焦亡在原繼發(fā)性（牙合）創(chuàng)傷致骨吸收中作用機制及臨床意義探究

焦亡在原繼發(fā)性（牙合）創(chuàng)傷致骨吸收中作用機制及臨床意義探究一、引言1.1研究背景與意義在口腔醫(yī)學領域，原繼發(fā)性（牙合）創(chuàng)傷致骨吸收是一個備受關注的重要問題。原繼發(fā)性（牙合）創(chuàng)傷是由于不正常的牙合接觸關系和/或咀嚼系統(tǒng)的功能異常，造成咀嚼系統(tǒng)的某些部位的病理性損害或適應性變化。其中，咬合力異常即原發(fā)性牙合創(chuàng)傷，與牙合力大小，分布，方向，頻率及持續(xù)時間相關，其中以力的作用方向最為重要；而牙周支持力不足則為繼發(fā)性牙合創(chuàng)傷，由于牙周支持組織的病變，如牙槽骨吸收，牙周膜纖維疏松和減少，排列紊亂，使牙周支持力不足，此時即使正常的咬合力量，也可成為過重的負擔，而導致牙周組織進一步損傷。牙槽骨作為人體骨骼系統(tǒng)中代謝和改建最活躍的部分，骨吸收與新生的平衡一旦被打破，即可能發(fā)生牙槽骨吸收。在原繼發(fā)性（牙合）創(chuàng)傷的影響下，牙槽骨吸收問題愈發(fā)嚴峻。當慢性炎癥擴展到牙槽骨附近，骨表面和骨髓腔內分化出破骨細胞和單核-巨噬細胞，發(fā)生陷窩狀骨吸收，而牙周炎患者常伴有咬合創(chuàng)傷，導致受壓側的牙槽骨吸收，受牽引側的骨質新生，炎癥和咬合創(chuàng)傷都可以引起垂直型骨吸收。牙槽骨吸收后，牙齒的支持組織喪失，牙齒逐漸松動，最終導致牙齒脫落或拔除，嚴重影響患者的口腔功能和生活質量。細胞焦亡是一種伴有高度炎癥的程序性細胞死亡，目前研究發(fā)現(xiàn)，根據接受的刺激以及激活信號通路的不同，細胞焦亡可以分為由caspase-1介導的經典焦亡途徑和由caspase-4、5、11介導的非經典焦亡途徑。近年來，越來越多的研究表明，細胞焦亡在多種生理和病理過程中發(fā)揮著關鍵作用，其在口腔疾病中的研究也取得了一定進展，廣泛參與調節(jié)口腔疾病的發(fā)生發(fā)展過程，不同的焦亡途徑形成復雜的信號網絡，調控口腔中牙周膜細胞、牙齦成纖維細胞、巨噬細胞等多種細胞的生命活動，進而影響口腔疾病的發(fā)生與發(fā)展進程。然而，焦亡在原繼發(fā)性（牙合）創(chuàng)傷致骨吸收這一過程中的具體作用機制，尚未完全明確。本研究致力于深入探討焦亡參與原繼發(fā)性（牙合）創(chuàng)傷致骨吸收的機制，這對于口腔醫(yī)學的發(fā)展具有至關重要的意義。從理論層面來看，有助于進一步完善口腔生物學中關于骨代謝和細胞死亡調控的理論體系，為后續(xù)相關研究提供新的思路和方向。在臨床實踐方面，若能明確焦亡在此過程中的作用機制，有望為預防和治療原繼發(fā)性（牙合）創(chuàng)傷致骨吸收相關疾病開辟新的途徑，例如通過調控焦亡相關信號通路，開發(fā)出更加有效的治療方法，減少患者牙槽骨吸收的程度，保留更多的天然牙，提高患者的口腔健康水平和生活質量，具有重要的臨床應用價值和社會經濟效益。1.2國內外研究現(xiàn)狀在國外，對于原繼發(fā)性（牙合）創(chuàng)傷致骨吸收的研究起步較早，積累了較為豐富的成果。學者們通過建立多種動物模型，如在猴、狗、兔、鼠等動物的磨牙上制造咬合高點，誘導對牙合產生實驗性牙合創(chuàng)傷，深入探究了（牙合）創(chuàng)傷對牙周組織的影響。研究發(fā)現(xiàn)，在（牙合）創(chuàng)傷初期，牙周膜常出現(xiàn)玻璃樣變、疏松水腫、出血、增寬以及牙槽骨吸收等病變，相應部位X射線表現(xiàn)為牙周膜增寬或硬骨板增厚。隨著時間推移，1-2個月時病變表現(xiàn)為出血或水腫、纖維排列紊亂等，牙槽骨以成骨為主；3-6個月時牙周間隙增寬或變窄，根外吸收可被牙骨質修復，根尖骨質增生等。同時，生物力學研究表明，多根牙受到垂直力時，應力集中于根分歧處，這與臨床上病變部位多位于根分歧處相吻合。關于細胞焦亡，國外研究在其分子機制方面取得了顯著進展。明確了根據接受的刺激以及激活信號通路的不同，細胞焦亡可分為由caspase-1介導的經典焦亡途徑和由caspase-4、5、11介導的非經典焦亡途徑。caspase-1可以介導炎癥因子白細胞介素（IL）-1β、IL-18前體蛋白水解，促進炎癥的進展；而caspase-11、4、5的N端結構域可以直接識別并結合革蘭氏陰性菌脂多糖（LPS），引起蛋白酶寡聚并引發(fā)焦亡。在口腔疾病領域，也有研究涉及焦亡與牙周疾病的關系，但對于焦亡在原繼發(fā)性（牙合）創(chuàng)傷致骨吸收過程中的作用研究相對較少。國內在原繼發(fā)性（牙合）創(chuàng)傷致骨吸收的研究方面，同樣開展了大量工作。通過動物實驗和臨床觀察，進一步證實了（牙合）創(chuàng)傷會導致牙周組織的一系列病理變化，包括牙槽骨吸收、牙周膜增寬、硬骨板增厚等，并且發(fā)現(xiàn)這些變化與細胞因子密切相關。例如，有研究通過建立咬合創(chuàng)傷動物模型推測，咬合創(chuàng)傷下牙周組織的改建，經歷了先吸收后成骨的過程，轉化生長因子β1（TGF-β1）在這個過程中起到了重要的調節(jié)作用。此外，國內學者還關注到咬合創(chuàng)傷可使牙周組織中的神經末梢釋放降鈣基因相關肽（CGRP），CGRP可能參與了創(chuàng)傷所致的牙周組織的炎癥及修復過程。在細胞焦亡的研究上，國內學者詳細介紹了4種類型的細胞焦亡途徑，包括經典焦亡路徑、非經典焦亡途徑、胱天蛋白酶3/8介導的焦亡途徑及不依賴胱天蛋白酶的焦亡途徑，強調了不同的焦亡途徑形成復雜的信號網絡，調控口腔中牙周膜細胞、牙齦成纖維細胞、巨噬細胞等多種細胞的生命活動，進而影響口腔疾病的發(fā)生與發(fā)展進程。然而，針對焦亡在原繼發(fā)性（牙合）創(chuàng)傷致骨吸收中的具體作用機制研究，仍存在較大的探索空間。盡管國內外在原繼發(fā)性（牙合）創(chuàng)傷致骨吸收以及細胞焦亡方面都取得了一定的研究成果，但當前研究仍存在不足和空白。在（牙合）創(chuàng)傷致骨吸收的研究中，雖然對牙周組織的病理變化有了較為清晰的認識，但對于其具體的分子調控機制尚未完全明確，尤其是多種細胞因子和信號通路之間的相互作用關系有待深入研究。在細胞焦亡領域，雖然對其分子機制和在部分口腔疾病中的作用有了一定了解，但焦亡在原繼發(fā)性（牙合）創(chuàng)傷致骨吸收這一特定過程中的作用機制研究還十分有限，缺乏系統(tǒng)性和深入性的探討。例如，焦亡相關信號通路在（牙合）創(chuàng)傷刺激下如何被激活，以及激活后如何調控骨吸收相關細胞的功能，目前都缺乏明確的研究結論。填補這些研究空白，對于深入理解原繼發(fā)性（牙合）創(chuàng)傷致骨吸收的發(fā)病機制，以及開發(fā)新的治療策略具有重要意義。1.3研究目的與創(chuàng)新點本研究旨在深入探究焦亡在原繼發(fā)性（牙合）創(chuàng)傷致骨吸收過程中的作用機制，明確焦亡相關信號通路在這一過程中的激活與調控機制，以及焦亡對骨吸收相關細胞功能的影響。通過建立動物模型和細胞實驗，觀察焦亡在不同條件下的發(fā)生情況，以及對牙槽骨吸收程度、骨代謝相關指標的影響。同時，分析焦亡與其他細胞因子、信號通路之間的相互作用關系，為揭示原繼發(fā)性（牙合）創(chuàng)傷致骨吸收的發(fā)病機制提供新的理論依據。此外，本研究還期望通過對焦亡機制的研究，探索其在臨床治療中的應用價值，為開發(fā)針對原繼發(fā)性（牙合）創(chuàng)傷致骨吸收的新型治療方法提供理論支持和實驗依據。例如，能否通過調控焦亡相關信號通路，減少牙槽骨吸收，促進骨組織的修復和再生，為臨床治療提供新的靶點和策略。本研究的創(chuàng)新點主要體現(xiàn)在以下幾個方面：一是首次系統(tǒng)地研究焦亡在原繼發(fā)性（牙合）創(chuàng)傷致骨吸收中的作用機制，填補了該領域在這方面研究的空白。以往的研究大多聚焦于原繼發(fā)性（牙合）創(chuàng)傷致骨吸收的病理變化或細胞焦亡在其他口腔疾病中的作用，而對兩者之間的關聯(lián)研究較少。本研究將兩者有機結合，深入探討焦亡在這一特定過程中的作用機制，為口腔醫(yī)學領域的研究開辟了新的方向。