ABO血型正反鑒定結(jié)果不符的原因分析.doc

大連醫(yī)科大學(xué)2012屆本科畢業(yè)論文ABO血型系統(tǒng)是人類發(fā)現(xiàn)的第一個(gè)血型系統(tǒng)，也是最重要的血型系統(tǒng)，對(duì)臨床輸血意義重大。ABO血型系統(tǒng)有A、B、O、AB四種表型，也存在A亞型、B亞型、AB亞型。ABO系統(tǒng)抗原則有A、B、AB、A1抗原，在胎兒的第9周就可以檢測(cè)出來(lái)，這些抗原隨著個(gè)體基因變異或疾病的影響而改變。ABO血型系統(tǒng)有兩個(gè)特點(diǎn)：一、紅細(xì)胞上缺少某個(gè)抗原，血清中就存在針對(duì)該抗原的抗體，而且是高效價(jià)的；二、不僅紅細(xì)胞上有ABO抗原，分泌型者得分泌液中也存在某抗原1，根據(jù)這一特性來(lái)判斷ABO血型。臨床上，當(dāng)輸入ABO血型不相合的血液時(shí)，會(huì)引起溶血性輸血反應(yīng)2，嚴(yán)重時(shí)會(huì)危及生命。為了保障臨床輸血的安全，對(duì)ABO血型定型規(guī)定做正反定型。當(dāng)正反定型一致時(shí)，方可準(zhǔn)確確定ABO血型。但實(shí)驗(yàn)中，往往會(huì)出現(xiàn)ABO正反定型不一致的情況。導(dǎo)致ABO正反定型不符的原因有很多，有試劑、方法、技術(shù)等因素的影響，更重要的是血液免疫因素的影響。本文就血液免疫因素方面對(duì)ABO正反定型的影響進(jìn)行研究?，F(xiàn)將武漢血液中心2011年14月份健康獻(xiàn)血者ABO正反定型不一致及14月份醫(yī)院送檢的正反定型不符的患者標(biāo)本進(jìn)行研究，報(bào)告如下。亞型的數(shù)字要用下標(biāo)表示。一 材料與方法1.1標(biāo)本來(lái)源武漢血液中心14月份健康獻(xiàn)血者ABO正反定型不符標(biāo)本及14月份各醫(yī)院送檢的正反定型不符而進(jìn)行疑難血型鑒定的標(biāo)本。其中健康獻(xiàn)血者80例，患者標(biāo)本35例。1.2主要試劑與器材試劑：抗-A、抗-B標(biāo)準(zhǔn)血清、抗-A1、抗-AB、譜細(xì)胞、O型試劑紅細(xì)胞均為上海血液生物醫(yī)藥有限責(zé)任公司，人源性抗-A、抗-B，A、B型試劑紅細(xì)胞為本輸血研究室自制。器材：離心機(jī)（日本久保田KA2200）；恒溫水浴箱（HH60）；顯微鏡（CKTV-2）。1.3實(shí)驗(yàn)方法1.3.1 ABO正定型實(shí)驗(yàn)取兩支試管，分別加入兩滴抗-A、抗-B試劑，再各加一滴3-5受檢者紅細(xì)胞懸液，混勻，3500r/min離心15秒，觀察結(jié)果。懷疑為亞型時(shí)，再加做抗-AB、抗-H試驗(yàn)。1.3.2 ABO反定型實(shí)驗(yàn)取四支試管，先各加入兩滴受檢者血清，再分別加入一滴A、B、O型試劑紅細(xì)胞和受檢者紅細(xì)胞懸液，混勻，3500r/min離心15秒，觀察結(jié)果。1.3.3 吸收放散及唾液血型物質(zhì)檢測(cè)吸收放散試驗(yàn)：因?yàn)槭軝z者自身紅細(xì)胞能吸收血清中的特異性抗體，然后再將抗體放散下來(lái)，取放散液用于血型鑒定。用生理鹽水將3ml受檢者壓積紅細(xì)胞洗滌三次，取洗后的壓積紅細(xì)胞2ml，加入對(duì)應(yīng)的人源性抗血清，4下吸收1小時(shí)，吸收后用4生理鹽水洗滌5次，再置于56放散10min，數(shù)次振蕩，3500r/min離心1min，取2滴放散液，加入對(duì)應(yīng)的1滴A、B、O試劑紅細(xì)胞，混勻，3500r/min離心15秒，觀察結(jié)果。