《抗凝劑的選擇》PPT課件.ppt

抗凝劑的選擇 概述 使用全血和血漿檢查 通常采集靜脈血 需要使用抗凝劑 所謂抗凝 是用物理或化學(xué)方法除去或抑制血液中的某些凝血因子的活性 以阻止血液凝固 這種能夠阻止血液凝固的物質(zhì) 稱為抗凝劑或抗凝物質(zhì) 檢查的項(xiàng)目不同 所使用的抗凝劑也不同 實(shí)驗(yàn)室常用抗凝劑 乙二胺四乙酸 EDTA 鹽草酸鹽肝素枸櫞酸鹽 1 1乙二胺四乙鹽 EDTA 常用其鈉鹽 EDTA Na2 H2O 或鉀鹽 EDTA K2 2H2O 能與血液中鈣離子結(jié)合成螯合物 而使ca2 失去凝血作用 從而阻止血液凝固 Na2C10H14O8N2 Ca2 CaC10H12O8N2 2Na 2H EDTA鹽對血細(xì)胞形態(tài)和血小板計(jì)數(shù)影響很小 適用于多項(xiàng)血液學(xué)檢查 尤其是血小板計(jì)數(shù) 但鈉溶解度明顯低于鉀鹽 有時(shí)影響抗凝效果 EDTA K2特別適用于全血細(xì)胞分析及血細(xì)胞比容測定 室溫下6h 紅細(xì)胞體積不改變 根據(jù)國際血液學(xué)標(biāo)準(zhǔn)化委員會 ICSH 1993年文件建議 血細(xì)胞計(jì)數(shù)用EDTA K2作抗菌素凝劑 用量為EDTA K2 2H2O1 5 2 2mg ml血液 EDTA影響血小板聚集 不適合于作凝血象檢查和血小板功能試驗(yàn) 1 2EDTA在檢驗(yàn)中的幾點(diǎn)注意事項(xiàng) 1 抗凝劑濃度過高 滲透壓上升 會造成細(xì)胞皺縮 EDTA溶液pH與鹽類關(guān)系較大 低pH可使細(xì)胞膨脹 EDTA K2可使紅細(xì)胞體積輕度膨脹 采血后短時(shí)間內(nèi)平均血小板體積非常不穩(wěn)定半小時(shí)后趨于穩(wěn)定 2 EDTA K2使Ca2 Mg2 下降 同時(shí)使肌酸激酶 堿性磷酸酶降低 EDTA K2的最佳濃度為1 5mg ml血液 如果血少 中性粒細(xì)胞會腫脹分葉消失 血小板會腫脹 崩解 產(chǎn)生正常血小板的碎片 使分析結(jié)果產(chǎn)生錯(cuò)誤 3 EDTA由于能抑制或干涉纖維蛋白凝塊形成時(shí)纖維蛋白單體的聚合 不適于血凝和血小板功能檢測 也不適用于鈣 鉀 鈉及含氮物質(zhì)的測定 4 此外 EDTA能影響某些酶的活性和抑制紅斑狼瘡因子 故不適合制作組化染色和檢查紅斑狼瘡細(xì)胞的血涂片 5 EDTA也可影響到中性粒細(xì)胞的形態(tài)學(xué)特征 這種變化取決于外周血涂片制備的時(shí)間和EDTA的濃度 即使EDTA濃度在最佳濃度 1 5mg ml血液時(shí) 也會引起中性粒細(xì)胞發(fā)生微小的形態(tài)學(xué)變化 這種變化首先包括中性粒細(xì)胞腫脹 分葉結(jié)構(gòu)的消失 隨后發(fā)生胞漿顆粒的喪失及核和胞漿出現(xiàn)空泡 在標(biāo)本采集后1 3h間 發(fā)生核腫脹 核染色質(zhì)發(fā)生交叉 3h后 中性粒細(xì)胞結(jié)構(gòu)模糊并發(fā)生碎裂 如果EDTA濃度采用2 5mg ml時(shí) 中心粒細(xì)胞及乎全部發(fā)生碎裂 6 單核細(xì)胞也可發(fā)生類似的與時(shí)間相關(guān)及與EDTA濃度相關(guān)的形態(tài)學(xué)變化 但在程度上輕于中性粒細(xì)胞 血小板同樣會發(fā)生變化 包括腫脹 產(chǎn)生巨血小板 后者發(fā)生碎裂后可產(chǎn)生與血小板大小一致的碎片 用電子計(jì)數(shù)儀計(jì)數(shù)時(shí)導(dǎo)致血小板假性升高 用EDTA作抗凝劑時(shí)血小板從盤型變?yōu)榍蛐?