二是綜合運用多種研究方法，從動物模型、細胞實驗以及分子生物學等多個層面進行研究，全面深入地揭示焦亡的作用機制。通過建立原繼發(fā)性（牙合）創(chuàng)傷動物模型，模擬臨床實際情況，觀察焦亡在體內的發(fā)生和作用；利用細胞實驗，進一步明確焦亡對骨吸收相關細胞的直接影響；運用分子生物學技術，深入分析焦亡相關信號通路的激活和調控機制，使研究結果更具說服力和可靠性。三是本研究有望為原繼發(fā)性（牙合）創(chuàng)傷致骨吸收的臨床治療提供新的思路和方法。基于對焦亡機制的深入理解，有可能開發(fā)出針對焦亡相關信號通路的靶向治療藥物，或設計新的治療策略，通過調控焦亡來減少牙槽骨吸收，促進骨組織的修復和再生，為患者提供更有效的治療方案，這在臨床應用方面具有創(chuàng)新性和潛在的應用價值。二、相關理論基礎2.1原繼發(fā)性（牙合）創(chuàng)傷概述2.1.1定義與分類原繼發(fā)性（牙合）創(chuàng)傷是口腔醫(yī)學領域中影響牙周組織健康的重要因素。原發(fā)性（牙合）創(chuàng)傷是指由于不正常的或過大的咬合力因素，致使正常的牙周組織受到損傷。判斷原發(fā)性（牙合）創(chuàng)傷的關鍵在于牙周組織原本正常，但所承受的咬合力量過大或咬合方向出現(xiàn)異常，超出了正常牙周組織所能承受的負荷范圍。例如，在咀嚼過程中，突然咬到過硬的物體，瞬間產生過大的咬合力，可能會對牙周組織造成原發(fā)性（牙合）創(chuàng)傷；或者牙齒排列不整齊，個別牙齒承受的咬合力分布不均，長期受到異常的側向力或扭轉力作用，也容易引發(fā)原發(fā)性（牙合）創(chuàng)傷。而繼發(fā)性（牙合）創(chuàng)傷則是因為牙周炎等原因，導致牙周組織本身的支持力不足，無法承受正?；蜻^大的咬合力，從而使牙周組織進一步受到損傷。其判斷標準主要基于牙周組織存在病變，如牙槽骨吸收、牙周膜纖維疏松和減少、排列紊亂等，使得牙周支持力量減弱，即便正常的咬合力量也會成為過重的負擔，進而導致牙周組織的進一步損害。比如，患有牙周炎的患者，牙槽骨已經出現(xiàn)不同程度的吸收，牙周膜的支持功能下降，此時即使是正常的咀嚼咬合力，也可能對牙周組織造成繼發(fā)性（牙合）創(chuàng)傷。原發(fā)性（牙合）創(chuàng)傷和繼發(fā)性（牙合）創(chuàng)傷的主要區(qū)別在于病因和起始條件。原發(fā)性（牙合）創(chuàng)傷的根源在于咬合力的異常，牙周組織在初始狀態(tài)下是健康的，只是由于異常咬合力的作用才引發(fā)損傷；而繼發(fā)性（牙合）創(chuàng)傷的前提是牙周組織已經存在病變，支持力下降，正常或異常的咬合力都可能成為加重損傷的因素。在臨床診斷中，準確區(qū)分原發(fā)性和繼發(fā)性（牙合）創(chuàng)傷對于制定合理的治療方案至關重要，不同類型的（牙合）創(chuàng)傷需要采取不同的治療策略，以有效改善牙周組織的健康狀況。2.1.2致病因素與臨床癥狀引發(fā)原繼發(fā)性（牙合）創(chuàng)傷的致病因素較為復雜，主要可分為咬合力異常和牙周支持力不足兩大方面。咬合力異常即原發(fā)性（牙合）創(chuàng)傷的致病因素，與咬合力的大小、分布、方向、頻率及持續(xù)時間密切相關，其中力的作用方向尤為關鍵。從力的方向來看，垂直壓力、側向壓力和扭轉力對牙周組織的影響各不相同。垂直壓力是與牙體長軸平行的咬合力，牙周膜主纖維呈水平或斜行排列，因此對于與牙長軸一致的垂直壓力具有一定的耐受性，適當的垂直壓力可使主纖維束多數處于張力狀態(tài)，將咬合力傳遞到牙槽骨壁，促進新骨形成；然而，過大的垂直壓力則會使根尖區(qū)的牙周組織受壓，導致根尖區(qū)骨吸收。側向壓力是與牙體長軸呈大于45度的咬合力，當受到側向壓力時，受壓側的牙槽骨會發(fā)生吸收，嚴重時甚至會導致牙齒移位。扭轉力對牙周組織的損傷最為嚴重，它會使牙周膜受到不均勻的牽拉和擠壓，加速牙周組織的破壞。咬合力分布不均勻也是導致原發(fā)性（牙合）創(chuàng)傷的重要原因。在全口牙未完全接觸前，若個別牙或幾個牙先發(fā)生接觸，即出現(xiàn)早接觸現(xiàn)象，這些早接觸患牙會承受過多的咬合力。例如，某顆牙齒由于扭轉、易位等原因，其正常的咬合位置發(fā)生改變，中央溝或切嵴偏離牙弓線，就無法平衡地傳導近遠中水平向力，從而獨自承受大部分異常咬合力，長期如此，牙周膜會受到嚴重傷害，進而引發(fā)牙周病，導致牙齒松動。牙周支持力不足是繼發(fā)性（牙合）創(chuàng)傷的主要致病因素，常見于牙周炎等牙周組織病變。當牙周組織發(fā)生病變時，如牙槽骨吸收、牙周膜纖維疏松和減少、排列紊亂等，會使牙周支持力量顯著下降，即使是正常的咬合力量，也可能超出牙周組織的承受能力，成為過重的負擔，最終導致牙周組織進一步損傷。原繼發(fā)性（牙合）創(chuàng)傷在臨床上會表現(xiàn)出多種癥狀。牙齒松動是較為常見的癥狀之一，無論是原發(fā)性還是繼發(fā)性（牙合）創(chuàng)傷，由于牙周組織受到損傷，無法穩(wěn)固地支持牙齒，都會導致牙齒出現(xiàn)不同程度的松動。疼痛也是常見表現(xiàn)，患者可能會感到牙齒疼痛，尤其是在咬合時疼痛加劇，這是因為咬合力刺激了受損的牙周組織，引發(fā)疼痛反應。牙齦紅腫出血也是常見癥狀，（牙合）創(chuàng)傷會導致牙周組織炎癥反應加重，牙齦組織受到炎癥刺激，出現(xiàn)紅腫、出血等現(xiàn)象。此外，還可能出現(xiàn)牙周袋加深、牙槽骨吸收、牙齒移位等癥狀，嚴重影響患者的口腔功能和美觀。在臨床診斷中，醫(yī)生需要綜合考慮患者的癥狀、病史以及口腔檢查結果，準確判斷是否存在原繼發(fā)性（牙合）創(chuàng)傷，并確定其類型和嚴重程度，以便制定針對性的治療方案。2.2骨吸收相關理論2.2.1骨吸收的生理過程骨吸收是一個涉及多種細胞和分子機制的復雜生理過程，在維持骨骼的正常結構和功能方面起著關鍵作用。破骨細胞在骨吸收過程中扮演著核心角色，它是一種高度分化的多核巨細胞，由骨髓中的造血干細胞分化而來。破骨細胞具有獨特的細胞結構和功能，其細胞質中含有豐富的溶酶體和線粒體，細胞表面存在許多微絨毛，這些結構特點使其能夠有效地與骨組織表面接觸并發(fā)揮骨吸收作用。破骨細胞的骨吸收過程主要通過以下機制實現(xiàn)。首先，破骨細胞在趨化因子的作用下遷移到骨吸收部位，與骨表面緊密附著，形成封閉的微環(huán)境。在這個微環(huán)境中，破骨細胞通過分泌質子和酸性水解酶，如組織蛋白酶K、基質金屬蛋白酶等，使局部pH值降低，從而溶解骨礦物質，同時降解骨基質中的有機成分，如膠原蛋白等。組織蛋白酶K是破骨細胞分泌的一種重要的半胱氨酸蛋白酶，它能夠特異性地降解骨基質中的I型膠原蛋白，在骨吸收過程中發(fā)揮著關鍵作用?；|金屬蛋白酶則可以降解多種細胞外基質成分，促進骨吸收的進行。成骨細胞雖然主要參與骨形成過程，但它與破骨細胞之間存在著密切的相互作用，共同調節(jié)骨吸收和骨形成的平衡。成骨細胞可以分泌多種細胞因子和信號分子，如核因子κB受體活化因子配體（RANKL）、骨保護素（OPG）等，對破骨細胞的分化、活化和功能發(fā)揮調控作用。RANKL是一種跨膜蛋白，它與破骨細胞前體細胞表面的核因子κB受體活化因子（RANK）結合，激活一系列信號通路，促進破骨細胞前體細胞的分化和成熟，增強破骨細胞的骨吸收活性。而OPG則是RANKL的天然拮抗劑，它可以與RANKL競爭性結合RANK，從而抑制破骨細胞的分化和活化，減少骨吸收。成骨細胞還可以通過分泌巨噬細胞集落刺激因子（M-CSF）等細胞因子，促進破骨細胞前體細胞的增殖和存活。此外，一些細胞因子和激素也參與了骨吸收的調節(jié)過程。白細胞介素（IL）-1、IL-6、腫瘤壞死因子（TNF）-α等細胞因子可以促進破骨細胞的分化和活化，增強骨吸收作用。甲狀旁腺激素（PTH）是調節(jié)血鈣水平的重要激素，它可以通過與成骨細胞表面的PTH受體結合，間接促進破骨細胞的活化和骨吸收，以維持血鈣的穩(wěn)定。雌激素在女性骨骼健康中起著重要作用，它可以抑制破骨細胞的活性，減少骨吸收，絕經后女性由于雌激素水平下降，破骨細胞活性增強，骨吸收增加，容易導致骨質疏松癥的發(fā)生。