唾液血型物質(zhì)檢測(cè)：受檢者唾液離心去雜質(zhì)后，煮沸10min，3500r/min離心5min，以2+凝集強(qiáng)度為標(biāo)準(zhǔn)將抗-A、抗-B標(biāo)準(zhǔn)血清和抗-H標(biāo)化，取1滴上清液與標(biāo)化后的1滴抗-A、抗-B標(biāo)準(zhǔn)血清和抗-H中和，然后加入1滴對(duì)應(yīng)的A、B、O試劑紅細(xì)胞，混勻，3500r/min離心15秒，觀察結(jié)果。1.3.4 抗體鑒定實(shí)驗(yàn)反定型中Oc反應(yīng)陽(yáng)性而自身反應(yīng)陰性標(biāo)本與譜細(xì)胞反應(yīng)。取十支試管，編號(hào)1-10，對(duì)應(yīng)加入一滴1-10號(hào)譜細(xì)胞，再各管中加入兩滴受檢者血清，搖勻，500r/min離心15秒，觀察結(jié)果。1.3.5 改變反應(yīng)溫度室溫下，反定型Oc管有凝集時(shí)，將自身試管和與正定型結(jié)果不一致的反定型試管放在37水浴箱，放置10min，輕搖試管觀察凝集是否消失，再放置于4中60min，立即3500r/min離心15秒，觀察結(jié)果。1.3.6 病例調(diào)查對(duì)于患者的標(biāo)本調(diào)查簡(jiǎn)要病例，詢問(wèn)有無(wú)輸血史、妊娠史、近期用藥史和患者以前血型。二 、結(jié) 果2.1健康獻(xiàn)血者ABO正反定型不符結(jié)果統(tǒng)計(jì) 表-1 健康獻(xiàn)血者ABO正反定型不符結(jié)果統(tǒng)計(jì)正定型 反定型 確認(rèn)血型 例數(shù) 不符原因 O A A 1 冷抗體 AB O AB 5 冷抗體 A O A 10 冷抗體 B O B 6 冷抗體 A AB A 2 冷抗體 O B O 1 冷抗體 B AB B 1 冷抗體 A O A 6 抗-M O A O 3 抗-M AB O AB 2 抗-M B O B 2 抗-M A AB A 1 抗-B抗體減弱 B O B 8 抗-Leb A O A 1 抗-Leb AB O AB 1 抗-Leb B O B 2 抗-Lea AB O AB 1 抗-Lea A O A 1 抗-P1 O A O 1 抗-P1 AB O AB 1 抗-JKb B AB AB 1 AmB亞型：A3B AB B AB 1 A2B有抗-A1 O A A 1 A亞型：Ael O B B 1 B亞型：Bel AB A AB 2 緡錢狀凝集 A AB AB 3 緡錢狀凝集 A O A 1 緡錢狀凝集 B O B 2 緡錢狀凝集 O A O 1 緡錢狀凝集 A O A 2 ABO以外抗體陽(yáng)性，譜細(xì)胞無(wú)法確定其特異性 B O B 1 同上 AB O AB 2 同上 AB A AB 3 同上 A AB A 1 同上 AB B AB 1 同上 O B O 1 同上 表-2健康獻(xiàn)血者ABO正反定型不符原因在血型分布情況血型 例數(shù) 冷抗體 抗原減弱或缺乏 抗體減弱或缺乏 不規(guī)則抗體 緡錢狀凝集A 26 12 1 1 11 1B 23 7 1 0 13 2O 8 2 0 0 5 1AB 23 5 2 0 11 5表-1表-2中，獻(xiàn)血者標(biāo)本中引起正反定型不符的原因：冷抗體占32.5（26/80），抗原減弱或缺乏占5（4/80），抗體減弱或缺乏占1.25（1/80），不規(guī)則抗體占50（40/80），緡錢狀凝集占11.25（9/80）。2.2疾病患者ABO正反定型不符結(jié)果統(tǒng)計(jì)表-3疾病患者ABO正反定型不符結(jié)果統(tǒng)計(jì)不符原因 例數(shù) 正定 反定 確認(rèn)血型 A B O AB A B O AB A B O AB紅細(xì)胞因素白血病導(dǎo)致抗原減弱 3 3 1 2 2 1Bx 1 1 1 1Ax 1 1 1 1抗體因素白血病導(dǎo)致抗體減弱 1 1 1 1腫瘤患者抗體缺乏 1 1 1 1抗-M 8 4 2 2 8 4 2 2抗-D 1 1 1 1抗-E 5 3 2 5 3 2抗-e 2 1 1 2 1 1抗-c 1 1 1抗-P1 1 1 1 1抗-Lea 1 1 1冷抗體 3 1 2 3 1 1 1混合因素溶貧 5 2 1 2 1 1 1 2 1 1 1 2SLE 1 1 1 1表-4 患者ABO正反定型不符原因在各疾病中分布原因 例數(shù) 疾病冷抗體 3 外科手術(shù)（孕產(chǎn)史）1例、膿胸1例 血液病1例不規(guī)則抗體 19 外科手術(shù)（輸血史）4例、外科手術(shù)（孕產(chǎn)史）5例、貧血3例、腫瘤3例、瓣膜病1例、上消化道出血1例、垂體腺病1例、肝硬化1例抗原減弱或消失 5 白血病3例、貧血2例抗體減弱或消失 2 白血病1例、腫瘤1例混合因素 6 溶貧4例、自免貧1例、SLE 1例表-3、表-4中：患者標(biāo)本中引起正反定型不符的原因：冷抗體占8.57（3/35），不規(guī)則抗體占54.3（19/35），抗原減弱或消失占14.3（5/35），抗體減弱或消失占5.71（2/35），混合因素占17.1（6/35）。三、討 論本文在排除技術(shù)因素及試劑因素研究對(duì)ABO正反定型不符的影響因素。筆者對(duì)80例ABO正反定型不符的健康獻(xiàn)血者及35例定型不符的疾病患者進(jìn)行ABO定型、吸收放散、抗體鑒定等實(shí)驗(yàn)，對(duì)結(jié)果分析如下：從表-1中可以看出，在健康獻(xiàn)血者中，引起ABO正反定型不符的主要原因是冷抗體32.5（26/80）及不規(guī)則抗體50（40/80）的產(chǎn)生。對(duì)于冷抗體，實(shí)驗(yàn)中將反應(yīng)試管分別放在37水浴箱及4冰箱，改變反應(yīng)溫度來(lái)確認(rèn)冷抗體3，當(dāng)冷抗體存在時(shí)，可以將試管放于37下孵育，去除冷抗體后再準(zhǔn)確定型。在不規(guī)則抗體引起的正反定型不符中，最多的是由于抗-M引起不符，占16.25（13/80），其次是抗-Leb占12.5（10/80）,這些獻(xiàn)血者無(wú)輸血史及妊娠史，這些抗體屬于天然抗體，大多為IgM性質(zhì)，少數(shù)為IgG，會(huì)導(dǎo)致ABO血型的正反定型不符和新生兒溶血病4?？?M及抗-Leb都是不規(guī)則抗體，都會(huì)引起配血的不合，這類抗體如果在37鹽水介質(zhì)和抗人球蛋白反應(yīng)是陽(yáng)性，輸血時(shí)則會(huì)產(chǎn)生輸血反應(yīng)5。對(duì)于此類獻(xiàn)血者建議今后不宜獻(xiàn)血，已獻(xiàn)的血液適合做洗滌紅細(xì)胞。表-1中還有一例是由于A2B產(chǎn)生抗-A1抗體而引起正反定型不符。A型抗原有兩種，A、A1，A1型人紅細(xì)胞上兩種抗原都有，A2型人紅細(xì)胞上只有A抗原，在通常輸血前檢測(cè)試驗(yàn)中，患者與獻(xiàn)血者的A1、A2型不必加以區(qū)分，除非當(dāng)A2型或A2B型人血清中有抗-A1抗體存在時(shí)6。22-26的A2B個(gè)體血清中可以檢出抗-A17 ，抗-A1抗體在臨床上意義不大，多數(shù)在25以上無(wú)活性，也有幾例是由于抗-A1引起的溶血性輸血反應(yīng)8。對(duì)于A2B患者血清中存在抗-A1抗體的輸血，應(yīng)選擇A2B亞型血，若無(wú)可以選擇O型洗滌紅細(xì)胞。本文還有11例正反定型標(biāo)本，ABO以外抗體陽(yáng)性，但上海譜細(xì)胞無(wú)法確定其特異性，此種情況可以增加譜細(xì)胞數(shù)，若仍不能確定特異性，可以采用分子生物學(xué)的方法來(lái)確定抗體的特異性。