗(yàn)臺(tái)面、加樣器、離心機(jī)、超凈工作臺(tái)、振蕩器、擴(kuò)增儀、實(shí)驗(yàn)室空間、實(shí)驗(yàn)室地面等（詳見(jiàn)實(shí)驗(yàn)室清潔制度）。4.1.9工作結(jié)束，內(nèi)務(wù)整理完畢，關(guān)閉排風(fēng)裝置及實(shí)驗(yàn)區(qū)，加鎖。4.1.10唯一流向制度同樣運(yùn)用于實(shí)驗(yàn)室物流管理及內(nèi)務(wù)管理。4.2質(zhì)量控制規(guī)章：4.2.1制定各種SOP文件并嚴(yán)格執(zhí)行。4.2.2參加室間質(zhì)評(píng)。4.2.3開(kāi)展室內(nèi)質(zhì)控工作。4.3人員行為規(guī)章：4.3.1要有強(qiáng)烈的時(shí)間觀念，按時(shí)上下班，不遲到、早退。4.3.2實(shí)驗(yàn)室人員須保持儀表整潔。4.3.3嚴(yán)格遵守實(shí)驗(yàn)操作規(guī)范，不得隨意更改操作步驟。4.3.4實(shí)驗(yàn)室技術(shù)人員必須嚴(yán)格按照PCR實(shí)驗(yàn)室操作程序進(jìn)行，包括實(shí)驗(yàn)室擦洗、臺(tái)面消毒，離心管、吸頭的無(wú)菌滅活準(zhǔn)備，儀器使用和廢棄物的處理等。4.3.5進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室工作人員必須遵守實(shí)驗(yàn)室唯一流向制度，無(wú)必要盡量減少進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室的次數(shù)。4.3.6 實(shí)驗(yàn)室內(nèi)嚴(yán)禁飲食、吸煙。4.3.7非本室工作人員未經(jīng)允許不得進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室。4.3.8語(yǔ)言有禮貌、舉止講文明，對(duì)待來(lái)訪病人或電話應(yīng)和藹禮貌，解釋明確耐心，不得推脫或生硬回絕。4.3.9晚上下班要關(guān)門(mén)、窗，檢查空調(diào)和儀器的電源是否關(guān)閉。4.4儀器管理規(guī)章：4.4.1實(shí)驗(yàn)人員必須熟悉儀器性能方允許操作，嚴(yán)格遵守操作規(guī)程。4.4.2所有儀器（如PCR擴(kuò)增儀）須有專人負(fù)責(zé)，有使用維修記錄。4.4.3儀器使用前必須檢查是否完好，一旦發(fā)現(xiàn)問(wèn)題，及時(shí)向負(fù)責(zé)人反映，不得擅自拆裝。4.4.4注意保持儀器衛(wèi)生整潔，嚴(yán)禁在室內(nèi)抽煙，吃零食，非儀器操作員應(yīng)盡量少入。4.4.5每天了解儀器運(yùn)轉(zhuǎn)情況，負(fù)責(zé)儀器的整潔，安全，檢查電源，水龍頭。4.4.6定期校正和維護(hù)PCR儀、離心機(jī)、水浴箱、冰箱等儀器、設(shè)備，并建立儀器質(zhì)量認(rèn)證檔案。4.5試劑管理規(guī)章：4.5.1實(shí)驗(yàn)室根據(jù)需要，定期提交試劑申購(gòu)單，并做到及時(shí)盤(pán)存清點(diǎn)，入庫(kù)做到心中有數(shù)。4.5.2所購(gòu)試劑一律按試劑和耗材的SOP進(jìn)行，并做到來(lái)源渠道正規(guī)，質(zhì)量保證。4.5.3實(shí)驗(yàn)室對(duì)試劑庫(kù)存定期檢查，不使用過(guò)期變質(zhì)的試劑。4.5.4自配試劑須經(jīng)嚴(yán)格校正后方可使用。4.5.5試劑的保存應(yīng)嚴(yán)格按照規(guī)定存放，確保有效期內(nèi)能有效使用，杜絕浪費(fèi)現(xiàn)象。4.5.6易燃易爆試劑應(yīng)分開(kāi)存放，遠(yuǎn)離火源和電源。4.5.7試劑外借一律須經(jīng)負(fù)責(zé)人同意方可。5本制度的變動(dòng)程序：本制度的變動(dòng)，可由任一使用該文件的工作人員向主管負(fù)責(zé)人提出，主管負(fù)責(zé)人則召集與本制度相關(guān)的所有人員進(jìn)行討論，根據(jù)討論結(jié)果是否通過(guò)，如通過(guò)則公布實(shí)施。起 草 人批 準(zhǔn) 人生 效 日 期 年 月 日表4 實(shí)驗(yàn)前的準(zhǔn)備及工作記錄日期： 年 月 日條 目工 作 記 錄責(zé)任人（簽名）緩沖區(qū)處在排風(fēng)狀態(tài)冰箱溫度記錄實(shí)驗(yàn)室紫外線照射30分鐘更換新配制的消毒液清潔液配制實(shí)驗(yàn)臺(tái)面的消毒 10%84液擦洗 75%乙醇清潔加樣器 在有效期內(nèi)擴(kuò)增儀 在有效期內(nèi)離心機(jī) 在有效期內(nèi)滅菌的吸頭 在有效期內(nèi)水浴鍋溫度校正 在有效期內(nèi)試劑： 在有效期內(nèi) 所用模板數(shù)量 所用陽(yáng)性對(duì)照 所用陰性對(duì)照表4 實(shí)驗(yàn)前的準(zhǔn)備及工作記錄日期： 