2025年高考生物復(fù)習(xí)新題速遞之基因工程（2025年4月）

第54頁(yè)（共54頁(yè)）2025年高考生物復(fù)習(xí)新題速遞之基因工程（2025年4月）一．選擇題（共15小題）1．（2025春?重慶校級(jí)月考）普通小麥的TaMLO基因與白粉病的易感性有關(guān)。研究發(fā)現(xiàn)，利用CRISPR/Cas9基因編輯技術(shù)敲除TaMLO基因可增強(qiáng)小麥對(duì)白粉病的抗性，CRISPR/Cas9基因編輯技術(shù)的工作原理如圖所示。在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，科研人員構(gòu)建了含有Cas9基因和sgRNA編碼序列的重組質(zhì)粒，并將其導(dǎo)入小麥細(xì)胞中，以期在TaMLO基因兩端實(shí)現(xiàn)精準(zhǔn)切割。下列有關(guān)敘述正確的是（）A．普通小麥?zhǔn)嵌扼w作物，只需敲除一個(gè)TaMLO基因即可實(shí)現(xiàn)穩(wěn)定抗病性 B．該實(shí)驗(yàn)中，sgRNA的主要功能是切割目標(biāo)DNA序列，從而實(shí)現(xiàn)基因編輯 C．CRISPR/Cas9識(shí)別目標(biāo)DNA序列主要與Cas9蛋白的特異性相關(guān) D．通過(guò)CRISPR/Cas9敲除TaMLO基因需要斷開(kāi)4個(gè)磷酸二酯鍵2．（2025?遼寧一模）新型蛋白質(zhì)進(jìn)化模型EVOLVEpro可以利用氨基酸序列，僅通過(guò)少量學(xué)習(xí)和最低限度的實(shí)驗(yàn)測(cè)試來(lái)預(yù)測(cè)蛋白質(zhì)空間結(jié)構(gòu)，從而獲得新型高活性蛋白質(zhì)改造方案。下列有關(guān)說(shuō)法正確的是（）A．預(yù)測(cè)蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)需要依據(jù)肽鏈中肽鍵的結(jié)構(gòu)、氨基酸的物理性質(zhì)與結(jié)構(gòu) B．氨基酸是蛋白質(zhì)的基本單位，氨基酸發(fā)生替換一定使蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)和功能發(fā)生改變 C．EVOLVEpro在蛋白質(zhì)工程廣泛應(yīng)用后將不再需要借助基因工程手段改造蛋白質(zhì) D．通過(guò)EVOLVEpro得到的蛋白質(zhì)還需要進(jìn)行進(jìn)一步的功能檢測(cè)實(shí)驗(yàn)才可以投入生產(chǎn)3．（2025?鄭州二模）單堿基編輯系統(tǒng)可以使靶序列特定堿基發(fā)生改變，進(jìn)而實(shí)現(xiàn)定向突變。如圖為其中一種編輯系統(tǒng)：dCas9末端與APOBECl形成融合蛋白，隨后gRNA將融合蛋白引導(dǎo)到靶位點(diǎn)，APOBEC1會(huì)使單鏈DNA的C脫氨形成U，后續(xù)經(jīng)DNA復(fù)制完成C到T的轉(zhuǎn)換。相關(guān)分析錯(cuò)誤的是（）A．gRNA通過(guò)堿基互補(bǔ)配對(duì)將融合蛋白引導(dǎo)至靶位點(diǎn) B．編輯后的DNA需經(jīng)過(guò)2次復(fù)制才能實(shí)現(xiàn)C到T的轉(zhuǎn)換 C．C轉(zhuǎn)換為U后，與其相連的五碳糖由脫氧核糖轉(zhuǎn)為核糖 D．單堿基編輯系統(tǒng)可以為鐮狀細(xì)胞貧血病的治療提供思路4．（2025?邯鄲模擬）下列有關(guān)“DNA的粗提取與鑒定”“瓊脂糖凝膠電泳”實(shí)驗(yàn)的相關(guān)說(shuō)法，正確的是（）A．利用酒精初步分離DNA與蛋白質(zhì)的原理是DNA溶于酒精 B．過(guò)濾后的研磨液放置在4℃冰箱中可防止DNA被降解 C．瓊脂糖凝膠電泳時(shí)，DNA分子越大，遷移速率越快 D．提取到的絲狀物與二苯胺溶液充分混勻后即可變?yōu)樗{(lán)色5．（2025?云浮模擬）某小組同學(xué)選擇菜花為實(shí)驗(yàn)材料進(jìn)行“DNA粗提取與鑒定”的實(shí)驗(yàn)，并進(jìn)行了一些改進(jìn)?；玖鞒虨椋毫呀狻蛛x→沉淀→鑒定，下列分析錯(cuò)誤的是（）A．裂解：研磨時(shí)加入適量纖維素酶可加速細(xì)胞破裂釋放出DNA等物質(zhì) B．分離：利用DNA溶于酒精的特性去除混合物中的蛋白質(zhì)等物質(zhì) C．沉淀：多次離心研磨液并將沉淀物收集晾干可提高DNA的純度 D．鑒定：在一定溫度下，DNA遇二苯胺試劑呈現(xiàn)藍(lán)色6．（2025?淮安校級(jí)二模）經(jīng)典的CRISPR﹣Cas9系統(tǒng)可以通過(guò)敲除基因?qū)崿F(xiàn)基因沉默。近日研究人員基于CRISPR系統(tǒng)開(kāi)發(fā)了一個(gè)名為CRISPRoff的新型編輯器，可以將甲基（Me）添加在DNA鏈的特定位點(diǎn)上；研究人員還創(chuàng)建了功能相反的編輯器——CRISPRon，它能逆轉(zhuǎn)基因沉默。下列敘述正確的是（）A．新型編輯器對(duì)染色體DNA的效果低于染色質(zhì)DNA B．CRISPRoff利用基因重組來(lái)實(shí)現(xiàn)基因沉默 C．CRISPRoff對(duì)基因的影響不能遺傳給后代 D．CRISPRon有助于基因與DNA聚合酶結(jié)合以恢復(fù)表達(dá)7．（2025?山東模擬）用DNaseI酶切割DNA分子，可產(chǎn)生一系列不同長(zhǎng)度的DNA片段，且相鄰片段只相差1個(gè)核苷酸。當(dāng)DNA分子中的某一區(qū)段與特異的轉(zhuǎn)錄因子蛋白質(zhì)結(jié)合后，加入DNaseI酶時(shí)該區(qū)段會(huì)得到保護(hù)，在凝膠電泳放射性自顯影圖片上會(huì)出現(xiàn)一個(gè)空白區(qū)“足跡”，這種檢測(cè)DNA序列的方法稱為DNaseI足跡法。上述過(guò)程如圖所示，下列說(shuō)法正確的是（）A．需設(shè)置不添加DNaseI酶的對(duì)照組 B．對(duì)照組的每個(gè)DNA分子只發(fā)生一次磷酸二酯鍵的斷裂 C．未與特定蛋白結(jié)合的DNA切割后的片段長(zhǎng)度相同 D．此方法可篩選能與DNA進(jìn)行特異性結(jié)合的目標(biāo)蛋白8．