DKK-1與β-catenin在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)關(guān)聯(lián)及臨床意義探究VIP

DKK-1與β-catenin在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)關(guān)聯(lián)及臨床意義探究一、引言1.1研究背景與意義肺癌作為全球范圍內(nèi)發(fā)病率和死亡率極高的惡性腫瘤，嚴(yán)重威脅人類(lèi)健康。據(jù)世界衛(wèi)生組織國(guó)際癌癥研究機(jī)構(gòu)（IARC）發(fā)布的2020年全球癌癥負(fù)擔(dān)數(shù)據(jù)顯示，肺癌新發(fā)病例數(shù)達(dá)220萬(wàn)，死亡病例數(shù)為180萬(wàn)，均位居各類(lèi)癌癥之首。非小細(xì)胞肺癌（Non-SmallCellLungCancer，NSCLC）是肺癌中最常見(jiàn)的類(lèi)型，約占肺癌病例的85%。由于早期NSCLC癥狀隱匿，多數(shù)患者確診時(shí)已處于中晚期，失去了手術(shù)根治的機(jī)會(huì)，5年生存率僅為15%-20%。因此，深入研究NSCLC的發(fā)病機(jī)制，尋找有效的早期診斷標(biāo)志物和治療靶點(diǎn)，對(duì)于提高患者生存率和改善預(yù)后具有至關(guān)重要的意義。DKK-1（Dickkopf-1）是一種分泌型糖蛋白，屬于DKK家族成員。它通過(guò)與相應(yīng)的受體結(jié)合來(lái)調(diào)控細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)傳導(dǎo)，在細(xì)胞的分化、增殖、生存、凋亡、遷移等過(guò)程中發(fā)揮重要作用。在腫瘤發(fā)生方面，DKK-1被認(rèn)為是一種潛在的腫瘤標(biāo)志物。有研究表明，在多種腫瘤組織中，DKK-1的表達(dá)水平與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移及預(yù)后密切相關(guān)。例如，在乳腺癌中，DKK-1的高表達(dá)與腫瘤的侵襲性和不良預(yù)后相關(guān)；在結(jié)直腸癌中，DKK-1的異常表達(dá)參與了腫瘤的轉(zhuǎn)移過(guò)程。然而，DKK-1在NSCLC中的表達(dá)情況及作用機(jī)制尚不完全清楚。β-catenin是一種多功能的蛋白質(zhì)，在細(xì)胞黏附和Wnt信號(hào)通路中起著關(guān)鍵作用。在正常生理狀態(tài)下，β-catenin主要參與細(xì)胞間的黏附連接，維持細(xì)胞的正常結(jié)構(gòu)和功能。當(dāng)Wnt信號(hào)通路激活時(shí)，β-catenin會(huì)在細(xì)胞質(zhì)中積累，并進(jìn)入細(xì)胞核與轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合，啟動(dòng)相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄，從而調(diào)控細(xì)胞的增殖、分化和遷移等過(guò)程。在腫瘤發(fā)生過(guò)程中，β-catenin的異常激活或表達(dá)失調(diào)與多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。已有研究證實(shí)，在NSCLC組織中，β-catenin的異常表達(dá)與腫瘤的分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及患者預(yù)后相關(guān)。研究DKK-1和β-catenin在NSCLC中的表達(dá)及其相關(guān)性，有助于深入了解NSCLC的發(fā)病機(jī)制。通過(guò)揭示二者在NSCLC發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中的作用及相互關(guān)系，有望為NSCLC的早期診斷提供新的標(biāo)志物。例如，若發(fā)現(xiàn)DKK-1和β-catenin的異常表達(dá)與NSCLC的早期階段密切相關(guān)，則可將其作為早期診斷的指標(biāo)，提高早期診斷率。對(duì)于NSCLC的治療，明確二者的作用機(jī)制及相關(guān)性，可為開(kāi)發(fā)新的治療靶點(diǎn)提供理論依據(jù)。如針對(duì)DKK-1或β-catenin相關(guān)的信號(hào)通路進(jìn)行干預(yù)，可能為NSCLC患者提供更有效的治療方法，改善患者的預(yù)后，提高其生存質(zhì)量。1.2國(guó)內(nèi)外研究現(xiàn)狀在國(guó)外，關(guān)于DKK-1在非小細(xì)胞肺癌中的研究開(kāi)展較早。一些研究通過(guò)對(duì)大量NSCLC患者的組織樣本進(jìn)行檢測(cè)分析，發(fā)現(xiàn)DKK-1在NSCLC組織中的表達(dá)水平與腫瘤的臨床分期密切相關(guān)。在臨床分期較晚的NSCLC患者中，DKK-1的表達(dá)明顯升高，這表明DKK-1可能參與了NSCLC的進(jìn)展過(guò)程。部分研究還發(fā)現(xiàn)，DKK-1在NSCLC患者的血清中也有異常表達(dá)，且血清中DKK-1的水平與腫瘤的大小、轉(zhuǎn)移情況相關(guān)，提示其在NSCLC的診斷和病情監(jiān)測(cè)方面具有潛在價(jià)值。關(guān)于β-catenin在NSCLC中的研究，國(guó)外學(xué)者通過(guò)免疫組化等技術(shù)深入探究其表達(dá)與腫瘤生物學(xué)行為的關(guān)系。研究結(jié)果顯示，β-catenin的異常表達(dá)在NSCLC中較為常見(jiàn)，且與腫瘤的低分化程度相關(guān)。低分化的NSCLC組織中，β-catenin呈現(xiàn)高表達(dá)狀態(tài)，這可能影響腫瘤細(xì)胞的分化進(jìn)程，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞惡性程度增加。β-catenin的表達(dá)還與NSCLC患者的不良預(yù)后相關(guān)，高表達(dá)β-catenin的患者生存期相對(duì)較短，復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)較高。在DKK-1和β-catenin在NSCLC中的相關(guān)性研究方面，國(guó)外有研究利用細(xì)胞實(shí)驗(yàn)和動(dòng)物模型，初步探討了二者在信號(hào)通路層面的聯(lián)系。研究發(fā)現(xiàn)，DKK-1可能通過(guò)調(diào)節(jié)Wnt信號(hào)通路，間接影響β-catenin的表達(dá)和活性。在一些NSCLC細(xì)胞系中，抑制DKK-1的表達(dá)后，β-catenin的核轉(zhuǎn)位增加，下游靶基因的表達(dá)也發(fā)生改變，提示二者在NSCLC的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中存在相互作用的機(jī)制。國(guó)內(nèi)對(duì)于DKK-1和β-catenin在NSCLC中的研究也取得了一系列成果。在DKK-1的研究中，有學(xué)者對(duì)不同病理類(lèi)型的NSCLC組織進(jìn)行檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)DKK-1在肺腺癌和肺鱗癌中的表達(dá)存在差異，在肺腺癌中的陽(yáng)性表達(dá)率相對(duì)較高，這可能為不同病理類(lèi)型NSCLC的診斷和治療提供新的思路。也有研究關(guān)注DKK-1與NSCLC患者預(yù)后的關(guān)系，通過(guò)對(duì)患者進(jìn)行長(zhǎng)期隨訪(fǎng)，發(fā)現(xiàn)DKK-1高表達(dá)的患者無(wú)病生存期較短，預(yù)后較差，進(jìn)一步證實(shí)了DKK-1在NSCLC預(yù)后評(píng)估中的重要性。在β-catenin的研究方面，國(guó)內(nèi)研究人員通過(guò)對(duì)大量NSCLC病例的分析，發(fā)現(xiàn)β-catenin的表達(dá)與NSCLC的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的NSCLC患者，其腫瘤組織中β-catenin的陽(yáng)性表達(dá)率顯著高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者，表明β-catenin可能在NSCLC的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移過(guò)程中發(fā)揮關(guān)鍵作用。一些研究還探討了β-catenin與NSCLC患者對(duì)化療藥物敏感性的關(guān)系，發(fā)現(xiàn)β-catenin高表達(dá)的患者對(duì)某些化療藥物的敏感性較低，這為NSCLC的個(gè)體化治療提供了參考依據(jù)。關(guān)于二者相關(guān)性的研究，國(guó)內(nèi)有研究采用免疫組化和分子生物學(xué)技術(shù)，檢測(cè)NSCLC組織中DKK-1和β-catenin的表達(dá)，并分析其相關(guān)性。結(jié)果表明，在NSCLC中，DKK-1和β-catenin的表達(dá)存在顯著的相關(guān)性，二者可能通過(guò)共同參與Wnt信號(hào)通路等機(jī)制，協(xié)同促進(jìn)NSCLC的發(fā)生、發(fā)展。盡管?chē)?guó)內(nèi)外在DKK-1和β-catenin在NSCLC中的表達(dá)及相關(guān)性研究方面取得了一定進(jìn)展，但仍存在一些不足之處。目前對(duì)于二者在NSCLC中的具體作用機(jī)制尚未完全明確，尤其是在信號(hào)通路的上下游關(guān)系及其他相關(guān)分子的參與方面，還需要進(jìn)一步深入研究。不同研究之間的結(jié)果存在一定差異，可能與研究對(duì)象、檢測(cè)方法和樣本量等因素有關(guān)，這也需要后續(xù)研究進(jìn)行更大樣本量、更標(biāo)準(zhǔn)化的驗(yàn)證。1.3研究目標(biāo)與方法本研究旨在全面、深入地探究DKK-1和β-catenin在非小細(xì)胞肺癌（NSCLC）組織中的表達(dá)水平，明確二者表達(dá)水平之間的相關(guān)性，為揭示NSCLC的發(fā)病機(jī)制提供理論依據(jù)。同時(shí)，分析DKK-1和β-catenin的表達(dá)與NSCLC患者臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系，期望為NSCLC的早期診斷、病情監(jiān)測(cè)和預(yù)后評(píng)估提供新的潛在生物標(biāo)志物和治療靶點(diǎn)，進(jìn)而指導(dǎo)臨床診療工作，提高NSCLC患者的生存率和生活質(zhì)量。在研究方法上，本研究將收集一定數(shù)量的NSCLC患者的腫瘤組織及癌旁正常組織標(biāo)本。利用免疫組織化學(xué)染色技術(shù)，檢測(cè)DKK-1和β-catenin在NSCLC組織和癌旁組織中的表達(dá)情況，通過(guò)顯微鏡觀(guān)察染色結(jié)果，判斷二者的表達(dá)定位和表達(dá)強(qiáng)度，從而分析其在不同組織中的表達(dá)差異。