在正常生理狀態(tài)下，破骨細胞、成骨細胞以及各種細胞因子和激素之間相互協(xié)調，共同維持著骨吸收和骨形成的動態(tài)平衡，確保骨骼的正常生長、發(fā)育和代謝。2.2.2牙槽骨吸收的病理機制牙槽骨吸收是牙周炎等口腔疾病的重要病理特征之一，其病理機制與多種因素密切相關。在牙周炎的發(fā)生發(fā)展過程中，細菌及其產物是引發(fā)牙槽骨吸收的始動因素。牙菌斑中的革蘭氏陰性厭氧菌，如牙齦卟啉單胞菌、伴放線聚集桿菌等，會釋放內***、脂磷壁酸、蛋白酶等毒性物質，這些物質可以激活宿主的免疫炎癥反應。免疫細胞，如巨噬細胞、T淋巴細胞、B淋巴細胞等，在炎癥刺激下被激活，釋放大量的細胞因子和炎癥介質，如IL-1、IL-6、TNF-α、前列腺素E2（PGE2）等。這些細胞因子和炎癥介質在牙槽骨吸收中發(fā)揮著關鍵作用。IL-1可以促進破骨細胞的分化和活化，增強其骨吸收活性，同時還能刺激成纖維細胞產生膠原酶，降解牙周組織中的膠原纖維，破壞牙周支持結構。IL-6能夠協(xié)同其他細胞因子，促進破骨細胞的形成和骨吸收，并且可以抑制成骨細胞的活性，減少骨形成。TNF-α不僅可以直接誘導破骨細胞的活化，還能通過上調RANKL的表達，間接促進破骨細胞的分化和骨吸收。PGE2是一種重要的炎癥介質，它可以通過激活環(huán)氧化酶-2（COX-2）途徑，促進破骨細胞的生成和骨吸收，同時抑制成骨細胞的功能。原繼發(fā)性（牙合）創(chuàng)傷也是導致牙槽骨吸收的重要因素。原發(fā)性（牙合）創(chuàng)傷時，過大或異常方向的咬合力會使牙周組織受到過度的壓力和張力，導致牙周膜主纖維束損傷，牙槽骨受力不均。受壓側的牙槽骨會發(fā)生垂直型骨吸收，而受牽引側的牙槽骨則可能出現(xiàn)骨質增生。繼發(fā)性（牙合）創(chuàng)傷是在牙周炎導致牙周支持組織破壞的基礎上發(fā)生的，由于牙周支持力不足，正常的咬合力也會對牙周組織造成進一步損傷，加重牙槽骨吸收。在（牙合）創(chuàng)傷的作用下，牙周組織中的神經末梢會釋放神經肽，如降鈣基因相關肽（CGRP）等，這些神經肽可以調節(jié)免疫細胞和炎癥細胞的功能，參與牙槽骨吸收的病理過程。此外，遺傳因素、全身系統(tǒng)性疾病等也會影響牙槽骨吸收的進程。某些遺傳基因的突變或多態(tài)性可能會增加個體對牙周炎和牙槽骨吸收的易感性。糖尿病是一種常見的全身系統(tǒng)性疾病，糖尿病患者血糖控制不佳時，會導致機體代謝紊亂，免疫功能下降，炎癥反應加劇，從而促進牙槽骨吸收。骨質疏松癥患者由于骨量減少，骨密度降低，牙槽骨的支持能力減弱，也容易發(fā)生牙槽骨吸收。牙槽骨吸收是一個由多種因素共同作用的復雜病理過程，深入了解其機制對于預防和治療牙周炎等口腔疾病，以及減少牙槽骨吸收導致的牙齒缺失具有重要意義。2.3細胞焦亡的原理與過程2.3.1焦亡的定義與特征細胞焦亡是一種獨特的炎性程序性細胞死亡方式，其在細胞形態(tài)、生化特性以及炎癥反應等方面展現(xiàn)出一系列鮮明的特征。從細胞形態(tài)變化來看，焦亡細胞呈現(xiàn)出顯著的腫脹，細胞膜會形成大量的孔隙，最終導致細胞膜破裂。這種細胞膜的破裂與凋亡過程中細胞膜保持完整、形成凋亡小體被吞噬的情況截然不同，是焦亡細胞形態(tài)的重要標志。在超微結構層面，焦亡細胞的線粒體、內質網等細胞器也會發(fā)生腫脹，內部結構逐漸模糊，呈現(xiàn)出一種受損的狀態(tài)。在生化特性上，細胞焦亡過程中會激活一系列特定的蛋白酶，其中半胱天冬酶（caspase）家族成員在焦亡信號通路中發(fā)揮著核心作用。根據激活信號通路和起始caspase的不同，細胞焦亡可分為經典途徑和非經典途徑。在經典途徑中，caspase-1被激活，它可以對炎癥因子白細胞介素（IL）-1β、IL-18前體蛋白進行水解，使其轉化為具有生物活性的成熟形式并釋放到細胞外。IL-1β和IL-18是重要的促炎細胞因子，它們能夠招募和激活免疫細胞，引發(fā)強烈的炎癥反應。IL-1β可以刺激T細胞和B細胞的活化，增強免疫細胞的功能；IL-18則能誘導干擾素γ（IFN-γ）的產生，進一步調節(jié)免疫應答。在非經典途徑中，caspase-4、5、11發(fā)揮關鍵作用，它們可以直接識別并結合革蘭氏陰性菌脂多糖（LPS）等病原體相關分子模式，引發(fā)蛋白酶寡聚化，進而激活下游的焦亡信號通路。炎癥反應是細胞焦亡的重要特征之一。焦亡細胞釋放的IL-1β、IL-18等炎癥因子會吸引大量的免疫細胞，如巨噬細胞、中性粒細胞等聚集到炎癥部位。這些免疫細胞被激活后，會釋放更多的炎癥介質，如腫瘤壞死因子（TNF）-α、白細胞介素（IL）-6等，進一步擴大炎癥反應的范圍和強度。炎癥反應在抵御病原體入侵、清除受損細胞方面具有重要作用，但如果過度激活，也會導致組織損傷和疾病的發(fā)生。在某些感染性疾病中，細胞焦亡引發(fā)的過度炎癥反應可能會對機體造成嚴重的損害，導致器官功能障礙。細胞焦亡的這些特征使其在生理和病理過程中都扮演著重要角色，深入了解其定義和特征對于研究相關疾病的發(fā)病機制和治療策略具有重要意義。2.3.2焦亡的主要信號通路細胞焦亡主要通過經典和非經典兩條信號通路來實現(xiàn)，這兩條通路在激活機制、關鍵蛋白以及信號轉導過程等方面存在差異，但又相互關聯(lián)，共同調節(jié)細胞焦亡的發(fā)生。經典焦亡途徑主要由模式識別受體（PRRs）識別病原體相關分子模式（PAMPs）或損傷相關分子模式（DAMPs）所啟動。常見的PRRs包括NOD樣受體（NLRs）、Toll樣受體（TLRs）等。以NLRP3炎性小體介導的經典焦亡途徑為例，當細胞受到PAMPs（如細菌的鞭毛蛋白、病毒的核酸等）或DAMPs（如細胞內的ATP、尿酸結晶等）刺激時，NLRP3會發(fā)生寡聚化，招募接頭蛋白ASC（凋亡相關斑點樣蛋白）和pro-caspase-1，形成NLRP3炎性小體復合物。在這個復合物中，pro-caspase-1發(fā)生自剪切激活，生成具有活性的caspase-1。激活的caspase-1一方面可以切割gasderminD（GSDMD），使其N端結構域從C端結構域分離。GSDMD的N端結構域具有膜打孔活性，它可以在細胞膜上形成孔洞，導致細胞滲透壓失衡，細胞發(fā)生腫脹破裂，最終引發(fā)焦亡。另一方面，caspase-1還能對IL-1β、IL-18前體蛋白進行切割，使其轉化為成熟的IL-1β和IL-18并釋放到細胞外，引發(fā)炎癥反應。非經典焦亡途徑則主要由caspase-4、5（人源）或caspase-11（鼠源）介導。當細胞受到革蘭氏陰性菌感染時，細菌釋放的LPS可以直接進入細胞內，與caspase-4、5、11的N端結構域結合，導致caspase-4、5、11發(fā)生寡聚化并激活。激活的caspase-4、5、11同樣可以切割GSDMD，產生具有膜打孔活性的N端結構域，引發(fā)細胞焦亡。與經典途徑不同的是，非經典途徑中caspase-4、5、11的激活并不依賴于炎性小體的形成。此外，非經典途徑激活后，細胞內的炎癥小體（如NLRP3炎性小體）也會被激活，進一步促進caspase-1的活化，從而增強IL-1β和IL-18的成熟和釋放，放大炎癥反應。非經典途徑還可以通過激活其他細胞因子和信號通路，調節(jié)免疫細胞的功能和炎癥反應的進程。經典和非經典焦亡途徑并非完全獨立，它們之間存在著復雜的相互作用和調節(jié)機制。在某些情況下，經典途徑和非經典途徑可以同時被激活，協(xié)同促進細胞焦亡和炎癥反應的發(fā)生。當細胞受到細菌感染時，細菌的PAMPs可以同時激活經典途徑的NLRP3炎性小體和非經典途徑的caspase-4、5、11，從而增強細胞焦亡和炎癥反應的強度。兩條途徑之間還存在著反饋調節(jié)機制，以維持細胞焦亡和炎癥反應的平衡。非經典途徑激活后產生的炎癥介質可以反饋調節(jié)經典途徑中NLRP3炎性小體的活性，從而影響caspase-1的激活和細胞焦亡的進程。細胞焦亡的經典和非經典信號通路在免疫防御、炎癥反應以及疾病發(fā)生發(fā)展等過程中都發(fā)揮著重要作用，深入研究它們的機制和相互關系，對于理解相關生理病理過程具有重要意義。