第36講基因工程（包括PCR技術(shù)）-高考生物一輪復(fù)習(xí)精講課件

高考生物一輪復(fù)習(xí)精講課件2023年選修3

現(xiàn)代生物科技專(zhuān)題第36講

基因工程（包括PCR技術(shù)）考點(diǎn)一

基因工程的操作工具考點(diǎn)二

基因工程的基本操作程序考點(diǎn)三

基因工程的應(yīng)用和蛋白質(zhì)工程考點(diǎn)四

DNA粗提取與鑒定真題再現(xiàn)教材基礎(chǔ)診斷1.

DNA連接酶的作用都是將雙鏈DNA片段“縫合”起來(lái)，恢復(fù)被限制酶切開(kāi)的兩個(gè)核苷酸之間的氫鍵。(

)×2.

E·coli

DNA連接酶既能連接平末端，又能連接黏性末端。(

)×3.

質(zhì)粒是一種裸露的、結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、獨(dú)立于細(xì)菌擬核DNA之外，并具有自我復(fù)制能力的小型環(huán)狀DNA分子,是基因工程常用的載體。(

)√4.

質(zhì)粒DNA分子上有特殊的標(biāo)記基因，如四環(huán)素合成基因、氨芐青霉素合成基因等標(biāo)記基因。(

)×考點(diǎn)一

基因工程的操作工具5.

攜帶外源DNA片段的質(zhì)粒進(jìn)入受體細(xì)胞后，在細(xì)胞中進(jìn)行自我復(fù)制，或整合到染色體DNA上，隨染色體DNA進(jìn)行同步復(fù)制。(

)6.

在進(jìn)行基因工程操作中，真正被用作載體的質(zhì)粒，都是在天然質(zhì)粒的基礎(chǔ)上進(jìn)行過(guò)人工改造的。(

)√√知識(shí)梳理整合1.基因工程的概念生物類(lèi)型生物產(chǎn)品人們的愿望轉(zhuǎn)基因遺傳性狀2.基因工程的基本工具限制酶是一類(lèi)酶，而不是一種酶核苷酸序列磷酸二酯鍵一種特定的核苷酸序列黏性末端提醒

①將一個(gè)基因從DNA分子上切割下來(lái)需要切兩處，同時(shí)產(chǎn)生四個(gè)黏性末端或平末端。②限制酶不切割自身DNA的原因是原核生物DNA分子中不存在該酶的識(shí)別序列或識(shí)別序列已經(jīng)被修飾。(1)限制性核酸內(nèi)切酶

(2)DNA連接酶黏性末端限制酶作用將目的基因運(yùn)送至受體細(xì)胞條件①能自我復(fù)制②有一個(gè)至多個(gè)_________切割位點(diǎn)，供外源DNA插入其中③有___________供重組DNA的鑒定和選擇④大小合適，便于操作⑤對(duì)受體細(xì)胞無(wú)害種類(lèi)及作用對(duì)象_______（常用）、λ噬菌體的衍生物（作用對(duì)象：大腸桿菌等受體）___________（作用對(duì)象：動(dòng)物細(xì)胞）植物病毒（作用對(duì)象：植物細(xì)胞）限制酶標(biāo)記基因質(zhì)粒動(dòng)物病毒（3）載體教材深挖拓展1.

根據(jù)你所掌握的知識(shí)，你能推測(cè)限制酶存在于原核生物中的作用是什么嗎？提示：防止外來(lái)病原物的侵害，切割外源DNA，保護(hù)自身。2.

請(qǐng)據(jù)圖回答下列問(wèn)題：據(jù)圖可知EcoRⅠ限制酶的識(shí)別序列是_______________;切口類(lèi)型是___________；切點(diǎn)是在________之間，由圖解可以看出，限制酶的作用特點(diǎn)是識(shí)別________________________________序列，并使每一條鏈中特定部位的兩個(gè)核苷酸之間的_____________斷開(kāi)?！狦AATTC—黏性末端G—A雙鏈DNA分子的某種特定核苷酸磷酸二酯鍵3.

（選修3

P6尋根問(wèn)底）DNA連接酶與DNA聚合酶是一回事嗎？為什么？提示：不是。DNA連接酶發(fā)揮作用時(shí)不需要模板，連接的是兩個(gè)DNA片段；DNA聚合酶發(fā)揮作用時(shí)需要模板，作用是將單個(gè)核苷酸依次連接到單鏈3′端。4.

）聯(lián)系你已有的知識(shí)，想一想，為什么限制酶不剪切細(xì)菌本身的DNA?提示：含有某種限制酶的細(xì)胞，自身DNA不具有這種酶的識(shí)別切割序列，或識(shí)別序列被修飾，使限制酶不能將其切開(kāi)。重難突破1.DNA相關(guān)酶的比較名稱(chēng)作用部位作用底物作用結(jié)果限制酶磷酸二酯鍵DNA將DNA切成兩個(gè)或多個(gè)片段DNA連接酶磷酸二酯鍵DNA片段將兩個(gè)DNA片段連接為一個(gè)DNA分子DNA聚合酶磷酸二酯鍵脫氧核苷酸以單鏈DNA為模板,將單個(gè)脫氧核苷酸依次連接到單鏈末端DNA（水解）酶磷酸二酯鍵DNA將DNA片段水解為單個(gè)脫氧核苷酸解旋酶氫鍵DNA將雙鏈DNA分子局部解旋為單鏈,形成兩條長(zhǎng)鏈RNA聚合酶磷酸二酯鍵核糖核苷酸以單鏈DNA為模板,將單個(gè)核糖核苷酸依次連接到單鏈末端2.基因工程的理論基礎(chǔ)3.載體上標(biāo)記基因的作用載體上的標(biāo)記基因一般是一些抗生素的抗性基因。目的基因要轉(zhuǎn)入的受體細(xì)胞沒(méi)有抵抗相關(guān)抗生素的能力。當(dāng)含有抗生素抗性基因的載體進(jìn)入受體細(xì)胞后，抗性基因在受體細(xì)胞內(nèi)表達(dá)，使受體細(xì)胞能夠抵抗相應(yīng)抗生素，所以在受體細(xì)胞的培養(yǎng)體系中加入該種抗生素就可以只保留轉(zhuǎn)入載體的受體細(xì)胞，原理如圖所示：能力素養(yǎng)提升考向一

限制性核酸內(nèi)切酶、DNA連接酶等酶的作用1.

