標準解讀

《DB31/T 600-2012 豬附紅細胞體PCR檢測方法》是一項地方標準，由上海市質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布，旨在規(guī)范豬附紅細胞體（Mycoplasma suis）的PCR檢測流程。該標準適用于動物疫病預(yù)防控制機構(gòu)、獸醫(yī)實驗室以及相關(guān)科研單位對豬附紅細胞體感染進行分子生物學(xué)診斷時使用。

標準中詳細描述了從樣本采集到最終結(jié)果分析的全過程。首先，在樣本準備階段，推薦采用血液作為檢測材料，并且對于采血部位、采血量等都有具體要求，以確保所取得的樣本能夠準確反映豬只是否受到豬附紅細胞體感染。接著是DNA提取步驟，通過特定試劑盒或手動操作完成，目的是獲得高質(zhì)量的基因組DNA用于后續(xù)實驗。

在PCR反應(yīng)體系構(gòu)建方面，《DB31/T 600-2012》規(guī)定了包括引物設(shè)計、Taq酶選擇、dNTPs濃度在內(nèi)的多個關(guān)鍵參數(shù)設(shè)置建議，這些設(shè)置直接影響到擴增效率和特異性。此外，還給出了詳細的熱循環(huán)條件，如預(yù)變性溫度及時長、退火溫度及延伸時間等，這些都是保證實驗成功的重要因素。

對于結(jié)果判讀，《DB31/T 600-2012》提出了基于凝膠電泳圖譜分析的方法，通過比較目標條帶與陽性對照之間的位置關(guān)系來確定樣品中是否存在豬附紅細胞體DNA。同時，也強調(diào)了實驗過程中應(yīng)注意避免污染的重要性，比如使用專用移液器、設(shè)立陰性對照等措施，以提高檢測準確性。

整個標準文件圍繞如何科學(xué)有效地實施豬附紅細胞體PCR檢測展開，為從事相關(guān)工作的人員提供了明確的操作指南和技術(shù)支持。


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....

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  • 廢止
  • 已被廢除、停止使用，并不再更新
  • 2012-05-17 頒布
  • 2012-10-01 實施
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文檔簡介

ICS11220

B42.

備案號34154—2012

:

上海市地方標準

DB31/T600—2012

豬附紅細胞體PCR檢測方法

MethodofdetectingEperythrozoonsuisbyPCR

2012-05-17發(fā)布2012-10-01實施

上海市質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布

DB31/T600—2012

前言

本標準按照給出的規(guī)則起草

GB/T1.1—2009。

本標準由上海交通大學(xué)提出

。

本標準由上海市畜牧辦公室歸口

。

本標準由上海交通大學(xué)中華人民共和國上海出入境檢驗檢疫局上海市動物疫病預(yù)防控制中心

、、、

上海市動物衛(wèi)生監(jiān)督所起草

。

本標準主要起草人楊志彪袁聰俐華修國夏永高崔立朱建國陳琦蔣靜

:、、、、、、、。

Ⅰ

DB31/T600—2012

豬附紅細胞體PCR檢測方法

1范圍

本標準規(guī)定了豬附紅細胞體檢測方法

PCR。

本標準適用于豬附紅細胞體的檢測

。

2規(guī)范性引用文件

下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的凡是注日期的引用文件僅注日期的版本適用于本文

。,

件凡是不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改單適用于本文件

。,()。

分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法

GB/T6682

實驗室生物安全通用要求

GB19489

3術(shù)語和定義

下列術(shù)語和定義適用于本文件

。

31

.

附紅細胞體Eperythrozoons

附紅細胞體病的病原主要寄生于人和動物的紅細胞表面血漿及骨髓以引起

(Eperythrozoonsis),、,

貧血黃疸和發(fā)熱為主要特征是一種重要的人獸共患病病原

、,。

32

.

豬附紅細胞體Eperythrozoonsuis

豬附紅細胞體病的病原主要寄生于豬的紅細胞表面血漿及骨髓以引起貧血黃疸和發(fā)熱為主要

,、,、

特征并有隱性感染慢性遷延條件致病急性發(fā)病時致死率高的特征

,、、、。

4原理

以從血液樣本中提取的基因組作為模板加入到擴增豬附紅細胞體的反應(yīng)混合液中

DNA,PCR,

進行擴增最后通過瓊脂糖凝膠電泳檢測產(chǎn)物與進行比較來確定擴增產(chǎn)物

PCR。PCR,DNAMarker,

的大小在此基礎(chǔ)上判定樣品的檢測結(jié)果

,。

所用引物是根據(jù)豬附紅細胞體保守序列設(shè)計

16SrRNA。

5試劑和材料

除另有規(guī)定所用試劑均為分析純水為符合的滅菌雙蒸水

,,GB/T6682。

51豬附紅細胞體反應(yīng)混合物

.PCR:

上下游引物各緩沖液含鎂離子雙蒸水加至引物序列如下擴

、1μL,10×PCR2.5μL(

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