五血型交叉配血.ppt

ABO血型鑒定實驗原理,正定型 根據(jù)IgM類特異性血型抗體與紅細胞膜上特異性抗原結(jié)合出現(xiàn)凝集反應的原理，用已知IgM類特異性標準抗A、抗B血清室溫下與被檢紅細胞在鹽水中反應，若出現(xiàn)凝集現(xiàn)象，表明被檢紅細胞膜上有血型抗體相對應的抗原，來判斷和鑒定被檢者的血型。,反定型 用已知標準A，B，O型紅細胞分別與被檢血清反應，若出現(xiàn)凝集，證明被檢血清中存在與該紅細胞抗原相對應的抗體。根據(jù)血清中存在的血型抗體和Landsteiner定律判斷和鑒定被檢者血型。,試劑器材,試劑 標準抗A、抗B血型定型試劑 5%（體積比）A，B，型標準紅細胞生理鹽水懸液。 生理鹽水 器材 試管、試管架、記號筆、吸管、離心機、玻片、顯微鏡 標本 5%被檢紅細胞生理鹽水懸液，血清或血漿,操作步驟 正定型,試管法： 1：標記試管 取試管兩支，分別標記抗A，抗B。 2：加定型試劑 將抗A、抗B試劑各1滴分別加入抗A，抗B試管中。 3：加入紅細胞懸液 各加5%被檢者紅細胞生理鹽水懸液1滴于試管中，混勻，以1000r/min離心1min。 4：觀察結(jié)果 先觀察上層液有無溶血現(xiàn)象，再斜持試管輕輕搖動或彈動，使管底紅細胞再懸浮，觀察有無凝集，如僅輕微凝集或不見凝集，必須將反應物倒于玻片上以低倍鏡觀察。,5：判斷結(jié)果 凝集判斷標準：完全凝集者，上層液無色清亮，底部有紅細胞凝塊，呈花邊狀，輕彈試管凝塊不散開。完全不凝集的試管，上層液無色清亮，血細胞均勻沉積管底，邊緣整齊，重懸細胞后成均勻的紅色懸液。,試管法： 1：標記試管 取試管3支，分別標記A，B，O。 2：加入樣本血清或血漿 血樣經(jīng)2500r/min離心3min分離出血漿或血清，在A，B，O試管中分別加1滴血漿或血清， 3：加標準紅細胞懸液 再分別加入5%A型、B型、型標準紅細胞生理鹽水懸液各1滴，混勻，以1000r/min離心1min。 4：觀察結(jié)果 先觀察上層液有無溶血現(xiàn)象，再斜持試管輕輕搖動或彈動，使管底紅細胞再懸浮，觀察有無凝集，如僅輕微凝集或不見凝集，必須將反應物倒于玻片上以低倍鏡觀察。,反定型,紅細胞的ABO正反定型結(jié)果判斷,正向定型 反向定型 抗A 抗B 抗A,B A細胞 B細胞 O細胞 - - - + + - O + - + - + - A - + + + - - B + + + - - - AB,判斷 結(jié)果,注意事項：,1.嚴格標記，器材干燥潔凈，防止溶血，避免交叉污染。 2.試管法出現(xiàn)溶血現(xiàn)象，表明存在抗原抗體反應并有補體激活。 3.46個月以內(nèi)嬰兒反定型可能不凝集或凝集很弱，年老體弱者抗原較弱，最好用試管法鑒定血型。 4.亞型紅細胞抗原較弱，凝集較弱。 5.防止冷凝集素的干擾。 6.某些疾病可能使紅細胞定型困難：嚴重的腸道細菌感染出現(xiàn)類B抗原；血清中存在病理性冷凝集素；部分高球蛋白與異常球蛋白癥患者。,毛細血管采血標準操作程序,操作步驟 1 采血部位成人以左手無名指內(nèi)側(cè)為宜,6月以下嬰幼兒通常選拇指內(nèi)側(cè)或足跟兩側(cè)采血。 2 輕輕按摩采血部位。 3 用棉簽蘸取消毒液消毒局部皮膚、待干。