從而使平均血小板體積測定結(jié)果不準(zhǔn)確 2 1草酸鹽 常用的有草酸鈉 草酸鉀和草酸銨 它們?nèi)芙夂箅x的草酸根與標(biāo)本中的鈣離子形成草酸鈣沉淀 使Ca2 失去凝血功能 Na2C2O4 Ca2 CaC2O4 2Na 草酸鹽抗凝的優(yōu)點(diǎn)是溶解度好 價(jià)廉 2mg草酸鹽可抗凝1ml血液 草酸鈉通常用0 1mol L濃度 與血液按1 9比例使用 過去主要用于凝血象檢查 實(shí)踐發(fā)現(xiàn) 草酸鹽對凝血V因子保護(hù)功能差 影響凝血酶原時(shí)間測定 另外由于草酸鹽與鈣結(jié)合后形成的沉淀物 影響自動(dòng)凝血儀的使用 因此 多數(shù)認(rèn)為 凝血象檢查選用枸椽酸鈉為抗凝劑更為適宜 高濃度鉀離子或鈉離子易使血細(xì)胞脫水皺縮 而草酸銨則可使血細(xì)胞膨脹 故測定血細(xì)胞比容時(shí)用草酸銨和草酸鉀或草酸鈉兩者適當(dāng)比例混合的抗凝劑 恰好不影響紅細(xì)胞的形態(tài)和體積 2 2草酸鹽在檢驗(yàn)中的幾點(diǎn)注意 若用草酸鉀或草酸鈉作抗凝劑 與肝素為抗凝劑測定的血細(xì)胞比容比較 測定值可降低8 13 此時(shí)的血漿量也相應(yīng)增加 用它測定血漿中化學(xué)成分 結(jié)果可低5 左右 標(biāo)本中如加入高濃度的草酸鹽抗凝劑 可發(fā)生溶血和改變血液pH 干擾血漿中的鉀 鈉和氯測定 還能抵制有些酶的活性 由于生成草酸鈣沉淀 紅細(xì)胞會出現(xiàn)鋸齒狀 白細(xì)胞出現(xiàn)空泡 淋巴細(xì)胞及單核細(xì)胞會變形 不宜做血片檢查 草酸鹽可使血小板聚集 并影響白細(xì)胞形態(tài) 不能用于白細(xì)胞和血小板分類計(jì)數(shù) 3 1肝素的一般特性 肝素是生理性抗凝劑 廣泛存在于肺 肝 脾等幾乎所有組織和血管周圍肥大細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞的顆粒中 它是一種含硫酸基團(tuán)的粘多糖 相對分子質(zhì)量15000 帶有較多負(fù)電荷 抗凝機(jī)制較為復(fù)雜 主要是加強(qiáng)抗凝血酶 AT 滅活絲氨酸蛋白酶的作用 從而阻止凝血酶的形成 并有阻止血小板聚集等多種抗凝作用 此外 肝素還能借助血漿輔助因子 肝素輔助因子 來抑制凝血酶 每毫升血液抗凝需要肝素 1 5 2 5 IU 所用制劑多為肝素的鈉鹽或鉀鹽 肝素具有抗凝力強(qiáng) 不影響血細(xì)胞體積 不易溶血等優(yōu)點(diǎn) 除有些因素會干擾凝血機(jī)制檢查項(xiàng)目外 絕大多數(shù)的檢查都可用肝素作為抗凝劑 它是紅細(xì)胞滲透脆性試驗(yàn)理想的抗凝劑 盡管肝素可以保持紅細(xì)胞的自然形態(tài) 但由于其常可引起白細(xì)胞聚集 并使血涂片在羅氏染色時(shí)產(chǎn)生藍(lán)色背景 