年 月 日條 目工 作 記 錄責(zé)任人（簽名）緩沖區(qū)處在排風(fēng)狀態(tài)冰箱溫度記錄實(shí)驗(yàn)室紫外線照射30分鐘更換新配制的消毒液清潔液配制實(shí)驗(yàn)臺(tái)面的消毒 10%84液擦洗 75%乙醇清潔加樣器 在有效期內(nèi)擴(kuò)增儀 在有效期內(nèi)離心機(jī) 在有效期內(nèi)滅菌的吸頭 在有效期內(nèi)水浴鍋溫度校正 在有效期內(nèi)試劑： 在有效期內(nèi) 所用模板數(shù)量 所用陽(yáng)性對(duì)照 所用陰性對(duì)照*醫(yī)院臨床檢驗(yàn)中心SOP文件實(shí)驗(yàn)室操作規(guī)程 文件編號(hào)： 版本：2013第三版 生效日期：2013/01/01臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室人員管理、配置及培訓(xùn)標(biāo)準(zhǔn)操作程序 第 20 頁(yè) 共 119 頁(yè)臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室人員管理、配置及培訓(xùn)1目的：保證實(shí)驗(yàn)室具備開(kāi)展該項(xiàng)實(shí)驗(yàn)的能力。2適用范圍：臨床核酸擴(kuò)增熒光檢測(cè)實(shí)驗(yàn)人員。3負(fù)責(zé)人：*4內(nèi)容：4.1人員要求：4.1.1由于PCR檢測(cè)干擾因素較多，結(jié)果分析復(fù)雜。因此，PCR實(shí)驗(yàn)室工作人員應(yīng)具備掌握相關(guān)學(xué)科知識(shí)及應(yīng)用能力（實(shí)驗(yàn)技能、分析能力、溝通能力等）；應(yīng)具備較廣泛的分子生物知識(shí)。4.1.2 PCR實(shí)驗(yàn)室工作人員應(yīng)取得上崗培訓(xùn)合格證書(shū)，臨床PCR檢驗(yàn)過(guò)程須在具培訓(xùn)合格證書(shū)的技術(shù)人員監(jiān)督指導(dǎo)下完成，檢驗(yàn)報(bào)告須由具培訓(xùn)合格證書(shū)的技術(shù)人員審核簽。4.1.3 工作人員上崗前必須學(xué)習(xí)掌握PCR實(shí)驗(yàn)管理文件及要求，并由實(shí)驗(yàn)室主任核查。4.2人員配置：4.2.1根據(jù)衛(wèi)生部臨檢中心對(duì)實(shí)驗(yàn)室人員的在求選擇人員；4.2.2我科PCR實(shí)驗(yàn)室配備3名工作人員（PCR實(shí)驗(yàn)室工作人員一覽見(jiàn)表2）；4.2.3實(shí)驗(yàn)室主任負(fù)責(zé)實(shí)驗(yàn)室全面管理、解決技術(shù)疑難及與臨床溝通、組織人員參加培訓(xùn)，室主任不在崗時(shí)，應(yīng)指定代理人負(fù)責(zé)。4.2.3資深檢驗(yàn)技師及青年技師負(fù)責(zé)實(shí)驗(yàn)室技術(shù)管理及臨床標(biāo)本的檢驗(yàn)。4.3人員管理：a) 嚴(yán)格遵守實(shí)驗(yàn)室內(nèi)務(wù)規(guī)章制度；b) 嚴(yán)格執(zhí)行年度考核制度：1)日常工作質(zhì)量的評(píng)價(jià)；2)室內(nèi)質(zhì)控的評(píng)測(cè)；3)室間質(zhì)控的評(píng)測(cè)；4)年度考試；5)在日常抱怨工作中的應(yīng)變能力。c) 科年度獎(jiǎng)勵(lì)制度：1)參加室間質(zhì)評(píng)優(yōu)秀；2)年度在CN級(jí)刊物上在論文發(fā)表；3)在本地刊物有多篇論文發(fā)表；4)考試成績(jī)優(yōu)秀；5)受到有關(guān)部門(mén)或群眾特別嘉獎(jiǎng)。d) 科主任建立實(shí)驗(yàn)室工作人員業(yè)績(jī)檔案。4.4人員培訓(xùn)計(jì)劃：4.4.1本室現(xiàn)有人員已參加安徽省臨床檢驗(yàn)中心基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室人員培訓(xùn)班，并取得上崗證。見(jiàn)附件14.4.2自學(xué)及考核：室主任督促指導(dǎo)實(shí)驗(yàn)室人員通過(guò)繼續(xù)教育或自學(xué)提高業(yè)務(wù)素質(zhì)。工作人員根據(jù)自身情況，每年完成一篇學(xué)術(shù)論文、綜述或經(jīng)驗(yàn)總結(jié)提交室主任，室主任以此作為年度考核技術(shù)人員的一項(xiàng)依據(jù)。4.4.3室主任每年必須參加臨床檢驗(yàn)中心的PCR質(zhì)控總結(jié)會(huì)議。4.4.4室成員每年至少有一個(gè)月脫產(chǎn)的理論和技能的學(xué)習(xí)。4.4.5經(jīng)常同其它PCR室的同道進(jìn)行理論和技術(shù)交流。4.4.6訂閱與分子生物學(xué)及PCR技術(shù)有關(guān)的文獻(xiàn)、雜志。