高考生物真題分項(xiàng)匯編 專題21 基因工程-：五年（2019-2023）高考生物真題分項(xiàng)匯編（全國(guó)）（原卷版）

專題21基因工程考點(diǎn)1基因工程的工具及其操作步驟〖2023年高考真題〗1．（2023·浙江·統(tǒng)考高考真題）紫外線引發(fā)的DNA損傷，可通過(guò)“核苷酸切除修復(fù)（NER）”方式修復(fù)，機(jī)制如圖所示。著色性干皮癥（XP）患者的NER酶系統(tǒng)存在缺陷，受陽(yáng)光照射后，皮膚出現(xiàn)炎癥等癥狀?；颊哂啄臧l(fā)病，20歲后開始發(fā)展成皮膚癌。下列敘述錯(cuò)誤的是（）

A．修復(fù)過(guò)程需要限制酶和DNA聚合酶B．填補(bǔ)缺口時(shí)，新鏈合成以5’到3’的方向進(jìn)行C．DNA有害損傷發(fā)生后，在細(xì)胞增殖后進(jìn)行修復(fù)，對(duì)細(xì)胞最有利D．隨年齡增長(zhǎng)，XP患者幾乎都會(huì)發(fā)生皮膚癌的原因，可用突變累積解釋2．（2023·廣東·統(tǒng)考高考真題）中外科學(xué)家經(jīng)多年合作研究，發(fā)現(xiàn)circDNMT1（一種RNA分子）通過(guò)與抑癌基因p53表達(dá)的蛋白結(jié)合誘發(fā)乳腺癌，為解決乳腺癌這一威脅全球女性健康的重大問(wèn)題提供了新思路。下列敘述錯(cuò)誤的是（

）A．p53基因突變可能引起細(xì)胞癌變B．p53蛋白能夠調(diào)控細(xì)胞的生長(zhǎng)和增殖C．circDNMT1高表達(dá)會(huì)使乳腺癌細(xì)胞增殖變慢D．circDNMT1的基因編輯可用于乳腺癌的基礎(chǔ)研究3．（2023·湖南·統(tǒng)考高考真題）鹽堿脅迫下植物應(yīng)激反應(yīng)產(chǎn)生的H2O2對(duì)細(xì)胞有毒害作用。禾本科農(nóng)作物AT1蛋白通過(guò)調(diào)節(jié)細(xì)胞膜上PIP2s蛋白磷酸化水平，影響H2O2的跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)，如圖所示。下列敘述錯(cuò)誤的是（

）

A．細(xì)胞膜上PIP2s蛋白高磷酸化水平是其提高H2O2外排能力所必需的B．PIP2s蛋白磷酸化被抑制，促進(jìn)H2O2外排，從而減輕其對(duì)細(xì)胞的毒害C．敲除AT1基因或降低其表達(dá)可提高禾本科農(nóng)作物的耐鹽堿能力D．從特殊物種中發(fā)掘逆境脅迫相關(guān)基因是改良農(nóng)作物抗逆性的有效途徑4．（2023·廣東·統(tǒng)考高考真題）“DNA粗提取與鑒定”實(shí)驗(yàn)的基本過(guò)程是：裂解→分離→沉淀→鑒定。下列敘述錯(cuò)誤的是（

）A．裂解：使細(xì)胞破裂釋放出DNA等物質(zhì)B．分離：可去除混合物中的多糖、蛋白質(zhì)等C．沉淀：可反復(fù)多次以提高DNA的純度D．鑒定：加入二苯胺試劑后即呈現(xiàn)藍(lán)色5．（2023·天津·統(tǒng)考高考真題）根據(jù)下圖，正確的是（

）

A．子代動(dòng)物遺傳性狀和受體動(dòng)物完全一致B．過(guò)程1需要MII期去核卵母細(xì)胞C．過(guò)程2可以大幅改良動(dòng)物性狀D．過(guò)程2為過(guò)程3提供了量產(chǎn)方式，過(guò)程3為過(guò)程1、2提供了改良性狀的方式6．（2023·湖北·統(tǒng)考高考真題）用氨芐青霉素抗性基因（AmpR）、四環(huán)素抗性基因（TetR）作為標(biāo)記基因構(gòu)建的質(zhì)粒如圖所示。用含有目的基因的DNA片段和用不同限制酶酶切后的質(zhì)粒，構(gòu)建基因表達(dá)載體（重組質(zhì)粒），并轉(zhuǎn)化到受體菌中。下列敘述錯(cuò)誤的是（）

A．若用HindⅢ酶切，目的基因轉(zhuǎn)錄的產(chǎn)物可能不同B．若用PvuⅠ酶切，在含Tet（四環(huán)素）培養(yǎng)基中的菌落，不一定含有目的基因C．若用SphⅠ酶切，可通過(guò)DNA凝膠電泳技術(shù)鑒定重組質(zhì)粒構(gòu)建成功與否D．若用SphⅠ酶切，攜帶目的基因的受體菌在含Amp（氨芐青霉素）和Tet的培養(yǎng)基中能形成菌落7．（2023·浙江·統(tǒng)考高考真題）某研究小組利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)，將綠色熒光蛋白基因（GFP）整合到野生型小鼠Gata3基因一端，如圖甲所示。實(shí)驗(yàn)得到能正常表達(dá)兩種蛋白質(zhì)的雜合子雌雄小鼠各1只，交配以期獲得Gata3-GFP基因純合子小鼠。為了鑒定交配獲得的4只新生小鼠的基因型，設(shè)計(jì)了引物1和引物2用于PCR擴(kuò)增，PCR產(chǎn)物電泳結(jié)果如圖乙所示。

下列敘述正確的是（）A．Gata3基因的啟動(dòng)子無(wú)法控制GFP基因的表達(dá)B．翻譯時(shí)先合成Gata3蛋白，再合成GFP蛋白C．2號(hào)條帶的小鼠是野生型，4號(hào)條帶的小鼠是Gata3-GFP基因純合子D．若用引物1和引物3進(jìn)行PCR，能更好地區(qū)分雜合子和純合子8．（2023·山西·統(tǒng)考高考真題）某同學(xué)擬用限制酶（酶1、酶2、酶3和酶4）、DNA連接酶為工具，將目的基因（兩端含相應(yīng)限制酶的識(shí)別序列和切割位點(diǎn)）和質(zhì)粒進(jìn)行切割、連接，以構(gòu)建重組表達(dá)載體。限制酶的切割位點(diǎn)如圖所示。

下列重組表達(dá)載體構(gòu)建方案合理且效率最高的是（

）A．質(zhì)粒和目的基因都用酶3切割，用E.coliDNA連接酶連接B．質(zhì)粒用酶3切割、目的基因用酶1切割，用T4DNA連接酶連接C．質(zhì)粒和目的基因都用酶1和酶2切割，用T4DNA連接酶連接D．質(zhì)粒和目的基因都用酶2和酶4切割，用E.coliDNA連接酶連接9．（2023·天津·統(tǒng)考高考真題）基因工程：制備新型酵母菌(1)已知酵母菌不能吸收淀粉，若想使新型酵母菌可以直接利用淀粉發(fā)酵，則應(yīng)導(dǎo)入多步分解淀粉所需的多種酶，推測(cè)這些酶生效的場(chǎng)所應(yīng)該是（填“細(xì)胞內(nèi)”和“細(xì)胞外”）(2)同源切割是一種代替限制酶、DNA連接酶將目的基因?qū)牖虮磉_(dá)載體的方法。當(dāng)目的基因兩側(cè)的小段序列與基因表達(dá)載體上某序列相同時(shí)，就可以發(fā)生同源切割，將目的基因直接插入。研究人員，運(yùn)用同源切割的方式，在目的基因兩端加上一組同源序列A．B，已知酵母菌體內(nèi)DNA有許多A-B序列位點(diǎn)可以同源切割插入。構(gòu)建完成的目的基因結(jié)構(gòu)如圖，則應(yīng)選擇圖中的引物對(duì)目的基因進(jìn)行PCR。

(3)已知酵母菌不能合成尿嘧啶，因此尿嘧啶合成基因（UGA）常用作標(biāo)記基因，又知尿嘧啶可以使5-氟乳清酸轉(zhuǎn)化為對(duì)酵母菌有毒物質(zhì)。（i）導(dǎo)入目的基因的酵母菌應(yīng)在的培養(yǎng)基上篩選培養(yǎng)。由于需要導(dǎo)入多種酶基因，需要多次篩選，因此在導(dǎo)入一種目的基因后，要切除UGA基因，再重新導(dǎo)入。研究人員在UGA基因序列兩端加上酵母菌DNA中不存在的同源C．C’序列，以便對(duì)UGA基因進(jìn)行切除。C．C’的序列方向?qū)⒂绊懬懈顣r(shí)同源序列的配對(duì)方式，進(jìn)而決定DNA片段在切割后是否可以順利重連，如圖，則應(yīng)選擇方式進(jìn)行連接。

（ii）切去UGA基因的酵母菌應(yīng)在的培養(yǎng)基上篩選培養(yǎng)。(4)綜上，目的基因、標(biāo)記基因和同源序列在導(dǎo)入酵母菌的基因表達(dá)載體上的排列方式應(yīng)該如圖。

10．（2023·湖南·統(tǒng)考高考真題）基因檢測(cè)是診斷和預(yù)防遺傳病的有效手段。研究人員采集到一遺傳病家系樣本，測(cè)序后發(fā)現(xiàn)此家系甲和乙兩個(gè)基因存在突變：甲突變可致先天性耳聾；乙基因位于常染色體上，編碼產(chǎn)物可將葉酸轉(zhuǎn)化為N5-甲基四氫葉酸，乙突變與胎兒神經(jīng)管缺陷（NTDs）相關(guān)；甲和乙位于非同源染色體上。家系患病情況及基因檢測(cè)結(jié)果如圖所示。不考慮染色體互換，回答下列問(wèn)題：

(1)此家系先天性耳聾的遺傳方式是。1-1和1-2生育育一個(gè)甲和乙突變基因雙純合體女兒的概率是。(2)此家系中甲基因突變?nèi)缦聢D所示：正?；騿捂溒?'-ATTCCAGATC……（293個(gè)堿基）……CCATGCCCAG-3'突變基因單鏈片段5'-ATTCCATATC……（293個(gè)堿基）……CCATGCCCAG-3'研究人員擬用PCR擴(kuò)增目的基因片段，再用某限制酶（識(shí)別序列及切割位點(diǎn)為

