結(jié)題論文初稿

水產(chǎn)養(yǎng)殖硝化物污染的檢測(cè)技術(shù)與生物凈化劑研究關(guān)好變、林曉霞、陳衍韜、趙國(guó)珍、王林川（華南農(nóng)業(yè)大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院廣州510642）摘要在集約化養(yǎng)殖水體方面，氨氮污染已經(jīng)成為制約水產(chǎn)養(yǎng)殖的主要環(huán)境脅迫因子。本項(xiàng)目針對(duì)水生動(dòng)物養(yǎng)殖與疾病防治中最難克服的“水體中硝酸鹽、亞硝酸鹽的檢測(cè)與清除”這一難題，應(yīng)用生物學(xué)、分析化學(xué)、微生物學(xué)的綜合技術(shù)，研究出快速檢測(cè)硝酸鹽、亞硝酸鹽的技術(shù)及開發(fā)出清除硝酸鹽、亞硝酸鹽的復(fù)合微生物制劑，以方便和指導(dǎo)水產(chǎn)養(yǎng)殖戶養(yǎng)好、高產(chǎn)漁類產(chǎn)品，增加農(nóng)民、漁民的收入。國(guó)內(nèi)外目前多以傳統(tǒng)的單一的化學(xué)物理方法進(jìn)行測(cè)氮或者使用生物性的流程工藝來(lái)對(duì)養(yǎng)殖水體進(jìn)行脫氮，這種方式耗資大，使用程序較為繁瑣，攜帶不便，只適用于大型的水產(chǎn)養(yǎng)殖，對(duì)小的養(yǎng)殖規(guī)模利益不大，存在很大的限制性；針對(duì)傳統(tǒng)脫氮技術(shù)的種種缺點(diǎn)，本項(xiàng)目進(jìn)行養(yǎng)殖水體的有益菌群的研究，進(jìn)行生物凈化劑研究。同時(shí)，本項(xiàng)目還從可持續(xù)發(fā)展方向出發(fā)，從綠色工藝出發(fā)，有針對(duì)性的利用微生物間的互生關(guān)系、輔代謝等生理特性將具有特定生物轉(zhuǎn)化能力的菌株經(jīng)過(guò)篩選、擴(kuò)增、放大培養(yǎng)制成菌劑；從而調(diào)節(jié)自然界生態(tài)平衡，減少自然生態(tài)環(huán)境污染，提高食品安全性，促使健康發(fā)展。關(guān)鍵詞：硝化菌、亞硝化菌與反硝化菌生物凈化劑目錄1.前言…………………42材料與方法…………42.1材料………………42.1.1硝化菌、反硝化菌、亞硝化菌等菌種………42.1.2儀器設(shè)備與其他材料…………42.2方法………………52.2.1硝酸鹽與亞硝酸鹽的檢測(cè)………………52.2.2生物凈化劑研究………………53結(jié)果…………53.1試劑盒……………53.2生物凈化劑………………………54討論…………………5致謝……………………7參考文獻(xiàn)………………81前言近些年來(lái)，水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展在數(shù)量上取得了巨大成功。由水產(chǎn)養(yǎng)殖生產(chǎn)出的魚占人們直接消費(fèi)的魚類總量的1/4以上，隨著人口數(shù)量不斷增長(zhǎng)，對(duì)作為人類蛋白質(zhì)來(lái)源之一的水產(chǎn)養(yǎng)殖的依靠也將會(huì)增加。水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)已經(jīng)發(fā)展成為一種與農(nóng)村種植業(yè)并存的農(nóng)業(yè)活動(dòng)，為擴(kuò)大就業(yè)、增加收入和食品安全作出了巨大貢獻(xiàn)。