果洛牛布魯氏菌病的流行診斷和綜合防控策略的分析探討

牛布魯氏菌病是現(xiàn)代牛養(yǎng)殖業(yè)中危害極大的一類人畜共患傳染性疾病，病原主要進(jìn)行消化道、生殖道、呼吸道和破損的黏膜組織等多種渠道進(jìn)行傳播，很容易在養(yǎng)殖、屠宰、銷售等諸多環(huán)節(jié)傳播流行，嚴(yán)重威脅到養(yǎng)殖人員和消費(fèi)者的身心健康以及畜牧養(yǎng)殖安全。青海省果洛州有著悠久的牛養(yǎng)殖歷史，牦牛養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)是當(dāng)?shù)氐闹е援a(chǎn)業(yè)，隨著近年來養(yǎng)殖規(guī)模逐漸擴(kuò)大，規(guī)?；B(yǎng)殖場的建設(shè)數(shù)量逐漸增加以及養(yǎng)殖戶對外引種頻率的顯著增強(qiáng)，布魯氏菌病的傳入風(fēng)險(xiǎn)大大增加，如果缺乏科學(xué)有效的診斷和防控，勢必會對牛的正常生長發(fā)育構(gòu)成嚴(yán)重危害。目前基層地區(qū)的農(nóng)牧民群眾對布魯氏菌病的危害認(rèn)知不足，在日常養(yǎng)殖過程中，并不能夠做好疾病的有效識別和防治工作經(jīng)驗(yàn)的有效總結(jié)，當(dāng)出現(xiàn)疑似病例之后，不知道該采取哪種措施進(jìn)行有效的處理，最終造成布魯氏菌在養(yǎng)殖場中大范圍傳播蔓延，引發(fā)大批量的牦牛發(fā)病，帶來不可挽回的直接損失。本次研究在對青海省果洛州牛養(yǎng)殖現(xiàn)狀進(jìn)行探討的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步分析了布魯氏菌病的流行特點(diǎn)、診斷方法和綜合防控措施，希望對更好地降低該類疾病的發(fā)生流行率有一定幫助。一、青海省果洛州牛布魯氏菌病的防控現(xiàn)狀1、青海省果洛州牛養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)現(xiàn)狀青海省果洛州屬高原大陸性季風(fēng)氣候，冬長夏短，溫差較大，降水稀少，年平均氣溫-2～2℃，1月平均氣溫-15～-5℃，7月平均氣溫10～16℃，平均年降水量300～500mm，主要集中在6～9月，年日照時數(shù)2800～3000h。當(dāng)?shù)負(fù)碛胸S富的畜牧資源全州草地面積，占全省草場面積的1/3以上，境內(nèi)有黃河、瑪曲河等河流，高原氣候涼爽，晝夜溫差大，有利于畜牧業(yè)的發(fā)展，再加上藏族文化中重視畜牧業(yè)，當(dāng)?shù)剞r(nóng)牧民群眾擁有豐富的畜牧業(yè)傳統(tǒng)和養(yǎng)殖經(jīng)驗(yàn)。目前果洛州已經(jīng)基本形成了以牦牛肉、牦牛奶、牦牛絨為核心的牦牛產(chǎn)業(yè)鏈。2、青海省果洛州牛布魯氏菌病防控現(xiàn)狀隨著青海果洛州牦牛養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)的不斷向前推進(jìn)和發(fā)展養(yǎng)殖規(guī)模擴(kuò)大背景之下，以布魯氏菌病為主的人畜共患傳染性疾病呈現(xiàn)散發(fā)流行的態(tài)勢，并且越發(fā)嚴(yán)重，其中瑪多縣、班瑪縣、久治縣等地發(fā)病率較高，病原主要通過接觸感染牛的胎盤、胎衣、流產(chǎn)物、精液等途徑傳播。