4.4.7每年底對(duì)下一年的人員培訓(xùn)做出具體安排。4.4.8實(shí)驗(yàn)室主任對(duì)技術(shù)人員的技術(shù)檔案每?jī)赡晷拚a(bǔ)充一次。5.該程序的變動(dòng)程序：本標(biāo)準(zhǔn)操作程序的改動(dòng)，可由任一使用本SOP的工作人員提出，并報(bào)經(jīng)下述人員批準(zhǔn)簽字：檢驗(yàn)科主任、室技術(shù)負(fù)責(zé)人注:所引用表格:1. 實(shí)驗(yàn)室工作人員一覽表見(jiàn)表22. 實(shí)驗(yàn)室工作人員檔案記錄見(jiàn)表5起 草 人批 準(zhǔn) 人生 效 日 期年 月 日表5 臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室工作人員檔案記錄表姓 名性別年齡學(xué)歷職務(wù)職稱畢業(yè)學(xué)校及所學(xué)專業(yè)畢業(yè)時(shí)間從事本專業(yè)時(shí)間培訓(xùn)合格證號(hào)工作業(yè)績(jī)（技能、經(jīng)歷、發(fā)表論文及科研成果）：*醫(yī)院臨床檢驗(yàn)中心SOP文件實(shí)驗(yàn)室操作規(guī)程 文件編號(hào)： 版本：2013第三版 生效日期：2013/01/01臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室設(shè)施和環(huán)境標(biāo)準(zhǔn)操作程序 第 22 頁(yè) 共 119 頁(yè)臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室的設(shè)施和環(huán)境1目的 保證環(huán)境良好，工作有序，結(jié)果可靠2范圍 PCR實(shí)驗(yàn)室及相關(guān)工作人員3操作人 * *4規(guī)章：4.1實(shí)驗(yàn)室分三個(gè)區(qū)：試劑儲(chǔ)存和準(zhǔn)備區(qū)（PCR-）、標(biāo)本制備區(qū)（PCR-）、PCR擴(kuò)增及產(chǎn)物分析區(qū)（PCR-）。進(jìn)入各區(qū)按照單一方向進(jìn)行，即試劑儲(chǔ)存和準(zhǔn)備區(qū)（PCR-）標(biāo)本制備區(qū)（PCR-）PCR擴(kuò)增及產(chǎn)物分析區(qū)（PCR-）。各區(qū)及設(shè)備、物品有明確標(biāo)識(shí)，嚴(yán)禁混用。4.2每個(gè)實(shí)驗(yàn)區(qū)的門(mén)上有本區(qū)的標(biāo)識(shí)及非本室人員不得進(jìn)入字樣。4.3每個(gè)實(shí)驗(yàn)區(qū)配有溫度調(diào)控設(shè)備、溫濕度計(jì)，可移動(dòng)及固定紫外燈。4.4PCR擴(kuò)增儀配有UPS多功能穩(wěn)壓電源。4.5工作人員在操作過(guò)程中嚴(yán)格遵守實(shí)驗(yàn)室內(nèi)務(wù)管理，嚴(yán)格執(zhí)行操作程序。4.6實(shí)驗(yàn)室人員進(jìn)入本工作區(qū)時(shí)須穿該區(qū)具有標(biāo)識(shí)專用工作服，同時(shí)配備其它保護(hù)性裝備如手套、口罩、帽子、鞋套并遵守實(shí)驗(yàn)室的唯一流向制度。4.7嚴(yán)禁將本區(qū)的物品和工作服帶離本區(qū)，以防擴(kuò)增產(chǎn)物污染擴(kuò)增前區(qū)。4.8在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中使用過(guò)的廢棄槍頭等材料應(yīng)立即浸泡于裝有84消毒液的容器中，過(guò)夜后再作為有污染的物品由專人統(tǒng)一處理。4.9標(biāo)本蓋子的開(kāi)閉及移取應(yīng)在超凈臺(tái)內(nèi)進(jìn)行，操作時(shí)應(yīng)，關(guān)閉抽風(fēng)機(jī)，操作時(shí)小心謹(jǐn)慎，防止液體外濺。4.10每天實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前，打開(kāi)紫外燈及紫外消毒車照射30分鐘。4.11工作結(jié)束后，對(duì)該區(qū)的工作臺(tái)用84消毒液消毒30分鐘后，再用該區(qū)專用的清潔干凈的抹布用自來(lái)水擦拭兩遍。對(duì)地面用該區(qū)專用的拖把用84消毒液消毒30分鐘后，再用該區(qū)專用的拖把用自來(lái)水拖擦兩遍。用紫外消毒車距實(shí)驗(yàn)臺(tái)面和實(shí)驗(yàn)儀器30cm照射1小時(shí)，同時(shí)打開(kāi)該區(qū)紫外消毒燈消毒1小時(shí)。