）酶切檢測(cè)甲基因突變情況，設(shè)計(jì)了一條引物為5′-GGCATG-3'，另一條引物為（寫出6個(gè)堿基即可）。用上述引物擴(kuò)增出家系成員Ⅱ-1的目的基因片段后，其酶切產(chǎn)物長(zhǎng)度應(yīng)為bp（注：該酶切位點(diǎn)在目的基因片段中唯一）。(3)女性的乙基因純合突變會(huì)增加胎兒NTDs風(fēng)險(xiǎn)。葉酸在人體內(nèi)不能合成，孕婦服用葉酸補(bǔ)充劑可降低NTDs的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)。建議從可能妊娠或孕前至少1個(gè)月開始補(bǔ)充葉酸，一般人群補(bǔ)充有效且安全劑量為0.4~1.0mg.d-1，NTDs生育史女性補(bǔ)充4mg.d-1。經(jīng)基因檢測(cè)胎兒（Ⅲ-2）的乙基因型為-/-，據(jù)此推薦該孕婦（Ⅱ-1）葉酸補(bǔ)充劑量為mg.d-1。11．（2023·天津·統(tǒng)考高考真題）某植物四號(hào)染色體上面的A基因可以指導(dǎo)植酸合成，不能合成植酸的該種植物會(huì)死亡。現(xiàn)有A3-和A25-兩種分別由A基因缺失3個(gè)和25個(gè)堿基對(duì)產(chǎn)生的基因，已知前者不影響植酸合成，后者效果未知。(1)現(xiàn)有基因型為AA25-的植物，這兩個(gè)基因是基因。該植物自交后代進(jìn)行PCR，正向引物與A25-缺失的堿基配對(duì)，反向引物在其下游0．5kb處，PCR后進(jìn)行電泳，發(fā)現(xiàn)植物全部后代PCR產(chǎn)物電泳結(jié)果均具有明亮條帶，原因是，其中明亮條帶分為較明亮和較暗兩種，其中較明亮條帶代表基因型為的植物，比例為。(2)將一個(gè)A基因?qū)牖蛐蜑锳3-A25-的植物的6號(hào)染色體，構(gòu)成基因型為A3-A25-A的植物、該植物自交子代中含有A25-A25-的比例是。(3)在某逆境中，基因型為A3-A3-的植物生存具有優(yōu)勢(shì)，現(xiàn)有某基因型為A3-A的植物，若該種植物嚴(yán)格自交，且基因型為A3-A3-的植物每代數(shù)量增加10%，補(bǔ)齊下面的表格中，子一代基因頻率數(shù)據(jù)（保留一位小數(shù)）：代親代子一代子二代A基因頻率50%%46．9%A3-基因頻率50%%53．1%基因頻率改變，是的結(jié)果。12．（2023·北京·統(tǒng)考高考真題）變胖過(guò)程中，胰島B細(xì)胞會(huì)增加。增加的B細(xì)胞可能源于自身分裂（途徑I），也可能來(lái)自胰島中干細(xì)胞的增殖、分化（途徑Ⅱ）?？茖W(xué)家采用胸腺嘧啶類似物標(biāo)記的方法，研究了L基因缺失導(dǎo)致肥胖的模型小鼠IK中新增B細(xì)胞的來(lái)源。(1)EdU和BrdU都是胸腺嘧啶類似物，能很快進(jìn)入細(xì)胞并摻入正在復(fù)制的DNA中，摻入DNA的EdU和BrdU均能與互補(bǔ)配對(duì)，并可以被分別檢測(cè)。未摻入的EdU和BrdU短時(shí)間內(nèi)即被降解。(2)將處于細(xì)胞周期不同階段的細(xì)胞混合培養(yǎng)于多孔培養(yǎng)板中，各孔同時(shí)加入EdU，隨后每隔一定時(shí)間向一組培養(yǎng)孔加入BrdU，再培養(yǎng)十幾分鐘后收集該組孔內(nèi)全部細(xì)胞，檢測(cè)雙標(biāo)記細(xì)胞占EdU標(biāo)記細(xì)胞的百分比（如圖）。圖中反映DNA復(fù)制所需時(shí)長(zhǎng)的是從點(diǎn)到點(diǎn)。

(3)為研究變胖過(guò)程中B細(xì)胞的增殖，需使用一批同時(shí)變胖的小鼠。為此，本實(shí)驗(yàn)使用誘導(dǎo)型基因敲除小鼠，即飼喂誘導(dǎo)物后小鼠的L基因才會(huì)被敲除，形成小鼠IK?？茖W(xué)家利用以下實(shí)驗(yàn)材料制備小鼠IK：①純合小鼠Lx：小鼠L基因兩側(cè)已插入特異DNA序列（x），但L的功能正常；②Ce酶基因：源自噬菌體，其編碼的酶進(jìn)入細(xì)胞核后作用于x，導(dǎo)致兩個(gè)x間的DNA片段丟失；③Er基因：編碼的Er蛋白位于細(xì)胞質(zhì)，與Er蛋白相連的物質(zhì)的定位由Er蛋白決定；④口服藥T：小分子化合物，可誘導(dǎo)Er蛋白進(jìn)入細(xì)胞核。請(qǐng)完善制備小鼠IK的技術(shù)路線：→連接到表達(dá)載體→轉(zhuǎn)入小鼠Lx→篩選目標(biāo)小鼠→→獲得小鼠IK。(4)各種細(xì)胞DNA復(fù)制所需時(shí)間基本相同，但途徑I的細(xì)胞周期時(shí)長(zhǎng)（t1）是途徑Ⅱ細(xì)胞周期時(shí)長(zhǎng)（t2）的三倍以上。據(jù)此，科學(xué)家先用EdU飼喂小鼠IK，t2時(shí)間后換用BrdU飼喂，再過(guò)t2時(shí)間后檢測(cè)B細(xì)胞被標(biāo)記的情況。研究表明，變胖過(guò)程中增加的B細(xì)胞大多數(shù)來(lái)源于自身分裂，與之相應(yīng)的檢測(cè)結(jié)果應(yīng)是。13．（2023·北京·統(tǒng)考高考真題）二十大報(bào)告提出“種業(yè)振興行動(dòng)”。油菜是重要的油料作物，篩選具有優(yōu)良性狀的育種材料并探究相應(yīng)遺傳機(jī)制，對(duì)創(chuàng)制高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)新品種意義重大。(1)我國(guó)科學(xué)家用誘變劑處理野生型油菜（綠葉），獲得了新生葉黃化突變體（黃化葉）。突變體與野生型雜交，結(jié)果如圖甲，其中隱性性狀是。

(2)科學(xué)家克隆出導(dǎo)致新生葉黃化的基因，與野生型相比，它在DNA序列上有一個(gè)堿基對(duì)改變，導(dǎo)致突變基因上出現(xiàn)了一個(gè)限制酶B的酶切位點(diǎn)（如圖乙）。據(jù)此，檢測(cè)F2基因型的實(shí)驗(yàn)步驟為：提取基因組DNA→PCR→回收擴(kuò)增產(chǎn)物→→電泳。F2中雜合子電泳條帶數(shù)目應(yīng)為條。

(3)油菜雄性不育品系A(chǔ)作為母本與可育品系R雜交，獲得雜交油菜種子S（雜合子），使雜交油菜的大規(guī)模種植成為可能。品系A(chǔ)1育性正常，其他性狀與A相同，A與A1雜交，子一代仍為品系A(chǔ)，由此可大量繁殖A。在大量繁殖A的過(guò)程中，會(huì)因其他品系花粉的污染而導(dǎo)致A不純，進(jìn)而影響種子S的純度，導(dǎo)致油菜籽減產(chǎn)。油菜新生葉黃化表型易辨識(shí)，且對(duì)產(chǎn)量沒有顯著影響?？茖W(xué)家設(shè)想利用新生葉黃化性狀來(lái)提高種子S的純度。育種過(guò)程中首先通過(guò)一系列操作，獲得了新生葉黃化的A1，利用黃化A1生產(chǎn)種子S的育種流程見圖丙。

①圖丙中，A植株的綠葉雄性不育子代與黃化A1雜交，篩選出的黃化A植株占子一代總數(shù)的比例約為。②為減少因花粉污染導(dǎo)致的種子S純度下降，簡(jiǎn)單易行的田間操作用。14．（2023·山東·高考真題）科研人員構(gòu)建了可表達(dá)J-V5融合蛋白的重組質(zhì)粒并進(jìn)行了檢測(cè)，該質(zhì)粒的部分結(jié)構(gòu)如圖甲所示，其中V5編碼序列表達(dá)標(biāo)簽短肽V5。

(1)與圖甲中啟動(dòng)子結(jié)合的酶是。除圖甲中標(biāo)出的結(jié)構(gòu)外，作為載體，質(zhì)粒還需具備的結(jié)構(gòu)有（答出2個(gè)結(jié)構(gòu)即可）。(2)構(gòu)建重組質(zhì)粒后，為了確定J基因連接到質(zhì)粒中且插入方向正確，需進(jìn)行PCR檢測(cè)，若僅用一對(duì)引物，應(yīng)選擇圖甲中的引物。已知J基因轉(zhuǎn)錄的模板鏈位于b鏈，由此可知引物F1與圖甲中J基因的（填“a鏈”或“b鏈”）相應(yīng)部分的序列相同。(3)重組質(zhì)粒在受體細(xì)胞內(nèi)正確表達(dá)后，用抗J蛋白抗體和抗V5抗體分別檢測(cè)相應(yīng)蛋白是否表達(dá)以及表達(dá)水平，結(jié)果如圖乙所示。其中，出現(xiàn)條帶1證明細(xì)胞內(nèi)表達(dá)了，條帶2所檢出的蛋白（填“是”或“不是”）由重組質(zhì)粒上的J基因表達(dá)的。15．（2023·海南·高考真題）基因遞送是植物遺傳改良的重要技術(shù)之一，我國(guó)多個(gè)實(shí)驗(yàn)室合作開發(fā)了一種新型基因遞送系統(tǒng)（切—浸—生芽Cut-Dip-Budding，簡(jiǎn)稱CDB法）。圖1與圖2分別是利用常規(guī)轉(zhuǎn)化法和CDB法在某植物中遞送基因的示意圖。