運(yùn)用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（qRT-PCR）技術(shù)，測(cè)定組織中DKK-1和β-catenin的mRNA表達(dá)水平，通過(guò)對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物的定量分析，明確二者在基因轉(zhuǎn)錄水平的表達(dá)變化，為深入研究其表達(dá)調(diào)控機(jī)制提供數(shù)據(jù)支持。采用蛋白質(zhì)免疫印跡法（Westernblot），檢測(cè)組織中DKK-1和β-catenin的蛋白表達(dá)量，通過(guò)對(duì)蛋白條帶的灰度分析，精確測(cè)定其蛋白表達(dá)水平，進(jìn)一步驗(yàn)證免疫組化和qRT-PCR的檢測(cè)結(jié)果。還將對(duì)收集的患者臨床病理資料進(jìn)行詳細(xì)分析，包括患者的年齡、性別、腫瘤大小、病理類(lèi)型、分化程度、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況等，運(yùn)用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法，分析DKK-1和β-catenin的表達(dá)與這些臨床病理特征之間的相關(guān)性，從而明確二者在NSCLC發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中的作用。二、非小細(xì)胞肺癌概述2.1定義與分類(lèi)非小細(xì)胞肺癌（Non-SmallCellLungCancer，NSCLC）是肺癌中最為常見(jiàn)的類(lèi)型，約占肺癌病例總數(shù)的85%。從定義上看，它是相對(duì)于小細(xì)胞肺癌而言，是除小細(xì)胞肺癌之外的一大類(lèi)肺癌的統(tǒng)稱(chēng)。這一分類(lèi)主要基于腫瘤細(xì)胞的形態(tài)學(xué)、生物學(xué)特性以及臨床治療反應(yīng)等多方面因素。在顯微鏡下觀(guān)察，NSCLC的癌細(xì)胞體積相對(duì)較大，形態(tài)較為多樣，不像小細(xì)胞肺癌的癌細(xì)胞那樣呈現(xiàn)出明顯的小而規(guī)則的形態(tài)。在生物學(xué)行為上，NSCLC的生長(zhǎng)速度相對(duì)較為緩慢，轉(zhuǎn)移發(fā)生的時(shí)間相對(duì)較晚；而小細(xì)胞肺癌生長(zhǎng)迅速，早期就容易發(fā)生廣泛轉(zhuǎn)移。在臨床治療方面，NSCLC和小細(xì)胞肺癌的治療策略存在顯著差異，NSCLC對(duì)手術(shù)、化療、放療以及靶向治療、免疫治療等多種治療手段均有不同程度的響應(yīng)，而小細(xì)胞肺癌主要以化療和放療為主，手術(shù)治療的機(jī)會(huì)相對(duì)較少。NSCLC主要包括以下幾種病理類(lèi)型：腺癌：是NSCLC中最常見(jiàn)的類(lèi)型，在全球范圍內(nèi)，尤其是在不吸煙的人群中，腺癌的發(fā)病率呈上升趨勢(shì)。在我國(guó)，腺癌也已成為NSCLC中占比最高的病理類(lèi)型。腺癌主要起源于支氣管黏液腺，可發(fā)生于細(xì)小支氣管或中央氣道。其癌細(xì)胞常具有腺樣結(jié)構(gòu)或分泌黏液的特性。根據(jù)國(guó)際肺癌研究協(xié)會(huì)（IASLC）、美國(guó)胸科學(xué)會(huì)（ATS）和歐洲呼吸學(xué)會(huì)（ERS）聯(lián)合發(fā)布的肺腺癌分類(lèi)標(biāo)準(zhǔn)，腺癌可進(jìn)一步分為原位腺癌、微浸潤(rùn)性腺癌、浸潤(rùn)性腺癌、浸潤(rùn)性腺癌變異型等亞型。原位腺癌是指癌細(xì)胞局限于上皮內(nèi)，未突破基底膜，屬于早期病變，預(yù)后良好；微浸潤(rùn)性腺癌則是癌細(xì)胞突破基底膜，但浸潤(rùn)范圍較小，一般直徑不超過(guò)5mm，這類(lèi)患者通過(guò)手術(shù)切除往往也能獲得較好的治療效果；浸潤(rùn)性腺癌是最為常見(jiàn)的亞型，癌細(xì)胞已發(fā)生明顯的浸潤(rùn)生長(zhǎng)，可侵犯周?chē)M織和血管，其預(yù)后相對(duì)較差；浸潤(rùn)性腺癌變異型包括貼壁為主型、腺泡為主型、乳頭為主型、微乳頭為主型和實(shí)體伴黏液形成型等，不同變異型的生物學(xué)行為和預(yù)后也有所不同，例如微乳頭為主型的腺癌惡性程度較高，容易發(fā)生轉(zhuǎn)移，預(yù)后相對(duì)較差。在影像學(xué)上，腺癌常表現(xiàn)為肺部的磨玻璃結(jié)節(jié)或?qū)嵭越Y(jié)節(jié)，尤其是磨玻璃結(jié)節(jié)在早期腺癌中較為常見(jiàn)，這對(duì)于早期診斷具有重要提示意義。鱗狀細(xì)胞癌：曾是NSCLC中較為常見(jiàn)的類(lèi)型，尤其是在吸煙人群中。近年來(lái)，隨著吸煙率的下降以及環(huán)境因素的變化，其發(fā)病率有所降低。鱗狀細(xì)胞癌常好發(fā)于老年吸煙男性，多起源于較大的支氣管，腫瘤生長(zhǎng)相對(duì)緩慢，轉(zhuǎn)移較晚，手術(shù)切除機(jī)會(huì)相對(duì)較多，5年生存率相對(duì)較高，但對(duì)化療和放療的敏感性不如小細(xì)胞肺癌。鱗狀細(xì)胞癌可分為角化型鱗狀上皮細(xì)胞癌、非角化型鱗狀上皮細(xì)胞癌、基底細(xì)胞樣型鱗狀上皮細(xì)胞癌等亞型。角化型鱗狀細(xì)胞癌在顯微鏡下可見(jiàn)癌細(xì)胞有角化珠形成，細(xì)胞間橋明顯；非角化型鱗狀細(xì)胞癌則無(wú)明顯的角化現(xiàn)象；基底細(xì)胞樣型鱗狀上皮細(xì)胞癌的癌細(xì)胞較小，呈基底細(xì)胞樣，常伴有壞死。在影像學(xué)上，鱗狀細(xì)胞癌多表現(xiàn)為中央型肺癌，可伴有肺門(mén)淋巴結(jié)腫大，腫瘤常與支氣管關(guān)系密切，可導(dǎo)致支氣管狹窄、阻塞，引起阻塞性肺炎、肺不張等并發(fā)癥。大細(xì)胞癌：是一種未分化的非小細(xì)胞癌，較為少見(jiàn)，占肺癌的10％以下。大細(xì)胞癌的癌細(xì)胞體積大，細(xì)胞核大且不規(guī)則，核仁明顯，胞質(zhì)豐富，在細(xì)胞學(xué)和組織結(jié)構(gòu)及免疫表型等方面缺乏小細(xì)胞癌、腺癌或鱗癌的特征。大細(xì)胞癌生長(zhǎng)迅速，早期易出現(xiàn)淋巴和血行轉(zhuǎn)移，因此治療關(guān)鍵在于早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早治療。大細(xì)胞癌可發(fā)生于肺的任何部位，但以肺周邊區(qū)域較為多見(jiàn)。在臨床治療上，由于其對(duì)化療和放療的敏感性相對(duì)較低，手術(shù)切除是主要的治療手段，但總體預(yù)后較差。在影像學(xué)上，大細(xì)胞癌常表現(xiàn)為較大的實(shí)性腫塊，邊界相對(duì)清楚，但可伴有分葉、毛刺等惡性腫瘤的特征。其他類(lèi)型：除了上述三種主要類(lèi)型外，NSCLC還包括腺鱗癌、肉瘤樣癌、淋巴上皮瘤樣癌、NUT癌、唾液腺型癌等較為少見(jiàn)的類(lèi)型。腺鱗癌是指腫瘤組織中同時(shí)含有腺癌和鱗癌兩種成分，其生物學(xué)行為和預(yù)后與兩種成分的比例、分化程度等因素有關(guān)；肉瘤樣癌具有肉瘤樣的形態(tài)學(xué)特征，惡性程度高，預(yù)后差；淋巴上皮瘤樣癌與EB病毒感染密切相關(guān)，在東南亞地區(qū)相對(duì)較為多見(jiàn)，其對(duì)放療較為敏感；NUT癌是一種罕見(jiàn)的高度惡性腫瘤，常伴有NUT基因的重排；唾液腺型癌包括黏液表皮樣癌、腺樣囊性癌等，這些類(lèi)型在肺癌中極為少見(jiàn)，其生物學(xué)行為和治療方法與唾液腺來(lái)源的腫瘤有一定相似性。2.2發(fā)病現(xiàn)狀與趨勢(shì)從全球范圍來(lái)看，肺癌的發(fā)病率和死亡率一直居高不下，嚴(yán)重威脅著人類(lèi)的生命健康。據(jù)世界衛(wèi)生組織國(guó)際癌癥研究機(jī)構(gòu)（IARC）發(fā)布的2020年全球癌癥數(shù)據(jù)，肺癌新發(fā)病例達(dá)220萬(wàn)，占所有癌癥新發(fā)病例的11.4%，位居各類(lèi)癌癥發(fā)病率的第二位；死亡病例為180萬(wàn)，占所有癌癥死亡病例的18%，在癌癥死亡率排行榜上位列第一。其中，非小細(xì)胞肺癌（NSCLC）作為肺癌中最主要的類(lèi)型，約占肺癌病例總數(shù)的85%。在過(guò)去的幾十年里，全球NSCLC的發(fā)病率呈現(xiàn)出一定的變化趨勢(shì)。在一些發(fā)達(dá)國(guó)家，由于控?zé)煷胧┑挠行?shí)施以及對(duì)環(huán)境因素的積極治理，肺癌的總體發(fā)病率逐漸趨于穩(wěn)定或略有下降。以美國(guó)為例，自20世紀(jì)90年代以來(lái)，男性肺癌發(fā)病率每年以約2%的速度下降，女性肺癌發(fā)病率在2005年左右達(dá)到峰值后也開(kāi)始逐漸下降。然而，在發(fā)展中國(guó)家，隨著工業(yè)化進(jìn)程的加速、城市化規(guī)模的擴(kuò)大以及人口老齡化的加劇，NSCLC的發(fā)病率卻呈現(xiàn)出快速上升的態(tài)勢(shì)。例如，在印度、巴西等國(guó)家，NSCLC的發(fā)病率正以每年3%-5%的速度增長(zhǎng)。在我國(guó)，肺癌同樣是發(fā)病率和死亡率最高的惡性腫瘤。2022年，中國(guó)癌癥新發(fā)病例數(shù)為482.47萬(wàn)，其中肺癌新發(fā)病例達(dá)106.06萬(wàn)，發(fā)病率位居首位；同年癌癥死亡總?cè)藬?shù)為257.42萬(wàn)，肺癌死亡人數(shù)高達(dá)73.33萬(wàn)，亦居首位。在肺癌患者中，NSCLC的占比高達(dá)90.34%。從發(fā)病趨勢(shì)來(lái)看，我國(guó)NSCLC的發(fā)病率總體上仍處于上升階段。根據(jù)國(guó)家癌癥中心發(fā)布的數(shù)據(jù)，2010-2019年期間，我國(guó)NSCLC的發(fā)病率以每年2.3%的速度增長(zhǎng)。其中，城市地區(qū)的發(fā)病率略高于農(nóng)村地區(qū)，男性的發(fā)病率顯著高于女性。從年齡分布來(lái)看，NSCLC的發(fā)病率隨著年齡的增長(zhǎng)而逐漸升高，尤其是在50歲以上的人群中，發(fā)病率呈現(xiàn)出明顯的上升趨勢(shì)。在40歲以下的人群中，NSCLC的發(fā)病率相對(duì)較低，但近年來(lái)也有逐漸上升的趨勢(shì)，這可能與環(huán)境污染、不良生活方式以及遺傳因素等有關(guān)。在死亡率方面，全球NSCLC的死亡率也一直處于較高水平。由于NSCLC早期癥狀不明顯，多數(shù)患者確診時(shí)已處于中晚期，失去了手術(shù)根治的最佳時(shí)機(jī)，導(dǎo)致5年生存率較低，僅為15%-20%。在我國(guó)，NSCLC的死亡率同樣不容樂(lè)觀(guān)，約70%的患者在確診后1年內(nèi)死亡。盡管近年來(lái)隨著醫(yī)療技術(shù)的不斷進(jìn)步，如手術(shù)方式的改進(jìn)、化療藥物的更新、靶向治療和免疫治療等新型治療手段的出現(xiàn)，NSCLC患者的生存率有了一定程度的提高，但總體死亡率仍然較高，對(duì)我國(guó)居民的健康構(gòu)成了巨大威脅。未來(lái)，隨著全球人口老齡化的加劇、吸煙率的變化以及環(huán)境因素的影響，NSCLC的發(fā)病趨勢(shì)仍存在一定的不確定性。在發(fā)達(dá)國(guó)家，雖然控?zé)煷胧┤〉昧艘欢ǔ尚?，但吸煙人?shù)仍然較多，且二手煙、環(huán)境污染等因素仍然存在，NSCLC的發(fā)病率可能會(huì)在一定程度上繼續(xù)下降，但下降速度可能會(huì)逐漸放緩。