起 草 人批 準(zhǔn) 人生 效 日 期年 月 日*醫(yī)院臨床檢驗(yàn)中心SOP文件實(shí)驗(yàn)室操作規(guī)程 文件編號(hào)： 版本：2013第三版 生效日期：2013/01/01臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室清潔規(guī)章制度標(biāo)準(zhǔn)操作程序 第 24 頁(yè) 共 119 頁(yè)臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室清潔制度規(guī)章1目的 保證實(shí)驗(yàn)室日常內(nèi)務(wù)管理及清潔工作順利進(jìn)行2范圍 PCR實(shí)驗(yàn)室臺(tái)面、地面及儀器、設(shè)備等3操作人 * *4規(guī)章：4.1實(shí)驗(yàn)室臺(tái)面和地面清潔4.1.1每次實(shí)驗(yàn)結(jié)束后由專人負(fù)責(zé)并記錄，各區(qū)的清潔工具不得混用。4.1.2實(shí)驗(yàn)臺(tái)面選用10%的84液擦拭;擴(kuò)增區(qū)實(shí)驗(yàn)臺(tái)面用75%的酒精清潔;實(shí)驗(yàn)室地面用先用10%的84液清潔，再用自來(lái)水清潔。4.1.3清潔完成后,按各區(qū)要求紫外線照射消毒。同時(shí)可移動(dòng)擴(kuò)增區(qū)紫外線燈照實(shí)驗(yàn)臺(tái)30-60分鐘。4.1.4實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程中出現(xiàn)血液/痰液等不慎泄露至實(shí)驗(yàn)臺(tái)面，應(yīng)立即停止實(shí)驗(yàn)，用10%84液浸住污染區(qū)域，再用濾紙片覆蓋可繼續(xù)實(shí)驗(yàn)，30分鐘左右后可用軟布蘸10%84液溶液反復(fù)清洗，再用75%酒精擦拭；實(shí)驗(yàn)結(jié)束后用紫外線燈照30-60分鐘。4.2高速離心機(jī)清潔 4.2.1每次實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前，用75%的酒精擦拭離心的心機(jī)外表。4.2.2每次實(shí)驗(yàn)完畢后，先用10%84消毒液浸過(guò)的軟布擦洗離心機(jī)的轉(zhuǎn)頭及內(nèi)壁,再用潔凈的濕布擦洗,待干后蓋上機(jī)蓋。4.2.3如果離心時(shí)及時(shí)發(fā)現(xiàn)離心管破裂，必須先停止實(shí)驗(yàn)，將有破裂管的離心管放入盛有10%84消毒液缸內(nèi)，取備用離心管繼續(xù)下一步操作。4.3超凈工作臺(tái)清潔4.3.1每次使用后用10%84消毒液擦拭工作臺(tái)面，再用潔凈的濕布擦洗。75%酒精棉球擦拭紫外燈；4.3.2每星期清潔凈化工作臺(tái)的周圍環(huán)境，去除塵埃。4.3.3如果操作過(guò)程中出現(xiàn)液體不慎泄露，應(yīng)立即停止實(shí)驗(yàn)，用10%84液浸住污染區(qū)域，再用濾紙片覆蓋可繼續(xù)實(shí)驗(yàn)，30分鐘左右后用軟布蘸10%84消毒液溶液反復(fù)清洗，再用潔凈的濕布擦洗，然后用75%酒精擦拭。 4.4加樣器清潔4.4.1每次實(shí)驗(yàn)結(jié)束后用75%的酒精擦拭。4.4.2當(dāng)懷疑加樣器有可能污染時(shí)在1210C及1巴壓力下消毒20分鐘。各區(qū)的加樣器歸各區(qū)專用（有標(biāo)識(shí)），清潔的消毒時(shí)分別處理。4.5工作服清潔4.5.1每周將工作服交院洗衣房洗滌消毒，不同實(shí)驗(yàn)區(qū)的工作服隔天洗滌。4.5.2如在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中疑有污染，立即用10%84液浸泡消毒。4.6擴(kuò)增儀的清潔：見(jiàn)儀器的維護(hù)。4.7實(shí)驗(yàn)室空間消毒：實(shí)驗(yàn)結(jié)束及后續(xù)工作（如地面及儀器清潔）完成后，將固定紫外燈打開(kāi)照射60分鐘。5.本制度的變動(dòng)程序：本制度的變動(dòng)，可由任一使用該文件的工作人員向主管負(fù)責(zé)人提出，主管負(fù)責(zé)人則召集與本制度相關(guān)的所有人員進(jìn)行討論，根據(jù)討論結(jié)果是否通過(guò)，如通過(guò)則公布實(shí)施。（注：實(shí)驗(yàn)室清潔消毒見(jiàn)表6）起 草 人批 準(zhǔn) 人生 效 日 期年 月 日*醫(yī)院臨床檢驗(yàn)中心SOP文件實(shí)驗(yàn)室操作規(guī)程 文件編號(hào)： 版本：2013第三版 生效日期：2013/01/01臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室儀器設(shè)備管理規(guī)章標(biāo)準(zhǔn)操作程序 第 29 頁(yè) 共 119 頁(yè)臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室儀器設(shè)備管理規(guī)章1目的 保證PCR實(shí)驗(yàn)室的儀器設(shè)備得到妥善管理，控制在用儀器設(shè)備的工作狀態(tài)2范圍 