DB1310∕T 251-2021 軟棗獼猴桃組織培養(yǎng)育苗技術(shù)規(guī)程

ICS65.020.01CCSB051310IDB1310/T251—2021本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。本文件由廊坊市農(nóng)業(yè)農(nóng)村局提出。本文件起草單位：廊坊市興延科技服務(wù)有限公司、廊坊師范學(xué)院。本文件主要起草人：蘇彥蘋、申彥平、馮雪、王秋芬、褚卓棟、孫艷香、張程亮、梁金明、袁志剛、張方悅。DB1310/T251—20211軟棗獼猴桃組織培養(yǎng)育苗技術(shù)規(guī)程本文件規(guī)定了軟棗獼猴桃組培育苗的術(shù)語和定義、培養(yǎng)基制備、初代培養(yǎng)、繼代培養(yǎng)、煉苗、移栽、大田移栽及管理、苗木出圃標(biāo)準(zhǔn)、保管、包裝及運(yùn)輸、技術(shù)檔案管理。本文件適用于廊坊及氣候相近地區(qū)軟棗獼猴桃組織培養(yǎng)育苗生產(chǎn)。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T6001—1985育苗技術(shù)規(guī)程GB19174—2010獼猴桃苗木LY/T1882—2010林木組織培養(yǎng)育苗技術(shù)規(guī)程3術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。組培苗根據(jù)植物細(xì)胞全能性，將植物的體細(xì)胞、組織或器官進(jìn)行離體培養(yǎng)，經(jīng)過不同的細(xì)胞分化途徑重建形成不同的器官，誘導(dǎo)培育出的完整植株。外植體是指用于植物組織培養(yǎng)的接種材料，它包括植物體的各種器官、組織、細(xì)胞和原生質(zhì)體等。繼代培養(yǎng)將誘導(dǎo)產(chǎn)生的芽、愈傷組織、原球莖或胚狀體等培養(yǎng)物重新分割，接種到新鮮培養(yǎng)基上進(jìn)一步擴(kuò)大培養(yǎng)的過程。4培養(yǎng)基制備培養(yǎng)基配方基本培養(yǎng)基采用MS培養(yǎng)基，具體的外植體誘導(dǎo)培養(yǎng)基及繼代培養(yǎng)基配方表見附錄A。母液配制2入不銹鋼鍋，加熱至沸騰，使培養(yǎng)基完全溶解，然后用1.0mol/L鹽酸或1.0mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)整pH培養(yǎng)基配制完成后，在24h內(nèi)完成滅菌。將分裝好的培養(yǎng)基放入滅菌鍋內(nèi)，求操作，滅菌氣壓0.11MPa,溫度121℃,滅菌時(shí)間20min~25min。培養(yǎng)基滅菌完成后待溫度下降到80℃內(nèi)使用完，2℃~4℃冷藏保存應(yīng)在14d內(nèi)使用完。4月至9月，選擇連續(xù)2d以上晴天的傍晚，采集母株樹冠外圍中上部幼嫩新梢，剪除葉片作為外植水的容器中，在23℃~25℃培養(yǎng)箱中催芽，每2d～3d換一次水，待葉芽萌動(dòng)長(zhǎng)出新梢后，采集幼嫩新可用濕潤(rùn)毛巾等保濕材料包裹后保存0.5h～4.0h;用泡沫保鮮箱配備冰袋低溫保藏48.0h,注意3用自來水沖洗外植體表面，將外植體剪成4.0cm~6.0cm的帶芽莖段，放入裝有0.3%～0.5%中性洗接種前使用75%酒精將超凈工作臺(tái)的臺(tái)面及內(nèi)壁擦拭干凈，然后啟動(dòng)超凈工作30min。