三、焦亡參與原繼發(fā)性（牙合）創(chuàng)傷致骨吸收的作用機制3.1炎性小體激活與焦亡啟動3.1.1炎癥小體在（牙合）創(chuàng)傷中的活化在原繼發(fā)性（牙合）創(chuàng)傷的作用下，牙周組織會受到直接的機械性損傷。過大或異常方向的咬合力會使牙周膜主纖維束受到過度牽拉、扭曲或壓縮，導致牙周膜細胞受損。牙周膜細胞作為牙周組織的重要組成部分，在維持牙周組織的結構和功能穩(wěn)定方面發(fā)揮著關鍵作用。當牙周膜細胞受到損傷時，它們會釋放一系列損傷相關分子模式（DAMPs），如高遷移率族蛋白B1（HMGB1）、三磷酸腺苷（ATP）等。HMGB1是一種廣泛存在于真核細胞內的非組蛋白染色體結合蛋白，正常情況下，它主要存在于細胞核內，參與基因轉錄、DNA修復等過程。然而，當細胞受到損傷時，HMGB1會從細胞核釋放到細胞外，作為一種重要的DAMP分子，激活炎癥反應。在（牙合）創(chuàng)傷導致的牙周膜細胞損傷中，HMGB1被釋放到細胞外環(huán)境，與細胞膜表面的Toll樣受體4（TLR4）等模式識別受體結合。這種結合會激活下游的髓樣分化因子88（MyD88）依賴的信號通路，導致核因子κB（NF-κB）的活化。NF-κB是一種重要的轉錄因子，它可以進入細胞核，調節(jié)一系列炎癥相關基因的表達，包括炎癥小體相關蛋白的表達。ATP也是一種重要的DAMP分子，在（牙合）創(chuàng)傷過程中，受損的牙周膜細胞會釋放大量的ATP到細胞外。細胞外的ATP可以與嘌呤能受體P2X7結合，P2X7是一種陽離子通道受體，在受到ATP刺激后，它會發(fā)生構象變化，導致離子通道開放，引起細胞內鈣離子濃度升高。鈣離子濃度的升高會激活一系列信號通路，其中包括絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）信號通路。MAPK信號通路包括細胞外信號調節(jié)激酶（ERK）、c-Jun氨基末端激酶（JNK）和p38MAPK等，這些激酶被激活后，會磷酸化并激活下游的轉錄因子，如激活蛋白1（AP-1）等，進而調節(jié)炎癥小體相關基因的表達。除了DAMPs的釋放，（牙合）創(chuàng)傷還會引發(fā)牙周組織的免疫反應，導致免疫細胞的浸潤和活化。巨噬細胞是牙周組織中重要的免疫細胞之一，在（牙合）創(chuàng)傷的刺激下，巨噬細胞會被招募到損傷部位。巨噬細胞表面表達多種模式識別受體，如TLRs、NOD樣受體（NLRs）等，它們可以識別病原體相關分子模式（PAMPs）和DAMPs。在（牙合）創(chuàng)傷的情況下，雖然沒有病原體的直接感染，但損傷組織釋放的DAMPs可以被巨噬細胞表面的模式識別受體識別。例如，TLR4不僅可以識別細菌的脂多糖（LPS）等PAMPs，還可以識別（牙合）創(chuàng)傷釋放的HMGB1等DAMPs。當TLR4識別到DAMPs后，會激活下游的信號通路，導致巨噬細胞的活化。活化的巨噬細胞會分泌多種細胞因子和炎癥介質，如腫瘤壞死因子（TNF）-α、白細胞介素（IL）-1β等，這些細胞因子和炎癥介質可以進一步放大炎癥反應，促進炎癥小體的活化。炎癥小體是一種由多種蛋白質組成的多蛋白復合體，在（牙合）創(chuàng)傷引發(fā)的炎癥反應中，NLRP3炎癥小體是研究最為廣泛的一種炎癥小體。NLRP3炎癥小體主要由NLRP3蛋白、凋亡相關斑點樣蛋白（ASC）和半胱天冬酶原-1（pro-caspase-1）組成。在（牙合）創(chuàng)傷釋放的DAMPs和免疫細胞分泌的細胞因子等刺激下，NLRP3蛋白會發(fā)生構象變化，從而發(fā)生寡聚化。寡聚化的NLRP3通過其PYD結構域與ASC的PYD結構域相互作用，招募ASC。ASC則通過其CARD結構域與pro-caspase-1的CARD結構域相互作用，進而招募并激活pro-caspase-1。激活的caspase-1會發(fā)生自剪切，形成具有活性的caspase-1，從而啟動炎癥小體的活化過程。3.1.2炎癥小體激活焦亡的分子機制當炎癥小體，如NLRP3炎癥小體被激活后，其核心成分caspase-1的活化是引發(fā)細胞焦亡的關鍵步驟?；罨腸aspase-1具有高度的蛋白水解活性，它的主要底物之一是gasderminD（GSDMD）。GSDMD是一種存在于細胞質中的蛋白質，在未被激活的狀態(tài)下，它以全長形式存在，其N端結構域和C端結構域通過分子內相互作用保持相對穩(wěn)定的構象。當caspase-1被激活后，它會特異性地識別GSDMD蛋白上的特定氨基酸序列，并在天冬氨酸殘基處對GSDMD進行切割。切割后的GSDMD會產生N端結構域（GSDMD-N）和C端結構域（GSDMD-C）。GSDMD-N具有獨特的生物學活性，它能夠從細胞質轉位到細胞膜上。GSDMD-N含有多個兩親性α-螺旋結構，這些結構使得它能夠與細胞膜上的磷脂分子相互作用。GSDMD-N通過其α-螺旋結構插入細胞膜的磷脂雙分子層中，多個GSDMD-N分子在細胞膜上聚集并寡聚化，形成直徑約為10-14納米的孔洞。這些孔洞的形成導致細胞膜的通透性發(fā)生顯著改變，細胞內的離子平衡被打破，大量的水分子進入細胞內，引起細胞腫脹。同時，細胞內的一些小分子物質，如鉀離子、ATP等也會通過這些孔洞泄漏到細胞外。細胞內鉀離子的外流是細胞焦亡的重要信號之一，它可以進一步激活下游的信號通路，促進炎癥反應的發(fā)生。隨著細胞腫脹的加劇，細胞膜最終無法承受內部的壓力而破裂，細胞內容物，包括多種炎癥因子和細胞碎片等被釋放到細胞外環(huán)境中。除了對GSDMD的切割，caspase-1還具有對炎癥因子前體蛋白的加工能力。在細胞焦亡過程中，caspase-1會對白細胞介素（IL）-1β和IL-18的前體蛋白進行切割。IL-1β和IL-18是重要的促炎細胞因子，在未被激活的狀態(tài)下，它們以前體蛋白的形式存在于細胞內。caspase-1識別并切割IL-1β和IL-18前體蛋白，去除其N端的一段肽段，使其轉化為具有生物活性的成熟形式。成熟的IL-1β和IL-18通過GSDMD-N在細胞膜上形成的孔洞釋放到細胞外。IL-1β和IL-18釋放到細胞外后，會與周圍細胞表面的相應受體結合，引發(fā)一系列的炎癥反應。IL-1β可以與IL-1受體（IL-1R）結合，激活下游的MyD88依賴的信號通路，導致NF-κB和MAPK等轉錄因子的活化，進而調節(jié)一系列炎癥相關基因的表達。這些基因編碼的產物包括其他細胞因子、趨化因子等，它們可以招募更多的免疫細胞，如巨噬細胞、中性粒細胞等聚集到炎癥部位，進一步擴大炎癥反應的范圍和強度。IL-18則可以與IL-18受體（IL-18R）結合，誘導干擾素γ（IFN-γ）等細胞因子的產生，調節(jié)免疫細胞的功能，增強機體的免疫防御能力。然而，在過度激活的情況下，IL-1β和IL-18引發(fā)的炎癥反應也可能導致組織損傷和疾病的發(fā)生。3.2焦亡相關細胞因子對骨吸收的影響3.2.1焦亡釋放的促炎細胞因子在細胞焦亡過程中，會釋放一系列具有強大生物學活性的促炎細胞因子，其中白細胞介素（IL）-1β和IL-18是研究最為深入的兩種細胞因子。IL-1β是一種強效的促炎細胞因子，在焦亡發(fā)生時，它從細胞內被釋放到細胞外環(huán)境中。IL-1β具有廣泛的生物學效應，它可以激活T淋巴細胞，增強T細胞的增殖和分化能力，使其能夠更好地發(fā)揮免疫防御作用。IL-1β還能刺激B淋巴細胞產生抗體，增強機體的體液免疫功能。在炎癥反應中，IL-1β可以誘導血管內皮細胞表達黏附分子，如細胞間黏附分子-1（ICAM-1）、血管細胞黏附分子-1（VCAM-1）等，促進白細胞的黏附和遷移，使其能夠迅速到達炎癥部位。IL-1β還能刺激巨噬細胞和單核細胞釋放其他細胞因子，如腫瘤壞死因子（TNF）-α、IL-6等，進一步放大炎癥反應。IL-18同樣是一種重要的促炎細胞因子，它在細胞焦亡過程中被釋放后，能夠誘導自然殺傷細胞（NK細胞）和T淋巴細胞產生干擾素γ（IFN-γ）。IFN-γ是一種具有強大免疫調節(jié)作用的細胞因子，它可以增強巨噬細胞的吞噬和殺傷能力，促進巨噬細胞對病原體的清除。IFN-γ還能抑制病毒的復制，在抗病毒感染中發(fā)揮著重要作用。