PCR實(shí)驗(yàn)室所有的儀器、設(shè)備3操作人 * *4操作：4.1儀器設(shè)備的管理，維護(hù)，保養(yǎng)等的具體事項(xiàng)由實(shí)驗(yàn)室設(shè)備管理人員負(fù)責(zé)執(zhí)行；4.2由PCR實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人負(fù)責(zé)組織執(zhí)行和監(jiān)督管理；5 內(nèi)容：5.1建檔管理：儀器設(shè)備的檔案管理應(yīng)包括以下內(nèi)容（實(shí)驗(yàn)室主要儀器設(shè)備相關(guān)文件一覽表見(jiàn)表6）：5.1.1儀器設(shè)備的一般情況：a) 名稱b) 制造商，型號(hào)，序號(hào)c) 接受日期，接收狀態(tài)（全新，改裝，原件調(diào)撥等），啟用日期d) 目前存放地點(diǎn)，接受人員簽字等。e) 校準(zhǔn)和檢定的日期、結(jié)果及下次校準(zhǔn)和檢定的日期、結(jié)果。f) 迄今為止所進(jìn)行的維護(hù)及今后維護(hù)計(jì)劃。5.1.2儀器設(shè)備的相關(guān)文件： 儀器設(shè)備的說(shuō)明書(shū)，操作手冊(cè)等，有關(guān)文件（或復(fù)印件）的文件序號(hào)，名稱，保存方式，管理負(fù)責(zé)人等。5.1.3儀器設(shè)備的損壞，故障，修理須作如下記錄 (相關(guān)表格見(jiàn)表7) ： 日期，設(shè)備名稱，設(shè)備標(biāo)記號(hào)，維修內(nèi)容（損壞或故障的表現(xiàn)、損壞故障的原因、修理人員及單位、修理的結(jié)果、記錄人員簽名、質(zhì)量負(fù)責(zé)人簽名等）。5.1.4正常運(yùn)轉(zhuǎn)的儀器設(shè)備貼上綠色正常使用標(biāo)識(shí)牌。有問(wèn)題的儀器設(shè)備加貼明顯的紅色停用標(biāo)識(shí)，標(biāo)識(shí)上應(yīng)有停用日期及原因；可搬動(dòng)的儀器移至設(shè)備處報(bào)修，不可移動(dòng)的設(shè)備原地使用布罩封存待修，直至修復(fù)校驗(yàn)后重新標(biāo)識(shí)正常使用。5.1.5儀器設(shè)備的報(bào)廢處理（報(bào)廢申請(qǐng)表見(jiàn)表8）： 因使用壽命，損壞，故障導(dǎo)致儀器設(shè)備不能滿足檢測(cè)需要時(shí)，該設(shè)備即行報(bào)廢。由管理人員填寫(xiě)報(bào)廢申請(qǐng)，科質(zhì)量負(fù)責(zé)人核實(shí)，設(shè)備科批準(zhǔn)后由質(zhì)量負(fù)責(zé)人在設(shè)備檔案中簽名注銷。5.2儀器設(shè)備實(shí)行嚴(yán)格的分區(qū)專用。5.3使用的儀器設(shè)備應(yīng)進(jìn)行校準(zhǔn)和檢定，具體見(jiàn)SOP文件。5.4為保持儀器設(shè)備工作狀態(tài)的穩(wěn)定，應(yīng)對(duì)其進(jìn)行定期的、必要的維護(hù)和保養(yǎng)，具體見(jiàn)SOP文件。5.5為了使擴(kuò)增儀處于穩(wěn)定的工作狀態(tài)，在該電腦上不得使用非本室的外來(lái)軟盤(pán)， 不能在電腦內(nèi)加載其它程序和軟件；在使用本室軟盤(pán)進(jìn)行資料備份時(shí)，需在報(bào)告系統(tǒng)電腦上預(yù)先殺毒方可使用。5.6非本室工作人員不得使用儀器。6 該程序的變動(dòng)程序：本標(biāo)準(zhǔn)操作程序的改動(dòng)，可由任一使用本SOP的工作人員提出，并報(bào)經(jīng)下述人員批準(zhǔn)簽字：檢驗(yàn)科主任、室技術(shù)負(fù)責(zé)人起 草 人批 準(zhǔn) 人生 效 日 期年 月 日表7 臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室主要儀器設(shè)備相關(guān)文件一覽表序號(hào)儀器名稱廠家放置地點(diǎn)使用說(shuō)明書(shū)產(chǎn)品合格證保修卡文件保存方式文件負(fù)責(zé)人備注1美菱電冰箱美菱股份有限公司試劑準(zhǔn)備區(qū)原件2可調(diào)式移液器上海雷勃分析儀器有限公司試劑準(zhǔn)備區(qū)原件3可調(diào)式移液器上海雷勃分析儀器有限公司試劑準(zhǔn)備區(qū)原件4可調(diào)式移液器上海雷勃分析儀器有限公司試劑準(zhǔn)備區(qū)原件5可調(diào)式移液器上海雷勃分析儀器有限公司試劑準(zhǔn)備區(qū)原件6紫外線消毒車江陰市光學(xué)儀有限公司試劑準(zhǔn)備區(qū)原件7美菱電冰箱美菱股份有限公司樣本準(zhǔn)備區(qū)原件8紫外線消毒車江陰市光學(xué)儀有限公司樣本準(zhǔn)備區(qū)原件9高速臺(tái)式離心機(jī)上海安亭科學(xué)儀器廠樣本準(zhǔn)備區(qū)原件10三用電熱恒溫水浴箱上海躍進(jìn)醫(yī)療器械廠樣本準(zhǔn)備區(qū)原件11無(wú)菌凈化工作臺(tái)浙江大學(xué)凈化設(shè)備廠樣本準(zhǔn)備區(qū)原件12可調(diào)式移液器上海雷勃分析儀器有限公司樣本準(zhǔn)備區(qū)原件13可調(diào)式移液器上海雷勃分析儀器有限公司樣本準(zhǔn)備區(qū)原件14可調(diào)式移液器上海雷勃分析儀器有限公司樣本準(zhǔn)備區(qū)原件15可調(diào)式移液器上海雷勃分析儀器有限公司樣本準(zhǔn)備區(qū)原件16Line-Gene擴(kuò)增儀杭州大和公司PCR擴(kuò)增區(qū)原件17紫外線消毒車江陰市光學(xué)儀有限公司PCR擴(kuò)增區(qū)原件表8 臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室儀器設(shè)備損壞、故障 、修理記錄日期儀器名稱放置地點(diǎn)儀器標(biāo)識(shí)損壞或故障的表現(xiàn)損壞或故障的原因修理單位修理人修理結(jié)果記錄人簽名質(zhì)量負(fù)責(zé)人簽名表9 臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室儀器設(shè)備的報(bào)廢申請(qǐng)表日期儀器名稱放置地點(diǎn)儀器標(biāo)識(shí)報(bào)廢原因質(zhì)量負(fù)責(zé)人核實(shí)簽名設(shè)備處批準(zhǔn)備注*醫(yī)院臨床檢驗(yàn)中心SOP文件實(shí)驗(yàn)室操作規(guī)程 文件編號(hào)： 版本：2013第三版 生效日期：2013/01/01臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室Roche 480II實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀標(biāo)準(zhǔn)操作程序 第 38 頁(yè) 共 119 頁(yè)Roche 480II實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀操作規(guī)程、維護(hù)方法、校準(zhǔn)（SOP-1）未修改1 目的：確保Line-Gene型核酸擴(kuò)增熒光檢測(cè)儀正確及正常使用。2 適用范圍：Line-Gene型核酸擴(kuò)增熒光檢測(cè)儀。3操作人 * *4標(biāo)準(zhǔn)操作方法：4.1在打開(kāi)電源以前，先確認(rèn)以下內(nèi)容：4.1.1確認(rèn)電源線插頭已插入電源插座中。4.1.2 Line-Gene與計(jì)算機(jī)及電源的連接是否可靠。4.2核酸擴(kuò)增儀操作方法：4.2.1依次打開(kāi)電腦顯示器和電腦主機(jī)的電源開(kāi)關(guān),進(jìn)入“熒光定量PCR檢測(cè)系統(tǒng)”界面；4.2.2模板制好后，按模擬模板反應(yīng)孔的樣式放入擴(kuò)增儀反應(yīng)槽，注意陰陽(yáng)性、陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品位置，標(biāo)本不夠用空白管填補(bǔ)；4.2.3打開(kāi)PCR儀電源開(kāi)關(guān),預(yù)熱5分鐘；4.2.4點(diǎn)擊“運(yùn)行”鍵，打開(kāi)“運(yùn)行”文件中“達(dá)安”試劑程序；4.2.3點(diǎn)擊工具欄中的“樣本資料”按鈕，輸入樣本資料，并清空缺省樣本號(hào)；點(diǎn)擊“確認(rèn)”保存樣本資料信息，保存的文件名為：年月日+批次（批次用a、b、c表示）如20030516a 文件自動(dòng)形成后綴名為*.flr4.2.4點(diǎn)擊儀器運(yùn)行的紅色按鈕“！”，儀器進(jìn)入運(yùn)行狀態(tài)。4.2.5檢測(cè)結(jié)果分析：a.程序運(yùn)行結(jié)束后，系統(tǒng)自動(dòng)進(jìn)入分析界面并將檢測(cè)結(jié)果自動(dòng)保存，在熒光定量PCR檢測(cè)系統(tǒng)界面單擊“數(shù)據(jù)分析”鍵，進(jìn)入結(jié)果分析界面。b.定量分析：1） 單擊“分析模式”菜單中的“定量分析”命令，在分析方法選擇中可選擇樣點(diǎn)擬合法。2） 樣點(diǎn)數(shù)選擇：樣點(diǎn)為循環(huán)數(shù)/熒光強(qiáng)度對(duì)數(shù)曲線中基線以上各循環(huán)的點(diǎn)，系統(tǒng)根據(jù)選擇的樣點(diǎn)數(shù)，將被選中的樣點(diǎn)擬合成直線，該直線與域值的交叉點(diǎn)即為CT值（僅適合于樣點(diǎn)擬合）。3） 擊“零點(diǎn)調(diào)整”，在彈出零點(diǎn)調(diào)整對(duì)話框進(jìn)行設(shè)置手動(dòng)調(diào)整：以設(shè)置的起始循環(huán)至終止循環(huán)熒光強(qiáng)度的平均值為零點(diǎn)設(shè)置時(shí)盡可能選擇樣本熒光強(qiáng)度穩(wěn)定（用“達(dá)安”試劑在Line-Gene熒光定量擴(kuò)增儀對(duì)標(biāo)本及控制品4） 檢測(cè)，通常起始及終止為5-15，結(jié)果較理想）。