圖（a）中的三個(gè)DNA片段上依次表示出了EcoRⅠ、BamHⅠ和Sau3AⅠ三種限制酶的識(shí)別序列與切割位點(diǎn)，圖（b）為某種表達(dá)載體的示意圖（載體上的EcoRⅠ、Sau3AⅠ的切點(diǎn)是唯一的）。圖（a）圖（b）根據(jù)基因工程的有關(guān)知識(shí),回答下列問(wèn)題:1）

經(jīng)BamHⅠ酶切后得到的目的基因可以與上述表達(dá)載體被___________酶切后的產(chǎn)物連接，理由是___________________________________________。Sau3AⅠ兩種酶切割后產(chǎn)生的片段具有相同的黏性末端圖（c）2）

若某人利用圖（b）所示的表達(dá)載體獲得了甲、乙、丙三種含有目的基因的重組子，如圖（c）所示。這三種重組子中，不能在宿主細(xì)胞中表達(dá)目的基因產(chǎn)物的有_________，不能表達(dá)的原因是__________________________________________________________________________________________。甲和丙甲中目的基因插在啟動(dòng)子的上游，丙中目的基因插在終止子的下游，二者的目的基因均不能被轉(zhuǎn)錄3）

DNA連接酶是將兩個(gè)DNA片段連接起來(lái)的酶，常見(jiàn)的有___________________和_______________，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是_______________。E·coli

DNA連接酶T4DNA連接酶T4DNA連接酶考向二

載體的作用和特點(diǎn)2.

某一質(zhì)粒載體如圖所示，外源DNA插入到Ampr或Tetr中會(huì)導(dǎo)致相應(yīng)的基因失活（Ampr表示氨芐青霉素抗性基因，Tetr表示四環(huán)素抗性基因）。有人將此質(zhì)粒載體用BamHⅠ酶切后，與用BamHⅠ酶切獲得的目的基因混合，加入DNA連接酶進(jìn)行連接反應(yīng)，用得到的混合物直接轉(zhuǎn)化大腸桿菌。結(jié)果大腸桿菌有的未被轉(zhuǎn)化，有的被轉(zhuǎn)化。被轉(zhuǎn)化的大腸桿菌有三種，分別是含有環(huán)狀目的基因、含有質(zhì)粒載體、含有插入了目的基因的重組質(zhì)粒的大腸桿菌?；卮鹣铝袉?wèn)題：1）

質(zhì)粒載體作為基因工程的工具，應(yīng)具備的基本條件有___________________________（答出兩點(diǎn)即可），而作為基因表達(dá)載體，除滿(mǎn)足上述基本條件外，還需具有啟動(dòng)子和終止子。[解析]

質(zhì)粒作為載體應(yīng)具備的基本條件有：能自我復(fù)制、具有標(biāo)記基因、含有一至多個(gè)限制酶切割位點(diǎn)等。能自我復(fù)制、具有標(biāo)記基因2）

如果用含有氨芐青霉素的培養(yǎng)基進(jìn)行篩選，在題述四種大腸桿菌細(xì)胞中，未被轉(zhuǎn)化的和僅含環(huán)狀目的基因的細(xì)菌是不能區(qū)分的，其原因是______________________________________________________；并且_______________和_________________________________________________的細(xì)菌也是不能區(qū)分的，其原因是______________________________________________________。在上述篩選的基礎(chǔ)上，若要篩選含有插入了目的基因的重組質(zhì)粒的大腸桿菌單菌落，還需使用含有_________的固體培養(yǎng)基。二者均不含氨芐青霉素抗性基因，在該培養(yǎng)基上均不生長(zhǎng)含有質(zhì)粒載體含有插入了目的基因的重組質(zhì)粒（或含有重組質(zhì)粒）二者均含有氨芐青霉素抗性基因，在該培養(yǎng)基上均能生長(zhǎng)四環(huán)素[解析]

由題意可知，未被轉(zhuǎn)化的和僅含環(huán)狀目的基因的細(xì)胞中均不含有氨芐青霉素抗性基因，所以在含有氨芐青霉素的培養(yǎng)基上均不能生長(zhǎng)。質(zhì)粒載體上含有氨芐青霉素抗性基因和四環(huán)素抗性基因，插入了目的基因的重組質(zhì)粒中僅含有氨芐青霉素抗性基因，所以含有質(zhì)粒載體和含有插入了目的基因的重組質(zhì)粒的細(xì)胞均能在含有氨芐青霉素的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，但前者可以在含有四環(huán)素的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)而后者不能，所以可用含有四環(huán)素的培養(yǎng)基，篩選出含有插入了目的基因的重組質(zhì)粒的大腸桿菌菌落。3）

基因工程中，某些噬菌體經(jīng)改造后可以作為載體，其DNA復(fù)制所需的原料來(lái)自___________。受體細(xì)胞[解析]

噬菌體屬于病毒，病毒增殖過(guò)程中所需的原料、酶等均來(lái)自受體細(xì)胞。教材基礎(chǔ)診斷1.

部分基因文庫(kù)就是cDNA文庫(kù)。(

)×2.

PCR操作過(guò)程中，不需要在反應(yīng)體系中加入ATP。(

)×3.

如果基因比較小，核苷酸序列又已知，也可以通過(guò)DNA合成儀用化學(xué)方法直接人工合成。(

)√4.

啟動(dòng)子是一段有特殊結(jié)構(gòu)的DNA片段，位于載體DNA的首端，是RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位。(

)×5.

基因表達(dá)載體中復(fù)制原點(diǎn)的作用是誘導(dǎo)目的基因的轉(zhuǎn)錄。(

)×6.

農(nóng)桿菌是一種在土壤中生活的微生物，能在自然條件下感染雙子葉植物和裸子植物，而對(duì)大多數(shù)單子葉植物沒(méi)有感染能力。(

)√考點(diǎn)二

基因工程的基本操作程序7.

農(nóng)桿菌中的Ti質(zhì)粒上的T-DNA可轉(zhuǎn)移至受體細(xì)胞，并整合到受體細(xì)胞染色體的DNA上。(

)8.