回答下列問(wèn)題。(1)圖1中，從外植體轉(zhuǎn)變成愈傷組織的過(guò)程屬于；從愈傷組織到幼苗的培養(yǎng)過(guò)程需要的激素有生長(zhǎng)素和，該過(guò)程還需要光照，其作用是。(2)圖1中的愈傷組織，若不經(jīng)過(guò)共培養(yǎng)環(huán)節(jié)，直接誘導(dǎo)培養(yǎng)得到的植株可以保持植株A的。圖1中，含有外源基因的轉(zhuǎn)化植株A若用于生產(chǎn)種子，其包裝需標(biāo)注。(3)圖1與圖2中，農(nóng)桿菌侵染植物細(xì)胞時(shí)，可將外源基因遞送到植物細(xì)胞中的原因是。(4)已知某酶（PDS）缺失會(huì)導(dǎo)致植株白化。某團(tuán)隊(duì)構(gòu)建了用于敲除PDS基因的CRISPR/Cas9基因編輯載體（含有綠色熒光蛋白標(biāo)記基因），利用圖2中的CDB法將該重組載體導(dǎo)入植株B，長(zhǎng)出毛狀根，成功獲得轉(zhuǎn)化植株B．據(jù)此分析，從毛狀根中獲得陽(yáng)性毛狀根段的方法是，圖2中，鑒定導(dǎo)入幼苗中的基因編輯載體是否成功發(fā)揮作用的方法是，依據(jù)是。(5)與常規(guī)轉(zhuǎn)化法相比，采用CDB法進(jìn)行基因遞送的優(yōu)點(diǎn)是（答出2點(diǎn)即可）。16．（2023·浙江·統(tǒng)考高考真題）賴氨酸是人體不能合成的必需氨基酸，而人類主要食物中的賴氨酸含量很低，利用生物技術(shù)可提高食物中賴氨酸含量。回答下列問(wèn)題：(1)植物細(xì)胞合成的賴氨酸達(dá)到一定濃度時(shí)，能抑制合成過(guò)程中兩種關(guān)鍵酶的活性，導(dǎo)致賴氨酸含量維持在一定濃度水平，這種調(diào)節(jié)方式屬于。根據(jù)這種調(diào)節(jié)方式，在培養(yǎng)基中添加，用于篩選經(jīng)人工誘變的植物懸浮細(xì)胞，可得到抗賴氨酸類似物的細(xì)胞突變體，通過(guò)培養(yǎng)獲得再生植株。(2)隨著轉(zhuǎn)基因技術(shù)與動(dòng)物細(xì)胞工程結(jié)合和發(fā)展，2011年我國(guó)首次利用轉(zhuǎn)基因和體細(xì)胞核移植技術(shù)成功培育了高產(chǎn)賴氨酸轉(zhuǎn)基因克隆奶牛。其基本流程為：①構(gòu)建乳腺專一表達(dá)載體。隨著測(cè)序技術(shù)的發(fā)展，為獲取富含賴氨酸的酪蛋白基因（目的基因），可通過(guò)檢索獲取其編碼序列，用化學(xué)合成法制備得到。再將獲得的目的基因與含有乳腺特異性啟動(dòng)子的相應(yīng)載體連接，構(gòu)建出乳腺專一表達(dá)載體。②表達(dá)載體轉(zhuǎn)入牛胚胎成纖維細(xì)胞（BEF）。將表達(dá)載體包裹到磷脂等構(gòu)成的脂質(zhì)體內(nèi)，與BEF膜發(fā)生，表達(dá)載體最終進(jìn)入細(xì)胞核，發(fā)生轉(zhuǎn)化。③核移植。將轉(zhuǎn)基因的BEF作為核供體細(xì)胞，從牛卵巢獲取卵母細(xì)胞，經(jīng)體外培養(yǎng)及去核后作為。將兩種細(xì)胞進(jìn)行電融合，電融合的作用除了促進(jìn)細(xì)胞融合，同時(shí)起到了重組細(xì)胞發(fā)育的作用。④重組細(xì)胞的體外培養(yǎng)及胚胎移植。重組細(xì)胞體外培養(yǎng)至，植入代孕母牛子宮角，直至小牛出生。⑤檢測(cè)。DNA水平檢測(cè)：利用PCR技術(shù)，以非轉(zhuǎn)基因牛耳組織細(xì)胞作為陰性對(duì)照，以為陽(yáng)性對(duì)照，檢測(cè)到轉(zhuǎn)基因牛耳組織細(xì)胞中存在目的基因。RNA水平檢測(cè)：從非轉(zhuǎn)基因牛乳汁中的脫落細(xì)胞、轉(zhuǎn)基因牛乳汁中的脫落細(xì)胞和轉(zhuǎn)基因牛耳組織細(xì)胞，提取總RNA，對(duì)總RNA進(jìn)行處理，以去除DNA污染，再經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄形成cDNA，并以此為，利用特定引物擴(kuò)增目的基因片段。結(jié)果顯示目的基因在轉(zhuǎn)基因牛乳汁中的脫落細(xì)胞內(nèi)表達(dá)，而不在牛耳組織細(xì)胞內(nèi)表達(dá)，原因是什么？。17．（2023·湖北·統(tǒng)考高考真題）某病毒對(duì)動(dòng)物養(yǎng)殖業(yè)危害十分嚴(yán)重。我國(guó)學(xué)者擬以該病毒外殼蛋白A為抗原來(lái)制備單克隆抗體，以期快速檢測(cè)該病毒，其主要技術(shù)路線如圖所示。回答下列問(wèn)題：(1)與小鼠骨髓瘤細(xì)胞融合前，已免疫的脾細(xì)胞（含漿細(xì)胞）（填“需要”或“不需要”）通過(guò)原代培養(yǎng)擴(kuò)大細(xì)胞數(shù)量；添加脂溶性物質(zhì)PEG可促進(jìn)細(xì)胞融合，該過(guò)程中PEG對(duì)細(xì)胞膜的作用是。(2)在雜交瘤細(xì)胞篩選過(guò)程中，常使用特定的選擇培養(yǎng)基（如HAT培養(yǎng)基），該培養(yǎng)基對(duì)和生長(zhǎng)具有抑制作用。(3)單克隆抗體篩選中，將抗體與該病毒外殼蛋白進(jìn)行雜交，其目的是。(4)構(gòu)建重組質(zhì)粒需要使用DNA連接酶。下列屬于DNA連接酶底物的是。18．（2023·浙江·統(tǒng)考高考真題）甲植物細(xì)胞核基因具有耐鹽堿效應(yīng)，乙植物細(xì)胞質(zhì)基因具有高產(chǎn)效應(yīng)。某研究小組用甲、乙兩種植物細(xì)胞進(jìn)行體細(xì)胞雜交相關(guān)研究，基本過(guò)程包括獲取原生質(zhì)體、誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合、篩選融合細(xì)胞、雜種植株再生和鑒定，最終獲得高產(chǎn)耐鹽堿再生植株。回答下列問(wèn)題：(1)根據(jù)研究目標(biāo)，在甲、乙兩種植物細(xì)胞進(jìn)行體細(xì)胞雜交前，應(yīng)檢驗(yàn)兩種植物的原生質(zhì)體是否具備的能力。為了便于觀察細(xì)胞融合的狀況，通常用不同顏色的原生質(zhì)體進(jìn)行融合，若甲植物原生質(zhì)體采用幼苗的根為外植體，則乙植物可用幼苗的為外植體。(2)植物細(xì)胞壁的主要成分為和果膠，在獲取原生質(zhì)體時(shí)，常采用相應(yīng)的酶進(jìn)行去壁處理。在原生質(zhì)體融合前，需對(duì)原生質(zhì)體進(jìn)行處理，分別使甲原生質(zhì)體和乙原生質(zhì)體的失活。對(duì)處理后的原生質(zhì)體在顯微鏡下用計(jì)數(shù)，確定原生質(zhì)體密度。兩種原生質(zhì)體1∶1混合后，通過(guò)添加適宜濃度的PEG進(jìn)行融合；一定時(shí)間后，加入過(guò)量的培養(yǎng)基進(jìn)行稀釋，稀釋的目的是。(3)將融合原生質(zhì)體懸浮液和液態(tài)的瓊脂糖混合，在凝固前倒入培養(yǎng)皿，融合原生質(zhì)體分散固定在平板中，并獨(dú)立生長(zhǎng)、分裂形成愈傷組織。同一塊愈傷組織所有細(xì)胞源于。下列各項(xiàng)中能說(shuō)明這些愈傷組織只能來(lái)自于雜種細(xì)胞的理由是哪幾項(xiàng)？A．甲、乙原生質(zhì)體經(jīng)處理后失活，無(wú)法正常生長(zhǎng)、分裂B．同種融合的原生質(zhì)體因甲或乙原生質(zhì)體失活而不能生長(zhǎng)、分裂C．培養(yǎng)基含有抑制物質(zhì)，只有雜種細(xì)胞才能正常生長(zhǎng)、分裂D．雜種細(xì)胞由于結(jié)構(gòu)和功能完整可以生長(zhǎng)、分裂(4)愈傷組織經(jīng)可形成胚狀體或芽。胚狀體能長(zhǎng)出，直接發(fā)育形成再生植株。(5)用PCR技術(shù)鑒定再生植株。已知甲植物細(xì)胞核具有特異性DNA序列a，乙植物細(xì)胞質(zhì)具有特異性DNA序列b；M1、M2為序列a的特異性引物，N1、N2為序列b的特異性引物。完善實(shí)驗(yàn)思路：Ⅰ．提取純化再生植株的總DNA，作為PCR擴(kuò)增的。Ⅱ．將DNA提取物加入PCR反應(yīng)體系，為特異性引物，擴(kuò)增序列a；用同樣的方法擴(kuò)增序列b。Ⅲ．得到的2個(gè)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)后，若每個(gè)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物在凝膠中均出現(xiàn)了預(yù)期的個(gè)條帶，則可初步確定再生植株來(lái)自于雜種細(xì)胞。19．（2023·廣東·統(tǒng)考高考真題）種子大小是作物重要的產(chǎn)量性狀。研究者對(duì)野生型擬南芥（2n=10）進(jìn)行誘變篩選到一株種子增大的突變體。通過(guò)遺傳分析和測(cè)序，發(fā)現(xiàn)野生型DAI基因發(fā)生一個(gè)堿基G到A的替換，突變后的基因?yàn)殡[性基因，據(jù)此推測(cè)突變體的表型與其有關(guān)，開展相關(guān)實(shí)驗(yàn)?；卮鹣铝袉?wèn)題：(1)擬采用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將野生型DAI基因轉(zhuǎn)入突變體植株，若突變體表型確由該突變?cè)斐?，則轉(zhuǎn)基因植株的種子大小應(yīng)與植株的種子大小相近。(2)用PCR反應(yīng)擴(kuò)增DAI基因，用限制性核酸內(nèi)切酶對(duì)PCR產(chǎn)物和進(jìn)行切割，用DNA連接酶將兩者連接。為確保插入的DAI基因可以正常表達(dá)，其上下游序列需具備。(3)轉(zhuǎn)化后，T-DNA（其內(nèi)部基因在減數(shù)分裂時(shí)不發(fā)生交換）可在基因組單一位點(diǎn)插入也可以同時(shí)插入多個(gè)位點(diǎn)。在插入片段均遵循基因分離及自由組合定律的前提下，選出單一位點(diǎn)插入的植株，并進(jìn)一步獲得目的基因穩(wěn)定遺傳的植株（如圖），用于后續(xù)驗(yàn)證突變基因與表型的關(guān)系。

①農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化T0代植株并自交，將T1代種子播種在選擇培養(yǎng)基上，能夠萌發(fā)并生長(zhǎng)的陽(yáng)性個(gè)體即表示其基因組中插入了。②T1代陽(yáng)性植株自交所得的T2代種子按單株收種并播種于選擇培養(yǎng)基，選擇陽(yáng)性率約%的培養(yǎng)基中幼苗繼續(xù)培養(yǎng)。③將②中選出的T2代陽(yáng)性植株（填“自交”、“與野生型雜交”或“與突變體雜交”）所得的T3代種子按單株收種并播種于選擇培養(yǎng)基，陽(yáng)性率達(dá)到%的培養(yǎng)基中的幼苗即為目標(biāo)轉(zhuǎn)基因植株。為便于在后續(xù)研究中檢測(cè)該突變，研究者利用PCR擴(kuò)增野生型和突變型基因片段，再使用限制性核酸內(nèi)切酶X切割產(chǎn)物，通過(guò)核酸電泳即可進(jìn)行突變檢測(cè)，相關(guān)信息見下，在電泳圖中將酶切結(jié)果對(duì)應(yīng)位置的條帶涂黑。

20．（2023·全國(guó)·統(tǒng)考高考真題）GFP是水母體內(nèi)存在的能發(fā)綠色熒光的一種蛋白?？蒲腥藛T以GFP基因?yàn)椴牧?，利用基因工程技術(shù)獲得了能發(fā)其他顏色熒光的蛋白，豐富了熒光蛋白的顏色種類?；卮鹣铝袉?wèn)題。(1)構(gòu)建突變基因文庫(kù)，科研人員將GFP基因的不同突變基因分別插入載體，并轉(zhuǎn)入大腸桿菌制備出GFP基因的突變基因文庫(kù)。通常，基因文庫(kù)是指。(2)構(gòu)建目的基因表達(dá)載體?？蒲腥藛T從構(gòu)建的GFP突變基因文庫(kù)中提取目的基因（均為突變基因）構(gòu)建表達(dá)載體，其模式圖如下所示（箭頭為GFP突變基因的轉(zhuǎn)錄方向）。圖中①為；②為，其作用是；圖中氨芐青霉素抗性基因是一種標(biāo)記基因，其作用是。