此外還有9例是由于緡錢狀凝集導(dǎo)致正反定型不符，可能與標(biāo)本使用的抗凝劑有關(guān)，EDTA抗凝劑能阻止補(bǔ)體的活化，補(bǔ)體存在時(shí)使反定型出現(xiàn)凝集9，導(dǎo)致正反定型的不符。4例亞型導(dǎo)致正反定型不符，減弱的抗原可以用吸收放散實(shí)驗(yàn)檢測(cè)出來(lái)，它可以將抗原濃縮和粗純化，靈活運(yùn)用吸收放散實(shí)驗(yàn)可以準(zhǔn)確定型10。出現(xiàn)亞型時(shí)，正定型加做抗-H、抗-AB,亞型紅細(xì)胞與抗-AB反應(yīng)是增強(qiáng)的11，檢測(cè)H抗原的量對(duì)亞型鑒定是有幫助的。從表-2可以看出，本文研究的80例健康獻(xiàn)血者中，A型中出現(xiàn)ABO定型不符的例數(shù)最多，占32.5（26/80），其次是B型、AB型，出現(xiàn)定型不符最少的血型是O型。可能是由于O血型的人體內(nèi)無(wú)A、B抗原，在抗原方面出現(xiàn)的變異情況少12。在35例患者標(biāo)本中，從表-3、4得出，抗原因素引起ABO正反定型不符的主要是白血病導(dǎo)致的抗原減弱。這是因?yàn)榘籽』颊唧w內(nèi)N-乙酰半乳糖轉(zhuǎn)移酶受抑制，引起抗原的減弱13。而在抗體因素中，較多是由于患者體內(nèi)產(chǎn)生較多的不規(guī)則抗體導(dǎo)致定型不符，最多的是抗-M，這些患者多數(shù)都有輸血史及妊娠史，體內(nèi)發(fā)生同種免疫反應(yīng)產(chǎn)生的同種抗體，多為IgG類。還有1例腫瘤患者，免疫功能下降導(dǎo)致抗體合成受抑制，抗體缺乏導(dǎo)致定型不符。而自身免疫性溶血性貧血患者，自身抗體與紅細(xì)胞結(jié)合，在高蛋白質(zhì)溶液中可自發(fā)凝集，包被嚴(yán)重的在低蛋白ABO定型試劑中也可以凝集，使定型不符，可以用45生理鹽水洗去自身抗體后就能準(zhǔn)確定型。綜上，排除試劑和技術(shù)因素的影響，導(dǎo)致ABO正反定型不符的原因有：（1）抗原減弱 此原因引起的定型不符，對(duì)健康獻(xiàn)血者是由于亞型，而患者則是疾病引起抗原減弱，最多的是白血病引起的減弱。（2）抗體減弱或缺乏 抗體水平與年齡有關(guān)。新生兒在出生后才產(chǎn)生IgM的ABO抗體，到3個(gè)月時(shí)才能檢測(cè)出來(lái)，510歲時(shí)抗體數(shù)目最多，隨后就漸漸下降，老年人在6570歲以后，抗體水平最低。白血病、免疫缺乏性疾病及服用免疫抑制藥物及骨髓移植的病人，由于血漿蛋白質(zhì)中的丙種球蛋白減少?gòu)亩鴮?dǎo)致抗體減少，使正反定型不符。（3）冷抗體 健康獻(xiàn)血者體內(nèi)的冷抗體效價(jià)一般不高，且在4溫度以下才會(huì)產(chǎn)生活性。但自免貧、再障、SLE等患者體內(nèi)有病理性自身抗體，這些抗體的效價(jià)很高，在定型時(shí)會(huì)出現(xiàn)全凝集現(xiàn)象。（4）假凝集引起的定型不符在健康獻(xiàn)血者中與所使用的抗凝劑有關(guān)。血樣管使用的是EDTA抗凝劑，它可以阻止補(bǔ)體活化，補(bǔ)體存在時(shí)反定型出現(xiàn)凝集反應(yīng)，而血袋辨使用的是ACD-A抗凝劑，它不能阻止補(bǔ)體活化，當(dāng)補(bǔ)體活化時(shí)會(huì)產(chǎn)生試管內(nèi)溶血，觀察結(jié)果時(shí)，容易將溶血誤判為陰性。患者則是由于血漿成分異常產(chǎn)生假凝集。（5）種屬抗體如A2型中有抗A1抗體和同種抗體都會(huì)使正反定型不符。遇到定型不符的情況時(shí)，以反定型O試劑紅細(xì)胞是否凝集為標(biāo)準(zhǔn)，將不符標(biāo)本分兩種情況進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)。