關(guān)閉紫外燈后開啟超凈工作臺(tái)風(fēng)機(jī)，鼓風(fēng)10min用75%酒精對(duì)雙手及手腕消毒，將預(yù)處理后的材料置于已消毒的超凈工作臺(tái)的莖段置于已滅菌的燒杯中，先用75%酒精浸泡外植體30s,無菌水清洗3次，每次30s,再鈉溶液滅菌10min,無菌水清洗3次，每次30s,用無菌濾紙吸干外植體表面的水分。也可選用其它外植于超凈工作臺(tái)上將已消毒的外植體莖段兩端各剪掉1mm,垂直插入誘導(dǎo)培養(yǎng)基，每個(gè)培養(yǎng)瓶接種3個(gè)莖段，均勻分布，接種后將培養(yǎng)瓶瓶口在酒精燈火焰上灼燒1s～2s,迅速蓋好瓶蓋，在培養(yǎng)瓶瓶壁上標(biāo)明品種名稱、接種日期、接種人等信息，放入培養(yǎng)室培養(yǎng)。培養(yǎng)室溫度控制在(25±1)℃,光照強(qiáng)度為15001x～30001x,光照時(shí)數(shù)為16h/d。割成帶1個(gè)芽的莖段，轉(zhuǎn)接至繼代培養(yǎng)基中。接至新配制的繼代培養(yǎng)基中。此后定期將繼代培養(yǎng)基中的不當(dāng)不定芽高度達(dá)3cm以上時(shí)，先將培養(yǎng)瓶置于溫度在20℃~30℃的溫室進(jìn)行閉瓶煉苗3d,再打開培DB1310/T251—20214容器規(guī)格為直徑5.0cm～6.0cm、高度10.0cm～12.0cm的塑料營(yíng)養(yǎng)缽或無紡布育苗袋?；|(zhì)將蛭石和泥炭土按1:1體積比混合均勻，裝入容器備用?；|(zhì)消毒移栽前1d～2d用500倍～800倍的50%多菌靈溶液澆透。溫室移栽及管理8.4.1溫室移栽移栽時(shí)間在3月～4月進(jìn)行。用自來水清洗干凈不定芽基部的培養(yǎng)基，剪去部分老葉及基部的愈傷組織，只留兩葉一心，將不定芽基部用1mg/mL的萘乙酸溶液速蘸5s～10s，快速移栽到營(yíng)養(yǎng)缽或育苗袋中，并澆透水。移栽時(shí)注意輕拿輕放以免損傷不定芽，移栽后7d內(nèi)用塑料薄膜或保鮮膜覆蓋以保濕。8.4.2溫濕度控制移栽后保持溫室溫度在23℃~28℃,空氣濕度85%以上。8.4.3水肥管理移栽7d～14d后去除薄膜，澆水以見干見濕為原則，保證基質(zhì)不缺水即可。移栽苗長(zhǎng)出新葉后，每隔7d～10d噴施1次葉面肥，連續(xù)噴3次～4次。8.4.4病蟲害防治病蟲害防治遵照GB/T6001—1985的要求執(zhí)行。9大田移栽及管理溫室幼苗高10cm以上時(shí)，澆一次透水，選擇在風(fēng)小、光照弱的天氣的傍晚，去除營(yíng)養(yǎng)缽或育苗袋，將帶土坨的幼苗按株距20cm、行距40cm移栽到大田。移栽后澆一次透水，以后根據(jù)土壤水分狀況及時(shí)灌水。前期可追施氮肥，中后期適當(dāng)增加磷鉀肥的使用，并做好病蟲害防治及人工除草和松土。10苗木出圃標(biāo)準(zhǔn)側(cè)根數(shù)量≥4條，側(cè)根長(zhǎng)度≥20cm，當(dāng)年生苗主干高度≥100cm、地徑≥0.4cm、主干完全木質(zhì)化。11保管、包裝及運(yùn)輸按照GB19174—2010中第7章執(zhí)行。12技術(shù)檔案管理按照GB/T6001—1985中第13章執(zhí)行。DB1310/T251—20215（資料性）軟棗獼猴桃組培苗培養(yǎng)基配方表A.1軟棗獼猴桃組培苗培養(yǎng)基配方表見表A.1。表