(3)目的基因的表達(dá)。科研人員將構(gòu)建好的表達(dá)載體導(dǎo)入大腸桿菌中進(jìn)行表達(dá)，發(fā)現(xiàn)大腸桿菌有的發(fā)綠色熒光，有的發(fā)黃色熒光，有的不發(fā)熒光。請(qǐng)從密碼子特點(diǎn)的角度分析，發(fā)綠色熒光的可能原因是（答出1點(diǎn)即可）。(4)新蛋白與突變基因的關(guān)聯(lián)性分析。將上述發(fā)黃色熒光的大腸桿菌分離純化后，對(duì)其所含的GFP突變基因進(jìn)行測(cè)序，發(fā)現(xiàn)其堿基序列與GFP基因的不同，將該GFP突變基因命名為YFP基因（黃色熒光蛋白基因）。若要通過(guò)基因工程的方法探究YFP基因能否在真核細(xì)胞中表達(dá)，實(shí)驗(yàn)思路是。21．（2023·全國(guó)·統(tǒng)考高考真題）接種疫苗是預(yù)防傳染病的一項(xiàng)重要措施，乙肝疫苗的使用可有效阻止乙肝病毒的傳播，降低乙型肝炎發(fā)病率。乙肝病毒是一種DNA病毒。重組乙肝疫苗的主要成分是利用基因工程技術(shù)獲得的乙肝病毒表面抗原（一種病毒蛋白）。回答下列問(wèn)題。(1)接種上述重組乙肝疫苗不會(huì)在人體中產(chǎn)生乙肝病毒，原因是。(2)制備重組乙肝疫苗時(shí)，需要利用重組表達(dá)載體將乙肝病毒表面抗原基因（目的基因）導(dǎo)入酵母細(xì)胞中表達(dá)。重組表達(dá)載體中通常含有抗生素抗性基因，抗生素抗性基因的作用是。能識(shí)別載體中的啟動(dòng)子并驅(qū)動(dòng)目的基因轉(zhuǎn)錄的酶是。(3)目的基因?qū)虢湍讣?xì)胞后，若要檢測(cè)目的基因是否插入染色體中，需要從酵母細(xì)胞中提取進(jìn)行DNA分子雜交，DNA分子雜交時(shí)應(yīng)使用的探針是。(4)若要通過(guò)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)目的基因在酵母細(xì)胞中是否表達(dá)出目的蛋白，請(qǐng)簡(jiǎn)要寫出實(shí)驗(yàn)思路。〖2022年高考真題〗22．（2022·重慶·統(tǒng)考高考真題）將人胰島素A鏈上1個(gè)天冬氨酸替換為甘氨酸，B鏈末端增加2個(gè)精氨酸，可制備出一種人工長(zhǎng)效胰島素。下列關(guān)于該胰島素的敘述，錯(cuò)誤的是（

）A．進(jìn)入人體后需經(jīng)高爾基體加工 B．比人胰島素多了2個(gè)肽鍵C．與人胰島素有相同的靶細(xì)胞 D．可通過(guò)基因工程方法生產(chǎn)23．（2022·遼寧·統(tǒng)考高考真題）抗蟲和耐除草劑玉米雙抗12-5是我國(guó)自主研發(fā)的轉(zhuǎn)基因品種。為給監(jiān)管轉(zhuǎn)基因生物安全提供依據(jù)，采用PCR方法進(jìn)行目的基因監(jiān)測(cè)，反應(yīng)程序如圖所示。下列敘述正確的是（

）A．預(yù)變性過(guò)程可促進(jìn)模板DNA邊解旋邊復(fù)制B．后延伸過(guò)程可使目的基因的擴(kuò)增更加充分C．延伸過(guò)程無(wú)需引物參與即可完成半保留復(fù)制D．轉(zhuǎn)基因品種經(jīng)檢測(cè)含有目的基因后即可上市24．（2022·北京·統(tǒng)考高考真題）下列高中生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中，對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果不要求精確定量的是（）A．探究光照強(qiáng)度對(duì)光合作用強(qiáng)度的影響B(tài)．DNA的粗提取與鑒定C．探索生長(zhǎng)素類調(diào)節(jié)劑促進(jìn)插條生根的最適濃度D．模擬生物體維持pH的穩(wěn)定25．（2022·湖北·統(tǒng)考高考真題）滅菌、消毒、無(wú)菌操作是生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中常見的操作。下列敘述正確的是（）A．動(dòng)、植物細(xì)胞DNA的提取必須在無(wú)菌條件下進(jìn)行B．微生物、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)基中需添加一定量的抗生素以防止污染C．為防止蛋白質(zhì)變性，不能用濕熱滅菌法對(duì)牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌D．可用濕熱滅菌法對(duì)實(shí)驗(yàn)中所使用的微量離心管、細(xì)胞培養(yǎng)瓶等進(jìn)行滅菌26．（2022·山東·高考真題）關(guān)于“DNA的粗提取與鑒定”實(shí)驗(yàn)，下列說(shuō)法錯(cuò)誤的是（

）A．過(guò)濾液沉淀過(guò)程在4℃冰箱中進(jìn)行是為了防止DNA降解B．離心研磨液是為了加速DNA的沉淀C．在一定溫度下，DNA遇二苯胺試劑呈現(xiàn)藍(lán)色D．粗提取的DNA中可能含有蛋白質(zhì)27．（2022·浙江·統(tǒng)考高考真題）羊瘙癢病是感染性蛋白粒子PrPSc引起的。某些羊體內(nèi)存在蛋白質(zhì)PrPc，但不發(fā)病。當(dāng)羊感染了PrPSc后，PrPSc將PrPc不斷地轉(zhuǎn)變?yōu)镻rPSc，導(dǎo)致PrPSc積累，從而發(fā)病。把患瘙癢病的羊組織勻漿接種到小鼠后，小鼠也會(huì)發(fā)病。下列分析合理的是（

）A．動(dòng)物體內(nèi)的PrPSc可全部被蛋白酶水解B．患病羊體內(nèi)存在指導(dǎo)PrPSc合成的基因C．產(chǎn)物PrPSc對(duì)PrPc轉(zhuǎn)變?yōu)镻rPSc具有反饋抑制作用D．給PrPc基因敲除小鼠接種PrPSc，小鼠不會(huì)發(fā)病28．（2022·河北·統(tǒng)考高考真題）人染色體DNA中存在串聯(lián)重復(fù)序列，對(duì)這些序列進(jìn)行體外擴(kuò)增、電泳分離后可得到個(gè)體的DNA指紋圖譜。該技術(shù)可用于親子鑒定和法醫(yī)學(xué)分析。下列敘述錯(cuò)誤的是（）A．DNA分子的多樣性、特異性及穩(wěn)定性是DNA鑒定技術(shù)的基礎(chǔ)B．串聯(lián)重復(fù)序列在父母與子女之間的遺傳不遵循孟德爾遺傳定律C．指紋圖譜顯示的DNA片段屬于人體基礎(chǔ)代謝功能蛋白的編碼序列D．串聯(lián)重復(fù)序列突變可能會(huì)造成親子鑒定結(jié)論出現(xiàn)錯(cuò)誤29．（2022·福建·統(tǒng)考高考真題）美西螈具有很強(qiáng)的再生能力。研究表明，美西螈的巨噬細(xì)胞在斷肢再生的早期起重要作用。為研究巨噬細(xì)胞的作用機(jī)制，科研人員制備了抗巨噬細(xì)胞表面標(biāo)志蛋白CD14的單克隆抗體，具體方法如下。回答下列問(wèn)題：（一）基因工程抗原的制備(1)根據(jù)美西螈CD14基因的核苷酸序列，合成引物，利用PCR擴(kuò)增CD14片段。已知DNA聚合酶催化引物的3’—OH與加入的脫氧核苷酸的5’—P形成磷酸二酯鍵，則新合成鏈的延伸方向是（填“5’→3’”或“3’→5’”）。

(2)載體和CD14片段的酶切位點(diǎn)及相應(yīng)的酶切抗性基因序列如圖1所示。用XhoI和Sal1分別酶切CD14和載體后連接，CD14接入載體時(shí)會(huì)形成正向連接和反向連接的兩種重組DNA．可進(jìn)一步用這兩種限制酶對(duì)CD14的連接方向進(jìn)行鑒定，理由是。培養(yǎng)能表達(dá)CD14蛋白的大腸桿菌，分離純化目的蛋白。（二）抗CD14單克隆抗體的制備流程如圖2所示：