為更好降低布魯氏菌病的陽性率，確保牦牛養(yǎng)殖安全，當(dāng)?shù)剞r(nóng)牧部門和政府部門高度重視牛布魯氏菌病的防控工作，定期對牛群進(jìn)行布魯氏菌抗體檢測，發(fā)現(xiàn)陽性牛后，立即隔離并撲殺，對密切接觸牛只進(jìn)行檢測和隔離，對4～8月齡的雌性犢牛進(jìn)行布魯氏菌疫苗接種，建立免疫屏障，加強(qiáng)疫區(qū)徹底消毒，對疫區(qū)引進(jìn)的牛只進(jìn)行檢疫和隔離，同時開展牛布魯氏菌病防治知識宣傳和培訓(xùn)，增強(qiáng)牧民的防控意識和能力。盡管果洛州采取了積極的防控措施，但牛布魯氏菌病防控仍面臨挑戰(zhàn)。在疫病防控期間部分農(nóng)牧民對布魯氏菌病認(rèn)識不足，防控措施落實(shí)不到位，另外果洛州地處高原，自然環(huán)境復(fù)雜，增加了布魯氏菌傳播的難度，再加上野生動物也可能攜帶布魯氏菌，對牛群構(gòu)成潛在威脅。二、牛布魯氏菌病的流行病學(xué)1、牛布魯氏菌病的病原學(xué)布魯氏菌病是由布魯氏菌屬的細(xì)菌引起，病原為革蘭氏陰性細(xì)菌，呈球形、球桿狀或短桿狀，無鞭毛，不運(yùn)動，也不形成芽孢，在沙黃-孔雀綠染色中呈紅色，而其他細(xì)菌則呈綠色，這一特性可作為其鑒別依據(jù)。布魯氏菌為絕對厭氧菌，對氧氣非常敏感，需要在無氧環(huán)境下生長。在低溫、干燥的環(huán)境中，其活動能力較強(qiáng)，而在高溫條件下活動能力較差，在60℃的環(huán)境中，約30min即可將其殺死。在體外環(huán)境中細(xì)菌的抵抗力較強(qiáng)，能在動物的乳汁、皮毛、分泌物和排泄物中存活數(shù)月，對常用的物理和化學(xué)消毒方法均敏感，濕熱60℃或紫外線照射20min即可滅活。目前，布魯氏菌病在全球近170個國家和地區(qū)的人畜中存在，在我國布魯氏菌病曾在20世紀(jì)80年代和90年代初期得到基本控制，但自90年代中期起疫病持續(xù)快速上升，成為報(bào)告發(fā)病率上升速度最快的傳染病之一。2、牛布魯氏菌病的致病機(jī)理牛布魯氏菌可通過皮膚損傷、吸入或攝入進(jìn)入人體，優(yōu)先靶向單核巨噬細(xì)胞，在單核巨噬細(xì)胞內(nèi)牛布魯氏菌在細(xì)胞質(zhì)中存活和增殖，并在增殖過程中能夠產(chǎn)生多種致病因子，常見的包括脂多糖（LPS）和生物膜，這些因子會抑制宿主的免疫反應(yīng)，LPS抑制巨噬細(xì)胞吞噬和殺菌活性，生物膜形成保護(hù)層，防止抗體和免疫細(xì)胞的進(jìn)入。隨后布魯氏菌產(chǎn)生胞內(nèi)生長抑制因子（IGS），損害巨噬細(xì)胞并導(dǎo)致細(xì)胞壞死，胞內(nèi)增殖會破壞單核巨噬細(xì)胞的生理功能，導(dǎo)致免疫反應(yīng)受損，細(xì)胞當(dāng)中的布魯氏菌死亡之后會釋放脂多糖（LPS），導(dǎo)致炎癥、發(fā)燒和組織損傷，炎癥細(xì)胞又會進(jìn)一步釋放促炎細(xì)胞因子，例如腫瘤壞死因子-α（TNF-α）和白細(xì)胞介素-6（IL-6），并持續(xù)在單核巨噬細(xì)胞內(nèi)建立持續(xù)感染。3、牛布魯氏菌病的流行特點(diǎn)從當(dāng)前牛布魯氏菌病的流行情況來看，該種疾病在牧區(qū)大多呈現(xiàn)散發(fā)流行狀態(tài)呈散發(fā)流行狀態(tài)，并且近年來越發(fā)嚴(yán)重，發(fā)病率逐年上升，已波及果洛州所有縣市，主要感染牦牛和黃牛，牦牛感染率高于黃牛，病原要通過接觸感染牛的胎盤、胎衣、流產(chǎn)物、精液等途徑傳播。