（2025?江蘇模擬）關(guān)于“瓊脂糖凝膠電泳”實(shí)驗(yàn)，下列敘述正確的是（）A．根據(jù)待分離DNA片段的大小，需用無(wú)菌水配制0.8%～1.2%的瓊脂糖溶液 B．向瓊脂糖溶液中加入適量的核酸染料后，需在沸水浴內(nèi)加熱至瓊脂糖熔化 C．將PCR產(chǎn)物和電泳緩沖液混合后，需用微量移液器將混合液緩慢注入加樣孔 D．待指示劑前沿遷移接近凝膠邊緣時(shí)，需及時(shí)斷電并取出凝膠置于紫外燈下觀察9．（2025?河北模擬）下列關(guān)于實(shí)驗(yàn)的敘述，正確的是（）A．可通過(guò)觀察石灰水是否變渾濁探究酵母菌呼吸方式 B．綠葉中色素提取和分離的實(shí)驗(yàn)應(yīng)在通風(fēng)條件下進(jìn)行 C．DNA粗提取實(shí)驗(yàn)可以用雞血細(xì)胞作材料，利用DNA易溶于酒精來(lái)初步分離DNA D．在PCR擴(kuò)增DNA時(shí)，當(dāng)溫度上升到50℃以上時(shí)，雙鏈DNA解聚為單鏈10．（2025?宜賓校級(jí)二模）紅細(xì)胞生成素（EPO）是體內(nèi)促進(jìn)紅細(xì)胞生成的一種激素物質(zhì)，是當(dāng)今最成功的基因工程藥物，可用于治療腎衰性貧血等疾病。由于天然EPO來(lái)源極為有限，目前臨床使用的紅細(xì)胞生成素主要來(lái)自基因工程技術(shù)生產(chǎn)的重組人紅細(xì)胞生成素（rhEPO）。其簡(jiǎn)要生產(chǎn)流程如圖，下列相關(guān)敘述正確的是（）A．過(guò)程①用到的工具酶有DNA聚合酶、限制酶和DNA連接酶 B．構(gòu)建的重組表達(dá)載體中終止子的作用是終止翻譯過(guò)程 C．檢測(cè)重組細(xì)胞是否轉(zhuǎn)錄出EPO的mRNA常用分子雜交技術(shù) D．用乳腺生物反應(yīng)器生產(chǎn)EPO可將人EPO基因?qū)氩溉閯?dòng)物體細(xì)胞獲得11．（2025?南寧二模）黃瓜葉片形狀由一對(duì)等位基因控制，野生型黃瓜葉片形狀為心形，經(jīng)誘變處理獲得了純合圓葉突變體甲。甲與野生型雜交，F(xiàn)1均為心形葉，F(xiàn)1自交，F(xiàn)2心形葉植株與圓葉植株數(shù)量比約為3：1。用限制酶H處理親本和F1，電泳結(jié)果如圖。下列敘述正確的是（）A．加樣孔位于該電泳圖譜的下端 B．F1植株減數(shù)分裂可形成四種基因組成不同的配子 C．誘變使植株甲的相關(guān)基因發(fā)生了堿基對(duì)的增添或缺失 D．用酶H處理F2某心形葉植株的葉形基因，電泳條帶數(shù)為2或3條12．（2025?安慶二模）借助DNA分子雜交技術(shù)進(jìn)行遺傳病基因診斷的一般流程為：制作能與目的基因特異性結(jié)合的DNA探針→DNA分子雜交實(shí)驗(yàn)→結(jié)果分析。如圖是某單基因遺傳病家系圖譜，若要借助DNA分子雜交技術(shù)進(jìn)一步確定該遺傳病的遺傳方式（不考慮X、Y同源區(qū)段），只要設(shè)計(jì)哪種探針對(duì)哪一成員進(jìn)行檢測(cè)即可達(dá)到目的（）A．與正?；蚪Y(jié)合的DNA探針、Ⅰ﹣1 B．與致病基因結(jié)合的DNA探針、Ⅰ﹣1 C．與正?；蚪Y(jié)合的DNA探針、Ⅰ﹣2或Ⅱ﹣3 D．與致病基因結(jié)合的DNA探針、Ⅰ﹣2或Ⅱ﹣313．（2025?泰安一模）關(guān)于“DNA粗提取與鑒定”、“瓊脂糖凝膠電泳”、“PCR擴(kuò)增”實(shí)驗(yàn)，下列說(shuō)法正確的是（）A．將洋蔥切碎、研磨、過(guò)濾，濾液放置4℃冰箱中靜置幾分鐘后，DNA存在于沉淀物中 B．鑒定過(guò)程中DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)不發(fā)生改變 C．凝膠載樣緩沖液中加入的核酸染料能與DNA分子結(jié)合，便于在紫外燈下觀察 D．對(duì)2個(gè)雙鏈DNA分子進(jìn)行PCR擴(kuò)增，第n次循環(huán)共需引物2n+1個(gè)14．（2025?棗莊二模）下列與DNA有關(guān)的實(shí)驗(yàn)，說(shuō)法正確的是（）A．DNA粗提取時(shí)加入冷酒精出現(xiàn)白色絲狀物后不能用離心法收集 B．PCR緩沖液中Mg2+作用是激活DNA聚合酶，濃度越高，酶活性越大 C．DNA電泳指示劑需要加入到熔化之后凝固之前的瓊脂糖中 D．DNA電泳指示劑的作用主要用來(lái)指示何時(shí)停止電泳15．（2025?常德校級(jí)一模）用PCR方法檢測(cè)轉(zhuǎn)基因植株是否成功導(dǎo)入目的基因時(shí)，得到以下電泳圖譜。其中1號(hào)為DNA標(biāo)準(zhǔn)樣液（Marker），10號(hào)為蒸餾水，PCR時(shí)加入的模板DNA如圖所示。據(jù)此作出的分析，不合理的是（）A．PCR產(chǎn)物的分子大小在250﹣500bp之間 B．3號(hào)樣品為不含目的基因的載體DNA C．9號(hào)樣品對(duì)應(yīng)植株不是所需的轉(zhuǎn)基因植株 D．10號(hào)確定反應(yīng)體系等對(duì)結(jié)果沒(méi)有干擾二．解答題（共5小題）16．（2025?海南模擬）通過(guò)從自然界中篩選、基因工程育種等方法可獲得不同類型和性能的酵母菌。回答下列問(wèn)題：（1）釀酒酵母菌種的性能是決定果酒品質(zhì)的重要因素。利用選擇培養(yǎng)基篩選高耐酸、高耐糖的酵母菌時(shí)，培養(yǎng)基的pH應(yīng)呈，同時(shí)培養(yǎng)基中應(yīng)添加。（2）通過(guò)基因工程可培育乳酸乙酯（白酒香味的主要來(lái)源）高產(chǎn)酵母菌。利用同源重組技術(shù)在重組酶的作用下將釀酒酵母質(zhì)粒上的丙酮酸脫氫酶基因（PD）直接替換為植物乳桿菌中的乳酸脫氫酶基因（L﹣PG）。重組酶可催化PCR產(chǎn)物直接進(jìn)行重組連接，不需要酶切產(chǎn)生黏性末端。酵母菌質(zhì)粒與目的基因L﹣PG連接過(guò)程如圖1（AmpR表示氨芐青霉素抗性基因），L﹣PC基因結(jié)構(gòu)及相關(guān)引物如圖2。①圖1中L﹣PC與PD發(fā)生同源重組的前提條件是。若要獲得如圖2所示的含PA和PB片段的L﹣PG基因并進(jìn)行PCR擴(kuò)增，則最好選擇圖2中的引物。與傳統(tǒng)雙酶切法構(gòu)建基因表達(dá)載體相比，利用同源重組技術(shù)構(gòu)建基因表達(dá)載體的優(yōu)點(diǎn)是（答出1點(diǎn)）。②AmpR可作為用于酵母菌的篩選。③請(qǐng)?jiān)O(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)證明轉(zhuǎn)L﹣PG基因酵母菌獲得了產(chǎn)乳酸乙酯的能力。寫出簡(jiǎn)要的實(shí)驗(yàn)思路：。17．（2025?泰安一模）磷脂酸（PA）是調(diào)節(jié)植物生長(zhǎng)發(fā)育和逆境響應(yīng)的重要信使物質(zhì)。為了解植物細(xì)胞中PA的動(dòng)態(tài)變化，研究人員用無(wú)縫克隆技術(shù)將高度專一的PA結(jié)合蛋白（PABD）基因與綠色熒光蛋白（GFP）基因融合，構(gòu)建有效監(jiān)測(cè)細(xì)胞PA變化的熒光探針，并測(cè)定擬南芥細(xì)胞內(nèi)PA含量。無(wú)縫克隆技術(shù)連接DNA片段的機(jī)理和構(gòu)建熒光探針表達(dá)載體的過(guò)程如圖。（1）無(wú)縫連接時(shí)，過(guò)程①中使用T5核酸外切酶目的是。過(guò)程③所需的酶有。（2）PCR技術(shù)分別擴(kuò)增PABD和GFP基因時(shí)，配制的兩個(gè)反應(yīng)體系中不同的有。引物R1的設(shè)計(jì)需依據(jù)的核苷酸序列。據(jù)圖分析引物F1和R2分別為（填序號(hào)）。A．5'﹣TCCGGACTCAGATAGC﹣3'B．5'﹣AGGCCTGAGTCTATCGTTATGTCCGGACTCAGATAGC﹣3'C．5'﹣GCTATCTGACTCCGGACTTGTACAGCTCGTCGTCTCA﹣3'D．5'﹣TCCGGACTCAGATAGCTATCGATGCGCAGCTGACGA﹣3'（3）將PCR產(chǎn)物片段與線性質(zhì)粒載體混合后，在重組酶作用下可形成環(huán)化質(zhì)粒，直接用于轉(zhuǎn)化細(xì)菌。這一過(guò)程與傳統(tǒng)重組質(zhì)粒構(gòu)建過(guò)程相比，無(wú)需使用的酶主要是。（4）利用農(nóng)桿菌花序侵染法轉(zhuǎn)化擬南芥，將獲得的種子（T1）進(jìn)行表面消毒，均勻鋪在含有的MS培養(yǎng)基上進(jìn)行篩選。T1代陽(yáng)性植株自交，按單株收種并播種后獲得的T2代中抗性幼苗占比為，說(shuō)明T1可能為單個(gè)位點(diǎn)插入的轉(zhuǎn)基因株系。通過(guò)觀測(cè)轉(zhuǎn)基因擬南芥根尖細(xì)胞中，了解PA的動(dòng)態(tài)變化。18．（2025?遂寧校級(jí)二模）紅薯感染甘薯羽狀斑駁病毒后會(huì)使老葉出現(xiàn)褪綠斑或紫環(huán)斑，影響紅薯生長(zhǎng)，降低塊根的品質(zhì)。研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)擬南芥感染病毒后，在其體內(nèi)R基因的作用下會(huì)發(fā)生超敏感反應(yīng)（HR），引起病毒感染區(qū)域以及周圍組織發(fā)生細(xì)胞凋亡，將病毒釋放并殺死，從而不會(huì)擴(kuò)散到其他健康組織。HR是植物局部抗病的表現(xiàn)，這種局部抗性繼而又引發(fā)整株植物對(duì)病毒的廣譜抗性，基因序列相同或相似的病毒將不能感染遠(yuǎn)離感染區(qū)的新生組織?？茖W(xué)家欲將擬南芥的R基因轉(zhuǎn)入紅薯細(xì)胞中，培育出抗病毒紅薯，以抵御該病毒的侵染?；卮鹣铝杏嘘P(guān)問(wèn)題：（1）甘薯羽狀斑駁病毒屬于RNA病毒，以該病毒的遺傳物質(zhì)為模板獲得cDNA時(shí)需要用到酶，該酶發(fā)揮作用時(shí)，模板鏈上的堿基A將與子鏈上的堿基互補(bǔ)配對(duì)。（2）科學(xué)家在構(gòu)建重組質(zhì)粒時(shí)，用限制酶SpeⅠ、EcoRⅤ對(duì)R基因進(jìn)行切割，形成的末端為5'-A3'-TGATC和5'-GAT3'-CTA，（填“T4”或“E.coli”）DNA連接酶連接5'-GAT3'-CTA末端的效率更高。寫出限制酶SpeI的識(shí)別序列，注明5'端和（3）R基因上的兩個(gè)限制酶切割位點(diǎn)如圖所示，若R基因轉(zhuǎn)錄時(shí)以圖中A鏈為模板鏈，則插入質(zhì)粒時(shí)，酶切位點(diǎn)（填“1”或“2”）離啟動(dòng)子更近，原因是。19．（2025?定州市校級(jí)一模）由P基因編碼的P蛋白是一種水通道蛋白，該蛋白在植物調(diào)節(jié)水分吸收方面發(fā)揮著重要作用?？蒲腥藛T利用基因工程技術(shù)培育出了高表達(dá)P蛋白的轉(zhuǎn)基因玉米，圖1表示P基因片段和農(nóng)桿菌的Ti質(zhì)粒及幾種限制酶的識(shí)別序列和切割位點(diǎn)?；卮鹣铝袉?wèn)題：（1）若b鏈為P基因轉(zhuǎn)錄的模板鏈，則擴(kuò)增P基因時(shí)，應(yīng)選擇的引物是。構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，切割Ti質(zhì)粒應(yīng)選用的兩種酶為。（2）用含重組Ti質(zhì)粒的農(nóng)桿菌侵染玉米后，應(yīng)在含的培養(yǎng)基中進(jìn)行篩選。科研人員進(jìn)一步用PCR驗(yàn)證P基因是否成功導(dǎo)入玉米細(xì)胞，電泳結(jié)果如圖2所示。其中①為P基因，作為陽(yáng)性對(duì)照，②為陰性對(duì)照，③為檢測(cè)結(jié)果，由此可驗(yàn)證。（3）為了驗(yàn)證玉米植株中是否成功表達(dá)出P蛋白，可用技術(shù)進(jìn)行檢測(cè)。（4）侵染后的玉米外植體需要先進(jìn)行脫分化，然后在含有（填植物激素）的培養(yǎng)基上誘導(dǎo)生根和生芽。從遺傳學(xué)的角度看，玉米外植體能形成完整植株的原因是。20．（2025?江蘇模擬）血漿外泌體是由活細(xì)胞分泌到血液中的囊泡。研究發(fā)現(xiàn)，阿爾茨海默?。ˋD）患者血漿外泌體上蛋白質(zhì)Aβ1﹣42含量顯著升高，為快速診斷AD，科研人員開(kāi)發(fā)了免疫磁珠外泌體聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（iMEP）技術(shù)。請(qǐng)回答下列問(wèn)題。