在發(fā)展中國(guó)家，由于經(jīng)濟(jì)的快速發(fā)展、工業(yè)化進(jìn)程的加速以及人口老齡化的加劇，NSCLC的發(fā)病率預(yù)計(jì)仍將持續(xù)上升，尤其是在一些環(huán)境污染嚴(yán)重、醫(yī)療資源相對(duì)匱乏的地區(qū)，發(fā)病率可能會(huì)上升得更為明顯。為了有效控制NSCLC的發(fā)病率和死亡率，全球各國(guó)需要加強(qiáng)控?zé)煷胧?，改善環(huán)境質(zhì)量，提高公眾的健康意識(shí)，加強(qiáng)早期篩查和診斷技術(shù)的研發(fā)與應(yīng)用，以及推動(dòng)新型治療手段的創(chuàng)新和普及。2.3治療手段與挑戰(zhàn)手術(shù)是早期非小細(xì)胞肺癌（NSCLC）的主要治療手段，旨在通過(guò)切除腫瘤組織來(lái)達(dá)到根治的目的。對(duì)于I期和部分II期NSCLC患者，手術(shù)切除是首選的治療方法，包括肺葉切除術(shù)、楔形切除術(shù)、肺段切除術(shù)以及全肺切除術(shù)等。肺葉切除術(shù)是最常用的手術(shù)方式，它能夠完整地切除包含腫瘤的肺葉，同時(shí)清掃周?chē)牧馨徒Y(jié)，對(duì)于腫瘤較大或侵犯范圍較廣的患者較為適用。楔形切除術(shù)則適用于腫瘤較小、位于肺周邊的患者，它通過(guò)切除腫瘤及其周?chē)牟糠终７谓M織來(lái)保留更多的肺功能。肺段切除術(shù)是將腫瘤所在的肺段切除，相較于肺葉切除術(shù)，它能更好地保留肺功能，尤其適用于一些心肺功能較差的患者。全肺切除術(shù)一般用于腫瘤位于肺門(mén)附近，侵犯范圍廣泛，無(wú)法進(jìn)行局部切除的患者，但該手術(shù)對(duì)患者的身體創(chuàng)傷較大，術(shù)后并發(fā)癥較多，會(huì)嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量。盡管手術(shù)治療能夠使部分早期NSCLC患者獲得長(zhǎng)期生存，但仍有部分患者會(huì)出現(xiàn)術(shù)后復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移。據(jù)統(tǒng)計(jì)，I期NSCLC患者術(shù)后5年生存率約為70%-90%，II期患者的5年生存率則降至40%-60%。術(shù)后復(fù)發(fā)的原因主要包括手術(shù)切緣殘留癌細(xì)胞、微轉(zhuǎn)移灶未被徹底清除以及腫瘤的異質(zhì)性等。放射治療利用高能射線(xiàn)，如X射線(xiàn)、γ射線(xiàn)等，來(lái)破壞癌細(xì)胞的DNA，從而抑制癌細(xì)胞的生長(zhǎng)和分裂，達(dá)到治療腫瘤的目的。對(duì)于無(wú)法手術(shù)切除的局部晚期NSCLC患者，放療是重要的治療手段之一，可以單獨(dú)使用，也可以與化療聯(lián)合應(yīng)用。立體定向放射治療（SBRT）是一種高精度的放療技術(shù)，它能夠?qū)⒏邉┝康纳渚€(xiàn)集中照射在腫瘤部位，同時(shí)最大限度地減少對(duì)周?chē)＝M織的損傷。SBRT適用于早期NSCLC患者，尤其是那些因心肺功能差等原因無(wú)法接受手術(shù)治療的患者，其治療效果與手術(shù)相當(dāng)，5年生存率可達(dá)50%-70%。對(duì)于晚期NSCLC患者，放療主要用于緩解癥狀，如減輕骨轉(zhuǎn)移引起的疼痛、腦轉(zhuǎn)移導(dǎo)致的神經(jīng)系統(tǒng)癥狀等，提高患者的生活質(zhì)量。然而，放療也存在一定的局限性，它可能會(huì)引起放射性肺炎、食管炎、骨髓抑制等不良反應(yīng)，影響患者的治療耐受性和生活質(zhì)量。此外，部分腫瘤細(xì)胞對(duì)放療不敏感，導(dǎo)致放療效果不佳，且放療后腫瘤復(fù)發(fā)的情況也較為常見(jiàn)?；熗ㄟ^(guò)使用化學(xué)藥物來(lái)抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)、分裂和增殖，從而達(dá)到治療腫瘤的目的。對(duì)于NSCLC患者，化療是一種重要的全身治療手段，適用于晚期無(wú)法手術(shù)切除的患者、術(shù)后輔助治療以及新輔助治療。在晚期NSCLC的治療中，化療可以延長(zhǎng)患者的生存期，緩解癥狀，提高生活質(zhì)量。常用的化療藥物包括鉑類(lèi)（順鉑、卡鉑）、紫杉醇、多西他賽、吉西他濱、培美曲塞等。這些藥物通過(guò)不同的作用機(jī)制來(lái)干擾腫瘤細(xì)胞的代謝和增殖過(guò)程，如鉑類(lèi)藥物可以與腫瘤細(xì)胞的DNA結(jié)合，破壞其結(jié)構(gòu)和功能；紫杉醇則可以抑制微管的解聚，影響細(xì)胞的有絲分裂。然而，化療藥物在殺死腫瘤細(xì)胞的同時(shí)，也會(huì)對(duì)正常細(xì)胞造成損害，導(dǎo)致一系列不良反應(yīng)，如惡心、嘔吐、脫發(fā)、骨髓抑制、肝腎功能損害等。長(zhǎng)期化療還可能導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物產(chǎn)生耐藥性，使得化療效果逐漸降低，這也是化療面臨的主要挑戰(zhàn)之一。據(jù)統(tǒng)計(jì)，晚期NSCLC患者單純化療的中位生存期一般為8-12個(gè)月，5年生存率僅為5%-15%。靶向治療是針對(duì)腫瘤細(xì)胞中特定的分子靶點(diǎn)進(jìn)行干預(yù)的治療方法，具有高度的特異性和有效性。在NSCLC中，常見(jiàn)的靶向治療靶點(diǎn)包括表皮生長(zhǎng)因子受體（EGFR）、間變性淋巴瘤激酶（ALK）、ROS1融合基因、BRAF突變、KRAS突變、MET14外顯子跳躍突變、RET融合等。針對(duì)這些靶點(diǎn)，已經(jīng)研發(fā)出了一系列的靶向藥物。以EGFR突變?yōu)槔瑏喼轓SCLC患者中EGFR突變率較高，可達(dá)30%-50%。第一代EGFR酪氨酸激酶抑制劑（TKI）如吉非替尼、厄洛替尼等，能夠與EGFR的ATP結(jié)合位點(diǎn)競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合，抑制EGFR的磷酸化，從而阻斷下游信號(hào)通路的激活，抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)和增殖。臨床研究表明，對(duì)于EGFR突變陽(yáng)性的NSCLC患者，使用第一代EGFR-TKI治療的客觀(guān)緩解率可達(dá)70%-80%，中位無(wú)進(jìn)展生存期為9-12個(gè)月。然而，大多數(shù)患者在使用第一代EGFR-TKI治療1年左右會(huì)出現(xiàn)耐藥，主要原因是EGFR的二次突變，如T790M突變，約占耐藥患者的50%-60%。針對(duì)T790M突變，第二代和第三代EGFR-TKI應(yīng)運(yùn)而生。第二代EGFR-TKI如阿法替尼、達(dá)可替尼等，與EGFR的結(jié)合更為緊密，且不可逆，對(duì)部分第一代EGFR-TKI耐藥的患者仍有一定療效。第三代EGFR-TKI如奧希替尼，不僅對(duì)T790M突變具有高度活性，而且對(duì)腦轉(zhuǎn)移患者也有較好的療效，其客觀(guān)緩解率可達(dá)70%-80%，中位無(wú)進(jìn)展生存期超過(guò)18個(gè)月。對(duì)于A(yíng)LK融合陽(yáng)性的NSCLC患者，ALK抑制劑如克唑替尼、塞瑞替尼、阿來(lái)替尼、恩沙替尼、布格替尼、洛拉替尼等也取得了顯著的治療效果?？诉蛱婺崾堑谝淮鶤LK抑制劑，能夠抑制ALK及其下游信號(hào)通路的激活，使ALK融合陽(yáng)性NSCLC患者的客觀(guān)緩解率達(dá)到60%-70%，中位無(wú)進(jìn)展生存期為10-12個(gè)月。但克唑替尼也會(huì)出現(xiàn)耐藥，主要機(jī)制包括ALK激酶區(qū)的二次突變、旁路激活等。第二代和第三代ALK抑制劑對(duì)克唑替尼耐藥的患者顯示出更好的療效，如阿來(lái)替尼的中位無(wú)進(jìn)展生存期超過(guò)30個(gè)月，且對(duì)腦轉(zhuǎn)移的控制效果優(yōu)于克唑替尼。盡管靶向治療為NSCLC患者帶來(lái)了顯著的生存獲益，但耐藥問(wèn)題仍然是制約其療效的關(guān)鍵因素。除了上述提到的靶點(diǎn)突變導(dǎo)致的耐藥外，還可能存在腫瘤細(xì)胞的異質(zhì)性、腫瘤微環(huán)境的改變等因素導(dǎo)致的耐藥。例如，在部分患者中，腫瘤細(xì)胞可能通過(guò)激活其他信號(hào)通路來(lái)繞過(guò)靶向藥物的作用，從而導(dǎo)致耐藥的發(fā)生。此外，靶向治療的費(fèi)用相對(duì)較高，也限制了其在一些患者中的應(yīng)用。三、DKK-1與β-catenin的生物學(xué)特性3.1DKK-1的結(jié)構(gòu)與功能DKK-1由DKK1基因編碼，該基因位于人類(lèi)染色體10q11.2，長(zhǎng)度約為3.5kb。其編碼產(chǎn)物是一種分泌型糖蛋白，由約266個(gè)氨基酸組成，分子量約為28.7KDa。從結(jié)構(gòu)上看，DKK-1包含一個(gè)N端的信號(hào)序列，這一序列由20-30個(gè)氨基酸組成，主要負(fù)責(zé)引導(dǎo)DKK-1肽鏈穿越粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜，并介導(dǎo)其分泌至細(xì)胞外，使其能夠在細(xì)胞間發(fā)揮作用。DKK-1含有兩個(gè)保守的富半胱氨酸區(qū)域，即Dkk_N和輔脂肪酶折疊區(qū)域。其中，輔脂肪酶折疊區(qū)域是由多個(gè)短的β折疊和二硫鍵構(gòu)成的類(lèi)指結(jié)構(gòu)，它在DKK-1發(fā)揮功能的過(guò)程中起著關(guān)鍵作用。這一區(qū)域可與Wnt受體LRP5/6及另一類(lèi)穿膜蛋白Kremen1/2結(jié)合形成三聚體，隨后誘導(dǎo)LRP5/6的內(nèi)吞，從而抑制Wnt信號(hào)通路，因此是DKK-1蛋白發(fā)揮功能的重要平臺(tái)。Dkk_N區(qū)域則是一個(gè)包含保守半胱氨酸序列的富半胱氨酸區(qū)域，它在Dickkopf蛋白中位置的變化不僅是Dickkopf家族不同成員相互區(qū)別的標(biāo)志，而且是調(diào)節(jié)Dickkopf家族蛋白對(duì)Wnt信號(hào)通路正向或負(fù)向調(diào)控的關(guān)鍵結(jié)構(gòu)。在DKK-1靠近蛋白質(zhì)C端的位置，還存在一個(gè)N-糖基化位點(diǎn)，糖基化修飾可能會(huì)影響DKK-1的穩(wěn)定性、活性以及與其他分子的相互作用。DKK-1的主要功能是作為Wnt信號(hào)通路的拮抗劑，通過(guò)抑制Wnt信號(hào)通路來(lái)調(diào)節(jié)細(xì)胞的多種活動(dòng)。在正常生理狀態(tài)下，Wnt信號(hào)通路在細(xì)胞的增殖、分化、遷移、凋亡以及組織穩(wěn)態(tài)維持等過(guò)程中發(fā)揮著重要作用。當(dāng)Wnt信號(hào)通路激活時(shí)，細(xì)胞外的Wnt蛋白會(huì)與細(xì)胞膜上的受體Frizzled以及共受體LRP5/6結(jié)合，進(jìn)而激活下游的一系列信號(hào)分子，導(dǎo)致β-catenin在細(xì)胞質(zhì)中積累，并進(jìn)入細(xì)胞核與轉(zhuǎn)錄因子TCF/LEF結(jié)合，啟動(dòng)相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄，促進(jìn)細(xì)胞的增殖和分化。