DB32/T 3686-2019山羊副流感病毒3型檢測技術(shù)規(guī)程

ICS6502030

B40..

江蘇省地方標(biāo)準(zhǔn)

DB32/T3686—2019

山羊副流感病毒3型檢測技術(shù)規(guī)程

TechnicalregulationsfordetectionofCaprineparainfluenzavirus3

2019-12-03發(fā)布2019-12-25實施

江蘇省市場監(jiān)督管理局發(fā)布

DB32/T3686—2019

前言

本標(biāo)準(zhǔn)按照給出的規(guī)則起草

GB/T1.1—2009。

本標(biāo)準(zhǔn)由江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院提出并歸口

。

本標(biāo)準(zhǔn)起草單位江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院

:。

本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人李文良毛立李基棕郝飛劉茂軍楊蕾蕾孫敏

:、、、、、、。

Ⅰ

DB32/T3686—2019

山羊副流感病毒3型檢測技術(shù)規(guī)程

1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了山羊副流感病毒型的病原學(xué)檢測病毒核酸

3(Caprineparaifluenzavirus3,CPIV3)(

的和熒光定量檢測血清學(xué)檢測血凝抑制試驗的技術(shù)要求

RT-PCRRT-PCR)、[(HI)]。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于山羊副流感病毒型及其感染情況的實驗室檢測

3。

2規(guī)范性引用文件

下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的凡是注日期的引用文件僅注日期的版本適用于本文

。,

件凡是不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改單適用于本文件

。,()。

分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法

GB/T6682

實驗室生物安全通用要求

GB19489

獸醫(yī)診斷樣品采集保存與運輸技術(shù)規(guī)范

NY/T541、

3病原學(xué)檢測

31材料

.

材料包括微量移液器水處理的管水處理的吸頭擴增管試劑三

:、DEPCEP、DEPC、PCR、TRIzol、

氯甲烷異丙醇處理水用水符合的規(guī)定反轉(zhuǎn)錄酶聚合酶混合液

、、DEPC(GB/T6682)、/TaqDNA、2×

一步法反應(yīng)緩沖液一步法熒光定量試劑盒緩沖液瓊脂糖核酸染料引物

RT-PCR、RT-PCR、TAE、、、

引物與探針參見附錄

MF/MR、qMF/qMR(A)。

32儀器設(shè)備

.

儀器設(shè)備包括儀熒光定量儀臺式冷凍離心機電泳儀和水平電泳槽凝膠成相儀或

:PCR、PCR、、、(

紫外透射儀

)。

33反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)RT-PCR

.()

331樣品處理與RNA的提取

..

采集羊的鼻拭子氣管拭子或肺臟樣品的采集保存和運輸應(yīng)符合的相關(guān)規(guī)定取

、(、NY/T541)。

待檢樣品液至無菌無酶的管中使用試劑提取試劑盒或自動化核酸

200μL、RNAEP,TRIzol、RNA

提取儀等方法提取

RNA。

332RT-PCR反應(yīng)

..

反應(yīng)使用體系一步法反應(yīng)緩沖液引物各

RT-PCR20μL:10μL2×RT-PCR、MF/MR0.5μL

反轉(zhuǎn)錄酶聚合酶混合液模板處理水

(10μmol/L)、0.4μL/TaqDNA、4μLRNA,4.6μLDEPC。

反應(yīng)條件為反轉(zhuǎn)錄預(yù)變性進(jìn)行個

: