辣椒及辣椒制品辣度ELISA檢測(cè)試劑盒使用說明書

河南歐諾生物科技有限公司HenanOunuoBiotechnologyCo.LTD地址：河南省鄭州市惠濟(jì)區(qū)大河路街道中原物流港B6-1-06郵編：450049電話：136412806261/4辣椒及其制品辣度ELISA檢測(cè)試劑盒使用說明書(貨號(hào)：Ounuo97002)本品采用競(jìng)爭(zhēng)性酶免檢測(cè)技術(shù)用于辣椒及其制品辣度的定量分析，最大可滿足96次測(cè)試，在做復(fù)孔的情況下，一次最多可檢測(cè)42個(gè)樣本。產(chǎn)品特性：快速（＜10min）、高回收（≥80%）和高效的前處理方法檢測(cè)限1度辣度，定量限2度辣度快速，檢測(cè)時(shí)間30min高的重現(xiàn)性【辣椒素辣度相關(guān)公式】參考《GB/T21266-2007辣椒及其制品中辣椒素類物質(zhì)測(cè)定及辣度表示方法》辣椒素和二氫辣椒素是影響辣度的最主要成分，二者占辣椒素類物質(zhì)總量約90%，其余辣椒素類物質(zhì)約占10%辣椒素或二氫辣椒素轉(zhuǎn)換為斯科維爾指數(shù)的系數(shù)：1g/kg（辣椒素或二氫辣椒素）=16.1×103其余辣椒素類物質(zhì)轉(zhuǎn)換為斯科維爾指數(shù)的系數(shù)：1g/kg（其余辣椒素類物質(zhì)）=9.3×103辣度與斯科維爾指數(shù)（SHU）的換算關(guān)系為：150SHU=1度綜上，辣度與1g/kg辣椒素類物質(zhì)含量之間的換算公式1g/kg辣椒素類物質(zhì)總量=1×0.9×16.1×103SHU+1×0.1×9.3×103SHU=15.42×103SHU=15420/150度=102.8度1g/kg(辣椒素類物質(zhì)總量）=1000mg/kg因此，10mg/kg辣椒素類物質(zhì)總量=1.028度，辣椒素和二氫辣椒素?fù)Q算為辣椒素類物質(zhì)總量的系數(shù)：0.910mg/kg（辣椒素或二氫辣椒素）=1.028/0.9度=1.142度技術(shù)服務(wù)：電話您提供產(chǎn)品貨號(hào)、批號(hào)、實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)等相關(guān)信息，以便能快速而高效的為您服務(wù)（貨號(hào)及批號(hào)見試劑盒外包裝）使用前須知當(dāng)與儀器方法結(jié)果相比時(shí)，試劑盒的結(jié)果偏高這是很正常的現(xiàn)象。因?yàn)閮x器方法僅測(cè)量的單一化合物，而試劑盒中的抗體由于不僅能識(shí)別目標(biāo)分子且還能識(shí)別結(jié)構(gòu)上相似的分子，包括其相關(guān)的代謝產(chǎn)物。因此，使用人員需要明白本產(chǎn)品的局限性和對(duì)數(shù)據(jù)做出合理的分析。任何試劑、檢測(cè)程序的改變都可能導(dǎo)致檢測(cè)失敗。不要使用超過有效期的產(chǎn)品；不同批次的產(chǎn)品不得混用。實(shí)驗(yàn)用水的質(zhì)量很重要，請(qǐng)使用蒸餾水或去離子水。微孔板開封后，需置于有干燥劑的密封袋中冷藏保存，建議于一個(gè)月內(nèi)使用完。需要但未提供的設(shè)備和試劑酶標(biāo)儀：配備450nm波長(zhǎng)單道移液器：0.5-10、20-200、100-1000μL、0.5-5mL量程各一支多道移液器：30-300μL量程一支白色、黃色和藍(lán)色吸頭若干恒溫培養(yǎng)箱均質(zhì)器或絞肉機(jī)甲醇，分析純二甲基亞砜，分析純1.樣本前處理準(zhǔn)備樣本提取液分別取甲醇70mL和二甲基亞砜30mL混勻備用。1×樣本稀釋液取4×樣本稀釋液1份，加入3份去離子水混勻，比如1mL+3mL辣椒油、火鍋底料火鍋底料、凝固性油樣，可以加熱至樣品溶化后再稱量稱取0.2g均質(zhì)的樣本于一合適的容器中，加入10mL樣本提取液渦旋2min;4000rpm，離心5min；取上層液體0.1mL，加入9.9mL去離子水混勻；再取0.1mL上一步混勻后溶液，加入0.9mL去離子水混勻再取0.1mL上一步混勻后溶液，加入0.1mL1×樣本稀釋液混勻稀釋倍數(shù)：1干辣椒粉碎后，過40目篩稱取0.2g均質(zhì)的樣本于一合適的容器中，加入10mL樣本提取液渦旋2min;4000rpm，離心5min；取上層液體0.1mL，加入9.9mL去離子水混勻；再取0.1mL上一步混勻后溶液，加入0.9mL去離子水混勻再取0.1mL上一步混勻后溶液，加入0.1mL1×樣本稀釋液混勻稀釋倍數(shù)：1新鮮辣椒以及辣椒醬等辣椒制品在均質(zhì)器或料理機(jī)上均質(zhì)呈勻漿稱取0.2g均質(zhì)的樣本于一合適的容器中，加入10mL樣本提取液渦旋2min;4000rpm，離心5min；取上層液體0.1mL，加入9.9mL去離子水混勻；再取0.1mL上一步混勻后溶液，加入0.9mL去離子水混勻再取0.1mL上一步混勻后溶液，加入0.1mL1×樣本稀釋液混勻稀釋倍數(shù)：12.