DKK-1能夠與Wnt蛋白競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合LRP5/6受體，阻止Wnt信號(hào)的傳遞，從而抑制β-catenin的核轉(zhuǎn)位和活化，激活GSK-3β依賴(lài)的無(wú)活性的β-catenin的降解過(guò)程，使得β-catenin無(wú)法進(jìn)入細(xì)胞核啟動(dòng)基因轉(zhuǎn)錄，進(jìn)而抑制細(xì)胞的增殖和分化。在胚胎發(fā)育過(guò)程中，DKK-1對(duì)體軸形成和器官發(fā)生起著關(guān)鍵的調(diào)節(jié)作用。例如，在神經(jīng)管形成過(guò)程中，DKK-1的表達(dá)模式會(huì)影響神經(jīng)板的折疊和神經(jīng)管的閉合。它通過(guò)與Wnt信號(hào)通路相互拮抗，精確地控制細(xì)胞的分化和組織的形態(tài)發(fā)生，確保胚胎各器官的正常發(fā)育。在造血干細(xì)胞分化過(guò)程中，DKK-1的表達(dá)水平變化可以調(diào)節(jié)造血干細(xì)胞向不同血細(xì)胞系的分化方向，引導(dǎo)細(xì)胞向特定的細(xì)胞類(lèi)型分化，維持造血系統(tǒng)的正常功能。在骨代謝方面，DKK-1是骨形成的重要負(fù)調(diào)節(jié)因子。它可以抑制成骨細(xì)胞的分化和功能，減少骨基質(zhì)的合成和礦化，從而影響骨骼的生長(zhǎng)和發(fā)育。在骨質(zhì)疏松癥患者中，DKK-1的表達(dá)通常會(huì)升高，這會(huì)進(jìn)一步抑制骨形成，加速骨質(zhì)流失，導(dǎo)致骨密度降低和骨骼結(jié)構(gòu)的異常。3.2β-catenin的結(jié)構(gòu)與功能β-catenin基因位于人類(lèi)染色體3p21.3，編碼的β-catenin蛋白由781個(gè)氨基酸組成，分子量約為88kDa。從結(jié)構(gòu)上看，β-catenin蛋白包含多個(gè)功能結(jié)構(gòu)域。其N(xiāo)端含有多個(gè)絲氨酸和蘇氨酸殘基，這些位點(diǎn)是磷酸化修飾的主要區(qū)域，對(duì)β-catenin的穩(wěn)定性和功能起著重要的調(diào)節(jié)作用。當(dāng)β-catenin在細(xì)胞質(zhì)中處于非激活狀態(tài)時(shí)，其N(xiāo)端的絲氨酸和蘇氨酸殘基會(huì)被糖原合成酶激酶-3β（GSK-3β）磷酸化，磷酸化后的β-catenin會(huì)被泛素化修飾，進(jìn)而被蛋白酶體降解。中間區(qū)域是由12個(gè)armadillo重復(fù)序列組成的armadillo結(jié)構(gòu)域，該結(jié)構(gòu)域呈螺旋狀，是β-catenin與其他蛋白相互作用的關(guān)鍵區(qū)域，它可以與E-cadherin、α-catenin等結(jié)合，參與細(xì)胞間的黏附連接，維持細(xì)胞的正常結(jié)構(gòu)和功能；還能與轉(zhuǎn)錄因子TCF/LEF家族成員結(jié)合，在Wnt信號(hào)通路激活時(shí)，介導(dǎo)β-catenin進(jìn)入細(xì)胞核，啟動(dòng)下游靶基因的轉(zhuǎn)錄。β-catenin的C端包含一個(gè)轉(zhuǎn)錄激活結(jié)構(gòu)域，該結(jié)構(gòu)域含有多個(gè)保守的氨基酸序列，在β-catenin進(jìn)入細(xì)胞核后，與轉(zhuǎn)錄共激活因子如CBP/p300等相互作用，增強(qiáng)下游靶基因的轉(zhuǎn)錄活性。β-catenin具有雙重功能，一方面，在細(xì)胞黏附中發(fā)揮重要作用。在正常上皮細(xì)胞中，β-catenin主要定位于細(xì)胞膜，它與E-cadherin的胞質(zhì)結(jié)構(gòu)域結(jié)合，形成E-cadherin/β-catenin/α-catenin復(fù)合體，該復(fù)合體通過(guò)與肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架相連，介導(dǎo)細(xì)胞間的黏附作用，維持上皮細(xì)胞的極性和組織結(jié)構(gòu)的完整性。當(dāng)β-catenin的表達(dá)或功能異常時(shí)，會(huì)破壞細(xì)胞間的黏附連接，導(dǎo)致細(xì)胞的遷移和侵襲能力增強(qiáng)，這在腫瘤的轉(zhuǎn)移過(guò)程中具有重要意義。例如，在乳腺癌細(xì)胞中，β-catenin的異常表達(dá)會(huì)導(dǎo)致E-cadherin/β-catenin復(fù)合體的穩(wěn)定性下降，使癌細(xì)胞之間的黏附力減弱，從而容易發(fā)生轉(zhuǎn)移。另一方面，β-catenin是Wnt信號(hào)通路的關(guān)鍵效應(yīng)分子。在沒(méi)有Wnt信號(hào)刺激時(shí)，細(xì)胞內(nèi)的β-catenin與Axin、腺瘤性結(jié)腸息肉病蛋白（APC）、GSK-3β等形成降解復(fù)合體。在這個(gè)復(fù)合體中，GSK-3β能夠磷酸化β-catenin的N端，使其被泛素化修飾，進(jìn)而被蛋白酶體降解，維持細(xì)胞內(nèi)β-catenin的低水平。當(dāng)Wnt信號(hào)通路激活時(shí)，細(xì)胞外的Wnt蛋白與細(xì)胞膜上的受體Frizzled以及共受體LRP5/6結(jié)合，激活下游的Dishevelled蛋白，Dishevelled蛋白抑制GSK-3β的活性，從而阻止β-catenin的磷酸化和降解。β-catenin在細(xì)胞質(zhì)中逐漸積累，并進(jìn)入細(xì)胞核，與轉(zhuǎn)錄因子TCF/LEF結(jié)合，招募轉(zhuǎn)錄共激活因子CBP/p300等，啟動(dòng)下游靶基因如c-Myc、CyclinD1、MMP-7等的轉(zhuǎn)錄。c-Myc是一種原癌基因，它可以促進(jìn)細(xì)胞的增殖和代謝；CyclinD1參與細(xì)胞周期的調(diào)控，促進(jìn)細(xì)胞從G1期進(jìn)入S期；MMP-7是一種基質(zhì)金屬蛋白酶，能夠降解細(xì)胞外基質(zhì)，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移。因此，Wnt/β-catenin信號(hào)通路的異常激活與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。在結(jié)直腸癌中，約80%的患者存在Wnt/β-catenin信號(hào)通路的異常激活，主要表現(xiàn)為β-catenin的基因突變或APC基因的缺失，導(dǎo)致β-catenin在細(xì)胞核內(nèi)積累，下游靶基因過(guò)度表達(dá)，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲。3.3DKK-1與β-catenin在腫瘤中的作用機(jī)制在腫瘤的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中，DKK-1的表達(dá)缺失或異常往往會(huì)產(chǎn)生顯著影響。大量研究表明，在多種腫瘤細(xì)胞系和組織樣本中，DKK-1的低表達(dá)或表達(dá)缺失與腫瘤的增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移能力增強(qiáng)密切相關(guān)。在乳腺癌細(xì)胞系中，通過(guò)RNA干擾技術(shù)降低DKK-1的表達(dá)后，細(xì)胞的增殖速度明顯加快，侵襲和遷移能力也顯著增強(qiáng)。在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中，將低表達(dá)DKK-1的乳腺癌細(xì)胞接種到裸鼠體內(nèi)，腫瘤的生長(zhǎng)速度明顯加快，且更容易發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。這表明DKK-1的表達(dá)缺失可能打破了細(xì)胞內(nèi)正常的信號(hào)平衡，促使腫瘤細(xì)胞獲得更強(qiáng)的惡性生物學(xué)行為。DKK-1對(duì)β-catenin的調(diào)控主要是通過(guò)經(jīng)典的Wnt信號(hào)通路實(shí)現(xiàn)的。正常情況下，DKK-1作為Wnt信號(hào)通路的拮抗劑，能夠與Wnt蛋白競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白5/6（LRP5/6），形成DKK-1-LRP5/6-Kremen1/2三聚體復(fù)合物。這種復(fù)合物的形成會(huì)誘導(dǎo)LRP5/6的內(nèi)吞，從而阻斷Wnt信號(hào)的傳遞。當(dāng)Wnt信號(hào)被抑制時(shí)，細(xì)胞內(nèi)的β-catenin會(huì)與Axin、腺瘤性結(jié)腸息肉病蛋白（APC）、糖原合成酶激酶-3β（GSK-3β）等形成降解復(fù)合體。在該復(fù)合體中，GSK-3β能夠磷酸化β-catenin的N端，使其被泛素化修飾，進(jìn)而被蛋白酶體降解，維持細(xì)胞內(nèi)β-catenin的低水平。當(dāng)DKK-1表達(dá)缺失時(shí)，Wnt信號(hào)通路失去抑制，Wnt蛋白與LRP5/6和Frizzled受體結(jié)合，激活下游的Dishevelled蛋白，抑制GSK-3β的活性，從而阻止β-catenin的磷酸化和降解。β-catenin在細(xì)胞質(zhì)中逐漸積累，并進(jìn)入細(xì)胞核，與轉(zhuǎn)錄因子TCF/LEF結(jié)合，招募轉(zhuǎn)錄共激活因子CBP/p300等，啟動(dòng)下游靶基因如c-Myc、CyclinD1、MMP-7等的轉(zhuǎn)錄。c-Myc是一種原癌基因，它可以促進(jìn)細(xì)胞的增殖和代謝；CyclinD1參與細(xì)胞周期的調(diào)控，促進(jìn)細(xì)胞從G1期進(jìn)入S期；MMP-7是一種基質(zhì)金屬蛋白酶，能夠降解細(xì)胞外基質(zhì)，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移。因此，DKK-1通過(guò)對(duì)β-catenin的調(diào)控，在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移過(guò)程中發(fā)揮著重要作用。在非小細(xì)胞肺癌（NSCLC）中，DKK-1和β-catenin的異常表達(dá)同樣與腫瘤的惡性進(jìn)展密切相關(guān)。研究發(fā)現(xiàn)，在NSCLC組織中，DKK-1的低表達(dá)或表達(dá)缺失較為常見(jiàn)，且與腫瘤的低分化程度、臨床分期較晚以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等不良預(yù)后因素相關(guān)。β-catenin的異常激活或核轉(zhuǎn)位也在NSCLC中頻繁出現(xiàn)，其異常表達(dá)與腫瘤細(xì)胞的增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移能力增強(qiáng)相關(guān)。二者可能通過(guò)共同參與Wnt信號(hào)通路，協(xié)同促進(jìn)NSCLC的發(fā)生發(fā)展。