有的基因工程產(chǎn)品需要與天然產(chǎn)品的功能進(jìn)行活性比較，以確定轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品的功能活性是否與天然產(chǎn)品相同，屬于個(gè)體生物學(xué)水平的鑒定。(

)√√知識(shí)梳理整合一、基本操作程序主要包括四個(gè)步驟：目的基因的獲取、_____________________、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞、_______________________。1.目的基因的獲取1）目的基因:主要指_____________的基因,也可以是一些具有調(diào)控作用的因子。2）獲取方法方法前提基因文庫(kù)獲取從自然界已有的物種中分離PCR技術(shù)擴(kuò)增有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便合成引物人工合成基因比較小，核苷酸序列已知；用DNA合成儀基因表達(dá)載體的構(gòu)建目的基因的檢測(cè)與鑒定編碼蛋白質(zhì)(1)從基因文庫(kù)中獲取目的基因反轉(zhuǎn)錄載體DNA片段(2)人工合成目的基因如果基因比較小，核苷酸序列又已知，可以通過(guò)______________用化學(xué)方法直接人工合成。①化學(xué)合成法DNA合成儀氨基酸脫氧核苷酸②反轉(zhuǎn)錄法DNA(3)利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因DNADNA大量提醒①在PCR過(guò)程中實(shí)際加入的為dNTP(即dATP、dGTP、dTTP、dCTP)，既可作為合成DNA子鏈的原料，又可為DNA的合成提供能量。②引物是一小段單鏈的DNA或RNA，作為新子鏈的合成起點(diǎn)，只能結(jié)合在母鏈的3′端，使DNA聚合酶能夠從引物的3′端開(kāi)始連接脫氧核苷酸。2.基因表達(dá)載體的構(gòu)建——核心(1)目的：使目的基因在__________中穩(wěn)定存在，并且可以遺傳給下一代，同時(shí)使目的基因能夠表達(dá)和發(fā)揮作用。(2)組成受體細(xì)胞(3)構(gòu)建過(guò)程同種3.將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞轉(zhuǎn)化：目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞內(nèi)，并且在受體細(xì)胞內(nèi)維持穩(wěn)定和表達(dá)的過(guò)程。細(xì)胞類(lèi)型方法過(guò)程受體細(xì)胞特點(diǎn)植物細(xì)胞農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將目的基因插入到Ti質(zhì)粒的T-DNA上→導(dǎo)入農(nóng)桿菌→侵染植物細(xì)胞→整合到受體細(xì)胞的染色體DNA上→表達(dá)體細(xì)胞或受精卵經(jīng)濟(jì)、有效，適用于雙子葉植物和裸子植物基因槍法目的基因包裹在微小的金粉粒子或鎢粉粒子表面→用基因槍高速射入受體細(xì)胞或組織中→目的基因表達(dá)成本較高，是單子葉植物中常用的轉(zhuǎn)化方法細(xì)胞類(lèi)型方法過(guò)程受體細(xì)胞特點(diǎn)植物細(xì)胞花粉管通道法在植物受粉后，花粉管還未愈合前，剪去柱頭→滴加目的基因→目的基因借助花粉管通道進(jìn)入受體細(xì)胞體細(xì)胞或受精卵簡(jiǎn)便、經(jīng)濟(jì)，我國(guó)科學(xué)家獨(dú)創(chuàng)動(dòng)物細(xì)胞顯微注射法

受精卵最為有效地將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞的方法續(xù)表細(xì)胞類(lèi)型方法過(guò)程受體細(xì)胞特點(diǎn)微生物細(xì)胞Ca2+處理法Ca2+處理細(xì)胞→感受態(tài)細(xì)胞→重組表達(dá)載體與感受態(tài)細(xì)胞混合→感受態(tài)細(xì)胞吸收DNA分子早期常用原核細(xì)胞簡(jiǎn)便、經(jīng)濟(jì)、有效續(xù)表注意

1）受體細(xì)胞為植物細(xì)胞時(shí)，受體細(xì)胞可以是體細(xì)胞和受精卵，因?yàn)橹参矬w細(xì)胞有全能性。2）原核生物常作為受體細(xì)胞的原因是繁殖快、多為單細(xì)胞、遺傳物質(zhì)相對(duì)較少。3）受體細(xì)胞為動(dòng)物細(xì)胞時(shí)，受體細(xì)胞是受精卵，因?yàn)楦叨确只膭?dòng)物體細(xì)胞的全能性受到限制。4）Ca2+處理法中，Ca2+可以增加微生物細(xì)胞壁的通透性。目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞后，是否可以維持穩(wěn)定和表達(dá)其遺傳特性，只有通過(guò)檢測(cè)與鑒定才能知道。這是檢驗(yàn)基因工程是否成功的重要一步。4.目的基因的檢測(cè)與鑒定目的基因抗原－抗體雜交帶抗性教材深挖拓展1.

為什么要構(gòu)建基因文庫(kù)？直接從含目的基因的生物體內(nèi)提取不行嗎？提示：構(gòu)建基因文庫(kù)是獲取目的基因的方法之一。如果所需要的目的基因序列已知，就可以通過(guò)PCR直接獲得；如果目的基因序列完全不知，或只知道一段序列，或想獲得許多基因等，往往就需要構(gòu)建基因文庫(kù)。2.

將生物的所有DNA直接導(dǎo)入受體細(xì)胞不是更簡(jiǎn)便嗎？如果這么做，結(jié)果會(huì)怎樣？提示：有人采用總DNA注射法進(jìn)行遺傳轉(zhuǎn)化，沒(méi)有進(jìn)行表達(dá)載體的構(gòu)建，這種方法針對(duì)性差，完全靠運(yùn)氣，也無(wú)法確定什么基因?qū)肓耸荏w細(xì)胞，嚴(yán)格來(lái)講不算基因工程。3.