(3)步驟①和步驟⑤分別向小鼠注射和。(4)步驟②所用的SP2/0細(xì)胞的生長(zhǎng)特點(diǎn)是。(5)吸?、壑械纳锨逡旱舰艿呐囵B(yǎng)孔中，根據(jù)抗原—抗體雜交原理，需加入①進(jìn)行專一抗體檢測(cè)，檢測(cè)過(guò)程發(fā)現(xiàn)有些雜交瘤細(xì)胞不能分泌抗CD14抗體，原因是②。(6)步驟⑥從中提取到大量的抗CD14抗體，用于檢測(cè)巨噬細(xì)胞。30．（2022·遼寧·統(tǒng)考高考真題）某抗膜蛋白治療性抗體藥物研發(fā)過(guò)程中，需要表達(dá)N蛋白胞外段，制備相應(yīng)的單克隆抗體，增加其對(duì)N蛋白胞外段特異性結(jié)合的能力。Ⅰ．N蛋白胞外段抗原制備，流程如圖1(1)構(gòu)建重組慢病毒質(zhì)粒時(shí)，選用氨芐青霉素抗性基因作為標(biāo)記基因，目的是。用脂質(zhì)體將重組慢病毒質(zhì)粒與輔助質(zhì)粒導(dǎo)入病毒包裝細(xì)胞，質(zhì)粒被包在脂質(zhì)體（填“雙分子層中”或“兩層磷脂分子之間”）。(2)質(zhì)粒在包裝細(xì)胞內(nèi)組裝出由組成的慢病毒，用慢病毒感染海拉細(xì)胞進(jìn)而表達(dá)并分離、純化N蛋白胞外段。Ⅱ．N蛋白胞外段單克隆抗體制備，流程如圖2(3)用N蛋白胞外段作為抗原對(duì)小鼠進(jìn)行免疫后，取小鼠脾組織用酶處理，制成細(xì)胞懸液，置于含有混合氣體的中培養(yǎng)，離心收集小鼠的B淋巴細(xì)胞，與骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)行融合。(4)用選擇性培養(yǎng)基對(duì)融合后的細(xì)胞進(jìn)行篩選，獲得雜交瘤細(xì)胞，將其接種到96孔板，進(jìn)行培養(yǎng)。用技術(shù)檢測(cè)每孔中的抗體，篩選既能產(chǎn)生N蛋白胞外段抗體，又能大量增殖的單克隆雜交瘤細(xì)胞株，經(jīng)體外擴(kuò)大培養(yǎng)，收集，提取單克隆抗體。(5)利用N蛋白胞外段抗體與藥物結(jié)合，形成，實(shí)現(xiàn)特異性治療。31．（2022·浙江·高考真題）回答下列（一）、（二）小題：（一）回答與產(chǎn)淀粉酶的枯草桿菌育種有關(guān)的問(wèn)題：(1)為快速分離產(chǎn)淀粉酶的枯草桿菌，可將土樣用制成懸液，再將含有懸液的三角瓶置于80℃的中保溫一段時(shí)間，其目的是。(2)為提高篩選效率，可將菌種的過(guò)程與菌種的產(chǎn)酶性能測(cè)定一起進(jìn)行：將上述懸液稀釋后涂布于淀粉為唯一碳源的固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)，采用顯色方法，根據(jù)透明圈與菌落直徑比值的大小，可粗略估計(jì)出菌株是否產(chǎn)酶及產(chǎn)酶性能。(3)為了獲得高產(chǎn)淀粉酶的枯草桿菌，可利用現(xiàn)有菌種，通過(guò)后再篩選獲得，或利用轉(zhuǎn)基因、等技術(shù)獲得。（二）回答與植物轉(zhuǎn)基因和植物克隆有關(guān)的問(wèn)題：(4)在用農(nóng)桿菌侵染的方法進(jìn)行植物轉(zhuǎn)基因過(guò)程中，通常要使用抗生素，其目的一是抑制生長(zhǎng)，二是篩選轉(zhuǎn)化細(xì)胞。當(dāng)選擇培養(yǎng)基中抗生素濃度時(shí)，通常會(huì)出現(xiàn)較多假陽(yáng)性植株，因此在轉(zhuǎn)基因前需要對(duì)受體進(jìn)行抗生素的檢測(cè)。(5)為提高培育轉(zhuǎn)基因植株的成功率，植物轉(zhuǎn)基因受體需具有較強(qiáng)的能力和遺傳穩(wěn)定性。對(duì)培養(yǎng)的受體細(xì)胞遺傳穩(wěn)定性的早期檢測(cè)，可通過(guò)觀察細(xì)胞內(nèi)形態(tài)是否改變進(jìn)行判斷，也可通過(guò)觀察分裂期染色體的，分析染色體組型是否改變進(jìn)行判斷。(6)植物轉(zhuǎn)基因受體全能性表達(dá)程度的高低主要與受體的基因型、培養(yǎng)環(huán)境、繼代次數(shù)和長(zhǎng)短等有關(guān)。同時(shí)也與受體的取材有關(guān)，其中受體為時(shí)全能性表達(dá)能力最高。32．（2022·浙江·統(tǒng)考高考真題）回答下列（一）、（二）小題：（一）紅曲霉合成的紅曲色素是可食用的天然色素，具有防腐、降脂等功能。研究者進(jìn)行了紅曲色素的提取及紅色素的含量測(cè)定實(shí)驗(yàn)，流程如下：(1)取紅曲霉菌種斜面，加適量洗下菌苔，制成菌懸液并培養(yǎng)，解除休眠獲得菌種。經(jīng)液體發(fā)酵，收集紅曲霉菌絲體，紅曲霉菌絲體與70%乙醇溶液混合，經(jīng)浸提、，獲得的上清液即為紅曲色素提取液。為進(jìn)一步提高紅曲色素得率，可將紅曲霉細(xì)胞進(jìn)行處理。(2)紅曲色素包括紅色素、黃色素和橙黃色素等，紅色素在390nm、420nm和505nm波長(zhǎng)處均有較大吸收峰。用光電比色法測(cè)定紅曲色素提取液甲的紅色素含量時(shí)，通常選用505nm波長(zhǎng)測(cè)定的原因是。測(cè)定時(shí)需用作空白對(duì)照。(3)生產(chǎn)上提取紅曲色素后的殘?jiān)?，?jīng)處理后作為飼料添加劑或有機(jī)肥，這屬于廢棄物的無(wú)害化和處理。（二）我國(guó)在新冠疫情方面取得了顯著的成效，但全球疫情形勢(shì)仍然非常嚴(yán)峻、尤其是病毒出現(xiàn)了新變異株——德爾塔、奧密克戎，更是威脅著全人類的生命健康。(4)新冠病毒核酸定性檢測(cè)原理是：以新冠病毒的單鏈RNA為模板，利用酶合成DNA，經(jīng)PCR擴(kuò)增，然后在擴(kuò)增產(chǎn)物中加入特異的，如果檢測(cè)到特異的雜交分子則核酸檢測(cè)為陽(yáng)性。(5)接種疫苗是遏制新冠疫情蔓延的重要手段。腺病毒疫苗的制備技術(shù)要點(diǎn)是：將腺病毒的復(fù)制基因敲除；以新冠病毒的基因?yàn)槟０搴铣傻腄NA插入腺病毒基因組，構(gòu)建重組腺病毒。重組腺病毒在人體細(xì)胞內(nèi)表達(dá)產(chǎn)生新冠病毒抗原，從而引發(fā)特異性免疫反應(yīng)。在此過(guò)程中，腺病毒的作用是作為基因工程中目的基因的。將腺病毒復(fù)制基因敲除的目的是。(6)單克隆抗體有望用于治療新冠肺炎。單克隆抗體的制備原理是：取免疫陽(yáng)性小鼠的細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞混合培養(yǎng)，使其融合，最后篩選出能產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細(xì)胞。與植物組織培養(yǎng)相比，雜交瘤細(xì)胞擴(kuò)大培養(yǎng)需要特殊的成分，如胰島素和。33．（2022·福建·統(tǒng)考高考真題）7S球蛋白是大豆最主要的過(guò)敏原蛋白，三種大豆脂氧酶Lox-1，2，3是大豆產(chǎn)生腥臭味的原因。大豆食品深加工過(guò)程中需要去除7S球蛋白和三種脂氧酶?？蒲腥藛T為獲得7S球蛋白與三種脂氧酶同時(shí)缺失的大豆新品種，將7S球蛋白缺失的大豆植株與脂氧酶完全缺失的植株雜交，獲得F1種子。F1植株自交得到F2種子。對(duì)F1種子和F2種子的7S球蛋白和脂氧酶進(jìn)行蛋白質(zhì)電泳檢測(cè)，不同表現(xiàn)型的電泳條帶示意如下圖。

注：圖中黑色條帶為抗原一抗體雜交帶，表示相應(yīng)蛋白質(zhì)的存在。M泳道條帶為相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)蛋白所在位置，F(xiàn)1種子泳道的條帶待填寫。根據(jù)電泳檢測(cè)的結(jié)果，對(duì)F2種子表現(xiàn)型進(jìn)行分類統(tǒng)計(jì)如下表。F2種子表現(xiàn)型粒數(shù)7S球蛋白野生型1247S球蛋白缺失型377脂氧酶Lox-1，2，3野生型282①94②94Lox-1，2，3全缺失型31回答下列問(wèn)題：(1)7S球蛋白缺失型屬于（填“顯性”或“隱性”）性狀。(2)表中①②的表現(xiàn)型分別是、。脂氧酶Lox—1，2，3分別由三對(duì)等位基因控制，在脂氧酶是否缺失的性狀上，F(xiàn)2種子表現(xiàn)型只有四種，原因是。(3)在答題卡對(duì)應(yīng)的圖中畫出F1種子表現(xiàn)型的電泳條帶。(4)已知Lox基因和7S球蛋白基因獨(dú)立遺傳。圖中第泳道的種子表現(xiàn)型為7S球蛋白與三種脂氧酶同時(shí)缺失型，這些種子在F2中的比例是。利用這些種子選擇并獲得穩(wěn)定遺傳種子的方法是。(5)為提高大豆品質(zhì)，利用基因工程方法提出一個(gè)消除野生型大豆7S球蛋白過(guò)敏原的設(shè)想。34．（2022·天津·高考真題）研究者擬構(gòu)建高效篩選系統(tǒng)，將改進(jìn)的苯丙氨酸合成關(guān)鍵酶基因P1導(dǎo)入谷氨酸棒桿菌，以提高苯丙氨酸產(chǎn)量。(1)如圖是該高效篩選系統(tǒng)載體的構(gòu)建過(guò)程。載體1中含有KanR（卡那霉素抗性基因）和SacB兩個(gè)標(biāo)記基因，為去除篩選效率較低的SacB，應(yīng)選擇引物和，并在引物的（5＇∕3＇）端引入XhoⅠ酶識(shí)別序列，進(jìn)行PCR擴(kuò)增，產(chǎn)物經(jīng)酶切、連接后環(huán)化成載體2。(2)PCR擴(kuò)增載體3中篩選效率較高的標(biāo)記基因RpsL（鏈霉素敏感基因）時(shí)，引物應(yīng)包含（EcoRⅠ∕HindⅢ∕XhoⅠ）酶識(shí)別序列，產(chǎn)物經(jīng)單酶切后連接到載體2構(gòu)建高效篩選載體4。(3)將改進(jìn)的P1基因整合到載體4構(gòu)建載體5。將載體5導(dǎo)入鏈霉素不敏感（由RpsL突變?cè)斐桑?、卡那霉素敏感的受體菌。為獲得成功導(dǎo)入載體5的菌株，應(yīng)采用含有的平板進(jìn)行初步篩選。(4)用一定的方法篩選出如下菌株：P1基因脫離載體5并整合到受體菌擬核DNA，且載體5上其他DNA片段全部丟失。該菌的表型為__________。A．卡那霉素不敏感、鏈霉素敏感B．卡那霉素敏感、鏈霉素不敏感C．卡那霉素和鏈霉素都敏感D．卡那霉素和鏈霉素都不敏感(5)可采用技術(shù)鑒定成功整合P1基因的菌株。之后以發(fā)酵法檢測(cè)苯丙氨酸產(chǎn)量。36．（2022·重慶·統(tǒng)考高考真題）改良水稻的株高和產(chǎn)量性狀是實(shí)現(xiàn)袁隆平先生“禾下乘涼夢(mèng)”的一種可能途徑。研究人員克隆了可顯著增高和增產(chǎn)的eui基因，并開展了相關(guān)探索。步驟I：步驟II：(1)花藥培養(yǎng)能縮短育種年限，原因是。在步驟I的花藥培養(yǎng)過(guò)程中，可產(chǎn)生單倍體愈傷組織，將其培養(yǎng)于含的培養(yǎng)基上，可促進(jìn)產(chǎn)生二倍體愈傷組織。I中能用于制造人工種子的材料是。(2)步驟II中，eui基因克隆于cDNA文庫(kù)而不是基因組文庫(kù)，原因是；在構(gòu)建重組Ti質(zhì)粒時(shí)使用的工具酶有。為篩選含重組Ti質(zhì)粒的菌株，需在培養(yǎng)基中添加。獲得的農(nóng)桿菌菌株經(jīng)鑒定后，應(yīng)侵染I中的，以獲得轉(zhuǎn)基因再生植株。再生植株是否含有eui基因的鑒定方法是，移栽后若發(fā)育為更高且豐產(chǎn)的稻株，則可望“禾下乘涼”。36．（2022·江蘇·統(tǒng)考高考真題）纖毛是廣泛存在的細(xì)胞表面結(jié)構(gòu)，功能異?？梢鸲喾N疾病。因此，研究纖毛形成的作用機(jī)制具有重要意義。請(qǐng)回答下列問(wèn)題。(1)纖毛結(jié)構(gòu)如圖1所示，由細(xì)胞膜延伸形成的纖毛膜主要由中心體轉(zhuǎn)變而來(lái)，中心體在有絲分裂中的功能是。(2)某病人腎小管上皮細(xì)胞纖毛異常，為了分析纖毛相關(guān)基因X是否發(fā)生了變異，對(duì)基因X進(jìn)行了PCR擴(kuò)增與產(chǎn)物測(cè)序。從細(xì)胞樣品中分離DNA時(shí)，可通過(guò)交替調(diào)節(jié)鹽濃度將與核蛋白結(jié)合的DNA分離出來(lái)，溶液中添加NaC1至2．0mo1/L的目的是。PCR擴(kuò)增時(shí)，需在催化下，在引物端進(jìn)行DNA鏈的延伸，獲得擴(kuò)增產(chǎn)物用于測(cè)序。(3)為研究蛋白質(zhì)X在細(xì)胞中的定位，構(gòu)建綠色熒光蛋白GFP與X的融合蛋白，融合蛋白具有綠色熒光，可示其在細(xì)胞內(nèi)位置。將X-GFP基因融合片段M導(dǎo)入如圖Ⅱ所示載體質(zhì)粒Y，構(gòu)建Y-M重組質(zhì)粒（在EcoRⅤ位點(diǎn)插入片段）。請(qǐng)完成下表。分步實(shí)驗(yàn)?zāi)繕?biāo)簡(jiǎn)易操作、結(jié)果、分析PCR鑒定正向重組質(zhì)粒Y-M（圖Ⅱ中融合片段M中有白色的箭頭，代表方向）①選擇圖Ⅱ引物；②PCR目的產(chǎn)物約為bp。確保M及連接處序列正確，Y-M的連接處上游含有HindIII+EcoRV的識(shí)別序列，下游含有EcoRV+BamHI的識(shí)別序列③質(zhì)粒測(cè)序，圖Ⅲ中正確的是（選填序列編號(hào)）檢測(cè)融合蛋白定位④對(duì)照質(zhì)粒Y-GFP（僅表達(dá)GFP）與實(shí)驗(yàn)質(zhì)粒Y-M分別導(dǎo)入細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)對(duì)照組整個(gè)細(xì)胞均有綠色熒光，而實(shí)驗(yàn)組熒光集中在纖毛基部，說(shuō)明。(4)為研究另一纖毛病相關(guān)基因Z表達(dá)的變化，采用熒光定量PCR法檢測(cè)健康人與病人基因Z的轉(zhuǎn)錄水平。采集樣本、提取總RNA，經(jīng)形成cDNA作為模板，PCR擴(kuò)增結(jié)果顯示，在總cDNA模板量相等的條件下，健康人Ct值為15，而病人Ct值為20（Ct值是產(chǎn)物熒光強(qiáng)度達(dá)到設(shè)定閾值時(shí)的PCR循環(huán)數(shù)）。從理論上估算，在PCR擴(kuò)增20個(gè)循環(huán)的產(chǎn)物中，健康人樣品的目的產(chǎn)物大約是病人的倍。37.（2022·河北·統(tǒng)考高考真題）蛋白酶抑制劑基因轉(zhuǎn)化是作物抗蟲育種的新途徑。某研究團(tuán)隊(duì)將胰蛋白酶抑制劑（NaPI）和胰凝乳蛋白酶抑制劑（StPinlA）的基因單獨(dú)或共同轉(zhuǎn)化棉花，獲得了轉(zhuǎn)基因植株?；卮鹣铝袉?wèn)題：(1)蛋白酶抑制劑的抗蟲機(jī)制是。(2)是實(shí)施基因工程的核心。(3)利用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法時(shí)，必須將目的基因插入到質(zhì)粒的上，此方法的不足之處是。(4)為檢測(cè)目的基因在受體細(xì)胞基因組中的整合及其轉(zhuǎn)錄和翻譯，可采用的檢測(cè)技術(shù)有（寫出兩點(diǎn)即可）。(5)確認(rèn)抗蟲基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定表達(dá)后，還需進(jìn)一步做抗蟲的以鑒定其抗性程度。下圖為三種不同遺傳操作產(chǎn)生的轉(zhuǎn)基因棉花抗蟲實(shí)驗(yàn)結(jié)果，據(jù)結(jié)果分析（填“NaPI”或“StPinlA”或“NaPI＋StPinlA”）轉(zhuǎn)基因棉花的抗蟲效果最佳，其原因是。(6)基因突變可產(chǎn)生新的等位基因，在自然選擇的作用下，昆蟲種群的基因頻率會(huì)發(fā)生。導(dǎo)致昆蟲朝著一定的方向不斷進(jìn)化。提此推測(cè)，胰蛋白酶抑制劑轉(zhuǎn)基因作物長(zhǎng)期選擇后，某些害蟲具有了抗胰蛋白酶抑制劑的能力，其分子機(jī)制可能是（寫出兩點(diǎn)即可）。38．（2022·北京·統(tǒng)考高考真題）生態(tài)文明建設(shè)已成為我國(guó)的基本國(guó)策。水中雌激素類物質(zhì)（E物質(zhì)）污染會(huì)導(dǎo)致魚類雌性化等異常，并通過(guò)食物鏈影響人體健康和生態(tài)安全。原產(chǎn)南亞的斑馬魚，其肌細(xì)胞、生殖細(xì)胞等存在E物質(zhì)受體，且幼體透明?？茖W(xué)家將綠色熒光蛋白（GFP）等基因轉(zhuǎn)入斑馬魚，建立了一種經(jīng)濟(jì)且快速的水體E物質(zhì)監(jiān)測(cè)方法。(1)將表達(dá)載體導(dǎo)入斑馬魚受精卵的最佳方式是。(2)為監(jiān)測(cè)E物質(zhì)，研究者設(shè)計(jì)了下圖所示的兩種方案制備轉(zhuǎn)基因斑馬魚，其中ERE和酵母來(lái)源的UAS是兩種誘導(dǎo)型啟動(dòng)子，分別被E物質(zhì)-受體復(fù)合物和酵母來(lái)源的Gal4蛋白特異性激活，啟動(dòng)下游基因表達(dá)。與方案1相比，方案2的主要優(yōu)勢(shì)是，因而被用于制備監(jiān)測(cè)魚（MO）。(3)現(xiàn)擬制備一種不育的監(jiān)測(cè)魚SM，用于實(shí)際監(jiān)測(cè)。SM需經(jīng)MO和另一親本（X）雜交獲得。欲獲得X，需從以下選項(xiàng)中選擇啟動(dòng)子和基因，構(gòu)建表達(dá)載體并轉(zhuǎn)入野生型斑馬魚受精卵，經(jīng)培育后進(jìn)行篩選。請(qǐng)將選項(xiàng)的序號(hào)填入相應(yīng)的方框中。Ⅰ.啟動(dòng)子：。①ERE②UAS③使基因僅在生殖細(xì)胞表達(dá)的啟動(dòng)子（P生）④使基因僅在肌細(xì)胞表達(dá)的啟動(dòng)子（P?。?基因：A．GFP