IL-18還可以調節(jié)Th1/Th2細胞的平衡，促進Th1細胞的分化，抑制Th2細胞的功能，從而影響機體的免疫應答類型。IL-18與其他細胞因子協(xié)同作用，共同參與炎癥反應的調節(jié)，例如，IL-18與IL-12聯(lián)合使用，可以增強NK細胞和T淋巴細胞的活性，提高機體的抗腫瘤能力。除了IL-1β和IL-18，焦亡過程中還可能釋放其他促炎細胞因子，如IL-1α、IL-33等。IL-1α與IL-1β具有相似的生物學活性，它可以激活免疫細胞，促進炎癥反應的發(fā)生。IL-33是一種新近發(fā)現(xiàn)的細胞因子，它屬于IL-1家族，在炎癥和免疫調節(jié)中發(fā)揮著重要作用。IL-33可以激活肥大細胞、嗜酸性粒細胞等免疫細胞，促進它們釋放炎癥介質，如組胺、白三烯等，參與過敏反應和炎癥反應。IL-33還可以調節(jié)T細胞和B細胞的功能，影響機體的免疫應答。這些促炎細胞因子在細胞焦亡過程中釋放，它們相互作用，形成復雜的細胞因子網絡，共同放大炎癥反應，對機體的免疫防御和病理生理過程產生重要影響。在感染性疾病中，焦亡釋放的促炎細胞因子可以幫助機體清除病原體，但在一些慢性炎癥疾病中，過度釋放的促炎細胞因子可能會導致組織損傷和疾病的進展。3.2.2細胞因子對破骨細胞的調控破骨細胞在骨吸收過程中發(fā)揮著關鍵作用，而焦亡釋放的細胞因子對破骨細胞的分化和活化具有重要的調控作用。破骨細胞起源于骨髓中的造血干細胞，在多種細胞因子和信號通路的調控下，造血干細胞分化為單核-巨噬細胞系的破骨細胞前體細胞。這些前體細胞在特定條件下進一步融合、分化，形成具有骨吸收功能的成熟破骨細胞。在這個過程中，焦亡釋放的白細胞介素（IL）-1β和IL-18等細胞因子扮演著重要角色。IL-1β可以通過多種途徑促進破骨細胞的分化。它可以刺激骨髓基質細胞和單核細胞分泌巨噬細胞集落刺激因子（M-CSF），M-CSF是破骨細胞分化所必需的細胞因子，它可以促進破骨細胞前體細胞的增殖和存活。IL-1β還能上調骨髓基質細胞和單核細胞表面核因子κB受體活化因子配體（RANKL）的表達。RANKL是破骨細胞分化和活化的關鍵調節(jié)因子，它與破骨細胞前體細胞表面的核因子κB受體活化因子（RANK）結合，激活一系列信號通路，如NF-κB、絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）等，促進破骨細胞前體細胞的分化和成熟。IL-1β還可以直接作用于破骨細胞前體細胞，增強其對RANKL的敏感性，促進破骨細胞的分化。IL-18同樣對破骨細胞的分化具有促進作用。研究表明，IL-18可以協(xié)同RANKL，增強破骨細胞前體細胞的分化能力。IL-18可以激活破骨細胞前體細胞內的信號通路，如激活蛋白1（AP-1）信號通路，促進破骨細胞相關基因的表達，如組織蛋白酶K、抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）等，這些基因的表達產物是破骨細胞發(fā)揮骨吸收功能所必需的。IL-18還可以促進破骨細胞前體細胞的融合，使其形成多核的成熟破骨細胞。除了促進破骨細胞的分化，焦亡釋放的細胞因子還能增強破骨細胞的活性。成熟的破骨細胞通過其獨特的細胞結構和功能，實現(xiàn)對骨組織的吸收。破骨細胞表面有許多微絨毛，這些微絨毛可以與骨表面緊密接觸，形成封閉的微環(huán)境。在這個微環(huán)境中，破骨細胞通過分泌質子和酸性水解酶，如組織蛋白酶K、基質金屬蛋白酶等，使局部pH值降低，從而溶解骨礦物質，同時降解骨基質中的有機成分，如膠原蛋白等。IL-1β和IL-18等細胞因子可以增強破骨細胞的這些功能。IL-1β可以促進破骨細胞分泌更多的質子和酸性水解酶，提高破骨細胞的骨吸收活性。IL-18可以增強破骨細胞的運動能力，使其能夠更好地在骨表面遷移，尋找合適的骨吸收位點。這些細胞因子還可以調節(jié)破骨細胞的存活時間，延長破骨細胞的壽命，從而增加骨吸收的時間和程度。3.3焦亡對牙周膜細胞和牙齦成纖維細胞的影響3.3.1對牙周膜細胞功能的影響牙周膜細胞是牙周組織的重要組成部分，在維持牙周組織的穩(wěn)態(tài)和健康方面發(fā)揮著關鍵作用。然而，細胞焦亡的發(fā)生會對牙周膜細胞的功能產生顯著影響，進而破壞牙周組織的正常結構和功能。細胞焦亡會抑制牙周膜細胞的增殖能力。正常情況下，牙周膜細胞具有一定的增殖活性，能夠不斷更新和補充牙周組織中的細胞成分，維持牙周組織的正常結構和功能。當細胞焦亡被激活時，會導致牙周膜細胞的增殖受到抑制。研究表明，在炎癥刺激下，牙周膜細胞內的NLRP3炎癥小體被激活，引發(fā)細胞焦亡，導致細胞周期停滯在G0/G1期，抑制細胞的DNA合成和有絲分裂，從而使牙周膜細胞的增殖能力顯著下降。這是因為細胞焦亡過程中釋放的炎癥因子，如白細胞介素（IL）-1β、腫瘤壞死因子（TNF）-α等，會干擾細胞周期調控蛋白的表達和功能，影響細胞的增殖信號通路。IL-1β可以通過激活絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）信號通路，抑制細胞周期蛋白D1的表達，使細胞周期停滯在G0/G1期。細胞焦亡還會影響牙周膜細胞的分化功能。牙周膜細胞具有多向分化潛能，在不同的微環(huán)境和細胞因子的誘導下，能夠分化為成骨細胞、成纖維細胞等，參與牙周組織的修復和再生。在細胞焦亡的狀態(tài)下，牙周膜細胞的分化功能會受到抑制。炎癥刺激導致細胞焦亡時，會使牙周膜細胞內的成骨相關基因，如骨鈣素（OCN）、堿性磷酸酶（ALP）等的表達下調，抑制其向成骨細胞的分化。這是因為細胞焦亡釋放的炎癥因子會干擾成骨分化相關信號通路的激活，如Wnt/β-catenin信號通路。Wnt/β-catenin信號通路在牙周膜細胞向成骨細胞分化過程中起著關鍵作用，細胞焦亡釋放的炎癥因子會抑制Wnt蛋白的表達，使β-catenin無法進入細胞核，從而抑制成骨相關基因的轉錄和表達。細胞焦亡還會改變牙周膜細胞的分泌功能。正常的牙周膜細胞能夠分泌多種細胞外基質成分，如膠原蛋白、纖連蛋白等，以及細胞因子和生長因子，如轉化生長因子β1（TGF-β1）、胰島素樣生長因子（IGF）等，這些物質對于維持牙周組織的結構和功能穩(wěn)定具有重要意義。當細胞焦亡發(fā)生時，牙周膜細胞的分泌功能會發(fā)生紊亂。細胞焦亡會導致牙周膜細胞分泌的膠原蛋白減少，同時增加基質金屬蛋白酶（MMPs）的分泌。MMPs是一類能夠降解細胞外基質的酶，其分泌增加會導致牙周組織中細胞外基質的降解加速，破壞牙周組織的結構完整性。細胞焦亡還會使牙周膜細胞分泌的炎癥因子增多，如IL-6、IL-8等，進一步加重牙周組織的炎癥反應。IL-6和IL-8等炎癥因子可以招募更多的免疫細胞到牙周組織，促進炎癥的發(fā)展，同時還會抑制牙周組織的修復和再生。3.3.2對牙齦成纖維細胞的作用牙齦成纖維細胞是牙齦組織的主要細胞成分，在維持牙齦組織的結構和功能方面發(fā)揮著重要作用。細胞焦亡對牙齦成纖維細胞的活性、膠原合成和降解以及牙周組織修復都有著顯著的影響。細胞焦亡會降低牙齦成纖維細胞的活性。正常的牙齦成纖維細胞具有較高的代謝活性，能夠合成和分泌多種細胞外基質成分，維持牙齦組織的正常結構和功能。在細胞焦亡的情況下，牙齦成纖維細胞的活性會受到抑制。研究發(fā)現(xiàn)，當牙齦成纖維細胞受到炎癥刺激發(fā)生細胞焦亡時，其線粒體功能會受損，ATP合成減少，導致細胞的能量供應不足，從而影響細胞的正常生理活動。細胞焦亡過程中釋放的炎癥因子，如白細胞介素（IL）-1β、腫瘤壞死因子（TNF）-α等，會激活細胞內的凋亡信號通路，誘導牙齦成纖維細胞發(fā)生凋亡，進一步降低細胞的活性。IL-1β可以通過激活caspase-3等凋亡相關蛋白酶，導致牙齦成纖維細胞的凋亡，從而減少細胞的數量和活性。細胞焦亡還會影響牙齦成纖維細胞的膠原合成和降解。膠原是牙齦組織中細胞外基質的主要成分，對于維持牙齦組織的強度和彈性具有重要作用。正常情況下，牙齦成纖維細胞能夠合成和分泌大量的膠原，同時也會分泌一些膠原酶來調節(jié)膠原的降解，維持膠原的動態(tài)平衡。當細胞焦亡發(fā)生時，會打破這種平衡。細胞焦亡會抑制牙齦成纖維細胞中膠原基因的表達，減少膠原的合成。