根據(jù)農(nóng)桿菌可將目的基因?qū)腚p子葉植物的機(jī)理，你能分析出農(nóng)桿菌不能將目的基因?qū)雴巫尤~植物的原因嗎?若想將一個(gè)抗病基因?qū)雴巫尤~植物，理論上應(yīng)該怎么做？提示：農(nóng)桿菌具有趨化性，農(nóng)桿菌不能將目的基因?qū)雴巫尤~植物的原因是單子葉植物通常不能產(chǎn)生分類(lèi)誘導(dǎo)物，有一些能產(chǎn)生誘導(dǎo)物的單子葉植物也可以被農(nóng)桿菌侵染。若想將一個(gè)抗病基因?qū)雴巫尤~植物，應(yīng)該選擇合適的農(nóng)桿菌菌株，因?yàn)椴皇撬械霓r(nóng)桿菌都可侵染單子葉植物；加趨化和誘導(dǎo)的物質(zhì)，使農(nóng)桿菌向植物組織的受傷部位靠攏。4.你能推測(cè)出mRNA反轉(zhuǎn)錄形成cDNA的過(guò)程大

致分為哪些步驟嗎？

提示

第1步：mRNA在反轉(zhuǎn)錄酶的作用下形成RNA—DNA雜交分子；第2步：在RNA酶的作用下將RNA—DNA雜交分子中的RNA水解掉，形成DNA單鏈；第3步：以DNA單鏈為模板，在DNA聚合酶的作用下形成雙鏈的DNA。5.cDNA文庫(kù)的基因中為什么不含有啟動(dòng)子和內(nèi)

含子？

提示

cDNA文庫(kù)是以某一發(fā)育時(shí)期細(xì)胞中的mRNA為模板反轉(zhuǎn)錄形成的，mRNA中不含有啟動(dòng)子和內(nèi)含子對(duì)應(yīng)的堿基序列。6.PCR是多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的縮寫(xiě),利用PCR技術(shù)可對(duì)目的基因進(jìn)行擴(kuò)增。請(qǐng)根據(jù)教材PCR原理示意圖回答有關(guān)問(wèn)題:1）

PCR技術(shù)使DNA解鏈?zhǔn)峭ㄟ^(guò)___________實(shí)現(xiàn)的,DNA的這種解鏈現(xiàn)象在一定條件下是_________（填“可逆的”或“不可逆的”）。高溫加熱可逆的2）

DNA解鏈后冷卻的目的是___________________________。讓引物與互補(bǔ)DNA鏈相結(jié)合3）

當(dāng)溫度加熱至70~75

℃時(shí),是_________________酶把單個(gè)脫氧核苷酸通過(guò)___________鍵連接到引物的3′端。如此逐漸延伸形成互補(bǔ)鏈,進(jìn)而使目的基因加倍。熱穩(wěn)定DNA聚合磷酸二酯4）

該反應(yīng)體系中_________（填“需要”或“不需要”）加入ATP；通過(guò)重復(fù)循環(huán)過(guò)程,使目的基因以_______形式擴(kuò)增。不需要指數(shù)重難突破1.基因組文庫(kù)與cDNA文庫(kù)比較文庫(kù)類(lèi)型cDNA文庫(kù)基因組文庫(kù)構(gòu)建基因文庫(kù)的過(guò)程

文庫(kù)大小小大基因中啟動(dòng)子無(wú)有基因中內(nèi)含子無(wú)有文庫(kù)類(lèi)型cDNA文庫(kù)基因組文庫(kù)基因多少某種生物的部分基因某種生物的全部基因物種間的基因交流可以部分基因可以說(shuō)明基因文庫(kù)的組建過(guò)程就包含基因工程的基本操作步驟。從基因文庫(kù)中獲取目的基因的優(yōu)點(diǎn)是操作簡(jiǎn)便，缺點(diǎn)是工作量大，具有一定的盲目性續(xù)表2.啟動(dòng)子、起始密碼子、終止子、終止密碼子的區(qū)別

位置作用啟動(dòng)子位于DNA分子上RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合位點(diǎn)，啟動(dòng)轉(zhuǎn)錄過(guò)程起始密碼子位于mRNA分子上決定翻譯的開(kāi)始終止子位于DNA分子上決定轉(zhuǎn)錄的結(jié)束終止密碼子位于mRNA分子上決定翻譯的結(jié)束3.PCR技術(shù)和DNA復(fù)制的比較4.DNA分子雜交技術(shù)的基本步驟1）將待測(cè)的轉(zhuǎn)基因生物的基因組DNA提取出來(lái)，經(jīng)適當(dāng)?shù)拿盖泻蟛㈦娪荆瑢⒋笮〔煌腄NA片段分開(kāi)；2）制備探針（在含有目的基因的DNA片段上用放射性同位素等做標(biāo)記）；3）使探針與待測(cè)的轉(zhuǎn)基因生物的基因組DNA雜交。4）結(jié)果與結(jié)論：如果出現(xiàn)雜交帶（即雜交分子），則說(shuō)明目的基因已插入染色體DNA中。5.抗原—抗體雜交的基本步驟1）制備抗體：將目的基因在大腸桿菌中表達(dá)出蛋白質(zhì)；將表達(dá)出的蛋白質(zhì)注射給動(dòng)物進(jìn)行免疫，產(chǎn)生相應(yīng)的抗體，并提取抗體；2）從轉(zhuǎn)基因生物中提取蛋白質(zhì)；3）使制備的抗體與提取的蛋白質(zhì)進(jìn)行雜交。4）結(jié)果與結(jié)論：如果出現(xiàn)雜交帶（即雜交分子），則說(shuō)明目的基因已表達(dá)出相應(yīng)蛋白質(zhì)。能力素養(yǎng)提升考向

基因工程的基本操作1.