B．Gal4

C．雌激素受體基因（ER）

D．僅導(dǎo)致生殖細(xì)胞凋亡的基因（dg）(4)SM不育的原因是：成體SM自身產(chǎn)生雌激素，與受體結(jié)合后造成不育。(5)使擬用于實(shí)際監(jiān)測(cè)的SM不育的目的是。39．（2022·海南·統(tǒng)考高考真題）以我國(guó)科學(xué)家為主的科研團(tuán)隊(duì)將OSNL（即4個(gè)基因Oct4／Sox2／Nanog／Lin28A的縮寫）導(dǎo)入黑羽雞胚成纖維細(xì)胞（CEFs），誘導(dǎo)其重編程為誘導(dǎo)多能干細(xì)胞（iPS），再誘導(dǎo)iPS分化為誘導(dǎo)原始生殖細(xì)胞（iPGCs），然后將iPGCs注射到孵化2.5天的白羽雞胚血管中，最終獲得具有黑羽雞遺傳特性的后代，實(shí)驗(yàn)流程如圖。回答下列問(wèn)題。(1)CEFs是從孵化9天的黑羽雞胚中分離獲得的，為了獲得單細(xì)胞懸液，雞胚組織剪碎后需用處理。動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)通常需要在合成培養(yǎng)基中添加等天然成分，以滿足細(xì)胞對(duì)某些細(xì)胞因子的需求。(2)體外獲取OSNL的方法有（答出1種即可）。若要在CEFs中表達(dá)外源基因的蛋白，需構(gòu)建基因表達(dá)載體，載體中除含有目的基因和標(biāo)記基因外，還須有啟動(dòng)子和等。啟動(dòng)子是識(shí)別和結(jié)合的部位，有了它才能驅(qū)動(dòng)。(3)iPS細(xì)胞和iPGCs細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)和功能不同的根本原因是。(4)誘導(dǎo)iPS細(xì)胞的技術(shù)與體細(xì)胞核移植技術(shù)的主要區(qū)別是。(5)該實(shí)驗(yàn)流程中用到的生物技術(shù)有（答出2點(diǎn)即可）。40．（2022·湖北·統(tǒng)考高考真題）“端穩(wěn)中國(guó)碗，裝滿中國(guó)糧”，為了育好中國(guó)種，科研人員在雜交育種與基因工程育種等領(lǐng)域開展了大量的研究。二倍體作物M的品系甲有抗蟲、高產(chǎn)等多種優(yōu)良性狀，但甜度不高。為了改良品系甲，增加其甜度，育種工作者做了如下實(shí)驗(yàn)；【實(shí)驗(yàn)一】遺傳特性及雜交育種的研究在種質(zhì)資源庫(kù)中選取乙、丙兩個(gè)高甜度的品系，用三個(gè)純合品系進(jìn)行雜交實(shí)驗(yàn)，結(jié)果如下表。雜交組合F1表現(xiàn)型F2表現(xiàn)型甲×乙不甜1/4甜、3/4不甜甲×丙甜3/4甜，1/4不甜乙×丙甜13/16甜、3/16不甜【實(shí)驗(yàn)二】甜度相關(guān)基因的篩選通過(guò)對(duì)甲、乙、丙三個(gè)品系轉(zhuǎn)錄的mRNA分析，發(fā)現(xiàn)基因S與作物M的甜度相關(guān)?！緦?shí)驗(yàn)三】轉(zhuǎn)S基因新品系的培育提取品系乙的mRNA，通過(guò)基因重組技術(shù)，以Ti質(zhì)粒為表達(dá)載體，以品系甲的葉片外植體為受體，培有出轉(zhuǎn)S基因的新品系。根據(jù)研究組的實(shí)驗(yàn)研究，回答下列問(wèn)題：(1)假設(shè)不甜植株的基因型為AAbb和Aabb，則乙、丙雜交的F2中表現(xiàn)為甜的植株基因型有種。品系乙基因型為。若用乙×丙中F2不甜的植株進(jìn)行自交，F(xiàn)3中甜∶不甜比例為。(2)下圖中，能解釋（1）中雜交實(shí)驗(yàn)結(jié)果的代謝途徑有。(3)如圖是S基因的cDNA和載體的限制性內(nèi)切核酸酶（限制性核酸內(nèi)切酶）酶譜。為了成功構(gòu)建重組表達(dá)載體，確保目的基因插入載體中方向正確，最好選用酶切割S基因的cDNA和載體。(4)用農(nóng)桿菌侵染品系甲葉片外植體，其目的是。(5)除了題中所示的雜交育種和基因工程育種外，能獲得高甜度品系，同時(shí)保持甲的其他優(yōu)良性狀的育種方法還有（答出2點(diǎn)即可）。41．（2022·山東·高考真題）某種類型的白血病由蛋白P引發(fā)，蛋白UBC可使P被蛋白酶識(shí)別并降解，藥物A可通過(guò)影響這一過(guò)程對(duì)該病起到治療作用。為探索藥物A治療該病的機(jī)理，需構(gòu)建重組載體以獲得融合蛋白FLAG-P和FLAG-P△。P△是缺失特定氨基酸序列的P，F(xiàn)LAG是一種短肽，連接在P或P△的氨基端，使融合蛋白能與含有FLAG抗體的介質(zhì)結(jié)合，但不影響P或P△的功能。(1)為構(gòu)建重組載體，需先設(shè)計(jì)引物，通過(guò)PCR特異性擴(kuò)增P基因。用于擴(kuò)增P基因的引物需滿足的條件是、為使PCR產(chǎn)物能被限制酶切割，需在引物上添加相應(yīng)的限制酶識(shí)別序列，該限制酶識(shí)別序列應(yīng)添加在引物的（填“3'端”或“5'端”）。(2)PCR擴(kuò)增得到的P基因經(jīng)酶切連接插入載體后，與編碼FLAG的序列形成一個(gè)融合基因，如圖甲所示，其中“ATGTGCA”為P基因編碼鏈起始序列。將該重組載體導(dǎo)入細(xì)胞后，融合基因轉(zhuǎn)錄出的mRNA序列正確，翻譯出的融合蛋白中FLAG的氨基酸序列正確，但P基因?qū)?yīng)的氨基酸序列與P不同。據(jù)圖甲分析，出現(xiàn)該問(wèn)題的原因是。修改擴(kuò)增P基因時(shí)使用的帶有EcoRⅠ識(shí)別序列的引物來(lái)解決該問(wèn)題，具體修改方案是。(3)融合蛋白表達(dá)成功后，將FLAG-P、FLAG-P△、藥物A和UBC按照?qǐng)D乙中的組合方式分成5組。各組樣品混勻后分別流經(jīng)含F(xiàn)LAG抗體的介質(zhì)，分離出與介質(zhì)結(jié)合的物質(zhì)并用UBC抗體檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果如圖丙所示。已知FLAG-P和FLAG-P△不能降解UBC，由①②③組結(jié)果的差異推測(cè)，藥物A的作用是；由②④組或③⑤組的差異推測(cè)，P△中缺失的特定序列的作用是。(4)根據(jù)以上結(jié)果推測(cè)，藥物A治療該病的機(jī)理是。42．（2022·山東·高考真題）果蠅的正常眼與無(wú)眼是1對(duì)相對(duì)性狀，受1對(duì)等位基因控制，要確定該性狀的遺傳方式，需從基因與染色體的位置關(guān)系及顯隱性的角度進(jìn)行分析。以正常眼雌果蠅與無(wú)眼雄果蠅為親本進(jìn)行雜交，根據(jù)雜交結(jié)果繪制部分后代果蠅的系譜圖，如圖所示。不考慮致死、突變和X、Y染色體同源區(qū)段的情況。(1)據(jù)圖分析，關(guān)于果蠅無(wú)眼性狀的遺傳方式，可以排除的是。若控制該性狀的基因位于X染色體上，Ⅲ-1與Ⅲ-2雜交的子代中正常眼雄果蠅的概率是。(2)用Ⅱ-1與其親本雄果蠅雜交獲得大量子代，根據(jù)雜交結(jié)果（填“能”或“不能”）確定果蠅正常眼性狀的顯隱性，理由是。(3)以系譜圖中呈現(xiàn)的果蠅為實(shí)驗(yàn)材料設(shè)計(jì)雜交實(shí)驗(yàn)，確定無(wú)眼性狀的遺傳方式。（要求：①只雜交一次；②僅根據(jù)子代表型預(yù)期結(jié)果；③不根據(jù)子代性狀的比例預(yù)期結(jié)果）實(shí)驗(yàn)思路：；預(yù)期結(jié)果并得出結(jié)論：。(4)若果蠅無(wú)眼性狀產(chǎn)生的分子機(jī)制是由于控制正常眼的基因中間缺失一段較大的DNA片段所致，且該對(duì)等位基因的長(zhǎng)度已知。利用PCR及電泳技術(shù)確定無(wú)眼性狀的遺傳方式時(shí)，只以Ⅱ-3為材料，用1對(duì)合適的引物僅擴(kuò)增控制該對(duì)性狀的完整基因序列，電泳檢測(cè)PCR產(chǎn)物，通過(guò)電泳結(jié)果（填“能”或“不能”）確定無(wú)眼性狀的遺傳方式，理由是。43．（2022·湖南·高考真題）水蛭是我國(guó)的傳統(tǒng)中藥材，主要藥理成分水蛭素為水蛭蛋白中重要成分之一，具有良好的抗凝血作用。擬通過(guò)蛋白質(zhì)工程改造水蛭素結(jié)構(gòu)，提高其抗凝血活性?；卮鹣铝袉?wèn)題:(1)蛋白質(zhì)工程流程如圖所示，物質(zhì)a是，物質(zhì)b是。在生產(chǎn)過(guò)程中，物質(zhì)b可能不同，合成的蛋白質(zhì)空間構(gòu)象卻相同，原因是。(2)蛋白質(zhì)工程是基因工程的延伸，基因工程中獲取目的基因的常用方法有、和利用PCR技術(shù)擴(kuò)增。PCR技術(shù)遵循的基本原理是。(3)將提取的水蛭蛋白經(jīng)甲、乙兩種蛋白酶水解后，分析水解產(chǎn)物中的肽含量及其抗凝血活性，結(jié)果如圖所示。推測(cè)兩種處理后酶解產(chǎn)物的抗凝血活性差異主要與肽的（填“種類”或“含量”）有關(guān)，導(dǎo)致其活性不同的原因是。(4)若要比較蛋白質(zhì)工程改造后的水蛭素、上述水蛭蛋白酶解產(chǎn)物和天然水蛭素的抗凝血活性差異，簡(jiǎn)要寫出實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)思路。44．（2022·湖南·高考真題）中國(guó)是傳統(tǒng)的水稻種植大國(guó)，有一半以上人口以稻米為主食。在培育水稻優(yōu)良品種的過(guò)程中，發(fā)現(xiàn)某野生型水稻葉片綠色由基因C控制?；卮鹣铝袉?wèn)題:(1)突變型1葉片為黃色，由基因C突變?yōu)镃1所致，基因C1純合幼苗期致死。突變型1連續(xù)自交3代，F(xiàn)3成年植株中黃色葉植株占。(2)測(cè)序結(jié)果表明，突變基因C1轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物編碼序列第727位堿基改變，由5＇-GAGAG-3＇變?yōu)?＇-GACAG-3＇，導(dǎo)致第位氨基酸突變?yōu)?，從基因控制性狀的角度解釋突變體葉片變黃的機(jī)理。（部分密碼子及對(duì)應(yīng)氨基酸:GAG谷氨酸;AGA精氨酸;GAC天冬氨酸;ACA蘇氨酸;CAG谷氨酰胺）(3)由C突變?yōu)镃1產(chǎn)生了一個(gè)限制酶酶切位點(diǎn)。從突變型1葉片細(xì)胞中獲取控制葉片顏色的基因片段，用限制酶處理后進(jìn)行電泳（電泳條帶表示特定長(zhǎng)度的DNA片段），其結(jié)果為圖中（填“I”“Ⅱ”或“Ⅲ”）。