然而，在漁業(yè)資源和可養(yǎng)水面有限的狀況下，漁業(yè)的可持續(xù)增長(zhǎng)必然要在水產(chǎn)養(yǎng)殖方面以增加養(yǎng)殖密度，提高單位水體產(chǎn)量尋求發(fā)展；但在養(yǎng)殖密度增加的情況下不僅對(duì)養(yǎng)殖系統(tǒng)本身，還會(huì)對(duì)附近的水域產(chǎn)生負(fù)面的影響；常規(guī)水產(chǎn)養(yǎng)殖的特征是大量使用合成餌料、化學(xué)肥料、添加劑、農(nóng)藥和生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑等化學(xué)品，導(dǎo)致水體中氨氮濃度的上升，造成水體富營(yíng)養(yǎng)化，也使自然界生態(tài)平衡遭受了巨大破壞，自然生態(tài)環(huán)境受到嚴(yán)重污染，生物多樣性減少，水產(chǎn)品中高化學(xué)殘留量嚴(yán)重影響著食品安全和人類健康。而氨氮的污染也即已經(jīng)成為制約水產(chǎn)養(yǎng)殖的的主要環(huán)境脅迫因子。所有這些都使得人們對(duì)常規(guī)水產(chǎn)養(yǎng)殖系統(tǒng)的可持續(xù)性產(chǎn)生懷疑，對(duì)水產(chǎn)養(yǎng)殖產(chǎn)品的安全度產(chǎn)生懷疑。本項(xiàng)目針對(duì)水生動(dòng)物養(yǎng)殖與疾病防治中最難克服的“水體中硝酸鹽、亞硝酸鹽的檢測(cè)與清除”這一難題，從多角度、新觀點(diǎn)出發(fā)，研究快速檢測(cè)養(yǎng)殖水體中硝酸鹽、亞硝酸鹽的技術(shù)以及開發(fā)出清除硝酸鹽、亞硝酸鹽的復(fù)合微生物劑，為養(yǎng)殖水體氮素的污染進(jìn)行生物修復(fù)，降解水體中有害物質(zhì)的含量，凈化水體，從而更好地指導(dǎo)水產(chǎn)養(yǎng)殖戶養(yǎng)好高產(chǎn)漁類產(chǎn)品，增加農(nóng)民、漁民的收入。2材料與方法2.1材料2.1.1硝化菌、反硝化菌、亞硝化菌等菌種從水產(chǎn)養(yǎng)殖場(chǎng)從水體及污泥中分離培養(yǎng)2.1.2儀器設(shè)備與其他材料電熱培養(yǎng)箱：數(shù)顯隔水式303As－2，上海浦東榮豐科學(xué)儀器，上海浦東躍欣科學(xué)儀器廠

（NH4）2SO4、MgSO4.7H2O、KH2PO4、NaCL硝酸鹽、亞硝酸鹽標(biāo)準(zhǔn)液、蒸餾水、氫氧化鋁溶液標(biāo)準(zhǔn)管、燒杯、培養(yǎng)基、試劑盒、接種環(huán)等2.2方法2.2.1硝酸鹽與亞硝酸鹽的檢測(cè)（1）亞硝酸鹽的檢測(cè)：將標(biāo)準(zhǔn)管內(nèi)小塑料管中的溶液全部轉(zhuǎn)移到標(biāo)準(zhǔn)管，用蒸餾水稀釋至刻度線，保留管內(nèi)溶液至此試劑盒里的試劑用完為止。用待測(cè)水樣沖洗樣品管。將待測(cè)水樣加至樣品管的刻度線，撕開一小包A，把包內(nèi)粉末倒入水樣中，蓋上蓋子，搖勻，5分鐘后再加入一小包B粉末，搖勻。10分鐘后將標(biāo)準(zhǔn)管和樣品管放在白色背景上由上而下目測(cè)比色。若樣品管溶液顏色比標(biāo)準(zhǔn)逛溶液顏色淺，則待測(cè)水樣中亞硝酸鹽含量合格；反之不合格。（2）硝酸鹽的檢測(cè)：方法同上，只是試劑不同注：若水樣混濁，需先進(jìn)行水樣預(yù)處理：取水樣約200ml，加入試劑C，反復(fù)振蕩混合，靜置，取上層清液進(jìn)行檢測(cè)。2.2.2生物凈化劑研究（1）采樣：樣品來(lái)自某水產(chǎn)養(yǎng)殖場(chǎng)；（2）分離純化：從水體及污泥中分離菌種，硝化菌、亞硝化菌與反硝化菌；（3）鑒定：鏡檢，試劑檢驗(yàn)等;（4）富集培養(yǎng)；（5）菌株進(jìn)的培養(yǎng)與繁殖；（6）已經(jīng)初步進(jìn)行菌株的性能測(cè)定；（7）接下來(lái)的工藝已有初步定案，現(xiàn)在還在進(jìn)行中。