抗菌肽是一類(lèi)由昆蟲(chóng)產(chǎn)生的多肽，同時(shí)具備抗霉菌、廣譜殺菌、抑制病毒、抑殺腫瘤細(xì)胞等多種功能。目前已獲得具有轉(zhuǎn)抗菌肽基因的轉(zhuǎn)基因動(dòng)、植物，均具有較高抗病性。1）

構(gòu)建基因表達(dá)載體的過(guò)程中使用的兩種工具酶是__________________________________________。質(zhì)粒作為常用的載體，應(yīng)具備的基本條件有______________________________________________________________（寫(xiě)出兩點(diǎn)即可）。若重組質(zhì)粒如圖所示，抗菌肽_______（填“能”或“不能”）正常表達(dá)，原因是______________________________________________。[解析]

基因工程中，常用的工具酶是限制性核酸內(nèi)切酶（限制酶）和DNA連接酶；質(zhì)粒作為載體，必須具備的條件是：能夠自我復(fù)制、具有標(biāo)記基因、具有一個(gè)至多個(gè)限制酶切割位點(diǎn)等。根據(jù)分析可知，圖示基因表達(dá)載體上的目的基因不能正常表達(dá)，因?yàn)閳D中目的基因插入啟動(dòng)子的上游，無(wú)法開(kāi)始轉(zhuǎn)錄。限制性核酸內(nèi)切酶（限制酶）、DNA連接酶能夠自我復(fù)制、具有標(biāo)記基因、具有一個(gè)至多個(gè)限制酶切割位點(diǎn)等不能圖中目的基因插入啟動(dòng)子的上游，無(wú)法開(kāi)始轉(zhuǎn)錄2）

選用抗菌肽PR39基因培育轉(zhuǎn)基因小鼠時(shí)，應(yīng)將重組質(zhì)粒導(dǎo)入_________細(xì)胞；通過(guò)_________________________________________________________________，可直接證明轉(zhuǎn)基因小鼠對(duì)細(xì)菌的抵抗力。受精卵人工細(xì)菌感染，比較轉(zhuǎn)PR39基因小鼠與野生型小鼠之間的抗菌能力的差異[解析]

選用抗菌肽PR39基因培育轉(zhuǎn)基因小鼠時(shí)，一般將重組質(zhì)粒導(dǎo)入受精卵。通過(guò)人工細(xì)菌感染，比較轉(zhuǎn)PR39基因小鼠與野生型小鼠之間的抗菌能力的差異，可直接證明轉(zhuǎn)基因小鼠對(duì)細(xì)菌的抵抗力。3）

選用抗菌肽PR39基因培育轉(zhuǎn)基因植物時(shí)，應(yīng)將重組質(zhì)粒導(dǎo)入其_____________細(xì)胞，再通過(guò)_______________技術(shù)快速繁殖轉(zhuǎn)基因植物。此過(guò)程中，通過(guò)調(diào)節(jié)______________________（填激素）的配比誘導(dǎo)其脫分化與再分化過(guò)程。（正常）體植物組織培養(yǎng)生長(zhǎng)素與細(xì)胞分裂素[解析]

選用抗菌肽PR39基因培育轉(zhuǎn)基因植物時(shí)，一般將重組質(zhì)粒導(dǎo)入其體細(xì)胞，再通過(guò)植物組織培養(yǎng)技術(shù)快速繁殖轉(zhuǎn)基因植物。此過(guò)程中，通過(guò)調(diào)節(jié)生長(zhǎng)素與細(xì)胞分裂素的配比誘導(dǎo)其脫分化與再分化過(guò)程。2.

幾丁質(zhì)是許多真菌細(xì)胞壁的重要成分，幾丁質(zhì)酶可催化幾丁質(zhì)水解。通過(guò)基因工程將幾丁質(zhì)酶基因轉(zhuǎn)入植物體內(nèi)，可增強(qiáng)其抗真菌病的能力。回答下列問(wèn)題：1）

在進(jìn)行基因工程操作時(shí)，若要從植物體中提取幾丁質(zhì)酶的mRNA，常選用嫩葉而不選用老葉作為實(shí)驗(yàn)材料，原因是_____________________。提取RNA時(shí)，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是_______________。嫩葉組織細(xì)胞易破碎防止RNA降解[解析]

由于嫩葉組織細(xì)胞比老葉細(xì)胞易破碎，所以嫩葉更適于作為提取幾丁質(zhì)酶的mRNA的實(shí)驗(yàn)材料。由于植物組織中存在的RNA酶能將RNA分解，所以實(shí)驗(yàn)過(guò)程中要添加RNA酶抑制劑以降低RNA酶的活性，保護(hù)提取的RNA不被分解。2）

以mRNA為材料可以獲得cDNA，其原理是________________________________________________________________________。在逆轉(zhuǎn)錄酶的作用下，以mRNA為模板按照堿基互補(bǔ)配對(duì)的原則可以合成cDNA[解析]

以mRNA為材料獲得cDNA的過(guò)程為逆轉(zhuǎn)錄，即以mRNA為模板、以4種脫氧核糖核苷酸為原料，在逆轉(zhuǎn)錄酶的催化下，遵循堿基互補(bǔ)配對(duì)原則，合成cDNA的過(guò)程。3）

若要使目的基因在受體細(xì)胞中表達(dá)，需要通過(guò)質(zhì)粒載體而不能直接將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞，原因是_________________________________________________（答出兩點(diǎn)即可）。目的基因無(wú)復(fù)制原點(diǎn)；目的基因無(wú)表達(dá)所需的啟動(dòng)子[解析]

由于目的基因無(wú)復(fù)制原點(diǎn)，也無(wú)基因表達(dá)所需的啟動(dòng)子和終止子，所以需要與質(zhì)粒構(gòu)建重組質(zhì)粒后再導(dǎo)入受體細(xì)胞。4）

當(dāng)幾丁質(zhì)酶基因和質(zhì)粒載體連接時(shí)，DNA連接酶催化形成的化學(xué)鍵是_____________。磷酸二酯鍵[解析]

DNA連接酶可以催化兩個(gè)DNA片段的黏性末端或平末端連接形成磷酸二酯鍵。5）

若獲得的轉(zhuǎn)基因植株（幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒(méi)有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是____________________________。目的基因的轉(zhuǎn)錄或翻譯異常[解析]

幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中，但是植株抗真菌病的能力沒(méi)有提高，從中心法則角度分析，可能是由轉(zhuǎn)基因植株細(xì)胞中幾丁質(zhì)酶基因不能轉(zhuǎn)錄或不能進(jìn)行翻譯導(dǎo)致的。2.

Bt毒蛋白只在某些昆蟲(chóng)腸道的堿性環(huán)境中才能表現(xiàn)出毒性，不會(huì)對(duì)人產(chǎn)生毒害。(

)3.

利用乳腺生物反應(yīng)器能夠獲得一些重要的醫(yī)藥產(chǎn)品,如人的血清白蛋白,這是因?yàn)閷⑷说难灏椎鞍谆驅(qū)肓藙?dòng)物的乳腺細(xì)胞中。(

)4.