檢測(cè)步驟檢測(cè)前準(zhǔn)備所有試劑需回復(fù)至室溫（在20-25℃下，從試劑盒中取出并放置1-2h）;檢測(cè)開始前需準(zhǔn)備好所需試劑；取出所需體積的試劑，其余放回盒內(nèi)；未使用完的試劑請(qǐng)勿倒回原試劑瓶?jī)?nèi)，移取每一種試劑需更換吸頭，以免交叉污染；請(qǐng)不要在通風(fēng)口、陽光直射下檢測(cè)，以避免造成微孔微環(huán)境差異導(dǎo)致檢測(cè)失??；標(biāo)準(zhǔn)品、陽性樣本以及用過的吸頭和器皿均應(yīng)做有毒廢棄物處理。洗液（1×）配制取1體積的20×濃縮洗液，加入19體積的去離子水或蒸餾水混勻TIPTIP加標(biāo)準(zhǔn)品時(shí)，建議從低濃度到高濃度檢測(cè)步驟移取50μL辣椒素標(biāo)準(zhǔn)品至相應(yīng)微孔中；移取50μL樣本至相應(yīng)微孔中；移取50μL酶結(jié)合物至所有微孔中；加入50μL辣椒素抗體至每一所需微孔中，用手指肚輕輕敲擊微孔板架兩側(cè)混勻1min；室溫（20-25℃）孵育20min；TIP加終止液后，請(qǐng)于30min內(nèi)讀數(shù)；讀數(shù)前用無塵布輕輕擦掉微孔底部的水珠或異物甩干微孔板，加入300μL洗液（1×），浸泡5sTIP加終止液后，請(qǐng)于30min內(nèi)讀數(shù)；讀數(shù)前用無塵布輕輕擦掉微孔底部的水珠或異物加入100μL底物，室溫（20-25℃）避光孵育10min;加入100μL終止液，于450nm下讀數(shù)結(jié)果計(jì)算以logit(B/B0）為y軸，以log（分析物濃度）為x，進(jìn)行線性擬合。其中公式如下logit(B/B0)=klnB為標(biāo)準(zhǔn)品或樣本對(duì)應(yīng)的吸光度；B0為零標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)應(yīng)的吸光度；logit(BK為斜率；C為截距計(jì)算出樣本的平均吸光度和樣本的B/B0值代入公式①中求出濃度并乘以對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)，即為樣本中待測(cè)物最終濃度；辣度換算公式【求得的濃度C樣，（C樣×1.142）/10，即為樣本的辣度】標(biāo)準(zhǔn)曲線圖如右：3.原理基于競(jìng)爭(zhēng)性免疫檢測(cè)原理：辣椒素與預(yù)包被在板上的辣椒素蛋白偶聯(lián)物競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合有限的抗辣椒素的抗體，然后加入酶結(jié)合物反應(yīng)，形成酶結(jié)合物—抗辣椒素抗體—辣椒素蛋白偶聯(lián)物復(fù)合物，洗滌除去未結(jié)合的反應(yīng)物，經(jīng)TMB底物顯色產(chǎn)生藍(lán)色產(chǎn)物，加終止液后，產(chǎn)物由藍(lán)色轉(zhuǎn)變?yōu)辄S色，其在450nm下有最大吸收峰。樣本中辣椒素含量與樣本的吸光度呈負(fù)相關(guān)。4.產(chǎn)品性能檢測(cè)限和定量限樣本類別檢測(cè)限定量限辣椒及辣椒制品辣度1度辣度2度特異性（交叉反應(yīng)）化合物交叉反應(yīng)率%辣椒素（capsaicin）100二氫辣椒素（dihydrocapsaicin）100精密度：批內(nèi)/間≤10%；準(zhǔn)確度（添加回收）樣本類型添加回收率%辣椒及其制品100±20線性區(qū)間：10~810mg/L（已將樣本稀釋因子換算入標(biāo)準(zhǔn)曲線中，實(shí)際濃度僅為標(biāo)示濃度的十萬分之一）檢測(cè)時(shí)間：30min；保存及有效期本產(chǎn)品需保存在2-8℃，有效期為12個(gè)月；開封使用后建議一個(gè)月內(nèi)使用完。5.