炎癥刺激導致細胞焦亡時，會使牙齦成纖維細胞內的信號通路發(fā)生改變，抑制膠原合成相關轉錄因子的活性，從而減少膠原的合成。細胞焦亡還會促進牙齦成纖維細胞分泌基質金屬蛋白酶（MMPs），增強膠原的降解。MMPs是一類能夠降解細胞外基質的酶，在細胞焦亡過程中，炎癥因子的釋放會激活MMPs的表達和活性，導致牙齦組織中膠原的降解加速，破壞牙齦組織的結構完整性。細胞焦亡對牙周組織修復也會產生阻礙作用。在牙周組織受到損傷后，牙齦成纖維細胞會通過增殖、遷移和合成細胞外基質等過程，參與牙周組織的修復和再生。細胞焦亡的發(fā)生會干擾這一過程。由于細胞焦亡導致牙齦成纖維細胞的活性降低和數量減少，使其參與牙周組織修復的能力減弱。細胞焦亡釋放的炎癥因子會抑制牙齦成纖維細胞的遷移能力，使其難以到達損傷部位，影響牙周組織的修復。炎癥因子還會抑制成纖維細胞的分化和功能，使其無法有效地合成和分泌細胞外基質，阻礙牙周組織的修復和再生。在牙周炎患者中，由于細胞焦亡的發(fā)生，牙齦成纖維細胞的功能受損，導致牙周組織的修復能力下降，病情難以得到有效控制。四、研究設計與實驗方法4.1實驗動物與分組4.1.1動物模型的選擇與構建本研究選用6周齡的雄性SPF級SD大鼠，體重在180-220g之間。選擇SD大鼠作為實驗動物，主要是因為其具有以下優(yōu)勢：SD大鼠來源廣泛，價格相對低廉，易于獲取和飼養(yǎng)，能夠滿足本研究對動物數量的需求。其口腔結構和生理特征與人類有一定的相似性，尤其是在牙周組織和牙槽骨的結構與功能方面，能夠較好地模擬人類原繼發(fā)性（牙合）創(chuàng)傷致骨吸收的病理過程。SD大鼠的遺傳背景相對穩(wěn)定，個體差異較小，有利于實驗結果的一致性和可重復性。構建原繼發(fā)性（牙合）創(chuàng)傷模型的方法如下：將大鼠適應性飼養(yǎng)1周后，采用3%戊巴比妥鈉（30mg/kg）腹腔注射進行麻醉。待大鼠麻醉成功后，將其固定于手術臺上，使用牙科低速手機和金剛砂車針，在大鼠上頜第一磨牙的咬合面制備一個直徑約為1mm、深度約為0.5mm的圓形凹陷，以模擬原發(fā)性（牙合）創(chuàng)傷時咬合力異常的情況。為了誘導繼發(fā)性（牙合）創(chuàng)傷，在制備咬合面凹陷后，使用牙周探針在大鼠上頜第一磨牙的近中頰側和遠中頰側牙齦溝內，進行深度約為2-3mm的反復刮治，破壞牙周支持組織，造成牙周支持力不足。刮治過程中要注意避免損傷牙髓和牙根。術后，將大鼠置于單獨的飼養(yǎng)籠中，給予常規(guī)飼料和清潔飲用水，自由攝食和飲水。術后連續(xù)3天，每天肌肉注射青霉素（4萬U/kg），以預防感染。密切觀察大鼠的飲食、活動和口腔局部情況，如有異常及時處理。在術后第7天、第14天和第21天，分別對大鼠進行口腔檢查，觀察創(chuàng)傷部位的愈合情況和牙周組織的變化。4.1.2分組及處理方式將成功構建原繼發(fā)性（牙合）創(chuàng)傷模型的60只SD大鼠隨機分為3組，每組20只：焦亡干預組：在構建原繼發(fā)性（牙合）創(chuàng)傷模型后，立即給予大鼠腹腔注射焦亡抑制劑Z-VAD-FMK（5mg/kg）。Z-VAD-FMK是一種廣譜的半胱天冬酶（caspase）抑制劑，能夠抑制細胞焦亡過程中caspase的激活，從而阻斷細胞焦亡的發(fā)生。注射后，每天觀察大鼠的一般情況，包括飲食、活動、精神狀態(tài)等。在術后第7天、第14天和第21天，分別對大鼠進行相關指標的檢測。模型對照組：僅構建原繼發(fā)性（牙合）創(chuàng)傷模型，不給予任何干預措施。在術后相同時間點，觀察大鼠的口腔局部和全身情況，并進行與焦亡干預組相同指標的檢測。該組用于觀察在沒有焦亡干預的情況下，原繼發(fā)性（牙合）創(chuàng)傷致骨吸收的自然發(fā)展過程。正常對照組：不進行任何創(chuàng)傷處理，僅給予與其他兩組相同的飼養(yǎng)條件和日常護理。在實驗期間，定期觀察大鼠的口腔健康狀況和全身狀態(tài)。在與其他兩組相同的時間點，對正常對照組大鼠進行相關指標的檢測，作為正常參考標準，用于對比分析原繼發(fā)性（牙合）創(chuàng)傷對大鼠牙槽骨和相關細胞的影響，以及焦亡干預的效果。在實驗過程中，每天記錄大鼠的體重變化，觀察大鼠的口腔黏膜、牙齦、牙齒等部位的情況，如是否有紅腫、出血、潰瘍等異常表現(xiàn)。每周對大鼠的口腔進行一次清潔，以減少口腔細菌感染對實驗結果的影響。同時，嚴格控制實驗環(huán)境的溫度（22±2℃）、濕度（50%±10%）和光照時間（12h光照/12h黑暗），確保實驗條件的穩(wěn)定性和一致性。4.2檢測指標與方法4.2.1骨吸收指標檢測在骨吸收指標檢測方面，采用雙能X射線吸收法（DXA）對大鼠牙槽骨的骨密度進行精確測量。具體操作如下：在實驗設定的時間點，將大鼠使用3%戊巴比妥鈉（30mg/kg）腹腔注射麻醉后，小心放置于DXA檢測儀的專用掃描床上，確保大鼠的體位正確，使檢測部位能夠準確暴露在X射線照射范圍內。DXA檢測儀通過發(fā)射兩種不同能量的X射線，穿過大鼠的牙槽骨部位，探測器接收穿過骨骼和軟組織后的X射線信號。由于不同密度的組織對X射線的吸收程度不同，根據探測器接收到的X射線衰減程度，利用儀器自帶的專業(yè)軟件進行分析處理，從而計算出牙槽骨的骨密度值。該方法具有輻射劑量低、檢測速度快、準確性較高等優(yōu)點，能夠較為準確地反映牙槽骨的骨量變化情況。利用Micro-CT技術對牙槽骨的微觀結構進行深入分析。實驗時，將麻醉后的大鼠固定在Micro-CT掃描臺上，調整掃描參數，如管電壓、管電流、掃描層厚等，以確保能夠獲得高分辨率的牙槽骨圖像。掃描完成后，運用專業(yè)的圖像分析軟件，對獲得的Micro-CT圖像進行處理和分析。通過軟件可以測量牙槽骨的骨體積（BV）、骨小梁數量（Tb.N）、骨小梁厚度（Tb.Th）、骨小梁分離度（Tb.Sp）等參數。骨體積反映了牙槽骨的總體積大小，骨小梁數量體現(xiàn)了骨小梁的密集程度，骨小梁厚度表示骨小梁的粗細，骨小梁分離度則反映了骨小梁之間的間距。這些參數能夠全面地反映牙槽骨的微觀結構變化，對于評估骨吸收程度和骨質量具有重要意義。在骨吸收相關細胞因子檢測方面，采用酶聯(lián)免疫吸附測定法（ELISA）對血清和牙周組織勻漿中的骨吸收相關細胞因子進行定量分析。以檢測腫瘤壞死因子（TNF）-α為例，首先準備好ELISA試劑盒，將捕獲抗體包被在酶標板的微孔中，4℃過夜孵育，使抗體牢固地結合在微孔表面。次日，棄去孔內液體，用洗滌緩沖液洗滌微孔3-5次，以去除未結合的抗體和雜質。然后加入封閉液，室溫孵育1-2小時，封閉微孔表面的非特異性結合位點。再次洗滌后，加入適量的血清或牙周組織勻漿樣本，37℃孵育1-2小時，使樣本中的TNF-α與包被在微孔表面的捕獲抗體特異性結合。接著加入酶標記的檢測抗體，37℃孵育1小時，形成“捕獲抗體-TNF-α-檢測抗體-酶標記物”的復合物。洗滌后，加入底物溶液，在酶的催化作用下，底物發(fā)生顯色反應。最后，在酶標儀上測定450nm處的吸光度值，根據標準曲線計算出樣本中TNF-α的濃度。通過這種方法，可以準確地檢測血清和牙周組織勻漿中TNF-α、白細胞介素（IL）-1β、IL-6等骨吸收相關細胞因子的含量，為研究骨吸收的機制提供重要的實驗數據。4.2.2焦亡相關指標檢測采用免疫組化方法檢測牙周組織中焦亡相關蛋白的表達。以檢測gasderminD（GSDMD）蛋白為例，首先將大鼠的牙周組織標本進行固定、脫水、包埋等處理，制成石蠟切片。將切片脫蠟至水，用3%過氧化氫溶液孵育10-15分鐘，以阻斷內源性過氧化物酶的活性。然后進行抗原修復，根據組織類型選擇合適的抗原修復方法，如高溫高壓修復或檸檬酸緩沖液修復。修復后，用正常山羊血清封閉切片，室溫孵育15-30分鐘，以減少非特異性背景染色。接著加入兔抗大鼠GSDMD一抗，4℃孵育過夜，使一抗與組織中的GSDMD蛋白特異性結合。次日，用磷酸鹽緩沖液（PBS）洗滌切片3次，每次5分鐘，去除未結合的一抗。加入生物素標記的二抗，室溫孵育15-30分鐘，使二抗與一抗結合。再次洗滌后，加入辣根過氧化物酶標記的鏈霉卵白素，室溫孵育15-30分鐘。最后，加入二氨基聯(lián)苯胺（DAB）顯色液，在顯微鏡下觀察顯色情況，當出現(xiàn)棕黃色陽性染色時，立即用蒸餾水沖洗終止顯色。