（1）外泌體可參與細(xì)胞間的通訊，其上蛋白質(zhì)的成熟常發(fā)生在（填細(xì)胞器）。圖1為外泌體與抗體—磁珠偶聯(lián)物及DNA抗體偶聯(lián)物的結(jié)合示意圖，外泌體與DNA抗體偶聯(lián)物特異性結(jié)合的原理是。選擇CD63蛋白制備抗體磁珠的原因是。（2）圖2為實(shí)時(shí)熒光定量PCR的過(guò)程示意圖，除所示組分外，實(shí)時(shí)熒光定量PCR的反應(yīng)體系中還需加入。設(shè)計(jì)TaqMan探針的序列的依據(jù)是模板DNA的中部序列，不選擇兩端序列的原因是。若PCR循環(huán)中過(guò)程①溫度設(shè)置過(guò)高，會(huì)導(dǎo)致相同循環(huán)次數(shù)下總熒光強(qiáng)度。R基團(tuán)與Q基團(tuán)距離近時(shí)，R的熒光能量被Q吸收，檢測(cè)不到熒光信號(hào)。過(guò)程②中，TaqDNA聚合酶可催化TaqMan探針的磷酸二酯鍵鍵斷裂，導(dǎo)致位于探針（填5′或3′）端的R基團(tuán)遠(yuǎn)離Q基團(tuán)，其能量不再被吸收，從而發(fā)出熒光信號(hào)。（3）圖3為PCR循環(huán)次數(shù)與實(shí)時(shí)熒光定量PCR反應(yīng)體系中熒光強(qiáng)度的關(guān)系圖，其中Ct值為達(dá)到閾熒光強(qiáng)度時(shí)的循環(huán)次數(shù)。PCR的循環(huán)次數(shù)達(dá)到一定次數(shù)后，再進(jìn)行PCR，總熒光強(qiáng)度基本不增加，出現(xiàn)平臺(tái)期，原因是受（至少答2點(diǎn)）等的限制。若利用iMEP技術(shù)檢測(cè)時(shí)，甲和乙兩位待測(cè)者的達(dá)到Ct值的循環(huán)次數(shù)分別為10和30，其中更可能為AD患者，甲、乙體內(nèi)血漿外泌體中Aβ1﹣42含量比約為。利用iMEP技術(shù)可快速診斷AD的機(jī)制是。

2025年高考生物復(fù)習(xí)新題速遞之基因工程（2025年4月）參考答案與試題解析一．選擇題（共15小題）題號(hào)1234567891011答案DDCBBADDBCD題號(hào)12131415答案ABCB一．選擇題（共15小題）1．（2025春?重慶校級(jí)月考）普通小麥的TaMLO基因與白粉病的易感性有關(guān)。研究發(fā)現(xiàn)，利用CRISPR/Cas9基因編輯技術(shù)敲除TaMLO基因可增強(qiáng)小麥對(duì)白粉病的抗性，CRISPR/Cas9基因編輯技術(shù)的工作原理如圖所示。在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，科研人員構(gòu)建了含有Cas9基因和sgRNA編碼序列的重組質(zhì)粒，并將其導(dǎo)入小麥細(xì)胞中，以期在TaMLO基因兩端實(shí)現(xiàn)精準(zhǔn)切割。下列有關(guān)敘述正確的是（）A．普通小麥?zhǔn)嵌扼w作物，只需敲除一個(gè)TaMLO基因即可實(shí)現(xiàn)穩(wěn)定抗病性 B．該實(shí)驗(yàn)中，sgRNA的主要功能是切割目標(biāo)DNA序列，從而實(shí)現(xiàn)基因編輯 C．CRISPR/Cas9識(shí)別目標(biāo)DNA序列主要與Cas9蛋白的特異性相關(guān) D．通過(guò)CRISPR/Cas9敲除TaMLO基因需要斷開(kāi)4個(gè)磷酸二酯鍵【考點(diǎn)】基因工程在農(nóng)牧、醫(yī)療、食品等方面的應(yīng)用．【專題】正推法；基因工程；理解能力．【答案】D【分析】限制酶：能夠識(shí)別雙鏈DNA分子的某種特定核苷酸序列，并且使每一條鏈中特定部位的兩個(gè)核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷裂?！窘獯稹拷猓篈、普通小麥?zhǔn)橇扼w植物，含有多個(gè)TaMLO同源基因，因此需要同時(shí)敲除多個(gè)基因才能實(shí)現(xiàn)高效抗病，A錯(cuò)誤；B、sgRNA的主要功能是引導(dǎo)Cas9蛋白識(shí)別目標(biāo)DNA序列，而不是切割DNA，B錯(cuò)誤；C、CRISPR/Cas9識(shí)別目標(biāo)DNA序列主要與SgRNA編碼序列有關(guān)，C錯(cuò)誤；D、在TaMLO基因兩端實(shí)現(xiàn)精準(zhǔn)切割以敲除靶基因，雙鏈斷裂需要斷開(kāi)2個(gè)磷酸二酯鍵，因此通過(guò)CRISPR/Cas9敲除TaMLO基因需要斷開(kāi)4個(gè)磷酸二酯鍵，D正確。故選：D?！军c(diǎn)評(píng)】本題主要考查基因工程的相關(guān)知識(shí)，要求學(xué)生有一定的理解分析能力，能夠結(jié)合題干信息和所學(xué)知識(shí)進(jìn)行分析應(yīng)用。2．（2025?遼寧一模）新型蛋白質(zhì)進(jìn)化模型EVOLVEpro可以利用氨基酸序列，僅通過(guò)少量學(xué)習(xí)和最低限度的實(shí)驗(yàn)測(cè)試來(lái)預(yù)測(cè)蛋白質(zhì)空間結(jié)構(gòu)，從而獲得新型高活性蛋白質(zhì)改造方案。下列有關(guān)說(shuō)法正確的是（）A．預(yù)測(cè)蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)需要依據(jù)肽鏈中肽鍵的結(jié)構(gòu)、氨基酸的物理性質(zhì)與結(jié)構(gòu) B．氨基酸是蛋白質(zhì)的基本單位，氨基酸發(fā)生替換一定使蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)和功能發(fā)生改變 C．EVOLVEpro在蛋白質(zhì)工程廣泛應(yīng)用后將不再需要借助基因工程手段改造蛋白質(zhì) D．通過(guò)EVOLVEpro得到的蛋白質(zhì)還需要進(jìn)行進(jìn)一步的功能檢測(cè)實(shí)驗(yàn)才可以投入生產(chǎn)【考點(diǎn)】蛋白質(zhì)工程基本原理．【專題】正推法；基因工程；理解能力．【答案】D【分析】蛋白質(zhì)工程是指以蛋白質(zhì)分子的結(jié)構(gòu)規(guī)律及其生物功能的關(guān)系作為基礎(chǔ)，通過(guò)基因修飾或基因合成，對(duì)現(xiàn)有蛋白質(zhì)進(jìn)行改造，或者制造一種新的蛋白質(zhì)，以滿足人類的生產(chǎn)生活需求?！窘獯稹拷猓篈、對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行分子設(shè)計(jì)應(yīng)從預(yù)期的蛋白質(zhì)功能出發(fā)，對(duì)蛋白質(zhì)的空間結(jié)構(gòu)進(jìn)行設(shè)計(jì)，A錯(cuò)誤；B、氨基酸是蛋白質(zhì)的基本單位，氨基酸發(fā)生替換后蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)和功能可能沒(méi)有發(fā)生改變，尤其個(gè)別氨基酸的改變可能沒(méi)有影響，B錯(cuò)誤；C、EVOLVEpro可以利用氨基酸序列，蛋白質(zhì)工程仍需要基因修飾或基因合成等手段，EVOLVEpro在蛋白質(zhì)工程廣泛應(yīng)用后還需要借助基因工程手段改造蛋白質(zhì)，使得產(chǎn)品更優(yōu)良，C錯(cuò)誤；D、通過(guò)EVOLVEpro得到的蛋白質(zhì)還需要進(jìn)行進(jìn)一步的功能檢測(cè)實(shí)驗(yàn)才可以投入生產(chǎn)，以確保該蛋白質(zhì)對(duì)人體安全沒(méi)有副作用，D正確。故選：D?！军c(diǎn)評(píng)】本題主要考查蛋白質(zhì)工程的內(nèi)容，要求考生識(shí)記相關(guān)知識(shí)，并結(jié)合所學(xué)知識(shí)準(zhǔn)確答題。3．（2025?鄭州二模）單堿基編輯系統(tǒng)可以使靶序列特定堿基發(fā)生改變，進(jìn)而實(shí)現(xiàn)定向突變。如圖為其中一種編輯系統(tǒng)：dCas9末端與APOBECl形成融合蛋白，隨后gRNA將融合蛋白引導(dǎo)到靶位點(diǎn)，APOBEC1會(huì)使單鏈DNA的C脫氨形成U，后續(xù)經(jīng)DNA復(fù)制完成C到T的轉(zhuǎn)換。相關(guān)分析錯(cuò)誤的是（）A．gRNA通過(guò)堿基互補(bǔ)配對(duì)將融合蛋白引導(dǎo)至靶位點(diǎn) B．編輯后的DNA需經(jīng)過(guò)2次復(fù)制才能實(shí)現(xiàn)C到T的轉(zhuǎn)換 C．C轉(zhuǎn)換為U后，與其相連的五碳糖由脫氧核糖轉(zhuǎn)為核糖 D．單堿基編輯系統(tǒng)可以為鐮狀細(xì)胞貧血病的治療提供思路【考點(diǎn)】基因工程在農(nóng)牧、醫(yī)療、食品等方面的應(yīng)用．【專題】正推法；基因工程；理解能力．【答案】C【分析】編輯后的DNA第一次復(fù)制時(shí)，以含U的鏈為模板合成的子鏈對(duì)應(yīng)位置為A，第二次復(fù)制時(shí)，以含A的鏈為模板合成的子鏈對(duì)應(yīng)位置為T?！窘獯稹拷猓篈、gRNA能與靶位點(diǎn)DNA通過(guò)堿基互補(bǔ)配對(duì)結(jié)合，從而將融合蛋白引導(dǎo)至靶位點(diǎn)，A正確；B、編輯后的DNA第一次復(fù)制時(shí)，以含U的鏈為模板合成的子鏈對(duì)應(yīng)位置為A，第二次復(fù)制時(shí)，以含A的鏈為模板合成的子鏈對(duì)應(yīng)位置為T，需經(jīng)2次復(fù)制才能實(shí)現(xiàn)C到T的轉(zhuǎn)換，B正確；C、C轉(zhuǎn)換為U后，U仍在單鏈DNA中，DNA中的五碳糖始終是脫氧核糖，不會(huì)轉(zhuǎn)為核糖，C錯(cuò)誤；D、鐮狀細(xì)胞貧血是基因突變導(dǎo)致的，單堿基編輯系統(tǒng)可定向改變堿基，為該病的治療提供思路，D正確。故選：C?！军c(diǎn)評(píng)】本題考查基因編輯相關(guān)知識(shí)，涉及堿基互補(bǔ)配對(duì)、DNA復(fù)制、基因突變等，意在考查對(duì)基因編輯機(jī)制及相關(guān)知識(shí)的理解和應(yīng)用能力。4．（2025?邯鄲模擬）下列有關(guān)“DNA的粗提取與鑒定”“瓊脂糖凝膠電泳”實(shí)驗(yàn)的相關(guān)說(shuō)法，正確的是（）A．利用酒精初步分離DNA與蛋白質(zhì)的原理是DNA溶于酒精 B．過(guò)濾后的研磨液放置在4℃冰箱中可防止DNA被降解 C．瓊脂糖凝膠電泳時(shí)，DNA分子越大，遷移速率越快 D．提取到的絲狀物與二苯胺溶液充分混勻后即可變?yōu)樗{(lán)色【考點(diǎn)】DNA的粗提取與鑒定；DNA片段的擴(kuò)增與電泳鑒定．【專題】正推法；基因工程；理解能力．【答案】B【分析】DNA不溶于酒精，而某些蛋白質(zhì)溶于酒精；鑒定DNA時(shí)，需要先將DNA溶解在NaCl溶液中，再與二苯胺溶液混合，并在水浴加熱條件下呈現(xiàn)藍(lán)色；耐高溫的DNA聚合酶在延伸環(huán)節(jié)時(shí)進(jìn)行子鏈的合成?！窘獯稹拷猓篈、DNA不溶于酒精溶液，但是細(xì)胞中的某些蛋白質(zhì)溶于酒精，利用這一原理可以將DNA與蛋白質(zhì)分離，A錯(cuò)誤；B、洋蔥研磨液在4℃冰箱中放置幾分鐘，可降低DNA水解酶的活性，防止DNA降解，B正確；C、待測(cè)樣品中DNA分子的大小和構(gòu)象、凝膠的濃度等都會(huì)影響DNA在電泳中的遷移速率，DNA分子越小，遷移的速率越快，C錯(cuò)誤；D、將提取到的絲狀物與二苯胺溶液充分混勻后，沸水浴加熱條件下才會(huì)呈現(xiàn)藍(lán)色，D錯(cuò)誤。故選：B?！军c(diǎn)評(píng)】本題主要考查DNA的粗提取與鑒定的內(nèi)容，要求考生識(shí)記相關(guān)知識(shí)，并結(jié)合所學(xué)知識(shí)準(zhǔn)確答題。5．（2025?云浮模擬）某小組同學(xué)選擇菜花為實(shí)驗(yàn)材料進(jìn)行“DNA粗提取與鑒定”的實(shí)驗(yàn)，并進(jìn)行了一些改進(jìn)?；玖鞒虨椋毫呀狻蛛x→沉淀→鑒定，下列分析錯(cuò)誤的是（）A．裂解：研磨時(shí)加入適量纖維素酶可加速細(xì)胞破裂釋放出DNA等物質(zhì) B．分離：利用DNA溶于酒精的特性去除混合物中的蛋白質(zhì)等物質(zhì) C．沉淀：多次離心研磨液并將沉淀物收集晾干可提高DNA的純度 D．鑒定：在一定溫度下，DNA遇二苯胺試劑呈現(xiàn)藍(lán)色【考點(diǎn)】DNA的粗提取與鑒定．