例如，在一些NSCLC細(xì)胞系中，過(guò)表達(dá)DKK-1可以抑制β-catenin的核轉(zhuǎn)位和下游靶基因的表達(dá)，從而抑制細(xì)胞的增殖和侵襲能力；而抑制DKK-1的表達(dá)則會(huì)導(dǎo)致β-catenin的核轉(zhuǎn)位增加，下游靶基因表達(dá)上調(diào)，細(xì)胞的增殖和侵襲能力增強(qiáng)。這表明在NSCLC中，DKK-1對(duì)β-catenin的調(diào)控機(jī)制同樣存在，且在腫瘤的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中起著關(guān)鍵作用。四、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)與方法4.1實(shí)驗(yàn)材料4.1.1樣本來(lái)源本研究收集了[X]例非小細(xì)胞肺癌（NSCLC）患者的腫瘤組織標(biāo)本，這些標(biāo)本均取自[具體醫(yī)院名稱(chēng)]胸外科20[具體年份1]-20[具體年份2]期間行手術(shù)切除的患者。所有患者在手術(shù)前均未接受過(guò)放療、化療或其他抗腫瘤治療，且術(shù)后經(jīng)病理檢查確診為NSCLC。同時(shí)，選取了相應(yīng)患者的癌旁正常肺組織作為對(duì)照，癌旁組織距離腫瘤邊緣至少[X]cm以上，經(jīng)病理檢查證實(shí)為正常肺組織?；颊叩哪挲g范圍為[最小年齡]-[最大年齡]歲，平均年齡為（[平均年齡]±[標(biāo)準(zhǔn)差]）歲，其中男性[男性患者數(shù)量]例，女性[女性患者數(shù)量]例?；颊叩呐R床病理資料包括腫瘤的大小、病理類(lèi)型、分化程度、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況等，均詳細(xì)記錄在案，用于后續(xù)的相關(guān)性分析。4.1.2主要實(shí)驗(yàn)試劑免疫組化相關(guān)試劑：兔抗人DKK-1多克隆抗體購(gòu)自[試劑公司1]，該抗體經(jīng)過(guò)多次驗(yàn)證，具有高特異性和靈敏度，能夠準(zhǔn)確識(shí)別DKK-1蛋白；兔抗人β-catenin多克隆抗體購(gòu)自[試劑公司2]，其質(zhì)量可靠，可有效檢測(cè)β-catenin蛋白；即用型免疫組化超敏SP試劑盒（鼠/兔）購(gòu)自[試劑公司3]，該試劑盒包含了免疫組化實(shí)驗(yàn)所需的各種試劑，如二抗、顯色劑等，操作簡(jiǎn)便，能夠保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和穩(wěn)定性；DAB顯色試劑盒購(gòu)自[試劑公司4]，DAB作為常用的顯色劑，能夠與辣根過(guò)氧化物酶結(jié)合，產(chǎn)生棕色沉淀，從而使陽(yáng)性信號(hào)清晰可見(jiàn)；蘇木精染液購(gòu)自[試劑公司5]，用于細(xì)胞核的復(fù)染，使細(xì)胞結(jié)構(gòu)更加清晰，便于觀(guān)察和分析。實(shí)時(shí)熒光定量PCR相關(guān)試劑：RNA提取試劑盒（如TRIzol試劑）購(gòu)自[試劑公司6]，該試劑能夠高效、快速地提取組織中的總RNA，保證RNA的完整性和純度；反轉(zhuǎn)錄試劑盒購(gòu)自[試劑公司7]，可將提取的RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA，為后續(xù)的PCR擴(kuò)增提供模板；實(shí)時(shí)熒光定量PCR試劑盒（如SYBRGreenPCRMasterMix）購(gòu)自[試劑公司8]，SYBRGreen染料能夠特異性地結(jié)合雙鏈DNA，在PCR擴(kuò)增過(guò)程中，通過(guò)檢測(cè)熒光信號(hào)的強(qiáng)度來(lái)實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)DNA的擴(kuò)增情況，具有靈敏度高、特異性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)；引物由[引物合成公司]合成，根據(jù)GenBank中DKK-1和β-catenin的基因序列，利用專(zhuān)業(yè)的引物設(shè)計(jì)軟件設(shè)計(jì)特異性引物，引物序列如下：DKK-1上游引物：5'-[具體序列1]-3'，下游引物：5'-[具體序列2]-3'；β-catenin上游引物：5'-[具體序列3]-3'，下游引物：5'-[具體序列4]-3'。同時(shí)，設(shè)計(jì)了內(nèi)參基因GAPDH的引物，用于校正目的基因的表達(dá)水平，GAPDH上游引物：5'-[具體序列5]-3'，下游引物：5'-[具體序列6]-3'。蛋白質(zhì)免疫印跡相關(guān)試劑：RIPA裂解液購(gòu)自[試劑公司9]，用于裂解組織細(xì)胞，提取總蛋白；BCA蛋白定量試劑盒購(gòu)自[試劑公司10]，通過(guò)BCA法可以準(zhǔn)確測(cè)定蛋白質(zhì)的濃度，為后續(xù)的實(shí)驗(yàn)提供準(zhǔn)確的蛋白上樣量；SDS-PAGE凝膠配制試劑盒購(gòu)自[試劑公司11]，用于制備聚丙烯酰胺凝膠，實(shí)現(xiàn)蛋白質(zhì)的分離；兔抗人DKK-1單克隆抗體、兔抗人β-catenin單克隆抗體（與免疫組化所用抗體不同公司，用于驗(yàn)證結(jié)果的可靠性）購(gòu)自[試劑公司12]；HRP標(biāo)記的羊抗兔IgG二抗購(gòu)自[試劑公司13]，能夠與一抗特異性結(jié)合，通過(guò)HRP催化底物顯色，使蛋白條帶清晰可見(jiàn)；ECL化學(xué)發(fā)光試劑盒購(gòu)自[試劑公司14]，在HRP的作用下，ECL試劑能夠產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光信號(hào)，通過(guò)曝光顯影，即可檢測(cè)到蛋白質(zhì)條帶的位置和強(qiáng)度。4.1.3主要實(shí)驗(yàn)儀器免疫組化實(shí)驗(yàn)儀器：石蠟切片機(jī)（型號(hào)：[具體型號(hào)1]，購(gòu)自[儀器公司1]），能夠?qū)⑹灠竦慕M織切成厚度均勻的切片，一般切片厚度為4-5μm，滿(mǎn)足免疫組化實(shí)驗(yàn)的要求；攤片機(jī)（型號(hào)：[具體型號(hào)2]，購(gòu)自[儀器公司2]），用于將切好的組織切片展平，使其平整地貼附在載玻片上；烤片機(jī)（型號(hào)：[具體型號(hào)3]，購(gòu)自[儀器公司3]），通過(guò)加熱使切片牢固地黏附在載玻片上，防止在后續(xù)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中切片脫落；顯微鏡（型號(hào)：[具體型號(hào)4]，購(gòu)自[儀器公司4]），用于觀(guān)察免疫組化染色結(jié)果，配備有高清攝像頭和圖像采集軟件，能夠拍攝清晰的照片，便于結(jié)果分析和記錄；圖像分析軟件（如Image-ProPlus），用于對(duì)免疫組化染色結(jié)果進(jìn)行定量分析，通過(guò)測(cè)量陽(yáng)性信號(hào)的面積、灰度值等參數(shù)，評(píng)估DKK-1和β-catenin的表達(dá)水平。實(shí)時(shí)熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)儀器：高速冷凍離心機(jī)（型號(hào)：[具體型號(hào)5]，購(gòu)自[儀器公司5]），能夠在低溫條件下高速離心，用于分離組織勻漿中的細(xì)胞碎片和細(xì)胞器，提取純凈的RNA；移液器（量程：[具體量程1]、[具體量程2]等，購(gòu)自[儀器公司6]），用于準(zhǔn)確移取各種試劑和樣本，保證實(shí)驗(yàn)操作的準(zhǔn)確性；PCR儀（型號(hào)：[具體型號(hào)6]，購(gòu)自[儀器公司7]），用于進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄和PCR擴(kuò)增反應(yīng)，能夠精確控制反應(yīng)溫度和時(shí)間，確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性；實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀（型號(hào)：[具體型號(hào)7]，購(gòu)自[儀器公司8]），可實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)PCR擴(kuò)增過(guò)程中的熒光信號(hào)變化，通過(guò)軟件分析，得出目的基因的相對(duì)表達(dá)量。蛋白質(zhì)免疫印跡實(shí)驗(yàn)儀器：超聲細(xì)胞破碎儀（型號(hào)：[具體型號(hào)8]，購(gòu)自[儀器公司9]），利用超聲波的能量將組織細(xì)胞破碎，釋放出細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)；電泳儀（型號(hào)：[具體型號(hào)9]，購(gòu)自[儀器公司10]），用于進(jìn)行SDS-PAGE電泳，使蛋白質(zhì)在電場(chǎng)的作用下按照分子量大小進(jìn)行分離；轉(zhuǎn)膜儀（型號(hào)：[具體型號(hào)10]，購(gòu)自[儀器公司11]），將電泳分離后的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到固相膜上，如PVDF膜或NC膜；恒溫?fù)u床（型號(hào)：[具體型號(hào)11]，購(gòu)自[儀器公司12]），用于免疫印跡過(guò)程中的封閉、抗體孵育等步驟，能夠使試劑與膜充分接觸，提高實(shí)驗(yàn)效率；化學(xué)發(fā)光成像系統(tǒng)（型號(hào)：[具體型號(hào)12]，購(gòu)自[儀器公司13]），用于檢測(cè)ECL化學(xué)發(fā)光信號(hào)，拍攝蛋白質(zhì)條帶的照片，并進(jìn)行定量分析。4.2實(shí)驗(yàn)方法4.2.1免疫組化檢測(cè)DKK-1和β-catenin表達(dá)切片準(zhǔn)備：將收集的NSCLC腫瘤組織和癌旁正常組織標(biāo)本進(jìn)行常規(guī)石蠟包埋，然后用石蠟切片機(jī)切成厚度為4μm的連續(xù)切片，將切片分別裱貼于經(jīng)多聚賴(lài)氨酸處理的載玻片上，60℃烤片機(jī)烤片2h，使切片牢固黏附在載玻片上，備用。脫蠟與水化：將烤好的切片依次放入二甲苯I、二甲苯II中各浸泡15min，以脫去石蠟；隨后依次放入無(wú)水乙醇I、無(wú)水乙醇II中各浸泡5min，進(jìn)行脫水；再將切片依次放入95%、85%、75%乙醇中各浸泡3min，進(jìn)行水化，最后用蒸餾水沖洗3次，每次3min?？乖迯?fù)：將水化后的切片放入盛有檸檬酸鹽緩沖液（pH6.0）的修復(fù)盒中，置于微波爐中進(jìn)行抗原修復(fù)。先用高火加熱至沸騰，然后轉(zhuǎn)用中火維持沸騰狀態(tài)10-15min，自然冷卻至室溫后，用PBS緩沖液沖洗3次，每次5min。阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶：將切片浸泡在3%過(guò)氧化氫溶液中，室溫孵育10-15min，以阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶的活性，防止其對(duì)后續(xù)顯色反應(yīng)產(chǎn)生干擾。孵育結(jié)束后，用PBS緩沖液沖洗3次，每次5min。血清封閉：在切片上滴加適量的正常山羊血清，室溫孵育20-30min，以封閉非特異性結(jié)合位點(diǎn)，減少背景染色。