3結(jié)果3.1制成了快速檢測(cè)水體中亞硝酸鹽與硝酸鹽是否超標(biāo)的半成品3.2分離培養(yǎng)出了菌株，掌握了快速培養(yǎng)菌株的方法3.3初步測(cè)定菌株的性能4討論在項(xiàng)目研究的過(guò)程中，在亞硝酸鹽與硝酸鹽的檢測(cè)中，用密封性較高的塑料瓶裝硝酸鹽及亞硝酸鹽標(biāo)準(zhǔn)溶液時(shí)，易長(zhǎng)時(shí)間放置，而且容易克服生產(chǎn)中腐蝕以及變性等等這個(gè)難題，從而為試劑盒的方便簡(jiǎn)易提供了一定的條件。由于所要檢測(cè)的水體是養(yǎng)殖場(chǎng)中的水體，有時(shí)可能會(huì)比較混濁，若不進(jìn)行凈化可能會(huì)影響檢測(cè)結(jié)果。故需要先進(jìn)性凈化，取其上清液進(jìn)行檢測(cè)，這樣能更加方便快速的檢測(cè)待測(cè)水體中的硝酸鹽與亞硝酸鹽是否超標(biāo)。為生產(chǎn)中的調(diào)整提高依據(jù)并且容易攜帶。在生物凈化劑研究方面，其技術(shù)要求方面更高。因此，其中也是遇到了較多的困難。在從水體及淤泥中分離菌種后，必須經(jīng)過(guò)鏡檢以及試劑檢驗(yàn)才能確定是否為所需要的硝化菌、亞硝化菌及反硝化菌。在確定了菌種的成分后，其培養(yǎng)一開始花費(fèi)了較長(zhǎng)的時(shí)間，而且現(xiàn)在國(guó)內(nèi)外對(duì)此菌種的特性研究還不是十分的透徹，所以進(jìn)行初步培養(yǎng)時(shí)比較慢，需要不斷的更換條件，不斷地尋求新的元素來(lái)確定最佳的條件。通過(guò)一段時(shí)間的探索，終于找到了一種快速培養(yǎng)菌種的方法，大大的縮短了菌株培養(yǎng)的時(shí)間。現(xiàn)在也成熟的掌握了這種技術(shù)，把時(shí)間壓縮到了一個(gè)星期內(nèi)，并在把此菌株初步進(jìn)行性能測(cè)定時(shí)，取得了一定的效果。這就有利于生產(chǎn)中的大規(guī)?；呐囵B(yǎng)。但是由于時(shí)間及某些原因，現(xiàn)在還未能進(jìn)行規(guī)模化生產(chǎn)及培養(yǎng)成品。本項(xiàng)研究為快速檢測(cè)凈化水體中的硝酸鹽與亞硝酸鹽奠定了基礎(chǔ)，同時(shí)由于該技術(shù)在我國(guó)只有零星的單個(gè)菌株的研究，尚存在很大的研究空間，因此本項(xiàng)目具有填補(bǔ)我國(guó)空白的創(chuàng)新之處，本項(xiàng)目還將從可持續(xù)發(fā)展方面著手，進(jìn)行養(yǎng)殖水體氨氮污染生物修復(fù)。致謝本文是在指導(dǎo)老師王林川教授的全面指導(dǎo)和親切關(guān)懷下完成的，與此同時(shí)還得到了菅永峰、區(qū)德慶、龔中貴、何輝、徐昌領(lǐng)、董青、季艷菊等在本實(shí)驗(yàn)過(guò)程中的熱心的幫助。謹(jǐn)對(duì)上述的和未提及的有關(guān)人士表示最衷心的感謝！參考文獻(xiàn)[1]J.S.阿拉巴斯特淡水魚類的水質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)北京：科普出版社，1986.4[2]王建龍,文湘華編著現(xiàn)代環(huán)境生物技術(shù)北京：清華大學(xué)出版社，2001[3]雷衍之主編養(yǎng)殖水環(huán)境化學(xué)北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社，2004[4]王衍亮主編可持續(xù)水產(chǎn)養(yǎng)殖——資源環(huán)境質(zhì)量：2003水產(chǎn)科技論壇北京：海洋出版社，2004[5]陳堅(jiān)等編著環(huán)境生物技術(shù)應(yīng)用與發(fā)展北京：中國(guó)輕工業(yè)出版社，2001[6]張玉芹劉開啟.反硝化細(xì)菌的篩選及培養(yǎng)條件的研究.農(nóng)業(yè)環(huán)境科學(xué)學(xué)報(bào)2005年1期[7