（1）O型試劑紅細(xì)胞不凝集，則按亞型、抗體減弱情況進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)。通過(guò)吸收放散、唾液血型物質(zhì)檢測(cè)、紅細(xì)胞與抗-H抗-AB反應(yīng)來(lái)確定亞型。（2）若O型試劑紅細(xì)胞凝集，按不規(guī)則抗體實(shí)驗(yàn)步驟去做，先將反定型試管放于37下孵育，通過(guò)判斷凝集是否消失來(lái)決定是否是冷抗體。凝集消失且定型相符，說(shuō)明有冷抗體存在，如果凝集不消失則用譜細(xì)胞來(lái)確定不規(guī)則抗體的特異性。四、結(jié) 論ABO血型對(duì)臨床輸血意義重大，同時(shí)ABO血型定型是一項(xiàng)有高度責(zé)任感的工作，要求工作人員要有高度的責(zé)任心和高超的技術(shù)水平及豐富的工作經(jīng)驗(yàn)。遇到定型不符時(shí)，要分析多方面的異常情況，準(zhǔn)確的確定血型。有條件的實(shí)驗(yàn)室可以通過(guò)ABO基因分型對(duì)血型進(jìn)行驗(yàn)證，到目前為止，ABO的基因分型在幾個(gè)方面應(yīng)用14：（1）用來(lái)處理正反定型中存在的矛盾問(wèn)題；（2）直抗試驗(yàn)陽(yáng)性或產(chǎn)生多凝集現(xiàn)象的標(biāo)本進(jìn)行基因分型，來(lái)判斷血型；（3）多次輸血的患者，外周血中有供者血液，應(yīng)用血清學(xué)方法無(wú)法確定血型，PCR能夠避免供血者與受血者間DNA的嵌合作用，故用基因分型可以準(zhǔn)確定型此類患者；（4）抗原表達(dá)較弱的ABO定型，可以用基因分型來(lái)避免假陰性結(jié)果15。PCR-SSP基因分型技術(shù)應(yīng)用較多，通過(guò)PCR來(lái)特異性擴(kuò)增相應(yīng)的基因片段，此方法簡(jiǎn)單易操作，且結(jié)果可靠穩(wěn)定16。從而確保臨床用血的安全性。綜上討論，得出導(dǎo)致ABO正反定型不符的原因有：（1）定型方法 相對(duì)實(shí)驗(yàn)室適宜采用試管法。（2）定型試劑 國(guó)家衛(wèi)生部對(duì)抗-A、抗-B定型試劑的標(biāo)準(zhǔn)是：抗體效價(jià)128，抗體親和力15，且必須能夠檢測(cè)出A2、A2B 。（3）技術(shù)因素 要求工作人員要有高度的責(zé)任心和高超的技術(shù)水平及豐富的工作經(jīng)驗(yàn)。 （4）血液免疫因素：抗原減弱或缺乏、獲得性抗原或改變抗原、抗體減弱或缺乏，冷抗體、假凝集、不規(guī)則抗體反應(yīng)。參考文獻(xiàn)1. 安萬(wàn)新，于衛(wèi)建.輸血技術(shù)學(xué).第2版.北京:科學(xué)技術(shù)文獻(xiàn)出版社，2010：45-45.2. 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ABO血型基礎(chǔ)ABO血型系統(tǒng)具有兩個(gè)顯著的特性：（1）紅細(xì)胞上缺少某種抗原，血清中就存在高效價(jià)針對(duì)該抗原的天然抗體。（2）許多組織細(xì)胞表面都分布著紅細(xì)胞抗原，同時(shí)分泌者分泌液中也存在某個(gè)血型抗原。ABO血型基因不直接編碼A抗原、B抗原而是編碼糖基轉(zhuǎn)移酶，這些糖基轉(zhuǎn)移酶是有特異性的，第4、7外顯子編碼的氨基酸序列決定A、B糖基轉(zhuǎn)移酶特異性2，構(gòu)成ABO血型分子生物學(xué)分型的基礎(chǔ)就是這些有序列多態(tài)性的等位基因 3。而且這些糖基轉(zhuǎn)移酶作用的前體物質(zhì)是H物質(zhì)，H物質(zhì)在特異性的A、B糖基轉(zhuǎn)移酶的作用下，它被進(jìn)一步糖基化，產(chǎn)生A、B抗原。