實驗二尿肌酐.doc

實驗二 尿肌酐的定量測定肌酐是肌酸代謝的終產(chǎn)物，人體肌酸的含量約120克，其中90%存在肌肉，而且大部分以磷酸肌酸的形式而存在于肌肉中。磷酸肌酸脫去磷酸后生成肌酐。磷酸肌酸 肌酐 H3PO4肌酐在肌肉中是無用之物，隨尿液排出即為尿肌酐。正常人日排出量十分穩(wěn)定，成年男子日排出量約11.8克，女性為0.71克，不受食物蛋白質(zhì)含量和尿量的影響，運動員也有類似情況。尿肌酐日排出量的絕對值與肌肉發(fā)達(dá)程度、訓(xùn)練水平、性別和運動項目等有關(guān)。因此，測定尿肌酐含量可以間接了解骨骼肌中磷酸肌酸的含量，從而了解運動員肌肉的工作能力、機能水平和質(zhì)量，評定運動員的訓(xùn)練效果。一、 實驗?zāi)康?、掌握尿肌酐的測定方法和原理。2、強化試管實驗操作技能，掌握分光光度計、離心機的使用。二、實驗原理無蛋白尿濾液中的肌酐與堿性苦味酸作用，經(jīng)反應(yīng)生成紅色的復(fù)合物苦味酸肌酐，然后與同樣處理之標(biāo)準(zhǔn)比色，讀出光密度，即可求出尿中肌酐的含量。三、實驗試劑及儀器（一）、實驗試劑1、飽和苦味酸：稱取苦味酸（A.R）15克，置于大燒杯中，加蒸餾水1000ml，冷卻后有結(jié)晶析出，表示已達(dá)飽和，傾出上清夜備用。此液標(biāo)準(zhǔn)飽和度的測定準(zhǔn)確取清夜10ml，用0.1%酚酞作指示劑，以0.1N的氫氧化鈉（NaOH）滴定需5.25.4ml應(yīng)能中和為準(zhǔn)。2、2.5N的氫氧化鈉溶液：稱取氫氧化鈉（NaOH）100克，加蒸餾水使溶解，冷卻后用蒸餾水稀釋至1升。3、堿性苦味酸： 準(zhǔn)確量稱取飽和苦味酸5份，加2.5N的氫氧化鈉1份，應(yīng)用時即配即用為宜。4、肌酐標(biāo)準(zhǔn)儲備液（1mg/ml），準(zhǔn)確量稱取純肌酐500mg,用0.1N鹽酸溶解，然后移至500ml的容量瓶中，加0.1N鹽酸至刻度。加甲苯數(shù)滴防腐，存于冰箱，此溶液穩(wěn)定，可長期保存。5、肌酐標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液（0.01mg/ml）: 準(zhǔn)確量取3ml標(biāo)準(zhǔn)儲備液，置于500ml的容量瓶中，加水稀釋至刻度，加甲苯或二甲苯數(shù)滴（此溶液可保存一周以上）。（二）、實驗儀器分光光度計、離心機、移液管、離心管及普通試管四、實驗操作步驟1、無蛋白尿液的制備：測定管（普通試管）加入0.5ml尿液 D1加蒸餾水4.5ml D2混勻后移取0.3ml于一離心管 D3加5.4ml0.037N硫酸 D4加0.3ml10%鎢酸鈉,靜置5-10分鐘后的上清液即為無蛋白尿液 D5 2、尿肌酐濃度的測定取以上無蛋白尿液1ml至刻度試管 D6加蒸餾水3ml D2加堿性苦味酸2ml，混勻后放置10分鐘520nm比色，空白調(diào)零讀取測定管光刻度值（OD測）五、 計算尿肌酐的百分含量計算公式：200肌酐（mg%）測定管光密度標(biāo)準(zhǔn)管光密度尿肌酐系數(shù)=24小時尿肌酐量（mg）/體重（Kg） OD標(biāo)值經(jīng)測定為0.120 六、 注意事項1、在顯色反應(yīng)10-15分鐘內(nèi)比色，