因此肝素抗凝血不適合血液學(xué)一般檢查 3 2肝素的藥理學(xué)特性 肝素與抗凝血酶 AT 結(jié)合后 引起AT 構(gòu)型改變 并明顯提高AT 抗凝血酶的效能和縮短起效時(shí)間 同時(shí)主要與蛋白水解酶性凝血因子 a a a a 及激肽釋放酶分子結(jié)構(gòu)中的絲氨酸殘基結(jié)合 并封閉這些酶的活性中心 呈現(xiàn)不可逆性阻斷這些因子的凝血作用 促進(jìn)纖維蛋白對凝血酶的吸附 抵制血小板的粘附和聚集 并影響凝血過程的每一步驟 使凝血時(shí)間 全血激活凝血時(shí)間 ACT 凝血酶時(shí)間及凝血酶原時(shí)間延長 3 3肝素在檢驗(yàn)中的幾點(diǎn)注意 常用肝素抗凝劑是肝素的鈉 鉀 鋰 銨鹽 其中以肝素鋰最好 但其價(jià)格較貴 鈉 鉀鹽會增加血液中的鈉 鉀含量 銨鹽會增加尿素氮的含量 肝素對血液成分干擾較少 不影響紅細(xì)胞體積 不引起溶血 適用于做紅細(xì)胞滲透性試驗(yàn) 血?dú)?血漿滲透量 紅細(xì)胞壓積及普通生化測定 肝素具有抗凝血酶作用 不適合做血凝試驗(yàn) 肝素過量可引起白細(xì)胞聚集和血小板減少 所以不適合做白細(xì)胞分類和血小板計(jì)數(shù) 更不能用于止血檢驗(yàn) 肝素抗凝血不能用于制作血涂片 因?yàn)閃right染色后出現(xiàn)深藍(lán)色背景 影響顯微鏡減產(chǎn) 肝素抗凝血應(yīng)于短時(shí)間內(nèi)使用 否則放置過久血液又可凝固 4 1枸椽酸鹽 主要為枸櫞酸三鈉 凝血試驗(yàn)時(shí)枸櫞酸鹽能與血液中的鈣離子結(jié)合形成螯合物 從而阻止血液凝固 2Na3C6H5O7 2Ca2 2CaC6H5O7 6Na 枸櫞酸鈉與血液的比例為1 9 枸櫞酸鹽在血中的溶解度低 抗凝力不如前幾鐘抗凝劑 多用于臨床血液學(xué)檢查 一般用于紅細(xì)胞沉降率和凝血功能測定 因其毒性小 也是輸血保養(yǎng)液的成分之一 4 2枸櫞酸鹽在檢驗(yàn)中的幾點(diǎn)注意 大部分凝血試驗(yàn)都可用枸櫞酸鈉抗凝 它有助于 因子和 因子的穩(wěn)定 并且對平均血小板體積及其他凝血因子影響較小 可用于血小板功能分析 枸櫞酸鈉6mg才能抗凝1ml血液 堿性強(qiáng) 不適用于血液化驗(yàn)和生化測驗(yàn) 在正常輸血速度下 枸櫞酸鈉不會出現(xiàn)不良反應(yīng) 當(dāng)輸血速度太快或輸血量太大 1000ml 以上時(shí) 因枸椽酸鹽不能及時(shí)被氧化 可致低鈣血癥 引起抽搐和心肌收縮抑制 當(dāng)肝腎功能不全或新生兒酶系統(tǒng)發(fā)育不全 不能充分代謝枸椽酸鈉 即使緩慢輸血也可能出現(xiàn)血鈣過低現(xiàn)象 為預(yù)防枸椽酸鹽中毒反應(yīng) 大量輸血時(shí)可靜脈注射適量葡萄糖酸鈣或氯化鈣 一般每輸注1000毫升含枸椽酸鈉血可靜脈注射10 葡萄糖酸鈣10毫升或5 氯化鈣10毫升 以中和輸入的大量枸椽酸鈉 防止低鈣血癥發(fā)生 鈣劑應(yīng)單獨(dú)注射 不能加入血液中 以免發(fā)生凝血 大量輸入含枸椽酸鈉 超過4000毫升 血液時(shí) 可能出現(xiàn)出血傾向 其原因之一可能是枸櫞酸鈉使毛細(xì)血管張力降低引起血管收縮不良所致 臨床檢驗(yàn)中常用抗凝劑抗凝劑濃度及主要用