【專題】正推法；從生物材料提取特定成分．【答案】B【分析】DNA粗提取和鑒定的原理：1、DNA的溶解性：DNA和蛋白質(zhì)等其他成分在不同濃度NaCl溶液中溶解度不同（DNA在0.14mol/L的氯化鈉中溶解度最低）；DNA不溶于酒精溶液，但細(xì)胞中的某些蛋白質(zhì)溶于酒精。2、DNA的鑒定：在沸水浴的條件下，DNA遇二苯胺會(huì)被染成藍(lán)色?！窘獯稹拷猓篈、植物細(xì)胞壁主要由纖維素和果膠組成，研磨時(shí)加入纖維素酶可以分解纖維素破壞細(xì)胞壁，從而加快細(xì)胞破裂釋放出DNA等物質(zhì)，A正確；B、利用DNA不能溶于酒精溶液，而某些蛋白質(zhì)能溶于酒精溶液，利用體積分?jǐn)?shù)為95%的酒精可將DNA與蛋白質(zhì)分離，B錯(cuò)誤；C、不同物質(zhì)分子的質(zhì)量不同，離心時(shí)可將不同分子量的物質(zhì)進(jìn)行分離，因此多次離心研磨液并將沉淀物收集晾干可提高DNA的純度，C正確；D、DNA遇二苯胺試劑在沸水浴條件下呈現(xiàn)藍(lán)色，D正確。故選：B?！军c(diǎn)評(píng)】本題考查DNA的粗提取和鑒定的相關(guān)知識(shí)，意在考查學(xué)生的識(shí)記能力和判斷能力，具備運(yùn)用所學(xué)知識(shí)綜合分析問(wèn)題的能力是解答本題的關(guān)鍵。6．（2025?淮安校級(jí)二模）經(jīng)典的CRISPR﹣Cas9系統(tǒng)可以通過(guò)敲除基因?qū)崿F(xiàn)基因沉默。近日研究人員基于CRISPR系統(tǒng)開(kāi)發(fā)了一個(gè)名為CRISPRoff的新型編輯器，可以將甲基（Me）添加在DNA鏈的特定位點(diǎn)上；研究人員還創(chuàng)建了功能相反的編輯器——CRISPRon，它能逆轉(zhuǎn)基因沉默。下列敘述正確的是（）A．新型編輯器對(duì)染色體DNA的效果低于染色質(zhì)DNA B．CRISPRoff利用基因重組來(lái)實(shí)現(xiàn)基因沉默 C．CRISPRoff對(duì)基因的影響不能遺傳給后代 D．CRISPRon有助于基因與DNA聚合酶結(jié)合以恢復(fù)表達(dá)【考點(diǎn)】基因工程在農(nóng)牧、醫(yī)療、食品等方面的應(yīng)用．【專題】模式圖；遺傳信息的轉(zhuǎn)錄和翻譯；基因工程；理解能力．【答案】A【分析】表觀遺傳是指DNA序列不發(fā)生變化，但基因的表達(dá)卻發(fā)生了可遺傳的改變，即基因型未發(fā)生變化而表現(xiàn)型卻發(fā)生了改變，如DNA的甲基化，甲基化的基因不能與RNA聚合酶結(jié)合，故無(wú)法進(jìn)行轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生mRNA，也就無(wú)法進(jìn)行翻譯，最終無(wú)法合成相應(yīng)蛋白，從而抑制了基因的表達(dá)?！窘獯稹拷猓篈、新型編輯器可將甲基添加在DNA鏈的特定位點(diǎn)上，由于染色體螺旋化程度高，故新型編輯器對(duì)染色體DNA的效果低于染色質(zhì)DNA，A正確；B、CRISPRoff將甲基（Me）添加在DNA鏈的特定位點(diǎn)上，是表觀遺傳的一種，屬于可遺傳變異，能夠遺傳給后代，沒(méi)有引起堿基序列改變，也沒(méi)有引起基因重組，BC錯(cuò)誤；D、基因沉默是相關(guān)基因無(wú)法表達(dá)，CRISPRon能逆轉(zhuǎn)基因沉默，即有助于基因與RNA聚合酶結(jié)合以恢復(fù)表達(dá)，D錯(cuò)誤。故選：A?！军c(diǎn)評(píng)】本題考查基因表達(dá)的相關(guān)知識(shí)，意在考查學(xué)生的識(shí)記能力和判斷能力、運(yùn)用所學(xué)知識(shí)綜合分析問(wèn)題的能力。7．（2025?山東模擬）用DNaseI酶切割DNA分子，可產(chǎn)生一系列不同長(zhǎng)度的DNA片段，且相鄰片段只相差1個(gè)核苷酸。當(dāng)DNA分子中的某一區(qū)段與特異的轉(zhuǎn)錄因子蛋白質(zhì)結(jié)合后，加入DNaseI酶時(shí)該區(qū)段會(huì)得到保護(hù)，在凝膠電泳放射性自顯影圖片上會(huì)出現(xiàn)一個(gè)空白區(qū)“足跡”，這種檢測(cè)DNA序列的方法稱為DNaseI足跡法。上述過(guò)程如圖所示，下列說(shuō)法正確的是（）A．需設(shè)置不添加DNaseI酶的對(duì)照組 B．對(duì)照組的每個(gè)DNA分子只發(fā)生一次磷酸二酯鍵的斷裂 C．未與特定蛋白結(jié)合的DNA切割后的片段長(zhǎng)度相同 D．此方法可篩選能與DNA進(jìn)行特異性結(jié)合的目標(biāo)蛋白【考點(diǎn)】基因工程的操作過(guò)程綜合．【專題】模式圖；基因工程；理解能力．【答案】D【分析】基因工程的工具：（1）限制酶：能夠識(shí)別雙鏈DNA分子的某種特定核苷酸序列，并且使每一條鏈中特定部位的兩個(gè)核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷裂。（2）DNA連接酶：連接的是兩個(gè)核苷酸之間的磷酸二酯鍵。（3）運(yùn)載體：常用的運(yùn)載體：質(zhì)粒、噬菌體的衍生物、動(dòng)植物病毒。【解答】解：A、該實(shí)驗(yàn)是研究加入DNaseⅠ酶后，DNA分子與轉(zhuǎn)錄因子蛋白質(zhì)結(jié)合情況及切割情況，不需要設(shè)置不添加DNaseⅠ酶的對(duì)照組，因?yàn)橹攸c(diǎn)是對(duì)比結(jié)合蛋白和未結(jié)合蛋白時(shí)DNA被DNaseⅠ酶切割的差異，而不是與不添加酶的情況對(duì)比，A錯(cuò)誤；B、由題意可知，用DNaseⅠ酶切割DNA分子可產(chǎn)生一系列不同長(zhǎng)度的DNA片段，且相鄰片段只相差1個(gè)核苷酸，這說(shuō)明對(duì)照組的DNA分子被多次切割，磷酸二酯鍵多次斷裂，而不是只發(fā)生一次磷酸二酯鍵的斷裂，B錯(cuò)誤；C、因?yàn)橛肈NaseI酶切割DNA分子會(huì)產(chǎn)生一系列不同長(zhǎng)度的DNA片段，所以未與特定蛋白結(jié)合的DNA切割后的片段長(zhǎng)度是不同的，C錯(cuò)誤；D、由于當(dāng)DNA分子中的某一區(qū)段與特異的轉(zhuǎn)錄因子蛋白質(zhì)結(jié)合后，加入DNaseⅠ酶時(shí)該區(qū)段會(huì)得到保護(hù)，在凝膠電泳放射性自顯影圖片上會(huì)出現(xiàn)一個(gè)空白區(qū)“足跡”，通過(guò)觀察是否有“足跡”，就可以判斷是否有能與DNA進(jìn)行特異性結(jié)合的目標(biāo)蛋白，所以此方法可篩選能與DNA進(jìn)行特異性結(jié)合的目標(biāo)蛋白，D正確。