(4)突變型2葉片為黃色，由基因C的另一突變基因C2所致。用突變型2與突變型1雜交，子代中黃色葉植株與綠色葉植株各占50%。能否確定C2是顯性突變還是隱性突變?（填“能”或“否”），用文字說(shuō)明理由。45．（2022·廣東·高考真題）“綠水逶迤去，青山相向開”大力發(fā)展低碳經(jīng)濟(jì)已成為全社會(huì)的共識(shí)?；谀承┧缶奶厥獯x能力，有研究者以某些工業(yè)廢氣（含CO2等一碳溫室氣體，多來(lái)自高污染排放企業(yè)）為原料，通過(guò)厭氧發(fā)酵生產(chǎn)丙酮，構(gòu)建一種生產(chǎn)高附加值化工產(chǎn)品的新技術(shù)?；卮鹣铝袉?wèn)題：(1)研究者針對(duì)每個(gè)需要擴(kuò)增的酶基因（如圖）設(shè)計(jì)一對(duì)，利用PCR技術(shù)，在優(yōu)化反應(yīng)條件后擴(kuò)增得到目標(biāo)酶基因。(2)研究者構(gòu)建了一種表達(dá)載體pMTL80k，用于在梭菌中建立多基因組合表達(dá)庫(kù)，經(jīng)篩選后提高丙酮的合成量。該載體包括了啟動(dòng)子、終止子及抗生素抗性基因等，其中抗生素抗性基因的作用是，終止子的作用是。(3)培養(yǎng)過(guò)程中發(fā)現(xiàn)重組梭菌大量表達(dá)上述酶蛋白時(shí)，出現(xiàn)了生長(zhǎng)遲緩的現(xiàn)象，推測(cè)其原因可能是，此外丙酮的積累會(huì)傷害細(xì)胞，需要進(jìn)一步優(yōu)化菌株和工藝才能擴(kuò)大應(yīng)用規(guī)模。(4)這種生產(chǎn)高附加值化工產(chǎn)品的新技術(shù)，實(shí)現(xiàn)了，體現(xiàn)了循環(huán)經(jīng)濟(jì)特點(diǎn)。從“碳中和”的角度看，該技術(shù)的優(yōu)勢(shì)在于，具有廣泛的應(yīng)用前景和良好的社會(huì)效益。46．（2022·全國(guó)·統(tǒng)考高考真題）新冠疫情出現(xiàn)后，病毒核酸檢測(cè)和疫苗接種在疫情防控中發(fā)揮了重要作用。回答下列問(wèn)題。(1)新冠病毒是一種RNA病毒，檢測(cè)新冠病毒RNA（核酸檢測(cè)）可以采取RT-PCR法。這種方法的基本原理是先以病毒RNA為模板合成cDNA，這一過(guò)程需要的酶是，再通過(guò)PCR技術(shù)擴(kuò)增相應(yīng)的DNA片段。根據(jù)檢測(cè)結(jié)果判斷被檢測(cè)者是否感染新冠病毒。(2)為了確保新冠病毒核酸檢測(cè)的準(zhǔn)確性，在設(shè)計(jì)PCR引物時(shí)必須依據(jù)新冠病毒RNA中的來(lái)進(jìn)行。PCR過(guò)程每次循環(huán)分為3步，其中溫度最低的一步是。(3)某人同時(shí)進(jìn)行了新冠病毒核酸檢測(cè)和抗體檢測(cè)（檢測(cè)體內(nèi)是否有新冠病毒抗體），若核酸檢測(cè)結(jié)果為陰性而抗體檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性，說(shuō)明（答出1種情況即可）；若核酸檢測(cè)和抗體檢測(cè)結(jié)果均為陽(yáng)性，說(shuō)明。(4)常見的病毒疫苗有滅活疫苗、蛋白疫苗和重組疫苗等。已知某種病毒的特異性蛋白S（具有抗原性）的編碼序列（目的基因）。為了制備蛋白疫苗，可以通過(guò)基因工程技術(shù)獲得大量蛋白S?；蚬こ痰幕静僮髁鞒淌恰！?021年高考真題〗（2021·天津·統(tǒng)考高考真題）閱讀下列材料，完成下面小題。S蛋白是新冠病毒識(shí)別并感染靶細(xì)胞的重要蛋白，作為抗原被宿主免疫系統(tǒng)識(shí)別并應(yīng)答，因此S蛋白是新冠疫苗研發(fā)的重要靶點(diǎn)。下表是不同類型新冠疫苗研發(fā)策略比較。類型研發(fā)策略滅活疫苗新冠病毒經(jīng)培養(yǎng)、增殖，用理化方法滅活后制成疫苗。腺病毒載體疫苗利用改造后無(wú)害的腺病毒作為載體，攜帶S蛋白基因，制成疫苗。接種后，S蛋白基因啟動(dòng)表達(dá)。亞單位疫苗通過(guò)基因工程方法，在體外合成S蛋白，制成疫苗。核酸疫苗將編碼S蛋白的核酸包裹在納米顆粒中，制成疫苗。接種后，在人體內(nèi)產(chǎn)生S蛋白。減毒流感病毒載體疫苗利用減毒流感病毒作為載體，帶S蛋白基因，并在載體病毒表面表達(dá)S蛋白，制成疫苗。47．自身不含S蛋白抗原的疫苗是（

）A．滅活疫苗 B．亞單位疫苗C．核酸疫苗 D．減毒流感病毒載體疫苗48．通常不引發(fā)細(xì)胞免疫的疫苗是（

）A．腺病毒載體疫苗 B．亞單位疫苗C．核酸疫苗 D．減毒流感病毒載體疫苗49．（2021·江蘇·高考真題）下圖是剔除轉(zhuǎn)基因植物中標(biāo)記基因的一種策略，下列相關(guān)敘述錯(cuò)誤的是（

）A．分別帶有目的基因和標(biāo)記基因的兩個(gè)質(zhì)粒，都帶有T-DNA序列B．該方法建立在高轉(zhuǎn)化頻率基礎(chǔ)上，標(biāo)記基因和目的基因須轉(zhuǎn)到不同染色體上C．若要獲得除標(biāo)記基因的植株，轉(zhuǎn)化植株必須經(jīng)過(guò)有性繁殖階段遺傳重組D．獲得的無(wú)篩選標(biāo)記轉(zhuǎn)基因植株發(fā)生了染色體結(jié)構(gòu)變異50．（2021·湖北·統(tǒng)考高考真題）某實(shí)驗(yàn)利用PCR技術(shù)獲取目的基因，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示除目的基因條帶（引物與模板完全配對(duì)）外，還有2條非特異條帶（引物和模板不完全配對(duì)）。為了減少反應(yīng)非特異條帶的產(chǎn)生，以下措施中有效的是（