5） 單擊“噪聲容限”，在基線和域值設(shè)置對(duì)話中設(shè)置基線位置?；€應(yīng)設(shè)置在各樣本噪聲的上方并盡可能的底，對(duì)同一種試劑在各個(gè)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果分析時(shí)基線設(shè)置盡可能相同。同一實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析，基線設(shè)置不同CT值不同。6） 單擊“定量分析”，在基線和域值設(shè)置對(duì)話框中設(shè)置域值位置。本批試劑的截距控制在422、斜率控制在-2.70.2、相關(guān)系數(shù)小于-0.98。設(shè)置完成后界面顯示分析結(jié)果。（在每進(jìn)一批試劑的時(shí)候，用本批試劑測(cè)定上一批穩(wěn)定的試劑已測(cè)定過(guò)的控制品及陰陽(yáng)對(duì)照，根據(jù)上批試劑測(cè)定的結(jié)果求出本批試劑在這種結(jié)果下的“截距”、“斜率”、“相關(guān)系數(shù)”范圍；在用“本批試劑”進(jìn)行實(shí)驗(yàn)時(shí)，本室其它人員判斷結(jié)果，這些參數(shù)必須控制在此范圍，這樣結(jié)果判斷在本室才具一致性。每進(jìn)購(gòu)一批試劑后，在SOP文件中，這些參數(shù)也需調(diào)整。）4.3分析結(jié)果打印。4.4Line-Gene 基因擴(kuò)增儀使用過(guò)后要及時(shí)記錄（Line-Gene 基因擴(kuò)增儀的使用記錄見(jiàn)表9）5維護(hù)方法及注意事項(xiàng)：5.1 PCR儀屬于精密電子儀器，應(yīng)放在水平臺(tái)上，PCR儀在運(yùn)行的時(shí)候，室溫應(yīng)當(dāng)控制在15至25之間，溫度過(guò)高或過(guò)低均會(huì)引起內(nèi)部的程控芯片或其它電子元件的不正常工作。5.2 PCR儀配有單獨(dú)使用的ups穩(wěn)壓電源。PCR儀不能靠近水池、火爐、腐蝕性物質(zhì)、強(qiáng)磁場(chǎng)等，均會(huì)影響儀器正常工作。5.3每次實(shí)驗(yàn)時(shí)，最好能將擴(kuò)增儀的孔位全部放置樣品管，若樣品管少時(shí)可用空的樣品管代替，以保證實(shí)驗(yàn)田的一致性和重復(fù)性。5.4實(shí)驗(yàn)結(jié)束后應(yīng)及時(shí)擦干孔內(nèi)存在的水份，蓋上機(jī)蓋。5.5本儀器表面如有污跡，可用軟布沾清潔膏擦拭干凈。5.6每周五清洗樣品槽一次。方法是用棉棒沾75%的乙醇清洗若干次，以有灰塵或其它殘留物影響擴(kuò)增效果。5.7每月末清潔熱蓋和反應(yīng)孔。具體方法是：正常關(guān)機(jī)后，將反應(yīng)槽取出，將熱蓋翻開(kāi)，用浸透95%酒精棉棒擦拭反應(yīng)孔和熱蓋，待乙醇揮發(fā)后再將熱蓋和反應(yīng)槽安裝好，熱蓋恢復(fù)原位。5.8熒光定量PCR檢測(cè)系統(tǒng)軟件的維護(hù)：5.8.1安裝熒光定量PCR檢測(cè)系統(tǒng)軟件計(jì)算機(jī)進(jìn)入Window98/2000/XP系統(tǒng)后，將熒光定量PCR檢測(cè)系統(tǒng)安裝光盤(pán)放入光驅(qū),找到光盤(pán)根目錄下的SETUP.EXE雙擊它，進(jìn)入設(shè)置程序熒光定量PCR檢測(cè)系統(tǒng)。據(jù)屏幕提示進(jìn)行操作即可完成熒光定量PCR檢測(cè)系統(tǒng)軟件的安裝。5.8.2卸載熒光定量PCR檢測(cè)系統(tǒng)軟件：在【開(kāi)始】/【設(shè)置】/【控置面板】菜單中單擊“添加刪除程序”項(xiàng)，選擇“熒光定量PCR檢測(cè)系統(tǒng)”，單擊刪除即可完成卸載熒光定量PCR檢測(cè)系統(tǒng).5.9Line-Gene 基因擴(kuò)增儀的維護(hù)保養(yǎng)后要及時(shí)記錄（Line-Gene 基因擴(kuò)增儀的維護(hù)保養(yǎng)記錄見(jiàn)表10）。6校準(zhǔn)：Line-Gene 基因擴(kuò)增儀校準(zhǔn)工作需由專業(yè)工程師進(jìn)行。除與儀器廠家達(dá)成協(xié)議以外，以實(shí)驗(yàn)判斷儀器校準(zhǔn)狀態(tài)也可為何時(shí)進(jìn)行儀器校準(zhǔn)提供信息。通過(guò)對(duì)室內(nèi)質(zhì)控圖的分析，及時(shí)發(fā)現(xiàn)系統(tǒng)誤差的出現(xiàn)。經(jīng)過(guò)分析排除了試劑和人員誤差后，應(yīng)進(jìn)行儀器狀態(tài)校驗(yàn)實(shí)驗(yàn)：6.1使用標(biāo)準(zhǔn)化試劑作為校驗(yàn)試劑。