從傳播規(guī)律來看，牛布魯氏菌病的流行具有一定季節(jié)性，牧區(qū)該類疾病發(fā)病多集中在春季和秋季，與牛的繁殖季節(jié)有關(guān)，青年牛和初產(chǎn)牛感染率較高，呈現(xiàn)地域性分布，牧區(qū)發(fā)病率高于農(nóng)區(qū)。從流行原因來看，果洛州牛布魯氏菌病的流行往往與養(yǎng)殖方式、免疫接種、農(nóng)牧民群眾的防控意識、野生動物的接觸密切相關(guān)，當(dāng)前在牧區(qū)大多數(shù)農(nóng)牧民群眾一直堅(jiān)持放牧為主，牛群間接觸頻繁，增加了傳播風(fēng)險(xiǎn)，再加上部分牧民未及時對牛犢進(jìn)行疫苗接種，對布魯氏菌病的認(rèn)識不足，防控措施落實(shí)不到位，以及野生動物也可能攜帶布魯氏菌，對牧區(qū)牦牛生產(chǎn)構(gòu)成潛在威脅。三、牛布魯氏菌病的臨床癥狀牦牛布魯氏菌病的潛伏期一般為7～60d，平均約為2～3周，但也有報(bào)告指出，少數(shù)病例的潛伏期可短至數(shù)天或長達(dá)數(shù)月。感染細(xì)菌之后，患病牛就會表現(xiàn)出較為復(fù)雜的臨床癥狀，牦牛在急性期可能出現(xiàn)發(fā)熱，典型的發(fā)熱形態(tài)為波狀熱，即體溫逐漸升高，達(dá)到高峰后緩慢下降，熱程約2～3周，間歇數(shù)日至2周，然后體溫再次升高，反復(fù)多次，并在此階段出現(xiàn)寒戰(zhàn)、多汗、頭痛、肌肉和關(guān)節(jié)疼痛、乏力、肝脾和淋巴結(jié)腫大等癥狀。病程超過一年的病例稱為慢性期，可分為兩類，一類是全身性非特異性癥狀，持續(xù)出現(xiàn)低熱、癥狀體征反復(fù)出現(xiàn)或加重，類似神經(jīng)癥和慢性疲勞綜合征，另一類是器質(zhì)性損害，骨骼-肌肉系統(tǒng)的損害，大關(guān)節(jié)損害和肌腱攣縮，神經(jīng)系統(tǒng)病變?nèi)缰車窠?jīng)炎、腦膜炎，以及泌尿生殖系統(tǒng)病變?nèi)绮G丸炎、附睪炎、卵巢炎等，尤其是妊娠階段的母牛在妊娠中后期極容易出現(xiàn)流產(chǎn)現(xiàn)象，產(chǎn)下的胎兒大多死亡，即便是胎兒能夠存活也會天然攜帶有布魯氏菌導(dǎo)致該種病情大范圍傳播蔓延。四、牛布魯氏菌病的病理變化通過對病死牛解剖之后能夠發(fā)現(xiàn)，病死牛的多個臟器器官都會出現(xiàn)廣泛性的病理變化，其中肝臟是布魯氏菌最常侵犯的器官之一，急性感染時，肝臟出現(xiàn)充血、水腫和細(xì)胞浸潤，隨后形成肉芽腫，主要由上皮樣細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和淋巴細(xì)胞組成，慢性感染時肝臟可能出現(xiàn)纖維化和肝硬化。脾臟腫大，鏡下可見淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞的彌漫性浸潤，淋巴結(jié)腫大，鏡下可見淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和漿細(xì)胞的浸潤。母畜可能出現(xiàn)流產(chǎn)、不育和子宮炎，公畜可能出現(xiàn)睪丸炎，導(dǎo)致睪丸腫大和萎縮。腎臟出現(xiàn)炎性變化，充血、細(xì)胞浸潤和腎小球硬化，中樞和周圍神經(jīng)系統(tǒng)病變導(dǎo)致腦膜炎、腦炎和神經(jīng)炎。