）A．增加模板DNA的量 B．延長(zhǎng)熱變性的時(shí)間C．延長(zhǎng)延伸的時(shí)間 D．提高復(fù)性的溫度51．（2021·湖北·統(tǒng)考高考真題）限制性內(nèi)切酶EcoRI識(shí)別并切割雙鏈DNA，用EcoRI完全酶切果蠅基因組DNA，理論上得到DNA片段的平均長(zhǎng)度（堿基對(duì)）約為（

）A．6 B．250 C．4000 D．2400052．（2021·遼寧·統(tǒng)考高考真題）腈水合酶（N0）廣泛應(yīng)用于環(huán)境保護(hù)和醫(yī)藥原料生產(chǎn)等領(lǐng)域，但不耐高溫。利用蛋白質(zhì)工程技術(shù)在N0的α和β亞基之間加入一段連接肽，可獲得熱穩(wěn)定的融合型腈水合酶（N1）。下列有關(guān)敘述錯(cuò)誤的是（）A．N1與N0氨基酸序列的差異是影響其熱穩(wěn)定性的原因之一B．加入連接肽需要通過(guò)改造基因?qū)崿F(xiàn)C．獲得N1的過(guò)程需要進(jìn)行轉(zhuǎn)錄和翻譯D．檢測(cè)N1的活性時(shí)先將N1與底物充分混合，再置于高溫環(huán)境53．（2021·天津·統(tǒng)考高考真題）孟德爾說(shuō)：“任何實(shí)驗(yàn)的價(jià)值和效用，取決于所使用材料對(duì)于實(shí)驗(yàn)?zāi)康牡倪m合性。”下列實(shí)驗(yàn)材料選擇不適合的是（

）A．用洋蔥鱗片葉表皮觀察細(xì)胞的質(zhì)壁分離和復(fù)原現(xiàn)象B．用洋蔥根尖分生區(qū)觀察細(xì)胞有絲分裂C．用洋蔥鱗片葉提取和分離葉綠體中的色素D．用洋蔥鱗片葉粗提取DNA54．（2021·北京·統(tǒng)考高考真題）關(guān)于物質(zhì)提取、分離或鑒定的高中生物學(xué)相關(guān)實(shí)驗(yàn)，敘述錯(cuò)誤的是（）A．研磨肝臟以破碎細(xì)胞用于獲取含過(guò)氧化氫酶的粗提液B．利用不同物質(zhì)在酒精溶液中溶解性的差異粗提DNAC．依據(jù)吸收光譜的差異對(duì)光合色素進(jìn)行紙層析分離D．利用與雙縮脲試劑發(fā)生顏色變化的反應(yīng)來(lái)鑒定蛋白質(zhì)55．（2021·山東·統(tǒng)考高考真題）粗提取DNA時(shí)，向雞血細(xì)胞液中加入一定量的蒸餾水并攪拌，過(guò)濾后所得濾液進(jìn)行下列處理后再進(jìn)行過(guò)濾，在得到的濾液中加入特定試劑后容易提取出DNA相對(duì)含量較高的白色絲狀物的處理方式是（

）A．加入適量的木瓜蛋白酶B．37～40℃的水浴箱中保溫10～15分鐘C．加入與濾液體積相等的、體積分?jǐn)?shù)為95%的冷卻的酒精D．加入NaCl調(diào)節(jié)濃度至2mol/L→過(guò)濾→調(diào)節(jié)濾液中NaCl濃度至0．14mol/L56．（2021·重慶·高考真題）為了研究PDCD4基因?qū)π∈笞訉m內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞凋亡的影響，進(jìn)行了相關(guān)實(shí)驗(yàn)。(1)取小鼠子宮時(shí)，為避免細(xì)菌污染，手術(shù)器具應(yīng)進(jìn)行處理；子宮取出剪碎后，用處理一定時(shí)間，可獲得分散的子宮內(nèi)膜組織細(xì)胞，再分離獲得基質(zhì)細(xì)胞用于培養(yǎng)。(2)培養(yǎng)基中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)應(yīng)有（填寫兩種）；培養(yǎng)箱中CO2濃度為5%，其主要作用是。(3)在含PDCD4基因的表達(dá)載體中，啟動(dòng)子的作用是。為了證明PDCD4基因?qū)|(zhì)細(xì)胞凋亡的作用，以含PDCD4基因的表達(dá)載體和基質(zhì)細(xì)胞的混合培養(yǎng)為實(shí)驗(yàn)組，還應(yīng)設(shè)立兩個(gè)對(duì)照組，分別為。經(jīng)檢測(cè)，實(shí)驗(yàn)組中PDCD4表達(dá)水平和細(xì)胞凋亡率顯著高于對(duì)照組，說(shuō)明該基因?qū)|(zhì)細(xì)胞凋亡具有（填“抑制”或“促進(jìn)”）作用。57．（2021·江蘇·高考真題）某小組為研究真菌基因m的功能，構(gòu)建了融合表達(dá)蛋白M和tag標(biāo)簽的質(zhì)粒，請(qǐng)結(jié)合實(shí)驗(yàn)流程回答下列問(wèn)題：(1)目的基因的擴(kuò)增①提取真菌細(xì)胞，經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄獲得cDNA，進(jìn)一步獲得基因m片段。②為了獲得融合tag標(biāo)簽的蛋白M，設(shè)計(jì)引物P2時(shí)，不能包含基因m終止密碼子的編碼序列，否則將導(dǎo)致。③熱啟動(dòng)PCR可提高擴(kuò)增效率，方法之一是：先將除TaqDNA聚合酶（Taq酶）以外的各成分混合后，加熱到80℃以上再混入酶，然后直接從94℃開始PCR擴(kuò)增，下列敘述正確的有A．Taq酶最適催化溫度范圍為50～60℃B．與常規(guī)PCR相比，熱啟動(dòng)PCR可減少反應(yīng)起始時(shí)引物錯(cuò)配形成的產(chǎn)物C．兩條子鏈的合成一定都是從5′端向3′端延伸D．PCR產(chǎn)物DNA堿基序列的特異性體現(xiàn)了Taq酶的特異性(2)重組質(zhì)粒的構(gòu)建①將SmaI切開的載體A與添加同源序列的m混合，用特定DNA酶處理形成黏性末端，然后降溫以促進(jìn)，形成A-m結(jié)合體。將A-m結(jié)合體導(dǎo)入大腸桿菌，利用大腸桿菌中的DNA聚合酶及酶等，完成質(zhì)粒的環(huán)化。②若正確構(gòu)建的重組質(zhì)粒A—m仍能被SmaI切開，則SmaI的酶切位點(diǎn)可能在。(3)融合蛋白的表達(dá)①用含有尿嘧啶的培養(yǎng)基培養(yǎng)URA3基因缺失型酵母，將其作為受體菌，導(dǎo)入質(zhì)粒A-m，然后涂布于無(wú)尿嘧啶的培養(yǎng)基上，篩選獲得目的菌株，其機(jī)理是。②若通過(guò)抗原一抗體雜交實(shí)驗(yàn)檢測(cè)到酵母蛋白中含tag標(biāo)簽，說(shuō)明，后續(xù)實(shí)驗(yàn)可借助tag標(biāo)簽進(jìn)行蛋白M的分離純化。58．（2021·海南·高考真題）CRISPR/Cas9是一種高效的基因編輯技術(shù)，Cas9基因表達(dá)的Cas9蛋白像一把“分子剪刀”，在單鏈向?qū)NA（SgRNA）引導(dǎo)下，切割DNA雙鏈以敲除目標(biāo)基因或插入新的基因。CRISPR/Cas9基因編輯技術(shù)的工作原理如圖所示?；卮鹣铝袉?wèn)題。(1)過(guò)程①中，為構(gòu)建CRISPR/Cas9重組質(zhì)粒，需對(duì)含有特定sgRNA編碼序列的DNA進(jìn)行酶切處理，然后將其插入到經(jīng)相同酶切處理過(guò)的質(zhì)粒上，插入時(shí)所需要的酶是。(2)過(guò)程②中，將重組質(zhì)粒導(dǎo)入大腸桿菌細(xì)胞的方法是。(3)過(guò)程③~⑤中，SgRNA與Cas9蛋白形成復(fù)合體，該復(fù)合體中的SgRNA可識(shí)別并與目標(biāo)DNA序列特異性結(jié)合，二者結(jié)合所遵循的原則是。隨后，Cas9蛋白可切割序列。(4)利用CRISPR/Cas9基因編輯技術(shù)敲除一個(gè)長(zhǎng)度為1200bp的基因，在DNA水平上判斷基因敲除是否成功所采用的方法是，基因敲除成功的判斷依據(jù)是。(5)某種蛋白酶可高效降解羽毛中的角蛋白?？蒲腥藛T將該蛋白酶基因插入到CRISPR/Cas9質(zhì)粒中獲得重組質(zhì)粒，隨后將其導(dǎo)入到大腸桿菌細(xì)胞，通過(guò)基因編輯把該蛋白酶基因插入到基因組DNA中，構(gòu)建得到能大量分泌該蛋白酶的工程菌。據(jù)圖簡(jiǎn)述CRISPR/Cas9重組質(zhì)粒在受體細(xì)胞內(nèi)，將該蛋白酶基因插入到基因組DNA的編輯過(guò)程：。59．（2021·福建·統(tǒng)考高考真題）微生物吸附是重金屬?gòu)U水的處理方法之一。金屬硫蛋白（MT）是一類廣泛存在于動(dòng)植物中的金屬結(jié)合蛋白，具有吸附重金屬的作用?？蒲腥藛T將棗樹的MT基因?qū)氪竽c桿菌構(gòu)建工程菌?；卮鹣铝袉?wèn)題：(1)根據(jù)棗樹的MTcDNA的核苷酸序列設(shè)計(jì)了相應(yīng)的引物（圖1甲），通過(guò)PCR擴(kuò)增MT基因。已知A位點(diǎn)和B位點(diǎn)分別是起始密碼子和終止密碼子對(duì)應(yīng)的基因位置。選用的引物組合應(yīng)為。(2)本實(shí)驗(yàn)中，PCR所用的DNA聚合酶擴(kuò)增出的MT基因的末端為平末端。由于載體E只有能產(chǎn)生黏性末端的酶切位點(diǎn)，需借助中間載體P將MT基因接入載體E。載體P和載體E的酶切位點(diǎn)及相應(yīng)的酶切序列如圖1乙所示。①選用酶將載體P切開，再用（填“T4DNA或“E·coli81DNA”）連接酶將MT基因與載體P相連，構(gòu)成重組載體P′。②載體P′不具有表達(dá)MT基因的和。選用酶組合對(duì)載體P′和載體E進(jìn)行酶切，將切下的MT基因和載體E用DA連接酶進(jìn)行連接，將得到的混合物導(dǎo)入到用離子處理的大腸桿菌，篩出MT工程菌。(3)MT基因在工程菌的表達(dá)量如圖2所示。結(jié)果仍無(wú)法說(shuō)明已經(jīng)成功構(gòu)建能較強(qiáng)吸附廢水中重金屬的MT工程菌，理由是。60．（2021·遼寧·統(tǒng)考高考真題）PHB2蛋白具有抑制細(xì)胞增殖的作用。為初步探究某動(dòng)物PHB2蛋白抑制人宮頸癌細(xì)胞增殖的原因，研究者從基因數(shù)據(jù)庫(kù)中獲取了該蛋白的基因編碼序列（簡(jiǎn)稱phb2基因），大小為0．9kb（1kb=1000堿基對(duì)），利用大腸桿菌表達(dá)該蛋白?；卮鹣铝袉?wèn)題：(1)為獲取phb2