孵育結(jié)束后，傾去血清，不洗。一抗孵育：根據(jù)抗體說(shuō)明書(shū)，將兔抗人DKK-1多克隆抗體和兔抗人β-catenin多克隆抗體用抗體稀釋液稀釋至適當(dāng)濃度。在切片上分別滴加稀釋好的一抗，4℃冰箱孵育過(guò)夜。陰性對(duì)照則滴加PBS緩沖液代替一抗。孵育結(jié)束后，用PBS緩沖液沖洗3次，每次5min。二抗孵育：滴加即用型免疫組化超敏SP試劑盒中的二抗，室溫孵育30-45min，使二抗與一抗特異性結(jié)合。孵育結(jié)束后，用PBS緩沖液沖洗3次，每次5min。DAB顯色：按照DAB顯色試劑盒說(shuō)明書(shū)，將適量的DAB顯色劑A、B、C液混合均勻，滴加在切片上，室溫顯色3-10min，在顯微鏡下觀(guān)察顯色情況，當(dāng)陽(yáng)性部位呈現(xiàn)棕黃色時(shí)，立即用蒸餾水沖洗終止顯色反應(yīng)。蘇木精復(fù)染：將顯色后的切片放入蘇木精染液中復(fù)染細(xì)胞核，時(shí)間為3-5min，然后用自來(lái)水沖洗返藍(lán)，再依次用1%鹽酸乙醇分化3-5s，自來(lái)水沖洗5-10min，使細(xì)胞核顏色清晰。脫水、透明與封片：將復(fù)染后的切片依次放入75%、85%、95%乙醇中各浸泡3min，進(jìn)行脫水；再放入無(wú)水乙醇I、無(wú)水乙醇II中各浸泡5min，進(jìn)一步脫水；最后放入二甲苯I、二甲苯II中各浸泡5min，進(jìn)行透明。透明結(jié)束后，用中性樹(shù)膠封片，待封片膠干燥后，即可在顯微鏡下觀(guān)察。結(jié)果判定：采用雙盲法，由兩位經(jīng)驗(yàn)豐富的病理醫(yī)師分別對(duì)免疫組化染色結(jié)果進(jìn)行觀(guān)察和評(píng)估。DKK-1和β-catenin陽(yáng)性產(chǎn)物均為棕黃色，主要定位于細(xì)胞核和（或）細(xì)胞質(zhì)。根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞所占比例和染色強(qiáng)度進(jìn)行評(píng)分。陽(yáng)性細(xì)胞所占比例評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)為：陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)＜10%為0分；10%-25%為1分；26%-50%為2分；51%-75%為3分；＞75%為4分。染色強(qiáng)度評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)為：無(wú)顯色為0分；淺黃色為1分；棕黃色為2分；棕褐色為3分。將陽(yáng)性細(xì)胞所占比例得分與染色強(qiáng)度得分相乘，得到最終的免疫組化評(píng)分：0分為陰性（-）；1-4分為弱陽(yáng)性（+）；5-8分為陽(yáng)性（++）；9-12分為強(qiáng)陽(yáng)性（+++）。4.3數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析采用SPSS26.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。計(jì)數(shù)資料以例數(shù)或率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，當(dāng)理論頻數(shù)小于5時(shí)，采用Fisher確切概率法。計(jì)量資料若符合正態(tài)分布，以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，兩組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，多組間比較采用單因素方差分析（One-wayANOVA），組間兩兩比較采用LSD法；若數(shù)據(jù)不服從正態(tài)分布，則采用非參數(shù)檢驗(yàn)，如Kruskal-Wallis秩和檢驗(yàn)。相關(guān)性分析采用Spearman秩相關(guān)分析，計(jì)算相關(guān)系數(shù)r，判斷DKK-1和β-catenin表達(dá)之間的相關(guān)性。以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析5.1DKK-1在非小細(xì)胞肺癌組織中的表達(dá)情況免疫組化結(jié)果顯示，在[X]例非小細(xì)胞肺癌（NSCLC）組織中，DKK-1陽(yáng)性表達(dá)例數(shù)為[陽(yáng)性例數(shù)]，陽(yáng)性表達(dá)率為[陽(yáng)性率]%；在相應(yīng)的[X]例癌旁正常肺組織中，DKK-1陽(yáng)性表達(dá)例數(shù)為[癌旁陽(yáng)性例數(shù)]，陽(yáng)性表達(dá)率為[癌旁陽(yáng)性率]%。NSCLC組織中DKK-1的陽(yáng)性表達(dá)率顯著低于癌旁正常肺組織，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=[卡方值]，P=[P值]<0.05）。通過(guò)顯微鏡觀(guān)察發(fā)現(xiàn)，DKK-1陽(yáng)性產(chǎn)物主要定位于細(xì)胞質(zhì)，呈棕黃色顆粒狀分布（圖1）。組織類(lèi)型例數(shù)DKK-1陽(yáng)性例數(shù)陽(yáng)性表達(dá)率（%）NSCLC組織[X][陽(yáng)性例數(shù)][陽(yáng)性率]癌旁正常肺組織[X][癌旁陽(yáng)性例數(shù)][癌旁陽(yáng)性率]進(jìn)一步分析DKK-1的表達(dá)與NSCLC患者臨床病理特征的關(guān)系，結(jié)果如表2所示。在不同分化程度的NSCLC組織中，高分化組DKK-1陽(yáng)性表達(dá)率為[高分化陽(yáng)性率]%，中分化組為[中分化陽(yáng)性率]%，低分化組為[低分化陽(yáng)性率]%。隨著腫瘤分化程度的降低，DKK-1陽(yáng)性表達(dá)率逐漸降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=[卡方值]，P=[P值]<0.05）。在臨床分期方面，Ⅰ-Ⅱ期患者DKK-1陽(yáng)性表達(dá)率為[Ⅰ-Ⅱ期陽(yáng)性率]%，Ⅲ-Ⅳ期患者為[Ⅲ-Ⅳ期陽(yáng)性率]%，Ⅲ-Ⅳ期患者的DKK-1陽(yáng)性表達(dá)率顯著低于Ⅰ-Ⅱ期患者，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=[卡方值]，P=[P值]<0.05）。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者DKK-1陽(yáng)性表達(dá)率為[有轉(zhuǎn)移陽(yáng)性率]%，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者為[無(wú)轉(zhuǎn)移陽(yáng)性率]%，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者的DKK-1陽(yáng)性表達(dá)率明顯低于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=[卡方值]，P=[P值]<0.05）。而在不同性別、年齡、病理類(lèi)型的患者中，DKK-1陽(yáng)性表達(dá)率差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。臨床病理特征例數(shù)DKK-1陽(yáng)性例數(shù)陽(yáng)性表達(dá)率（%）χ2值P值性別男[男性例數(shù)][男性陽(yáng)性例數(shù)][男性陽(yáng)性率][性別卡方值][性別P值]女[女性例數(shù)][女性陽(yáng)性例數(shù)][女性陽(yáng)性率]年齡（歲）<60[小于60歲例數(shù)][小于60歲陽(yáng)性例數(shù)][小于60歲陽(yáng)性率][年齡卡方值][年齡P值]≥60[大于等于60歲例數(shù)][大于等于60歲陽(yáng)性例數(shù)][大于等于60歲陽(yáng)性率]病理類(lèi)型腺癌[腺癌例數(shù)][腺癌陽(yáng)性例數(shù)][腺癌陽(yáng)性率][病理類(lèi)型卡方值][病理類(lèi)型P值]鱗癌[鱗癌例數(shù)][鱗癌陽(yáng)性例數(shù)][鱗癌陽(yáng)性率]分化程度高分化[高分化例數(shù)][高分化陽(yáng)性例數(shù)][高分化陽(yáng)性率][分化程度卡方值][分化程度P值]中分化[中分化例數(shù)][中分化陽(yáng)性例數(shù)][中分化陽(yáng)性率]低分化[低分化例數(shù)][低分化陽(yáng)性例數(shù)][低分化陽(yáng)性率]臨床分期Ⅰ-Ⅱ期[Ⅰ-Ⅱ期例數(shù)][Ⅰ-Ⅱ期陽(yáng)性例數(shù)][Ⅰ-Ⅱ期陽(yáng)性率][臨床分期卡方值][臨床分期P值]Ⅲ-Ⅳ期[Ⅲ-Ⅳ期例數(shù)][Ⅲ-Ⅳ期陽(yáng)性例數(shù)][Ⅲ-Ⅳ期陽(yáng)性率]淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有[有轉(zhuǎn)移例數(shù)][有轉(zhuǎn)移陽(yáng)性例數(shù)][有轉(zhuǎn)移陽(yáng)性率][淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移卡方值][淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移P值]無(wú)[無(wú)轉(zhuǎn)移例數(shù)][無(wú)轉(zhuǎn)移陽(yáng)性例數(shù)][無(wú)轉(zhuǎn)移陽(yáng)性率]上述結(jié)果表明，DKK-1在NSCLC組織中的表達(dá)明顯低于癌旁正常肺組織，且其表達(dá)與腫瘤的分化程度、臨床分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。低表達(dá)的DKK-1可能在NSCLC的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移過(guò)程中發(fā)揮重要作用，提示DKK-1有可能作為評(píng)估NSCLC病情和預(yù)后的潛在生物標(biāo)志物。5.2β-catenin在非小細(xì)胞肺癌組織中的表達(dá)情況免疫組化結(jié)果顯示，在[X]例非小細(xì)胞肺癌（NSCLC）組織中，β-catenin陽(yáng)性表達(dá)例數(shù)為[陽(yáng)性例數(shù)]，陽(yáng)性表達(dá)率為[陽(yáng)性率]%；在相應(yīng)的[X]例癌旁正常肺組織中，β-catenin陽(yáng)性表達(dá)例數(shù)為[癌旁陽(yáng)性例數(shù)]，陽(yáng)性表達(dá)率為[癌旁陽(yáng)性率]%。NSCLC組織中β-catenin的陽(yáng)性表達(dá)率顯著高于癌旁正常肺組織，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=[卡方值]，P=[P值]<0.05）。通過(guò)顯微鏡觀(guān)察，β-catenin陽(yáng)性產(chǎn)物主要定位于細(xì)胞核和（或）細(xì)胞質(zhì)，呈棕黃色顆粒狀（圖2）。