O基因?yàn)闊o(wú)效的等位基因，不能編碼產(chǎn)生相應(yīng)的糖基轉(zhuǎn)移酶，故O型人只存在高濃度的H抗原。二、ABO正反定型不符原因及處理辦法1、定型試劑的影響國(guó)家衛(wèi)生部對(duì)抗-A、抗-B定型試劑的標(biāo)準(zhǔn)是：抗體效價(jià)128，抗體親和力15，且必須能夠檢測(cè)出A2、A2B4。定型試劑的保存不當(dāng)、過(guò)期，影響了抗體的效價(jià)、親和力，使其都達(dá)不到規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)，導(dǎo)致結(jié)果的假陰性。2、定型方法的影響實(shí)驗(yàn)室ABO定型常用的方法有：紙片法、玻片法、試管法、凝膠法等等，采用任何一種方法都不會(huì)引起定型不符，而是有的方法會(huì)產(chǎn)生弱凝集使結(jié)果觀察困難或錯(cuò)誤，造成正反不符，相對(duì)來(lái)說(shuō)實(shí)驗(yàn)室最適宜采用試管法。3、技術(shù)因素的影響ABO定型對(duì)工作人員的理論基礎(chǔ)、操作技術(shù)要求很高。比如配置過(guò)濃或過(guò)淡的紅細(xì)胞懸液，觀察結(jié)果前離心時(shí)間過(guò)長(zhǎng)過(guò)短、速度過(guò)高過(guò)低，觀察結(jié)果時(shí)手法過(guò)重或過(guò)輕，抗原抗體反應(yīng)時(shí)間過(guò)短，都會(huì)造成正反定型結(jié)果的不符。所以要規(guī)范操作步驟，嚴(yán)格要求實(shí)驗(yàn)的技術(shù)水平。工作人員要有責(zé)任心、尤其是實(shí)驗(yàn)人員要有過(guò)關(guān)的技術(shù)及豐富的工作經(jīng)驗(yàn)。4、血液免疫因素4.1、抗原減弱或封閉導(dǎo)致ABO正反定型不符。遺傳基因可以決定紅細(xì)胞表面抗原減弱或缺乏，這些減弱或缺乏的抗原也可以是獲得性的。對(duì)于健康獻(xiàn)血者來(lái)說(shuō)，亞型最可能導(dǎo)致抗原的減弱，而患者則是由于所患疾病。最多的是白血病患者引起的抗原減弱或消失。白血病患者在疾病活動(dòng)期抗原減弱，通常情況下抗原減弱是暫時(shí)的，但是患者在疾病緩解期又會(huì)恢復(fù)回原來(lái)的血型5。為了將抗原減弱與亞型區(qū)別，可以通過(guò)延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間，在4放置后再試驗(yàn)，同時(shí)加做吸收放散，有條件的可以進(jìn)行過(guò)唾液血型物質(zhì)檢測(cè)。懷疑亞型時(shí)，因?yàn)閬喰图t細(xì)胞上H抗原數(shù)目是增多的，正定型可以加做紅細(xì)胞與抗-H、抗-AB抗體反應(yīng)，多數(shù)反應(yīng)比正常同型要強(qiáng)6，反定型加做血清與A1c、A2c細(xì)胞反應(yīng)，用吸收放散試驗(yàn)來(lái)檢測(cè)紅細(xì)胞上是否有弱血型抗原及確定其亞型型別，檢測(cè)唾液血型物質(zhì)有助于ABO血型的準(zhǔn)確定型。此外，卵巢囊腫、胃癌或腸道阻塞的患者，本身血清中會(huì)有大量血型特異性的可溶物質(zhì)產(chǎn)生，能與抗-A抗-B試劑中和，使抗原被封閉，導(dǎo)致定型困難。這時(shí)可以將待檢測(cè)紅細(xì)胞用生理鹽水洗滌三次后重新試驗(yàn)。自免貧、輸血反應(yīng)、新生兒溶血病及服用抗高血壓藥物的患者，紅細(xì)胞由于被抗體致敏，使抗原被封閉，造成ABO正定型的困難，這時(shí)用吸收放散法去除致敏的抗體，然后再重復(fù)試驗(yàn)來(lái)準(zhǔn)確定型。