基因治療是把不正常基因改造成正?；?，使正?；虻谋磉_(dá)產(chǎn)物發(fā)揮功能。(

)√××教材基礎(chǔ)診斷1.

大量使用化學(xué)農(nóng)藥不僅造成了嚴(yán)重的環(huán)境污染，損害了人類(lèi)健康，而且大大增加了生產(chǎn)成本。(

)√考點(diǎn)三

基因工程的應(yīng)用和蛋白質(zhì)工程6.

反義基因是指能與病變基因產(chǎn)生的mRNA互補(bǔ)的RNA分子。(

)7.

蛋白質(zhì)工程是在分子水平上對(duì)蛋白質(zhì)分子直接進(jìn)行操作,定向改變分子的結(jié)構(gòu)。(

)√×5.

體外基因治療都是先從病人體內(nèi)獲得某種細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，在體外完成基因轉(zhuǎn)移，再篩選成功轉(zhuǎn)移的細(xì)胞擴(kuò)增培養(yǎng)，最后重新輸入患者體內(nèi)。(

)√知識(shí)梳理整合1.基因工程的應(yīng)用1）植物基因工程:培育抗蟲(chóng)轉(zhuǎn)基因植物、抗病轉(zhuǎn)基因植物和抗逆轉(zhuǎn)基因植物;利用轉(zhuǎn)基因改良植物的_______。外源基因類(lèi)型及舉例成果舉例抗蟲(chóng)轉(zhuǎn)基因植物Bt毒蛋白基因、蛋白酶抑制劑基因、淀粉酶抑制劑基因、植物凝集素基因抗蟲(chóng)水稻、抗蟲(chóng)棉、抗蟲(chóng)玉米抗病轉(zhuǎn)基因植物①抗病毒基因：病毒外殼蛋白基因、病毒復(fù)制酶基因②抗真菌基因：幾丁質(zhì)酶基因、抗毒素合成基因抗病毒煙草、抗病毒小麥、抗病毒番茄、抗病毒甜椒品質(zhì)外源基因類(lèi)型及舉例成果舉例抗逆轉(zhuǎn)基因植物調(diào)節(jié)細(xì)胞滲透壓基因、抗凍蛋白基因、抗除草劑基因抗鹽堿和抗干旱煙草、抗寒番茄、抗除草劑大豆和玉米改良品質(zhì)轉(zhuǎn)基因植物提高必需氨基酸含量的蛋白質(zhì)編碼基因、控制番茄成熟的基因、與花青素代謝有關(guān)的基因高賴(lài)氨酸玉米、耐儲(chǔ)存番茄、新花色矮牽牛續(xù)表2）動(dòng)物基因工程:提高動(dòng)物___________，從而提高產(chǎn)品產(chǎn)量;用于改善畜產(chǎn)品品質(zhì);用轉(zhuǎn)基因動(dòng)物生產(chǎn)藥物;用轉(zhuǎn)基因動(dòng)物作器官移植的_______等。種類(lèi)目的基因?qū)嵗岣呱L(zhǎng)速度的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物外源生長(zhǎng)激素基因轉(zhuǎn)基因綿羊、轉(zhuǎn)基因鯉魚(yú)等改善畜產(chǎn)品品質(zhì)的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物腸乳糖酶基因乳糖含量較少的乳汁生產(chǎn)藥物的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物藥用蛋白基因與乳腺蛋白基因的啟動(dòng)子等調(diào)控組件乳腺生物反應(yīng)器作器官移植供體的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物抑制抗原決定基因表達(dá)的調(diào)節(jié)因子無(wú)免疫排斥反應(yīng)的轉(zhuǎn)基因克隆豬器官生長(zhǎng)速度供體①方式:利用基因工程培育“_________”來(lái)生產(chǎn)藥品。工程菌3）基因工程藥物②成果:利用“工程菌”可生產(chǎn)細(xì)胞因子、抗體、疫苗、激素等。③工程菌：用基因工程的方法，使外源基因得到高效率表達(dá)的菌類(lèi)細(xì)胞株系。提醒(1)青霉素是青霉菌產(chǎn)生的，不是通過(guò)基因工程產(chǎn)生的。

(2)動(dòng)物基因工程主要是為了改善畜產(chǎn)品的品質(zhì)，而不是為了產(chǎn)生體型巨大的個(gè)體。(3)原核生物的基因(如抗蟲(chóng)基因)可以作為真核生物(棉花)的目的基因。(4)Bt毒蛋白基因產(chǎn)生的Bt毒蛋白只在某些昆蟲(chóng)腸道的堿性環(huán)境中才能表現(xiàn)出毒性，而人和牲畜的胃液呈酸性，腸道細(xì)胞也無(wú)特異性受體，因此，Bt毒蛋白不會(huì)對(duì)人畜產(chǎn)生危害。4）基因治療①概念：把正?；?qū)氩∪梭w內(nèi)，使該基因的表達(dá)產(chǎn)物發(fā)揮功能，從而達(dá)到治療疾病的目的。這是治療遺傳病最有效的手段。②種類(lèi)a.體外基因治療：培養(yǎng)某種病人細(xì)胞→體外基因轉(zhuǎn)移→篩選成功轉(zhuǎn)移的細(xì)胞擴(kuò)增培養(yǎng)→輸入患者體內(nèi)。b.體內(nèi)基因治療：直接向人體組織細(xì)胞中轉(zhuǎn)移基因的治療方法。2.蛋白質(zhì)工程1）概念項(xiàng)目?jī)?nèi)容崛起緣由①基因工程在原則上只能生產(chǎn)自然界已存在的蛋白質(zhì)②天然蛋白質(zhì)不一定完全符合人類(lèi)生產(chǎn)和生活的需求基礎(chǔ)蛋白質(zhì)分子的結(jié)構(gòu)規(guī)律及其與生物功能的關(guān)系手段基因修飾或基因合成目的對(duì)現(xiàn)有蛋白質(zhì)進(jìn)行改造，或制造一種新的蛋白質(zhì)，以滿(mǎn)足人類(lèi)生產(chǎn)和生活的需求原理通過(guò)基因改造實(shí)現(xiàn)對(duì)蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的設(shè)計(jì)改造過(guò)程預(yù)期的蛋白質(zhì)功能→設(shè)計(jì)預(yù)期蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)→推測(cè)應(yīng)有的氨基酸序列→找到相對(duì)應(yīng)的脫氧核苷酸序列（基因）2）基本流程3)蛋白質(zhì)工程與基因工程的區(qū)別和聯(lián)系教材深挖拓展1、