6.2在儀器處于校準(zhǔn)狀態(tài)下，由固定人員用標(biāo)準(zhǔn)化試劑對(duì)102、103、104、106、標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)。該實(shí)驗(yàn)在兩個(gè)月應(yīng)進(jìn)行20次。分別計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率、截距、相關(guān)性的控制限。6.3每年6月、12月由固定人員進(jìn)行上述實(shí)驗(yàn)，觀察標(biāo)準(zhǔn)曲線的三個(gè)參數(shù)是否處在控制范圍和102 標(biāo)準(zhǔn)品是否檢出。6.4當(dāng)102 標(biāo)準(zhǔn)品未檢出、標(biāo)準(zhǔn)曲線的三個(gè)參數(shù)控制超出控制范圍或僅出現(xiàn)后者時(shí)，先排除實(shí)驗(yàn)人員、試劑因素，再重復(fù)實(shí)驗(yàn)。如結(jié)果依然，聯(lián)系廠家立即進(jìn)行儀器校準(zhǔn)。6.5當(dāng)僅有102 標(biāo)準(zhǔn)品未檢出時(shí)，檢查實(shí)驗(yàn)全過(guò)程。再次上機(jī)檢測(cè)102 標(biāo)準(zhǔn)品兩枚。如仍未檢出，則聯(lián)系廠家進(jìn)行儀器校準(zhǔn)。6.6儀器經(jīng)過(guò)校準(zhǔn)后，重復(fù)該實(shí)驗(yàn)。結(jié)果歸入儀器檔案。6.7本程序的變動(dòng)程序：本程序的變動(dòng)，可由任一使用該文件的工作人員向主管負(fù)責(zé)人提出，主管負(fù)責(zé)人則召集與本制度相關(guān)的所有人員進(jìn)行討論，根據(jù)討論結(jié)果是否通過(guò)，如通過(guò)則公布實(shí)施。附：Line-GenePCR擴(kuò)增儀文件的創(chuàng)建：1.檢測(cè)文件的創(chuàng)建：1.1在熒光定量PCR檢測(cè)系統(tǒng)界面單擊“運(yùn)行”鍵，進(jìn)入程序設(shè)置界面。單擊“文件”菜單中的“新建”命令，（或單擊工具欄中的“新建”按扭）。1.2單擊“編輯”菜單中“用戶信息”命令，（或單擊工具欄中的“用戶信息” 按扭），輸入用戶信息。1.3樣本信息輸入：1）“編輯”菜單中的“樣本資料”命令或單擊工具欄中的“樣本資料”按扭。2）“屬性”、“性別”欄的輸入：選中該欄中某行后單擊該行，在彈出的下拉框內(nèi)選擇屬性或性別。3）標(biāo)準(zhǔn)樣本在濃度欄設(shè)置濃度值，同濃度值的標(biāo)準(zhǔn)只能設(shè)置一個(gè)。“濃度單位”欄輸入：?jiǎn)螕魸舛葐挝坏南吕I在下拉框內(nèi)選擇濃度單位，缺省項(xiàng)為“copyies/ml”。4）“名稱” 欄的輸入：選中該欄中某輸入內(nèi)容，單擊“缺省樣本列表”鍵，名稱欄自動(dòng)按1、2、333名稱設(shè)置，其余欄全部清空。5）“樣本編號(hào)”、“編號(hào)”欄的輸入：選中該欄中某行輸入號(hào)碼，點(diǎn)擊下一行，該行自動(dòng)形成比上一行大一個(gè)值的號(hào)碼，也可修改。6)“類型”、“臨床診斷”欄的輸入：選中該欄中某行輸入內(nèi)容，點(diǎn)擊下一行的內(nèi)容，也可修改。7）“臨床醫(yī)師”、“送檢科室”欄的輸入：選中該欄中某行后單擊該行，在彈出的下拉框內(nèi)選擇臨床醫(yī)師或送檢科室。點(diǎn)擊下一行（無(wú)輸入內(nèi)容時(shí)），該行自動(dòng)形成上一行的內(nèi)容，也可單擊該行重新選擇。8)“送檢日期”，“采樣時(shí)間”欄的輸入：雙擊該欄中某行，在彈出的對(duì)話框顯示當(dāng)天日期，按Enter鍵輸入該日期，或點(diǎn)擊對(duì)話框左邊的下拉鍵彈出日歷界面，選擇需輸入的日期按Enter鍵輸入，點(diǎn)擊下一行（無(wú)輸入內(nèi)空時(shí)），該行自動(dòng)形成上一行的內(nèi)容，也可雙擊該行在日歷界面重新選擇。9）樣本信息內(nèi)容在打印報(bào)表時(shí)將會(huì)打?。ù蛴r(shí)類型、樣本編號(hào)、編號(hào)、姓名、年齡、性別、住院號(hào)、門(mén)診號(hào)、病歷號(hào)、臨床醫(yī)師、送檢科室、臨床診斷、采樣時(shí)間最多可選取10項(xiàng)打印），樣本信息內(nèi)容未輸入，打印報(bào)表以缺省打印。1.4樣本輸入模板：?jiǎn)螕簟熬庉嫛辈藛沃械摹皹颖据斎肽０濉泵?。在樣本輸入模板中添加送檢科室、臨床醫(yī)生內(nèi)容。在樣本信息輸入時(shí)，送檢科室、臨床醫(yī)師項(xiàng)的輸入可選擇樣本輸入模板中已添加的送檢科室、臨床醫(yī)師內(nèi)容。1.5設(shè)置檢測(cè)通道、熒光強(qiáng)度增益：選擇1通道，增益值須根據(jù)不同的試劑進(jìn)行設(shè)置，定量分析，熒光強(qiáng)度初試值調(diào)整在70左右。1.