4.2、未知的抗原反應(yīng)導(dǎo)致正反定型不符（1）獲得性A或B抗原 患者紅細(xì)胞與抗-A試劑反應(yīng)，在顯微鏡下觀察到混合視野凝集，Tn抗原活化的紅細(xì)胞，證明有獲得性A抗原。獲得性B抗原的紅細(xì)胞反應(yīng)像AB型，血清內(nèi)有抗B抗體，多為患腸道阻塞和消化道疾病的患者，病情好轉(zhuǎn)時(shí)，獲得性B抗原也隨即消失。獻(xiàn)血者的獲得性B抗原，可能是原患疾病產(chǎn)生的，提倡對(duì)獻(xiàn)血者進(jìn)行健康調(diào)查時(shí)注意胃腸道患病史，避免此類獻(xiàn)血者7。（2）改變的抗原 多凝集細(xì)胞是指紅細(xì)胞能被多數(shù)正常人血清所凝集，這種凝集反應(yīng)叫多凝集反應(yīng)，產(chǎn)生的原因有：T抗原活化（一般是紅細(xì)胞受到細(xì)菌等污染）、Tn抗原活化（與血液學(xué)方面異常有關(guān)如溶血性貧血）、Cad多凝集。相對(duì)應(yīng)的解決辦法是:對(duì)于是由于Tn活化導(dǎo)致的多凝集反應(yīng)，可用1無(wú)花果酶或木瓜酶處理紅細(xì)胞，而T活化的多凝集反應(yīng)，由于其再室溫下反應(yīng)較強(qiáng)，在37下反應(yīng)則較弱，故實(shí)驗(yàn)需在37下進(jìn)行。（3）低頻率的抗原抗體反應(yīng) 抗血清試劑抗-A、抗-B中可能存在低頻率抗體，通常情況下，獻(xiàn)血者或患者紅細(xì)胞很少與抗血清試劑內(nèi)的低頻率抗體反應(yīng)，但在有料想不到的極弱抗原存在時(shí)應(yīng)該考慮低頻率的抗原抗體反應(yīng)。4.3、抗體減弱或缺乏導(dǎo)致ABO正反定型不符抗體的降低或缺乏，可以引起同族凝集素的減弱或缺乏。見(jiàn)于以下幾種情況：（1）嵌合現(xiàn)象 此原因?qū)е碌目贵w缺乏不是很常見(jiàn)。非同卵雙胎的個(gè)體，雙受精引起體內(nèi)都認(rèn)為是自己的兩種種群的紅細(xì)胞終生存在，這些人不會(huì)產(chǎn)生抗-A或抗-B抗體，從而導(dǎo)致正反定型不符。如骨髓移植后或換血治療的患者。（2）丙種球蛋白過(guò)低血癥、丙種球蛋白缺乏血癥 白血病、免疫缺乏性疾病及服用免疫抑制藥物及骨髓移植的病人，由于血漿蛋白質(zhì)中的丙種球蛋白減少?gòu)亩鴮?dǎo)致抗體減少，使正反定型不符。通過(guò)在反定型時(shí)，增加反應(yīng)時(shí)間，加大血清量，在4溫度下放置510min后再進(jìn)行試驗(yàn)來(lái)準(zhǔn)確定型。（3）年齡 正反定型不符情況在新生兒中出現(xiàn)最多。新生兒在出生后才產(chǎn)生IgM的ABO抗體，到3個(gè)月時(shí)才能檢測(cè)出來(lái)，510歲時(shí)抗體數(shù)目最多，隨后就漸漸下降，老年人在6570歲以后，抗體水平最低。所以一般新生兒不做反定型，如果做反定型，可以加大血清量或?qū)嶒?yàn)中使用低離子強(qiáng)度溶液。（4）從正在輸液患者一側(cè)靜脈采集血液標(biāo)本，采集血液的部位不規(guī)范，導(dǎo)致血液被稀釋而抗體反應(yīng)假性減弱8。當(dāng)非AB型病人大量輸注AB型血漿時(shí)，血漿被稀釋,而血漿中的A型B型血型物質(zhì)發(fā)揮其中和作用，使血型抗體減弱，這些都會(huì)導(dǎo)致正反定型不符。4.4、假凝集反應(yīng)或不規(guī)則抗體反應(yīng)導(dǎo)致ABO正反定型不符（1）體內(nèi)冷自身抗體的存在 導(dǎo)致ABO正反定型不符的常見(jiàn)原因是冷自身抗體。冬天溫度低時(shí)，冷抗體對(duì)交叉配血實(shí)驗(yàn)影響最大。健康獻(xiàn)血者體內(nèi)的冷抗體效價(jià)一般不高，且在4溫度以下才會(huì)產(chǎn)生活性。但自免貧、再障、SLE等患者體內(nèi)有病理性自身抗體，這些抗體的效價(jià)很高，在定型時(shí)會(huì)出現(xiàn)全凝集現(xiàn)象。這時(shí)可將血液標(biāo)本放在37下預(yù)溫，用自身紅細(xì)胞反復(fù)吸收血清中的冷抗體，當(dāng)紅細(xì)胞不凝集時(shí)再定型。如果出現(xiàn)標(biāo)本已經(jīng)凝固和效價(jià)過(guò)高的病理性冷自身抗體，這時(shí)可用巰基乙醇處理紅細(xì)胞后再定型9。（2）緡錢狀凝集 又叫錢串狀凝集，是一種假凝集。在健康獻(xiàn)血者做血型定型時(shí)，會(huì)出現(xiàn)血樣管與血袋辨定型不符情況，血樣管使用的是EDTA抗凝劑，它可以阻止補(bǔ)體活化，補(bǔ)體存在時(shí)反定型出現(xiàn)凝集反應(yīng)，而血袋辨使用的是ACD-A抗凝劑，它不能阻止補(bǔ)體活化，當(dāng)補(bǔ)體活化時(shí)會(huì)產(chǎn)生試管內(nèi)溶血，觀察結(jié)果時(shí)，容易將溶血誤判為陰性10，出現(xiàn)定型不符。對(duì)于患者來(lái)說(shuō)，由于各種疾病導(dǎo)致血漿成分異常，如巨球蛋白血癥、多發(fā)性骨髓瘤，淋巴瘤等，血漿擴(kuò)容劑右旋糖酐的使用，這些異常的免疫球蛋白使紅細(xì)胞表面的負(fù)電荷發(fā)生改變，改變了血清蛋白濃度11，都會(huì)有緡錢狀假凝集產(chǎn)生，使血型定型不符。觀察到有緡錢狀凝集時(shí)，加12滴生理鹽水于試管中，假凝集即可清除。（3）未知的種屬抗體及同種抗體 種屬抗體能與紅細(xì)胞上相對(duì)應(yīng)的抗原反應(yīng)，如A2型或A2B型的人體內(nèi)會(huì)產(chǎn)生抗A1抗體，定型時(shí)能與反定型中的A1試劑紅細(xì)胞發(fā)生強(qiáng)烈的凝集反應(yīng)，出現(xiàn)正反定型不符的情況。這時(shí)，要做吸收放散試驗(yàn)來(lái)確定是否存在弱抗原及確定亞型。有些人的血清中除了存在ABO種屬抗體外，還有能與反定型中的試劑紅細(xì)胞發(fā)生反應(yīng)的同種抗體，如反定型中Oc細(xì)胞出現(xiàn)凝集而自身細(xì)胞無(wú)凝集，此時(shí)要用篩選細(xì)胞或譜細(xì)胞對(duì)未知的抗體做抗體篩查與鑒定。三、ABO正反定型不符后果當(dāng)患者輸入不相合的血液時(shí)，會(huì)出現(xiàn)嚴(yán)重的輸血不良反應(yīng)。由于ABO正反定型不符導(dǎo)致定型錯(cuò)誤而輸入ABO血型不合的血液時(shí)，會(huì)出現(xiàn)免疫性溶血反應(yīng)，主要是血管內(nèi)溶血，屬于即發(fā)性輸血反應(yīng)，是臨床上最危險(xiǎn)的12。此時(shí)會(huì)出現(xiàn)血管動(dòng)力障礙、心臟呼吸系統(tǒng)虛脫或彌漫性血管內(nèi)凝血等癥狀，這些癥狀都是致命的。嚴(yán)重的還會(huì)導(dǎo)致腎臟功能的衰竭，引發(fā)系統(tǒng)性高血壓癥及腎血管血栓的形成。輸注血型的不配合的血量決定溶血反應(yīng)的程度，同時(shí)不配合血型及治療時(shí)間的早晚也會(huì)影響反應(yīng)的嚴(yán)重程度13?？梢?jiàn)，ABO血型的準(zhǔn)確定型對(duì)臨床輸血的重要性。四、ABO正反定型技術(shù)發(fā)展到目前為止，血型鑒定工作中常用的方法還是血清學(xué)方法，采用紅細(xì)胞與單克隆或多克隆抗體反應(yīng)來(lái)測(cè)定紅細(xì)胞上的抗原或血清中的抗體，鑒定困難的加做吸收放散唾液血型和不規(guī)則抗體檢測(cè)試驗(yàn)。此方法雖然簡(jiǎn)單快捷但同時(shí)有一定的局限性。Yamamoto在1990年科龍并測(cè)序了人類ABO血型基因，使人們能夠從基