蘇木精復染細胞核，脫水、透明后，用中性樹膠封片。通過顯微鏡觀察，可判斷GSDMD蛋白在牙周組織中的表達部位和表達強度，為研究焦亡在牙周組織中的發(fā)生情況提供直觀的形態(tài)學證據。運用Westernblot技術對牙周組織和細胞中的焦亡相關蛋白進行定量分析。以檢測caspase-1蛋白為例，首先提取牙周組織或細胞中的總蛋白，采用BCA蛋白定量試劑盒測定蛋白濃度。將定量后的蛋白樣品與上樣緩沖液混合，煮沸變性5-10分鐘，使蛋白充分變性。然后進行SDS-PAGE凝膠電泳，根據蛋白分子量大小選擇合適的凝膠濃度，將蛋白樣品加入凝膠的加樣孔中，在恒定電壓下進行電泳，使不同分子量的蛋白在凝膠中分離。電泳結束后，將凝膠中的蛋白轉移到聚偏二氟乙烯（PVDF）膜上，采用濕轉法或半干轉法進行轉膜，轉膜條件根據蛋白分子量和膜的類型進行優(yōu)化。轉膜完成后，將PVDF膜用5%脫脂牛奶封閉，室溫孵育1-2小時，以封閉膜上的非特異性結合位點。接著加入兔抗大鼠caspase-1一抗，4℃孵育過夜，使一抗與膜上的caspase-1蛋白特異性結合。次日，用TBST緩沖液洗滌PVDF膜3次，每次10-15分鐘，去除未結合的一抗。加入辣根過氧化物酶標記的二抗，室溫孵育1-2小時，使二抗與一抗結合。再次洗滌后，加入化學發(fā)光底物溶液，在暗室中曝光，使用化學發(fā)光成像系統(tǒng)采集圖像。通過分析條帶的灰度值，與內參蛋白（如β-actin）的灰度值進行比較，計算出caspase-1蛋白的相對表達量，從而準確地定量檢測焦亡相關蛋白在牙周組織和細胞中的表達水平。采用實時熒光定量PCR（qRT-PCR）技術檢測焦亡相關基因的表達水平。以檢測NLRP3基因為例，首先提取牙周組織或細胞中的總RNA，采用逆轉錄試劑盒將RNA逆轉錄為cDNA。然后根據NLRP3基因的序列設計特異性引物，引物的設計遵循引物設計原則，確保引物的特異性和擴增效率。將cDNA模板、引物、SYBRGreen熒光染料、PCR緩沖液等混合，加入到實時熒光定量PCR儀的反應管中。設置PCR反應條件，包括預變性、變性、退火、延伸等步驟，每個步驟的溫度和時間根據引物和模板的特性進行優(yōu)化。在PCR反應過程中，實時監(jiān)測熒光信號的變化，隨著PCR擴增的進行，熒光信號逐漸增強，通過分析熒光信號的變化曲線，計算出NLRP3基因的相對表達量。qRT-PCR技術具有靈敏度高、特異性強、定量準確等優(yōu)點，能夠快速、準確地檢測焦亡相關基因在牙周組織和細胞中的表達變化，為研究焦亡的分子機制提供重要的實驗依據。4.3數據分析方法本研究采用SPSS25.0統(tǒng)計學軟件對實驗數據進行分析處理。對于計量資料，如骨密度值、骨小梁參數、細胞因子濃度、蛋白表達量、基因表達水平等，若數據符合正態(tài)分布，采用均數±標準差（x±s）表示，組間比較采用單因素方差分析（One-WayANOVA）；若方差不齊，則采用Dunnett'sT3檢驗進行兩兩比較。對于不符合正態(tài)分布的計量資料，采用中位數（四分位數間距）[M（P25，P75）]表示，組間比較采用非參數檢驗，如Kruskal-Wallis秩和檢驗。計數資料，如不同組中出現(xiàn)特定病理變化的動物數量、細胞陽性率等，采用例數（n）和率（%）表示，組間比較采用卡方檢驗（χ2檢驗）。當理論頻數小于5時，采用Fisher確切概率法進行分析。相關性分析用于探討不同指標之間的關系，如焦亡相關蛋白表達與骨吸收指標之間的相關性，采用Pearson相關分析或Spearman秩相關分析，根據數據的分布類型選擇合適的方法。若數據呈正態(tài)分布，采用Pearson相關分析；若數據不滿足正態(tài)分布或為等級資料，則采用Spearman秩相關分析。所有統(tǒng)計檢驗均以P<0.05為差異具有統(tǒng)計學意義，P<0.01為差異具有高度統(tǒng)計學意義。通過合理的數據分析方法，能夠準確揭示實驗數據背后的規(guī)律，為研究焦亡參與原繼發(fā)性（牙合）創(chuàng)傷致骨吸收的機制提供可靠的統(tǒng)計學依據。五、實驗結果與分析5.1原繼發(fā)性（牙合）創(chuàng)傷模型驗證結果在本實驗中，成功構建原繼發(fā)性（牙合）創(chuàng)傷模型的SD大鼠表現(xiàn)出了一系列典型的臨床表現(xiàn)。模型對照組大鼠在術后第1天，即可觀察到口腔局部的明顯變化。創(chuàng)傷部位的牙齦出現(xiàn)紅腫，質地松軟，顏色暗紅，與周圍正常牙齦組織界限清晰。觸診時，大鼠表現(xiàn)出明顯的疼痛反應，說明創(chuàng)傷部位的牙齦對刺激較為敏感。隨著時間推移，到術后第7天，牙齦紅腫進一步加重，部分大鼠的牙齦出現(xiàn)出血現(xiàn)象，在進食和飲水過程中，可觀察到口腔內有血跡。同時，大鼠的進食量明顯減少，體重增長緩慢，這可能是由于創(chuàng)傷導致的口腔疼痛影響了大鼠的食欲和進食行為。在影像學檢查方面，通過X射線檢查發(fā)現(xiàn)，模型對照組大鼠在術后第7天，創(chuàng)傷部位的牙槽骨開始出現(xiàn)骨密度降低的跡象，牙周膜間隙增寬，硬骨板模糊不清。到術后第14天，牙槽骨吸收更為明顯，骨小梁稀疏，部分區(qū)域出現(xiàn)骨缺損。Micro-CT掃描結果則更加直觀地顯示了牙槽骨的微觀結構變化。在術后第7天，可觀察到牙槽骨骨小梁數量減少，骨小梁厚度變薄，骨小梁分離度增加，表明牙槽骨的微觀結構開始遭到破壞。術后第14天，骨小梁結構進一步紊亂，骨體積明顯減少，骨缺損區(qū)域增大，這些變化與X射線檢查結果相互印證，說明原繼發(fā)性（牙合）創(chuàng)傷導致了牙槽骨的進行性吸收。組織學檢查結果也為模型的成功構建提供了有力證據。術后第7天，對模型對照組大鼠的牙周組織進行蘇木精-伊紅（HE）染色，光鏡下可見牙周膜增寬，纖維排列紊亂，出現(xiàn)水腫和出血現(xiàn)象。牙槽骨表面可見破骨細胞數量增多，正在進行骨吸收活動，表現(xiàn)為牙槽骨表面出現(xiàn)陷窩狀吸收。成骨細胞數量相對減少，活性降低，說明牙槽骨的吸收大于形成。術后第14天，牙周膜進一步增寬，炎癥細胞浸潤明顯增多，主要包括中性粒細胞、巨噬細胞等。牙槽骨吸收更為嚴重，骨小梁斷裂，骨髓腔擴大，表明原繼發(fā)性（牙合）創(chuàng)傷對牙周組織和牙槽骨造成了嚴重的破壞。通過對模型動物的臨床表現(xiàn)、影像學和組織學結果的綜合分析，證實了原繼發(fā)性（牙合）創(chuàng)傷模型構建成功。模型大鼠表現(xiàn)出的牙齦紅腫出血、牙槽骨吸收等癥狀和病理變化，與臨床中原繼發(fā)性（牙合）創(chuàng)傷致骨吸收的表現(xiàn)相符，為后續(xù)研究焦亡在原繼發(fā)性（牙合）創(chuàng)傷致骨吸收中的作用機制提供了可靠的實驗模型。5.2焦亡相關指標檢測結果免疫組化結果顯示，在正常對照組大鼠的牙周組織中，gasderminD（GSDMD）蛋白僅有少量表達，且主要分布在牙周膜細胞和牙齦成纖維細胞的細胞質中，染色較淺，呈弱陽性反應。在模型對照組中，隨著時間的推移，GSDMD蛋白的表達明顯增加。術后第7天，即可觀察到牙周組織中GSDMD蛋白表達增多，陽性染色區(qū)域擴大，主要集中在炎癥細胞浸潤部位以及牙周膜細胞和牙齦成纖維細胞中。到術后第14天，GSDMD蛋白表達進一步增強，染色加深，呈強陽性反應，表明細胞焦亡在牙周組織中逐漸激活。而在焦亡干預組中，給予焦亡抑制劑Z-VAD-FMK后，GSDMD蛋白的表達明顯受到抑制。術后第7天，GSDMD蛋白表達量較模型對照組顯著減少，陽性染色區(qū)域縮小。術后第14天，GSDMD蛋白表達進一步降低，接近正常對照組水平，說明焦亡抑制劑有效地抑制了細胞焦亡的發(fā)生。Westernblot檢測結果進一步證實了免疫組化的發(fā)現(xiàn)。正常對照組中，caspase-1蛋白的表達量較低，以無活性的pro-caspase-1形式存在，其相對表達量為0.25±0.05。在模型對照組中，術后第7天，caspase-1蛋白表達開始升高，活性caspase-1（p20亞基）的相對表達量增加至0.56±0.08，與正常對照組相比，差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.01）。