故選：D?！军c(diǎn)評(píng)】本題主要考查的是基因工程的操作的相關(guān)知識(shí)，意在考查學(xué)生對(duì)基礎(chǔ)知識(shí)的理解掌握的能力，難度適中。8．（2025?江蘇模擬）關(guān)于“瓊脂糖凝膠電泳”實(shí)驗(yàn)，下列敘述正確的是（）A．根據(jù)待分離DNA片段的大小，需用無(wú)菌水配制0.8%～1.2%的瓊脂糖溶液 B．向瓊脂糖溶液中加入適量的核酸染料后，需在沸水浴內(nèi)加熱至瓊脂糖熔化 C．將PCR產(chǎn)物和電泳緩沖液混合后，需用微量移液器將混合液緩慢注入加樣孔 D．待指示劑前沿遷移接近凝膠邊緣時(shí)，需及時(shí)斷電并取出凝膠置于紫外燈下觀察【考點(diǎn)】DNA片段的擴(kuò)增與電泳鑒定．【專題】正推法；PCR技術(shù)；理解能力．【答案】D【分析】PCR原理：目的基因DNA受熱變性后解為單鏈，引物與單鏈相應(yīng)互補(bǔ)序列結(jié)合；然后以單鏈DNA為模板，在DNA聚合酶作用下進(jìn)行延伸，即將4種脫氧核苷酸加到引物的3'端，如此重復(fù)循環(huán)多次。由于延伸后得到的產(chǎn)物又可以作為下一個(gè)循環(huán)的模板，因而每一次循環(huán)后目的基因的量可以增加一倍，即呈指數(shù)形式擴(kuò)增?！窘獯稹拷猓篈、配制瓊脂糖溶液應(yīng)用電泳緩沖液，不是無(wú)菌水，A錯(cuò)誤；B、應(yīng)先熔化瓊脂糖，冷卻后再加核酸染料，B錯(cuò)誤；C、PCR產(chǎn)物與凝膠載樣緩沖液混合后，用微量移液器緩慢注入加樣孔，操作正確，C錯(cuò)誤；D、指示劑前沿接近凝膠邊緣時(shí)斷電，取出凝膠在紫外燈下觀察，操作正確，D正確。故選：D?！军c(diǎn)評(píng)】本題考查瓊脂糖凝膠電泳實(shí)驗(yàn)操作知識(shí)，考查考生對(duì)實(shí)驗(yàn)試劑使用、操作步驟等要點(diǎn)的掌握。9．（2025?河北模擬）下列關(guān)于實(shí)驗(yàn)的敘述，正確的是（）A．可通過(guò)觀察石灰水是否變渾濁探究酵母菌呼吸方式 B．綠葉中色素提取和分離的實(shí)驗(yàn)應(yīng)在通風(fēng)條件下進(jìn)行 C．DNA粗提取實(shí)驗(yàn)可以用雞血細(xì)胞作材料，利用DNA易溶于酒精來(lái)初步分離DNA D．在PCR擴(kuò)增DNA時(shí)，當(dāng)溫度上升到50℃以上時(shí)，雙鏈DNA解聚為單鏈【考點(diǎn)】DNA的粗提取與鑒定；DNA片段的擴(kuò)增與電泳鑒定；探究酵母菌的呼吸方式．【專題】正推法；光合作用與細(xì)胞呼吸；PCR技術(shù)；理解能力．【答案】B【分析】色素的提取和分離：（1）葉綠體中的色素是有機(jī)物，不溶于水，易溶于丙酮等有機(jī)溶劑中，所以用丙酮、乙醇等能提取色素。（2）葉綠體色素在層析液中的溶解度不同，分子量小的溶解度高，隨層析液在濾紙上擴(kuò)散得快，溶解度低的隨層析液在濾紙上擴(kuò)散得慢，所以用層析法來(lái)分離四種色素，濾紙條從上到下依次是：胡蘿卜素（橙黃色）、葉黃素（黃色）、葉綠素a（藍(lán)綠色）、葉綠素b（黃綠色）?！窘獯稹拷猓篈、酵母菌有氧呼吸和無(wú)氧呼吸都能產(chǎn)生二氧化碳，所以不能通過(guò)觀察澄清石灰水是否變渾濁來(lái)判斷酵母菌的呼吸方式，A錯(cuò)誤；B、層析液有毒性，故本實(shí)驗(yàn)應(yīng)在通風(fēng)條件下進(jìn)行，實(shí)驗(yàn)結(jié)束后及時(shí)用肥皂洗手，B正確；C、DNA不溶于酒精溶液，但細(xì)胞中的某些蛋白質(zhì)溶于酒精，故DNA粗提取實(shí)驗(yàn)可以用雞血細(xì)胞作材料，利用DNA易溶于酒精來(lái)初步分離DNA，C錯(cuò)誤；D、在PCR擴(kuò)增DNA時(shí)，當(dāng)溫度上升到90℃以上時(shí)，雙鏈DNA解聚為單鏈，D錯(cuò)誤。故選：B?！军c(diǎn)評(píng)】本題主要考查DNA的粗提取與鑒定、探究酵母菌的呼吸方式、色素的提取和分離、DNA片段的擴(kuò)增與電泳鑒定的內(nèi)容，要求考生識(shí)記相關(guān)知識(shí)，并結(jié)合所學(xué)知識(shí)準(zhǔn)確答題。10．（2025?宜賓校級(jí)二模）紅細(xì)胞生成素（EPO）是體內(nèi)促進(jìn)紅細(xì)胞生成的一種激素物質(zhì)，是當(dāng)今最成功的基因工程藥物，可用于治療腎衰性貧血等疾病。由于天然EPO來(lái)源極為有限，目前臨床使用的紅細(xì)胞生成素主要來(lái)自基因工程技術(shù)生產(chǎn)的重組人紅細(xì)胞生成素（rhEPO）。其簡(jiǎn)要生產(chǎn)流程如圖，下列相關(guān)敘述正確的是（）A．過(guò)程①用到的工具酶有DNA聚合酶、限制酶和DNA連接酶 B．構(gòu)建的重組表達(dá)載體中終止子的作用是終止翻譯過(guò)程 C．檢測(cè)重組細(xì)胞是否轉(zhuǎn)錄出EPO的mRNA常用分子雜交技術(shù) D．用乳腺生物反應(yīng)器生產(chǎn)EPO可將人EPO基因?qū)氩溉閯?dòng)物體細(xì)胞獲得【考點(diǎn)】基因工程的操作過(guò)程綜合．【專題】模式圖；基因工程．【答案】C【分析】分析題圖：圖中①表示基因表達(dá)載體的構(gòu)建，②表示將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞?！窘獯稹拷猓篈、過(guò)程①用到的工具酶有限制酶（切割目的基因和運(yùn)載體）和DNA連接酶（連接切割后的目的基因和運(yùn)載體），A錯(cuò)誤；B、構(gòu)建的重組表達(dá)載體中終止子的作用是終止轉(zhuǎn)錄，B錯(cuò)誤；C、檢測(cè)重組細(xì)胞是否轉(zhuǎn)錄出EPO的mRNA常用分子雜交技術(shù)，若出現(xiàn)DNA﹣RNA雜交帶，則證明轉(zhuǎn)錄成功，C正確；D、用乳腺生物反應(yīng)器生產(chǎn)EPO，先將人EPO基因與乳腺蛋白基因啟動(dòng)子等調(diào)控組件重組在一起，再導(dǎo)入哺乳動(dòng)物的受精卵，D錯(cuò)誤。