將腫大關(guān)節(jié)切開之后可以發(fā)現(xiàn)內(nèi)部關(guān)節(jié)炎顯著增多，關(guān)節(jié)軟骨壞死，有的病死牛還會表現(xiàn)出心內(nèi)膜炎和心肌炎，導(dǎo)致心臟病變。五、牛布魯氏菌病的實(shí)驗(yàn)室診斷1、顯微鏡檢查準(zhǔn)備好干凈的載玻片，患病牛的流產(chǎn)物、胎衣碎片、科茲羅夫斯基染液、95%酒精溶液、顯微鏡。將病料粉碎之后，按照1∶20用生理鹽水進(jìn)行稀釋，在干凈的載玻片上滴加少量病料，加一滴科茲羅夫斯基染液覆蓋在病料上。放置片刻，讓染料與病料充分接觸，滴加95%酒精溶液至玻片邊緣，讓酒精從邊緣處緩慢滲入，直至玻片中央，作用30s后，用濾紙吸去多余酒精，自然干燥，用顯微鏡觀察染色后的細(xì)菌。在顯微鏡下能夠觀察到菌體被染成紅色，背景是淡黃色或者淡棕色，其他菌體被染成藍(lán)色。出現(xiàn)上述特征之后，可以初步判定為布魯氏菌感染。2、虎紅平板凝集試驗(yàn)在玻璃板各方格標(biāo)記受檢血清編號，然后加入相應(yīng)的血清25L，各待檢血清旁滴加虎紅抗原25L，用滅菌牙簽類小棒快速混勻血清和抗原，涂成2cm直徑的圓形，于4min內(nèi)觀察結(jié)果。標(biāo)準(zhǔn)陰性血型不出現(xiàn)凝集，標(biāo)準(zhǔn)陽性血清出現(xiàn)凝集，在陰性對照和陽性對照成立的基礎(chǔ)上待檢血清出現(xiàn)凝集之后表示為陽性，不出現(xiàn)凝集表示為陰性。3、試管凝集試驗(yàn)在實(shí)驗(yàn)之前準(zhǔn)備好布魯氏菌標(biāo)準(zhǔn)抗原，0.5%石炭酸生理鹽水，待檢血清，已知陰性和陽性血清，用于對照、凝集試驗(yàn)管（三角管）、試管架、吸管和溫箱。按常規(guī)方法將牦牛血清從-20℃冰箱中取出恢復(fù)到室溫溫度條件，對試管分別進(jìn)行標(biāo)記，記錄1號、2號、3號和4號試管。1號試管到4號試管分別加入0.5%石炭酸生理鹽水1.15mL、0.5mL、0.5mL、0.5mL。分別取0.1mL被檢血清加入1號試管，用吸管將混合液吹打均勻后棄去0.25mL，取0.5mL混合液加入2號試管，取0.5mL混合液加入3號試管，從3號試管棄去0.5mL混合液，取0.5mL混合液加入4號試管，在各個步驟操作完成之后，分別用吸管將混合液吹打均勻。陰性對照和陽性對照成立的條件下，4號試管出現(xiàn)凝集現(xiàn)象且3號試管也出現(xiàn)凝集現(xiàn)象，2號試管不出現(xiàn)凝集現(xiàn)象判定為陽性，4號試管不出現(xiàn)凝集現(xiàn)象，3號試管不出現(xiàn)凝集現(xiàn)象，2號試管出現(xiàn)凝集現(xiàn)象表示陰性，4號試管出現(xiàn)凝集現(xiàn)象，3號試管出現(xiàn)凝集現(xiàn)象，2號試管也出現(xiàn)凝集現(xiàn)象判定可疑。4、全乳環(huán)狀試驗(yàn)準(zhǔn)備好疑似患病牛的全乳樣本、布魯氏菌抗原、PBS（pH7.2-7.4）、環(huán)狀試驗(yàn)板（直徑3cm）。實(shí)驗(yàn)操作期間將布魯氏菌抗原稀釋為1∶100，離心全乳樣本，取上清液使用，在環(huán)狀試驗(yàn)板中添加50μlPBS，然后向其中小心加50μL稀釋的抗原，沿著抗原和PBS的界面緩慢滴加100μl乳樣，將試驗(yàn)板置于搖床或旋轉(zhuǎn)儀上，以60～80r/min的速度旋轉(zhuǎn)30min，在環(huán)狀試驗(yàn)板的界面處觀察結(jié)果。