,4 緊捏刺血部位,使其自然充血。 5 用無菌刺針穿刺,動作應迅速,深度23mm,稍加擠壓以血液流出為宜。 6 用干棉球擦去第一滴血。 7 按需要依次采血。 8 采血完畢,用干棉球壓住傷口,止血3min。,標本要求,1 除特殊情況外，不在耳垂采血。采血應避開凍瘡、炎癥、損傷、水腫等部位。 2采血后輕輕擠壓血液順暢流出，避免過度擠壓，混入組織液易致凝固。 3進行多項檢驗時,采血次序為血小板計數(shù)、紅細胞計數(shù)、血紅蛋白測定、白細胞計數(shù)、涂片等。出血時間、凝血時間用APTT、PT和PLT計數(shù)聯(lián)合取代。,二、交叉配血實驗,分類 1.“主側(cè)”配血 2.“次側(cè)”配血,獻血者 受血者 紅細胞 紅細胞 血清 血清,主側(cè),次側(cè),供血者紅細胞與受血者血清反應（主側(cè)交叉配血） 受血者紅細胞與供血者血清反應（次側(cè)交叉配血） 其目的是檢查受血者與供血者是否存在血型抗原與抗體不合的情況。,交叉配血實驗技術,1.鹽水介質(zhì)法 2.酶介質(zhì)法 3.抗人球蛋白介質(zhì)法 4.凝聚胺法 5.微柱凝膠免疫技術,實驗原理,鹽水介質(zhì)法（Immediatespin，IS ）是利用天然IgM類血型抗體與對應紅細胞抗原在室溫下的鹽水介質(zhì)中出現(xiàn)凝集反應，通過離心觀察受血者血清與供血者紅細胞以及受血者紅細胞與供血者血清之間有無凝集現(xiàn)象，判斷供血者與受血者之間有無ABO血型不合的情況。,酶技術,利用木瓜酶或菠蘿酶破壞紅細胞表面唾液酸，使紅細胞失去電荷，縮小細胞間距離 同時改變紅細胞膜表面結(jié)構(gòu)，使某些隱蔽的抗原暴露，從而增強凝集反應 主要用于一些不完全抗體的檢測,凝聚胺技術,利用多聚季胺鹽在介質(zhì)溶液中產(chǎn)生大量正電荷中和紅細胞表面的負電荷，減少紅細胞間排斥，形成可逆凝集，加入解聚液僅可使非特異性聚集分散，而發(fā)生抗原抗體特異性反應凝集不會散開。,凝膠卡式檢測法的工作原理,將紅細胞懸液和血清加在凝膠上部反應，離心后觀察 凝集的紅細胞，被阻擋在微柱中凝膠的上部或中央，證明發(fā)生凝集反應，判斷凝集反應陽性 游離的紅細胞，擠過裝有過濾介質(zhì)的微柱到達底部，證明未發(fā)生凝集，判斷凝集反應陰性,試劑器材,1：試劑 生理鹽水 2：器材 試管，試管架、記號筆、一次性塑料吸管，玻片、離心機，顯微鏡， 3：標本 患者、獻血員靜脈血,操作步驟,1：患者標本準備 分離血清，標記為PS（patient serum） 配制5患者紅細胞生理鹽水懸液，標記為PC（patient cell） ：獻血員標本準備 分離血清，標記為DS（donor serum） 配制5獻血員紅細胞生理鹽水懸液，標記為DC（donor cell）,交叉配血,1. 取兩支試管，分別標明主，次，即主側(cè)配血管和次側(cè)配血管。 2.在主側(cè)配血管中加PS 1滴，滴， 3.在次側(cè)配血管中加DS 1滴，滴， 4.混勻，1000r/min離心1min。 5.觀察結(jié)果 先觀察試管上層液有無溶血，再斜持試管輕輕搖動，觀察管底反應物有無凝集，重懸液在低倍鏡下觀察有無紅細胞凝集。,判斷結(jié)果：,凝集結(jié)果判斷： 判斷標準同正定型試管法 配血是否相合判斷標準：AB