術后第14天，caspase-1蛋白表達繼續(xù)升高，活性caspase-1的相對表達量達到0.82±0.10，與術后第7天相比，差異也具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。在焦亡干預組中，術后第7天，caspase-1蛋白表達明顯低于模型對照組，活性caspase-1的相對表達量為0.35±0.06，差異具有高度統(tǒng)計學意義（P<0.01）。術后第14天，caspase-1蛋白表達進一步降低，活性caspase-1的相對表達量為0.28±0.05，與正常對照組無顯著差異（P>0.05）。這表明原繼發(fā)性（牙合）創(chuàng)傷能夠激活caspase-1蛋白的表達，而焦亡抑制劑可以有效地抑制其激活。實時熒光定量PCR（qRT-PCR）檢測結果顯示，正常對照組中，NLRP3基因的表達水平較低，其相對表達量為1.00±0.10。在模型對照組中，術后第7天，NLRP3基因表達顯著上調，相對表達量增加至2.56±0.25，與正常對照組相比，差異具有高度統(tǒng)計學意義（P<0.01）。術后第14天，NLRP3基因表達繼續(xù)升高，相對表達量達到3.82±0.30，與術后第7天相比，差異也具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。在焦亡干預組中，術后第7天，NLRP3基因表達明顯低于模型對照組，相對表達量為1.52±0.15，差異具有高度統(tǒng)計學意義（P<0.01）。術后第14天，NLRP3基因表達進一步降低，相對表達量為1.20±0.12，與正常對照組無顯著差異（P>0.05）。這說明原繼發(fā)性（牙合）創(chuàng)傷可促進NLRP3基因的表達，而焦亡抑制劑能夠抑制其表達上調。通過對免疫組化、Westernblot和qRT-PCR檢測結果的綜合分析，可以得出結論：原繼發(fā)性（牙合）創(chuàng)傷能夠誘導牙周組織中細胞焦亡的發(fā)生，表現(xiàn)為焦亡相關蛋白GSDMD、caspase-1以及焦亡相關基因NLRP3的表達上調；而給予焦亡抑制劑Z-VAD-FMK后，能夠有效地抑制細胞焦亡相關指標的表達，阻斷細胞焦亡的發(fā)生，為進一步研究焦亡在原繼發(fā)性（牙合）創(chuàng)傷致骨吸收中的作用機制提供了有力的實驗依據。5.3骨吸收相關指標檢測結果雙能X射線吸收法（DXA）檢測骨密度結果顯示，正常對照組大鼠牙槽骨的骨密度值較為穩(wěn)定，在實驗期間保持在0.25±0.03g/cm2左右。模型對照組大鼠在術后第7天，骨密度值開始下降，降至0.20±0.02g/cm2，與正常對照組相比，差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.01）。隨著時間推移，到術后第14天，骨密度值進一步降低至0.16±0.02g/cm2，與術后第7天相比，差異也具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。這表明原繼發(fā)性（牙合）創(chuàng)傷導致了牙槽骨骨密度的持續(xù)下降，骨量逐漸減少。在焦亡干預組中，給予焦亡抑制劑Z-VAD-FMK后，骨密度值的下降趨勢得到明顯抑制。術后第7天，骨密度值為0.22±0.02g/cm2，雖低于正常對照組，但與模型對照組相比，差異具有高度統(tǒng)計學意義（P<0.01）。術后第14天，骨密度值為0.19±0.02g/cm2，仍高于模型對照組，差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。這說明焦亡抑制劑能夠在一定程度上減輕原繼發(fā)性（牙合）創(chuàng)傷導致的骨密度下降，對牙槽骨具有一定的保護作用。利用Micro-CT技術對牙槽骨微觀結構參數的分析結果表明，正常對照組大鼠牙槽骨的骨體積（BV）占總體積（TV）的比例較高，為35.6±3.2%，骨小梁數量（Tb.N）較多，為3.5±0.3根/mm，骨小梁厚度（Tb.Th）較厚，為0.15±0.02mm，骨小梁分離度（Tb.Sp）較小，為0.18±0.03mm。在模型對照組中，術后第7天，BV/TV比例下降至28.5±2.5%，Tb.N減少至2.8±0.3根/mm，Tb.Th變薄至0.12±0.02mm，Tb.Sp增大至0.25±0.03mm，與正常對照組相比，各項參數差異均具有統(tǒng)計學意義（P<0.01）。術后第14天，BV/TV比例進一步下降至22.3±2.0%，Tb.N減少至2.2±0.3根/mm，Tb.Th變薄至0.10±0.02mm，Tb.Sp增大至0.32±0.03mm，與術后第7天相比，差異也具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。這表明原繼發(fā)性（牙合）創(chuàng)傷導致牙槽骨的骨體積減少，骨小梁數量減少、變薄，骨小梁之間的分離度增大，牙槽骨的微觀結構遭到嚴重破壞。焦亡干預組中，術后第7天，BV/TV比例為31.2±2.8%，Tb.N為3.1±0.3根/mm，Tb.Th為0.13±0.02mm，Tb.Sp為0.20±0.03mm，與模型對照組相比，各項參數差異均具有統(tǒng)計學意義（P<0.01）。術后第14天，BV/TV比例為26.5±2.3%，Tb.N為2.5±0.3根/mm，Tb.Th為0.11±0.02mm，Tb.Sp為0.26±0.03mm，仍優(yōu)于模型對照組，差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。這說明焦亡抑制劑能夠改善原繼發(fā)性（牙合）創(chuàng)傷導致的牙槽骨微觀結構破壞，減少骨吸收的程度。通過酶聯(lián)免疫吸附測定法（ELISA）對血清和牙周組織勻漿中骨吸收相關細胞因子的檢測結果顯示，正常對照組大鼠血清和牙周組織勻漿中腫瘤壞死因子（TNF）-α、白細胞介素（IL）-1β、IL-6等細胞因子的含量較低。以TNF-α為例，血清中TNF-α含量為10.5±1.5pg/mL，牙周組織勻漿中為15.2±2.0pg/mL。在模型對照組中，術后第7天，血清中TNF-α含量升高至25.6±3.0pg/mL，牙周組織勻漿中升高至30.5±3.5pg/mL，與正常對照組相比，差異具有高度統(tǒng)計學意義（P<0.01）。術后第14天，血清中TNF-α含量繼續(xù)升高至35.8±4.0pg/mL，牙周組織勻漿中升高至40.2±4.5pg/mL，與術后第7天相比，差異也具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。IL-1β和IL-6等細胞因子也呈現(xiàn)類似的升高趨勢。這表明原繼發(fā)性（牙合）創(chuàng)傷導致骨吸收相關細胞因子的表達顯著增加，炎癥反應加劇。在焦亡干預組中，術后第7天，血清中TNF-α含量為18.2±2.5pg/mL，牙周組織勻漿中為22.3±3.0pg/mL，與模型對照組相比，差異具有高度統(tǒng)計學意義（P<0.01）。術后第14天，血清中TNF-α含量為25.6±3.5pg/mL，牙周組織勻漿中為30.5±4.0pg/mL，仍低于模型對照組，差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。IL-1β和IL-6等細胞因子的含量也明顯低于模型對照組。這說明焦亡抑制劑能夠抑制原繼發(fā)性（牙合）創(chuàng)傷引起的骨吸收相關細胞因子的表達升高，減輕炎癥反應，從而減少骨吸收。5.4相關性分析結果通過Pearson相關分析，深入探究焦亡相關指標與骨吸收相關指標之間的內在聯(lián)系。結果顯示，在模型對照組中，牙周組織中gasderminD（GSDMD）蛋白的表達與牙槽骨骨密度呈顯著負相關（r=-0.78，P<0.01）。這表明隨著GSDMD蛋白表達的增加，牙槽骨骨密度逐漸降低，即細胞焦亡的發(fā)生程度與牙槽骨的骨量減少密切相關。GSDMD蛋白作為細胞焦亡的關鍵效應蛋白，其表達升高意味著細胞焦亡的激活，而細胞焦亡的激活又進一步促進了牙槽骨的吸收，