用動(dòng)物乳腺作為反應(yīng)器，生產(chǎn)高價(jià)值的蛋白質(zhì)比工廠(chǎng)化生產(chǎn)的優(yōu)越之處有哪些？提示：產(chǎn)量高、質(zhì)量好、成本低。2、

如何操作才能實(shí)現(xiàn)目的基因的產(chǎn)物在乳腺產(chǎn)生？提示：要在編碼目的蛋白質(zhì)的基因序列前加上只在乳腺組織中表達(dá)的啟動(dòng)子來(lái)構(gòu)建基因表達(dá)載體。3

、用基因工程技術(shù)實(shí)現(xiàn)動(dòng)物乳腺生物反應(yīng)器的操作過(guò)程是怎樣的？提示：獲取目的基因→構(gòu)建基因表達(dá)載體（在目的基因前加只在乳腺組織中表達(dá)的啟動(dòng)子）→顯微注射導(dǎo)入哺乳動(dòng)物受精卵中→形成胚胎→將胚胎送入母體→發(fā)育成轉(zhuǎn)基因動(dòng)物。4、蛋白質(zhì)工程為什么通過(guò)對(duì)基因操作來(lái)實(shí)現(xiàn)對(duì)天然蛋白質(zhì)的改造？提示

①蛋白質(zhì)具有十分復(fù)雜的空間結(jié)構(gòu)，基因的結(jié)構(gòu)相對(duì)簡(jiǎn)單，容易改造；②改造后的基因可以遺傳給下一代，被改造的蛋白質(zhì)無(wú)法遺傳。能力素養(yǎng)提升考向

基因工程和蛋白質(zhì)工程的應(yīng)用已知生物體內(nèi)有一種蛋白質(zhì)（P），該蛋白質(zhì)是一種轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，由305個(gè)氨基酸組成。如果將P分子中第158位的絲氨酸變成亮氨酸，第240位的谷氨酰胺變成苯丙氨酸，改變后的蛋白質(zhì)（P1）不但保留P的功能，而且具有了酶的催化活性。回答下列問(wèn)題：1）

從上述資料可知，若要改變蛋白質(zhì)的功能，可以考慮對(duì)蛋白質(zhì)的___________________________________________進(jìn)行改造。氨基酸序列（或結(jié)構(gòu)）（其他合理答案也可）[解析]

蛋白質(zhì)的功能與結(jié)構(gòu)相關(guān)，若要改變蛋白質(zhì)的功能，需要對(duì)其結(jié)構(gòu)進(jìn)行改造。2）

以P基因序列為基礎(chǔ)，獲得P1基因的途徑有修飾____基因或合成_____基因。所獲得的基因表達(dá)時(shí)遵循中心法則，中心法則的內(nèi)容包括_______________________的復(fù)制，以及遺傳信息在不同分子之間的流動(dòng)，即：_________________________________________________________________。DNA→RNA、RNA→DNA、RNA→蛋白質(zhì)（或轉(zhuǎn)錄、逆轉(zhuǎn)錄、翻譯）PP1DNA和RNA（或遺傳物質(zhì)）[解析]

確定目的基因的堿基序列后，可通過(guò)對(duì)現(xiàn)有基因進(jìn)行改造或者重新合成來(lái)獲得目的基因。中心法則的內(nèi)容包括DNA的復(fù)制、RNA的復(fù)制、轉(zhuǎn)錄、逆轉(zhuǎn)錄和翻譯。3）

蛋白質(zhì)工程也被稱(chēng)為第二代基因工程，其基本途徑是從預(yù)期蛋白質(zhì)功能出發(fā)，通過(guò)___________________和_________________，進(jìn)而確定相對(duì)應(yīng)的脫氧核苷酸序列，據(jù)此獲得基因，再經(jīng)表達(dá)、純化獲得蛋白質(zhì)，之后還需要對(duì)蛋白質(zhì)的生物_______進(jìn)行鑒定。設(shè)計(jì)蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)推測(cè)氨基酸序列功能[解析]

蛋白質(zhì)工程的基本途徑是從預(yù)期蛋白質(zhì)功能出發(fā)，通過(guò)設(shè)計(jì)蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)和推測(cè)氨基酸序列，進(jìn)而確定相對(duì)應(yīng)的脫氧核苷酸序列。獲得蛋白質(zhì)之后要對(duì)蛋白質(zhì)的生物功能進(jìn)行鑒定。教材基礎(chǔ)診斷1.

用不同濃度的NaCl溶液反復(fù)溶解與析出DNA可去除蛋白質(zhì)。(

)√2.

提取DNA時(shí),如果沒(méi)有雞血材料,可用豬血代替。(

)3.

在DNA的粗提取與鑒定實(shí)驗(yàn)中,將絲狀物溶解在2

mol/L

NaCl溶液中,加入二苯胺試劑即呈藍(lán)色。(

)××考點(diǎn)四

DNA粗提取與鑒定知識(shí)梳理整合1.實(shí)驗(yàn)原理0.14NaCl2.操作流程N(yùn)aCl溶液的濃度95%二苯胺藍(lán)色3.DNA和蛋白質(zhì)在不同濃度的NaCl溶液中溶解度的比較4.DNA的粗提取與鑒定中的“2、3、4”能力素養(yǎng)提升考向

PCR技術(shù)和DNA的粗提取與鑒定1.