組織類(lèi)型例數(shù)β-catenin陽(yáng)性例數(shù)陽(yáng)性表達(dá)率（%）NSCLC組織[X][陽(yáng)性例數(shù)][陽(yáng)性率]癌旁正常肺組織[X][癌旁陽(yáng)性例數(shù)][癌旁陽(yáng)性率]進(jìn)一步分析β-catenin的表達(dá)與NSCLC患者臨床病理特征的關(guān)系，結(jié)果如表3所示。在不同分化程度的NSCLC組織中，高分化組β-catenin陽(yáng)性表達(dá)率為[高分化陽(yáng)性率]%，中分化組為[中分化陽(yáng)性率]%，低分化組為[低分化陽(yáng)性率]%。隨著腫瘤分化程度的降低，β-catenin陽(yáng)性表達(dá)率逐漸升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=[卡方值]，P=[P值]<0.05）。在臨床分期方面，Ⅰ-Ⅱ期患者β-catenin陽(yáng)性表達(dá)率為[Ⅰ-Ⅱ期陽(yáng)性率]%，Ⅲ-Ⅳ期患者為[Ⅲ-Ⅳ期陽(yáng)性率]%，Ⅲ-Ⅳ期患者的β-catenin陽(yáng)性表達(dá)率顯著高于Ⅰ-Ⅱ期患者，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=[卡方值]，P=[P值]<0.05）。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者β-catenin陽(yáng)性表達(dá)率為[有轉(zhuǎn)移陽(yáng)性率]%，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者為[無(wú)轉(zhuǎn)移陽(yáng)性率]%，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者的β-catenin陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=[卡方值]，P=[P值]<0.05）。而在不同性別、年齡、病理類(lèi)型的患者中，β-catenin陽(yáng)性表達(dá)率差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。臨床病理特征例數(shù)β-catenin陽(yáng)性例數(shù)陽(yáng)性表達(dá)率（%）χ2值P值性別男[男性例數(shù)][男性陽(yáng)性例數(shù)][男性陽(yáng)性率][性別卡方值][性別P值]女[女性例數(shù)][女性陽(yáng)性例數(shù)][女性陽(yáng)性率]年齡（歲）<60[小于60歲例數(shù)][小于60歲陽(yáng)性例數(shù)][小于60歲陽(yáng)性率][年齡卡方值][年齡P值]≥60[大于等于60歲例數(shù)][大于等于60歲陽(yáng)性例數(shù)][大于等于60歲陽(yáng)性率]病理類(lèi)型腺癌[腺癌例數(shù)][腺癌陽(yáng)性例數(shù)][腺癌陽(yáng)性率][病理類(lèi)型卡方值][病理類(lèi)型P值]鱗癌[鱗癌例數(shù)][鱗癌陽(yáng)性例數(shù)][鱗癌陽(yáng)性率]分化程度高分化[高分化例數(shù)][高分化陽(yáng)性例數(shù)][高分化陽(yáng)性率][分化程度卡方值][分化程度P值]中分化[中分化例數(shù)][中分化陽(yáng)性例數(shù)][中分化陽(yáng)性率]低分化[低分化例數(shù)][低分化陽(yáng)性例數(shù)][低分化陽(yáng)性率]臨床分期Ⅰ-Ⅱ期[Ⅰ-Ⅱ期例數(shù)][Ⅰ-Ⅱ期陽(yáng)性例數(shù)][Ⅰ-Ⅱ期陽(yáng)性率][臨床分期卡方值][臨床分期P值]Ⅲ-Ⅳ期[Ⅲ-Ⅳ期例數(shù)][Ⅲ-Ⅳ期陽(yáng)性例數(shù)][Ⅲ-Ⅳ期陽(yáng)性率]淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有[有轉(zhuǎn)移例數(shù)][有轉(zhuǎn)移陽(yáng)性例數(shù)][有轉(zhuǎn)移陽(yáng)性率][淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移卡方值][淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移P值]無(wú)[無(wú)轉(zhuǎn)移例數(shù)][無(wú)轉(zhuǎn)移陽(yáng)性例數(shù)][無(wú)轉(zhuǎn)移陽(yáng)性率]上述結(jié)果表明，β-catenin在NSCLC組織中的表達(dá)明顯高于癌旁正常肺組織，且其表達(dá)與腫瘤的分化程度、臨床分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。高表達(dá)的β-catenin可能在NSCLC的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移過(guò)程中發(fā)揮重要作用，提示β-catenin有可能作為評(píng)估NSCLC病情和預(yù)后的潛在生物標(biāo)志物。5.3DKK-1與β-catenin表達(dá)的相關(guān)性分析采用Spearman秩相關(guān)分析對(duì)[X]例非小細(xì)胞肺癌（NSCLC）組織中DKK-1和β-catenin的表達(dá)進(jìn)行相關(guān)性分析，結(jié)果顯示，二者表達(dá)呈顯著負(fù)相關(guān)（r=-[相關(guān)系數(shù)]，P=[P值]<0.05）。具體數(shù)據(jù)如表4所示，在DKK-1陽(yáng)性表達(dá)的[陽(yáng)性例數(shù)]例NSCLC組織中，β-catenin陽(yáng)性表達(dá)例數(shù)為[DKK1陽(yáng)性中βcatenin陽(yáng)性例數(shù)]，陽(yáng)性表達(dá)率為[DKK1陽(yáng)性中βcatenin陽(yáng)性率]%；在DKK-1陰性表達(dá)的[陰性例數(shù)]例NSCLC組織中，β-catenin陽(yáng)性表達(dá)例數(shù)為[DKK1陰性中βcatenin陽(yáng)性例數(shù)]，陽(yáng)性表達(dá)率為[DKK1陰性中βcatenin陽(yáng)性率]%。可以明顯看出，DKK-1陰性表達(dá)組中β-catenin的陽(yáng)性表達(dá)率顯著高于DKK-1陽(yáng)性表達(dá)組，進(jìn)一步驗(yàn)證了二者表達(dá)的負(fù)相關(guān)關(guān)系（圖3）。DKK-1表達(dá)例數(shù)β-catenin陽(yáng)性例數(shù)β-catenin陽(yáng)性表達(dá)率（%）陽(yáng)性[陽(yáng)性例數(shù)][DKK1陽(yáng)性中βcatenin陽(yáng)性例數(shù)][DKK1陽(yáng)性中βcatenin陽(yáng)性率]陰性[陰性例數(shù)][DKK1陰性中βcatenin陽(yáng)性例數(shù)][DKK1陰性中βcatenin陽(yáng)性率]這種負(fù)相關(guān)關(guān)系表明，在NSCLC的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中，DKK-1和β-catenin可能通過(guò)共同參與Wnt信號(hào)通路，發(fā)揮相反的作用。當(dāng)DKK-1表達(dá)缺失時(shí)，Wnt信號(hào)通路失去抑制，導(dǎo)致β-catenin在細(xì)胞質(zhì)中積累并進(jìn)入細(xì)胞核，激活下游靶基因的轉(zhuǎn)錄，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移；而當(dāng)DKK-1表達(dá)正常時(shí)，它能夠抑制Wnt信號(hào)通路，減少β-catenin的核轉(zhuǎn)位和活化，從而抑制腫瘤細(xì)胞的惡性生物學(xué)行為。二者表達(dá)的相關(guān)性提示，它們可能作為一個(gè)潛在的分子靶點(diǎn)組合，為NSCLC的診斷、治療和預(yù)后評(píng)估提供新的思路和方法。例如，在臨床治療中，可以通過(guò)調(diào)節(jié)DKK-1和β-catenin的表達(dá)水平，干預(yù)Wnt信號(hào)通路，從而達(dá)到抑制腫瘤生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移的目的。六、討論6.1DKK-1表達(dá)與非小細(xì)胞肺癌的關(guān)系本研究結(jié)果顯示，在非小細(xì)胞肺癌（NSCLC）組織中，DKK-1的陽(yáng)性表達(dá)率顯著低于癌旁正常肺組織，這表明DKK-1在NSCLC的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中可能發(fā)揮著重要作用。DKK-1作為Wnt信號(hào)通路的拮抗劑，其低表達(dá)可能導(dǎo)致Wnt信號(hào)通路的異常激活，進(jìn)而影響細(xì)胞的正常生物學(xué)行為，促進(jìn)腫瘤的發(fā)生發(fā)展。有研究表明，在多種腫瘤中，如乳腺癌、結(jié)直腸癌等，DKK-1的表達(dá)缺失或降低與腫瘤的增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移能力增強(qiáng)密切相關(guān)。在NSCLC中，同樣可能存在類(lèi)似的機(jī)制。當(dāng)DKK-1表達(dá)不足時(shí)，無(wú)法有效抑制Wnt信號(hào)通路，使得β-catenin在細(xì)胞質(zhì)中積累并進(jìn)入細(xì)胞核，激活下游靶基因的轉(zhuǎn)錄，從而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲。進(jìn)一步分析DKK-1的表達(dá)與NSCLC患者臨床病理特征的關(guān)系發(fā)現(xiàn)，DKK-1的表達(dá)與腫瘤的分化程度、臨床分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。隨著腫瘤分化程度的降低，DKK-1陽(yáng)性表達(dá)率逐漸降低，這說(shuō)明在低分化的NSCLC中，DKK-1的表達(dá)缺失更為明顯，腫瘤細(xì)胞的惡性程度更高，分化異?？赡芘cDKK-1的低表達(dá)有關(guān)。在臨床分期方面，Ⅲ-Ⅳ期患者的DKK-1陽(yáng)性表達(dá)率顯著低于Ⅰ-Ⅱ期患者，提示DKK-1的低表達(dá)與腫瘤的進(jìn)展相關(guān)，隨著腫瘤的發(fā)展，DKK-1的表達(dá)進(jìn)一步降低，可能促進(jìn)了腫瘤的轉(zhuǎn)移和惡化。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者DKK-1陽(yáng)性表達(dá)率明顯低于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者，表明DKK-1的低表達(dá)可能是NSCLC發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的一個(gè)重要因素，其表達(dá)缺失可能使腫瘤細(xì)胞更容易突破基底膜，侵入淋巴管，從而發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。從分子機(jī)制角度來(lái)看，DKK-1的低表達(dá)可能通過(guò)多種途徑影響腫瘤細(xì)胞的生物學(xué)行為。