細(xì)菌革蘭氏染色

實(shí)驗(yàn)三細(xì)菌的革蘭氏染色 Gramstain 一 目的要求 了解革蘭氏染色的原理 學(xué)習(xí)并掌握革蘭氏染色的方法 二 基本原理 革蘭氏染色反應(yīng)是細(xì)菌分類和鑒定的重要性狀 它是1884年由丹麥醫(yī)師Gram創(chuàng)立的 革蘭氏染色法 Gramstain 不僅能觀察到細(xì)菌的形態(tài)而且還可將所有細(xì)菌區(qū)分為兩大類 染色反應(yīng)呈藍(lán)紫色的稱為革蘭氏陽性細(xì)菌 用G 表示 染色反應(yīng)呈紅色 復(fù)染顏色 的稱為革蘭氏陰性細(xì)菌 用G 表示 細(xì)菌對(duì)于革蘭氏染色的不同反應(yīng) 是由于它們細(xì)胞壁的成分和結(jié)構(gòu)不同而造成的 肽聚糖 peptidoglycan 革蘭陽性菌肽聚糖 聚糖骨架 四肽側(cè)鏈 五肽交聯(lián)橋 革蘭陰性菌肽聚糖 聚糖骨架 四肽側(cè)鏈 肽聚糖 peptidoglycan 革蘭陽性菌細(xì)胞壁特殊組分 革蘭陰性菌細(xì)胞壁特殊組分 革蘭陽性菌與陰性菌細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)比較 革蘭氏染色需用四種不同的溶液 堿性染料 basicdye 初染液 媒染劑 mordant 脫色劑 decolorisingagent 和復(fù)染液 counterstain 堿性染料初染液 結(jié)晶紫 crystalviolet 媒染劑 碘 iodine 脫色劑 95 的酒精 ethanol 復(fù)染液 番紅 三 實(shí)驗(yàn)器材 大腸桿菌 枯草芽孢桿菌 未知菌 草酸銨結(jié)晶紫 番水水溶液 碘液 95 乙醇 載玻片 顯微鏡等 四 實(shí)驗(yàn)步驟 1 涂片 將培養(yǎng)24小時(shí)的大腸桿菌和未知菌 培養(yǎng)12 18小時(shí)的枯草芽孢桿球菌 分別作涂片 注意涂片切不可過于濃厚 干燥 固定 固定時(shí)通過火焰1 2次即可 不可過熱 以載玻片不燙手為宜 2 染色 1 初染 加草酸銨結(jié)晶紫一滴 約一分鐘 水洗 2 媒染 滴加碘液沖去殘水 并覆蓋約一分鐘 水洗 3 脫色 將載玻片上面的水甩凈 并襯以白背景 用95 酒精滴洗至流出酒精剛剛不出現(xiàn)紫色時(shí)為止 約20 30秒鐘 立即用水沖凈酒精 4 復(fù)染 用番紅液染1 2分鐘 水洗 5 干燥和鏡檢 干燥后 置油鏡觀察 革蘭氏陰性菌呈紅色 革蘭氏陽性菌呈紫色 以分散開的細(xì)菌的革蘭氏染色反應(yīng)為準(zhǔn) 過于密集的細(xì)菌 常常呈假陽性 6 同法在一載玻片上以大腸桿菌與枯草芽孢桿菌混合制片 作革蘭氏染色對(duì)比 革蘭氏染色的關(guān)鍵在于嚴(yán)格掌握酒精脫色程度 如脫色過度 則陽性菌可被誤染為陰性菌 而脫色不夠時(shí) 陰性菌可被誤染為陽性菌 此外 菌齡也影響染色結(jié)果 如陽性菌培養(yǎng)時(shí)間過長(zhǎng) 或已死亡及部分菌自行溶解了 都常呈陰性反應(yīng) 大腸桿菌革蘭氏染色 1 結(jié)果列表比較大腸桿菌 枯草芽孢桿菌和未知菌的染色反應(yīng) 并判斷它們分別是G 或G 2 思考題 1 作革蘭氏染色涂片為什么不能過于濃厚 其染色