[2019課標(biāo)全國(guó)Ⅰ，38，15分]基因工程中可以通過(guò)PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因?；卮鹣铝袉?wèn)題。1）

基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫(kù)中獲得?；蛭膸?kù)包括_____________和____________。基因組文庫(kù)cDNA文庫(kù)[解析]

基因文庫(kù)包括基因組文庫(kù)和cDNA文庫(kù)。2）

生物體細(xì)胞內(nèi)的DNA復(fù)制開(kāi)始時(shí)，解開(kāi)DNA雙鏈的酶是_________。在體外利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因時(shí)，使反應(yīng)體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是__________________。上述兩個(gè)解鏈過(guò)程的共同點(diǎn)是破壞了DNA雙鏈分子中的_______。解旋酶加熱至90～95

℃氫鍵[解析]

體內(nèi)DNA復(fù)制時(shí)，需用解旋酶打開(kāi)氫鍵使雙鏈DNA解旋，而PCR擴(kuò)增目的基因時(shí)，是借助高溫（加熱至90～95

℃）使DNA變性解旋。3）

目前在PCR中使用Taq酶而不使用大腸桿菌DNA聚合酶的主要原因是_______________________________________________________。Taq酶熱穩(wěn)定性高，而大腸桿菌DNA聚合酶在高溫下會(huì)失活[解析]

PCR體系中進(jìn)行互補(bǔ)鏈的合成時(shí)，溫度需控制在70～75

℃，應(yīng)使用耐高溫的DNA聚合酶，即Taq酶，而不能使用大腸桿菌DNA聚合酶（高溫下會(huì)失活）。2.

DNA提取過(guò)程中可以選用雞血或者菜花作為實(shí)驗(yàn)材料。請(qǐng)回答下列關(guān)于DNA粗提取和鑒定的問(wèn)題：1）

使用雞血提取DNA時(shí)，需在雞血中加入檸檬酸鈉，目的是_______________；在雞血細(xì)胞液中加入蒸餾水，目的是_________________。防止血液凝固使雞血細(xì)胞破裂[解析]

在雞血中加入檸檬酸鈉可以防止血液凝固；在雞血細(xì)胞液中加入蒸餾水使血細(xì)胞吸水漲破。2）

使用菜花提取DNA時(shí)，需要研磨，研磨時(shí)可加入一定的洗滌劑和食鹽，其作用分別是_____________和___________。瓦解細(xì)胞膜溶解DNA[解析]

研磨時(shí)加入洗滌劑是為了瓦解細(xì)胞膜，加入食鹽是為了溶解DNA。3）

DNA在濃度為_(kāi)______mol/L的氯化鈉溶液中溶解度最低。使用體積分?jǐn)?shù)為95%的冷卻酒精可使DNA_______（填“析出”或“溶解”）。0.14析出[解析]

DNA在濃度為0.14

mol/L的氯化鈉溶液中溶解度最低。使用體積分?jǐn)?shù)為95%的冷卻酒精可使DNA析出。4）

使用二苯胺鑒定DNA時(shí)，需要在_________條件下進(jìn)行，DNA與二苯胺反應(yīng)呈現(xiàn)_____色。沸水浴藍(lán)[解析]

使用二苯胺鑒定DNA時(shí)，需要沸水浴加熱，DNA與二苯胺反應(yīng)呈現(xiàn)藍(lán)色。1.

[2020課標(biāo)全國(guó)Ⅲ，38，15分]W是一種具有特定功能的人體蛋白質(zhì)。某研究小組擬仿照制備乳腺生物反應(yīng)器的研究思路，制備一種膀胱生物反應(yīng)器來(lái)獲得W，基本過(guò)程如圖所示?；卮鹣铝袉?wèn)題：1）

步驟①中需要使用的工具酶有_______________________________。步驟②和③所代表的操作分別是___________和___________。步驟④稱(chēng)為_(kāi)__________。限制性核酸內(nèi)切酶、DNA連接酶顯微注射體外培養(yǎng)胚胎移植[解析]

在基因表達(dá)載體的構(gòu)建過(guò)程中需要使用限制性核酸內(nèi)切酶切割W基因和載體，同時(shí)需要DNA連接酶進(jìn)行連接。將重組表達(dá)載體導(dǎo)入受精卵常用顯微注射法，從受精卵到早期胚胎需要進(jìn)行體外培養(yǎng)，將獲得的早期胚胎通過(guò)胚胎移植移至代孕母體體內(nèi)。真題再現(xiàn)2）

與乳腺生物反應(yīng)器相比，用膀胱生物反應(yīng)器生產(chǎn)W的優(yōu)勢(shì)在于不受轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的_____________（答出2點(diǎn)即可）的限制。性別、年齡[解析]

乳腺生物反應(yīng)器和膀胱生物反應(yīng)器都屬于動(dòng)物反應(yīng)器。前者受動(dòng)物性別（只能是雌性）和年齡（哺乳期）限制，后者不受動(dòng)物性別和年齡限制。3）

一般來(lái)說(shuō)，在同一動(dòng)物個(gè)體中，乳腺上皮細(xì)胞與膀胱上皮細(xì)胞的細(xì)胞核中染色體DNA所含的遺傳信息_______（填“相同”或“不同”），原因是________________________________________________。相同兩種上皮細(xì)胞都是體細(xì)胞，且來(lái)源于同一個(gè)受精卵[解析]

題述兩種上皮細(xì)胞都是體細(xì)胞，且來(lái)源于同一個(gè)受精卵，所以其細(xì)胞核中染色體DNA所含遺傳信息相同。4）

從上述流程可知，制備生物反應(yīng)器涉及胚胎工程，胚胎工程中所用到的主要技術(shù)有_____________________（答出2點(diǎn)即可）。體外受精、胚胎移植[解析]

胚胎工程中所用到的技術(shù)主要有體外受精、胚胎移植。2.

[2021全國(guó)甲卷，38，15分]PCR技術(shù)可用于臨床的病原菌檢測(cè)。為檢測(cè)病人是否感染了某種病原菌，醫(yī)生進(jìn)行了相關(guān)操作:①分析PCR擴(kuò)增結(jié)果；②從病人組織樣本中提取DNA;③利用PCR擴(kuò)增DNA片段;④采集病人組織樣本?；卮鹣铝袉?wèn)題:1）

若要得到正確的檢測(cè)結(jié)果，正確的操作順序應(yīng)該是___________（用數(shù)字序號(hào)表示）。④②③①[解析]

根據(jù)題干中給出的信息分析，若要檢測(cè)病人是否感染了某種病原菌，需要從病人體內(nèi)獲取組織樣本，提取樣本中的DNA，進(jìn)行PCR擴(kuò)增，再分析PCR擴(kuò)增的結(jié)果。由此可知若要得到正確的