在抗原和乳樣之間出現(xiàn)明顯的環(huán)形沉淀帶判定為陽性，沒有出現(xiàn)環(huán)形沉淀帶可以判定為陰性，在抗原和乳樣之間出現(xiàn)不明顯的或部分環(huán)形沉淀帶判定為疑似感染。必要時可以采集血清進(jìn)行PCR檢測，以確定疫病。六、牛布魯氏菌病的疫病處置方案在進(jìn)行牦牛布魯氏菌病疫病處置過程中，一定要嚴(yán)格落實(shí)所出臺實(shí)施的強(qiáng)制性規(guī)章制度。發(fā)生疫病之后，應(yīng)該注重做好疫病的報(bào)告工作，確診疫病后，立即啟動應(yīng)急預(yù)案，開展疫病處置工作。首先將病患牦牛與其他牦牛分開，轉(zhuǎn)移到隔離區(qū)進(jìn)行觀察，對病患牦牛所處的圈舍、用具使用2%的復(fù)合酚或者2%的甲酚皂等消毒劑進(jìn)行全面消毒，防止疫病擴(kuò)散，堅(jiān)持每天上午下午各消毒1次，連續(xù)使用一周以后每周消毒1～2次，逐漸過渡到常規(guī)消毒方案。對疑似病例進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室檢測，排查其他牦牛是否感染布魯氏菌，對確診為布魯氏菌病的牦牛嚴(yán)格地?fù)錃o害化處理，防止疫病反復(fù)。同時加強(qiáng)疫病監(jiān)測與防控，對牦牛進(jìn)行布魯氏菌病檢測，確保疫病不擴(kuò)散。疫病控制措施實(shí)施后，疫區(qū)的最后一頭患病牛撲上，或者死亡，連續(xù)監(jiān)測至少21d時間，未發(fā)現(xiàn)新發(fā)病例，可解除疫病，解除疫病后，應(yīng)繼續(xù)加強(qiáng)監(jiān)測，防止疫病復(fù)發(fā)。七、牛布魯氏菌病的綜合預(yù)防為了有效防控牦牛布魯氏菌病，需要做到每間隔2～3個月對牦牛群進(jìn)行布魯氏菌病的監(jiān)測，使用血清學(xué)檢測等方法，及時發(fā)現(xiàn)帶菌動物，對檢出的陽性牛只進(jìn)行隔離撲殺，避免其與其他健康牛只接觸。養(yǎng)殖場內(nèi)部建立完善的生物安全體系，劃分好隔離養(yǎng)殖區(qū)，嚴(yán)格控制外來動物及產(chǎn)品進(jìn)入養(yǎng)殖場，做好畜舍的清潔和消毒工作，特別是對于流產(chǎn)、死胎和排泄物等高風(fēng)險(xiǎn)區(qū)域應(yīng)該嚴(yán)格落實(shí)流產(chǎn)物的無害化處理和衛(wèi)生消毒，避免不同年齡和來源的牦?；烊?，特別是避免帶菌牛與健康牛混群。另外，加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，保持牛只良好的體質(zhì)，提高其對疾病的抵抗力，避免過度擁擠和不良的飼養(yǎng)環(huán)境，減少疾病傳播的風(fēng)險(xiǎn)。從事養(yǎng)殖、屠宰、加工等職業(yè)的人員在工作過程中，應(yīng)采取適當(dāng)?shù)膫€人防護(hù)措施并做到每年對從事相關(guān)工作的人員進(jìn)行健康檢查，及時發(fā)現(xiàn)和治療感染者。此前，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部下發(fā)的常見動物疫病免疫推薦方案中，將青海省確定為布魯氏菌病感染的一類地區(qū)，所以為更好防控該種疾病的發(fā)生流行，應(yīng)該以縣為單位連續(xù)3年對牛實(shí)行全面免疫接種，推薦使用M5或者S9株布魯氏菌疫苗對牛進(jìn)行免疫接種，2月齡以上的健康牛每頭牛使用1mL，皮下注射，免疫期12個月。綜上所述，牛布魯氏菌病具