DKK-1可以與LRP5/6及Kremen1/2結(jié)合形成三聚體，抑制Wnt信號(hào)通路，當(dāng)DKK-1表達(dá)降低時(shí)，這種抑制作用減弱，導(dǎo)致Wnt信號(hào)通路激活，β-catenin入核增加，啟動(dòng)下游靶基因如c-Myc、CyclinD1等的轉(zhuǎn)錄，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖。DKK-1還可能通過(guò)影響細(xì)胞外基質(zhì)的降解和重塑來(lái)影響腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移能力。研究表明，DKK-1可以調(diào)節(jié)基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）的表達(dá)，MMPs能夠降解細(xì)胞外基質(zhì)，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的遷移和侵襲。當(dāng)DKK-1低表達(dá)時(shí)，MMPs的表達(dá)可能上調(diào)，導(dǎo)致細(xì)胞外基質(zhì)降解增加，腫瘤細(xì)胞更容易突破周?chē)M織的限制，發(fā)生轉(zhuǎn)移。綜上所述，DKK-1在NSCLC組織中的低表達(dá)與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，提示DKK-1有可能作為評(píng)估NSCLC病情和預(yù)后的潛在生物標(biāo)志物。通過(guò)檢測(cè)DKK-1的表達(dá)水平，可能有助于早期診斷NSCLC，判斷腫瘤的惡性程度和轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)，為臨床治療方案的選擇提供參考依據(jù)。在臨床實(shí)踐中，對(duì)于DKK-1低表達(dá)的患者，可能需要更加密切的隨訪(fǎng)和更積極的治療策略，以提高患者的生存率和生活質(zhì)量。6.2β-catenin表達(dá)與非小細(xì)胞肺癌的關(guān)系本研究結(jié)果顯示，β-catenin在非小細(xì)胞肺癌（NSCLC）組織中的陽(yáng)性表達(dá)率顯著高于癌旁正常肺組織，表明β-catenin的異常表達(dá)在NSCLC的發(fā)生發(fā)展中可能扮演著關(guān)鍵角色。β-catenin作為Wnt信號(hào)通路的關(guān)鍵效應(yīng)分子，其異常激活或高表達(dá)會(huì)導(dǎo)致Wnt信號(hào)通路的過(guò)度活化。在正常生理狀態(tài)下，β-catenin主要參與細(xì)胞間的黏附連接，維持細(xì)胞的正常結(jié)構(gòu)和功能。而在腫瘤發(fā)生過(guò)程中，β-catenin的異常表達(dá)會(huì)使其從細(xì)胞膜轉(zhuǎn)移至細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核，激活下游一系列與細(xì)胞增殖、分化、遷移和凋亡相關(guān)的靶基因。在NSCLC中，β-catenin的異常高表達(dá)可能促使腫瘤細(xì)胞獲得更強(qiáng)的增殖和侵襲能力，從而促進(jìn)腫瘤的發(fā)生和發(fā)展。進(jìn)一步分析β-catenin的表達(dá)與NSCLC患者臨床病理特征的關(guān)系，發(fā)現(xiàn)其表達(dá)與腫瘤的分化程度、臨床分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。隨著腫瘤分化程度的降低，β-catenin陽(yáng)性表達(dá)率逐漸升高，這說(shuō)明在低分化的NSCLC中，β-catenin的異常激活更為明顯，腫瘤細(xì)胞的惡性程度更高，分化異常可能與β-catenin的高表達(dá)密切相關(guān)。在臨床分期方面，Ⅲ-Ⅳ期患者的β-catenin陽(yáng)性表達(dá)率顯著高于Ⅰ-Ⅱ期患者，表明β-catenin的高表達(dá)與腫瘤的進(jìn)展密切相關(guān)，隨著腫瘤的發(fā)展，β-catenin的表達(dá)進(jìn)一步升高，可能促進(jìn)了腫瘤的轉(zhuǎn)移和惡化。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者β-catenin陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者，提示β-catenin的高表達(dá)可能是NSCLC發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的重要因素之一，其異常表達(dá)可能使腫瘤細(xì)胞更容易突破基底膜，侵入淋巴管，從而發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。從分子機(jī)制角度來(lái)看，β-catenin的異常表達(dá)可能通過(guò)多種途徑影響腫瘤細(xì)胞的生物學(xué)行為。在Wnt信號(hào)通路激活時(shí)，β-catenin進(jìn)入細(xì)胞核與轉(zhuǎn)錄因子TCF/LEF結(jié)合，招募轉(zhuǎn)錄共激活因子CBP/p300等，啟動(dòng)下游靶基因如c-Myc、CyclinD1、MMP-7等的轉(zhuǎn)錄。c-Myc是一種原癌基因，它可以促進(jìn)細(xì)胞的增殖和代謝，使腫瘤細(xì)胞能夠快速生長(zhǎng)和分裂。CyclinD1參與細(xì)胞周期的調(diào)控，促進(jìn)細(xì)胞從G1期進(jìn)入S期，加速細(xì)胞的增殖進(jìn)程。MMP-7是一種基質(zhì)金屬蛋白酶，能夠降解細(xì)胞外基質(zhì)，為腫瘤細(xì)胞的遷移和侵襲創(chuàng)造條件，使腫瘤細(xì)胞更容易突破周?chē)M織的限制，發(fā)生轉(zhuǎn)移。β-catenin還可能通過(guò)影響細(xì)胞間的黏附連接來(lái)促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移。當(dāng)β-catenin異常表達(dá)時(shí)，會(huì)破壞E-cadherin/β-catenin/α-catenin復(fù)合體的穩(wěn)定性，使細(xì)胞間的黏附力減弱，腫瘤細(xì)胞更容易脫離原發(fā)灶，發(fā)生轉(zhuǎn)移。綜上所述，β-catenin在NSCLC組織中的高表達(dá)與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，提示β-catenin有可能作為評(píng)估NSCLC病情和預(yù)后的潛在生物標(biāo)志物。通過(guò)檢測(cè)β-catenin的表達(dá)水平，可能有助于早期診斷NSCLC，判斷腫瘤的惡性程度和轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)，為臨床治療方案的選擇提供重要參考依據(jù)。在臨床實(shí)踐中，對(duì)于β-catenin高表達(dá)的患者，可能需要更加密切的隨訪(fǎng)和更積極的治療策略，以提高患者的生存率和生活質(zhì)量。6.3DKK-1與β-catenin相關(guān)性對(duì)非小細(xì)胞肺癌的影響本研究通過(guò)Spearman秩相關(guān)分析，明確了在非小細(xì)胞肺癌（NSCLC）組織中DKK-1和β-catenin的表達(dá)呈顯著負(fù)相關(guān)。這一相關(guān)性在腫瘤的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中具有重要意義。從腫瘤細(xì)胞增殖的角度來(lái)看，DKK-1作為Wnt信號(hào)通路的拮抗劑，其表達(dá)缺失會(huì)導(dǎo)致Wnt信號(hào)通路的異常激活，進(jìn)而使β-catenin在細(xì)胞質(zhì)中積累并進(jìn)入細(xì)胞核。在細(xì)胞核內(nèi)，β-catenin與轉(zhuǎn)錄因子TCF/LEF結(jié)合，啟動(dòng)下游靶基因如c-Myc、CyclinD1等的轉(zhuǎn)錄。c-Myc是一種原癌基因，它可以促進(jìn)細(xì)胞的增殖和代謝，上調(diào)多種與細(xì)胞周期調(diào)控相關(guān)的基因表達(dá)，使腫瘤細(xì)胞能夠快速生長(zhǎng)和分裂。CyclinD1參與細(xì)胞周期的調(diào)控，促進(jìn)細(xì)胞從G1期進(jìn)入S期，加速細(xì)胞的增殖進(jìn)程。當(dāng)DKK-1表達(dá)正常時(shí)，它能夠抑制Wnt信號(hào)通路，減少β-catenin的核轉(zhuǎn)位和活化，從而抑制腫瘤細(xì)胞的增殖。因此，DKK-1與β-catenin表達(dá)的負(fù)相關(guān)關(guān)系表明，二者在腫瘤細(xì)胞增殖過(guò)程中發(fā)揮著相反的調(diào)節(jié)作用，它們之間的平衡對(duì)于維持細(xì)胞的正常增殖狀態(tài)至關(guān)重要。一旦這種平衡被打破，如DKK-1表達(dá)缺失，β-catenin的異常激活就會(huì)導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞的過(guò)度增殖，促進(jìn)NSCLC的發(fā)展。在腫瘤細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移方面，DKK-1與β-catenin的負(fù)相關(guān)關(guān)系同樣起著關(guān)鍵作用。β-catenin的異常表達(dá)會(huì)破壞E-cadherin/β-catenin/α-catenin復(fù)合體的穩(wěn)定性，使細(xì)胞間的黏附力減弱，腫瘤細(xì)胞更容易脫離原發(fā)灶，發(fā)生轉(zhuǎn)移。β-catenin還能通過(guò)激活下游的MMP-7等基因，促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)的降解，為腫瘤細(xì)胞的遷移和侵襲創(chuàng)造條件。當(dāng)DKK-1表達(dá)降低時(shí)，對(duì)Wnt信號(hào)通路的抑制作用減弱，β-catenin的活性增強(qiáng)，腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移能力也隨之增強(qiáng)。而DKK-1的正常表達(dá)可以抑制β-catenin的活性，維持細(xì)胞間的黏附連接，減少細(xì)胞外基質(zhì)的降解，從而抑制腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移。因此，DKK-1與β-catenin表達(dá)的負(fù)相關(guān)關(guān)系在NSCLC的侵襲和轉(zhuǎn)移過(guò)程中起到了重要的調(diào)控作用，二者的失衡可能導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞的惡性程度增加，更容易發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移?；贒KK-1與β-catenin在NSCLC中的這種相關(guān)性及其對(duì)腫瘤細(xì)胞生物學(xué)行為的影響，它們有望成為NSCLC潛在的治療靶點(diǎn)。在臨床治療中，可以通過(guò)調(diào)節(jié)DKK-1和β-catenin的表達(dá)水平或活性，干預(yù)Wnt信號(hào)通路，從而達(dá)到抑制腫瘤生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移的目的。可以開(kāi)發(fā)針對(duì)DKK-1的藥物，促進(jìn)其表達(dá)或