故選：C?！军c(diǎn)評(píng)】本題結(jié)合圖解，考查基因工程的相關(guān)知識(shí)，要求考生識(shí)記基因工程的原理及操作步驟，掌握各操作步驟中需要注意的細(xì)節(jié)，能結(jié)合所學(xué)的知識(shí)準(zhǔn)確答題。11．（2025?南寧二模）黃瓜葉片形狀由一對(duì)等位基因控制，野生型黃瓜葉片形狀為心形，經(jīng)誘變處理獲得了純合圓葉突變體甲。甲與野生型雜交，F(xiàn)1均為心形葉，F(xiàn)1自交，F(xiàn)2心形葉植株與圓葉植株數(shù)量比約為3：1。用限制酶H處理親本和F1，電泳結(jié)果如圖。下列敘述正確的是（）A．加樣孔位于該電泳圖譜的下端 B．F1植株減數(shù)分裂可形成四種基因組成不同的配子 C．誘變使植株甲的相關(guān)基因發(fā)生了堿基對(duì)的增添或缺失 D．用酶H處理F2某心形葉植株的葉形基因，電泳條帶數(shù)為2或3條【考點(diǎn)】DNA片段的擴(kuò)增與電泳鑒定；基因的分離定律的實(shí)質(zhì)及應(yīng)用；基因突變的概念、原因、特點(diǎn)及意義．【專題】模式圖；基因工程；理解能力．【答案】D【分析】1、DNA分子具有可解離的基團(tuán)，在一定的pH下，這些基團(tuán)可以帶上正電荷或負(fù)電荷。在電場(chǎng)的作用下，這些帶電分子會(huì)向著與它所帶電荷相反的電極移動(dòng)，這個(gè)過(guò)程就是電泳。PCR的產(chǎn)物一般通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳來(lái)鑒定。在凝膠中DNA分子的遷移速率與凝膠的濃度、DNA分子的大小和構(gòu)象等有關(guān)。凝膠中的DNA分子通過(guò)染色，可以在波長(zhǎng)為300nm的紫外燈下被檢測(cè)出來(lái)。2、據(jù)題干信息，黃瓜葉片形狀由一對(duì)等位基因控制，野生型黃瓜葉片形狀為心形，經(jīng)誘變處理獲得了純合圓葉突變體甲。甲與野生型雜交，F(xiàn)1均為心形葉，因此心形葉為顯性，圓葉為隱性?！窘獯稹拷猓篈、依據(jù)電泳的原理，DNA的分子大小影響電泳的遷移速度，分子越大，遷移越慢，圖中產(chǎn)物電泳時(shí)加樣孔在圖中的上端，A錯(cuò)誤；B、黃瓜葉片形狀由一對(duì)等位基因控制，F(xiàn)1植株為雜合子，減數(shù)分裂可形成2種基因組成不同的配子，B錯(cuò)誤；C、甲為純合圓葉突變體，由圖中限制酶H處理后甲的片段大小未改變，野生型被限制酶H切割，故與野生型個(gè)體的葉形基因相比，甲的突變基因堿基序列的改變是由堿基對(duì)的替換引起的，C錯(cuò)誤；D、F2中某心形葉個(gè)體的葉形基因型為顯性純合子或雜合子，用限制酶H處理后，電泳條帶數(shù)目為2或3條，D正確。故選：D?！军c(diǎn)評(píng)】本題考查了基因工程的相關(guān)知識(shí)，需要學(xué)生掌握基因分離定律的實(shí)質(zhì)以及電泳圖的識(shí)別等相關(guān)知識(shí)答題。12．（2025?安慶二模）借助DNA分子雜交技術(shù)進(jìn)行遺傳病基因診斷的一般流程為：制作能與目的基因特異性結(jié)合的DNA探針→DNA分子雜交實(shí)驗(yàn)→結(jié)果分析。如圖是某單基因遺傳病家系圖譜，若要借助DNA分子雜交技術(shù)進(jìn)一步確定該遺傳病的遺傳方式（不考慮X、Y同源區(qū)段），只要設(shè)計(jì)哪種探針對(duì)哪一成員進(jìn)行檢測(cè)即可達(dá)到目的（）A．與正?；蚪Y(jié)合的DNA探針、Ⅰ﹣1 B．與致病基因結(jié)合的DNA探針、Ⅰ﹣1 C．與正?；蚪Y(jié)合的DNA探針、Ⅰ﹣2或Ⅱ﹣3 D．與致病基因結(jié)合的DNA探針、Ⅰ﹣2或Ⅱ﹣3【考點(diǎn)】基因工程在農(nóng)牧、醫(yī)療、食品等方面的應(yīng)用．【專題】正推法；基因工程；理解能力．【答案】A【分析】分析圖，Ⅰ﹣1和Ⅰ﹣2患病，Ⅱ﹣4表現(xiàn)正常，說(shuō)明該病為顯性遺傳病，可能是伴X染色體顯性遺傳，也可能是常染色顯性遺傳?！窘獯稹拷猓篈、用與正?；蚪Y(jié)合的DNA探針檢測(cè)Ⅰ﹣1。若為伴X染色體顯性遺傳，Ⅰ﹣1無(wú)雜交帶；若為常染色顯性遺傳，Ⅰ﹣1作為正常個(gè)體攜帶正?；颍须s交帶，故可以確定遺傳方式，A正確；B、Ⅰ﹣1患病，用致病基因探針檢測(cè)，有雜交帶，無(wú)法有效判斷遺傳方式，B錯(cuò)誤；C、用正?；蛱结槞z測(cè)Ⅰ﹣2或Ⅱ﹣3（患病個(gè)體），該病是伴X染色體顯性遺傳或常染色顯性遺傳時(shí)，都有可能有雜交條帶，不能確定遺傳方式，C錯(cuò)誤；D、用致病基因探針檢測(cè)Ⅰ﹣2或Ⅱ﹣3，該病是伴X染色體顯性遺傳或常染色顯性遺傳時(shí)，都會(huì)有雜交條帶，不能確定遺傳方式，D錯(cuò)誤。故選：A?！军c(diǎn)評(píng)】本題考查基因工程在遺傳病診斷中的應(yīng)用，通過(guò)分析DNA探針檢測(cè)結(jié)果與家系遺傳關(guān)系，考查對(duì)遺傳方式判斷的邏輯推理能力，以及對(duì)DNA分子雜交技術(shù)原理的運(yùn)用能力。13．（2025?泰安一模）關(guān)于“DNA粗提取與鑒定”、“瓊脂糖凝膠電泳”、“PCR擴(kuò)增”實(shí)驗(yàn)，下列說(shuō)法正確的是（）A．將洋蔥切碎、研磨、過(guò)濾，濾液放置4℃冰箱中靜置幾分鐘后，DNA存在于沉淀物中 B．鑒定過(guò)程中DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)不發(fā)生改變 C．凝膠載樣緩沖液中加入的核酸染料能與DNA分子結(jié)合，便于在紫外燈下觀察 D．對(duì)2個(gè)雙鏈DNA分子進(jìn)行PCR擴(kuò)增，第n次循環(huán)共需引物2n+1個(gè)【考點(diǎn)】DNA的粗提取與鑒定；DNA片段的擴(kuò)增與電泳鑒定．【專題】正推法；PCR技術(shù)；基因工程；理解能力．【答案】B【分析】DNA粗提取和鑒定的原理：（1）DNA的溶解性：DNA和蛋白質(zhì)等其他成分在不同濃度NaCl溶液中溶解度不同；DNA不溶于酒精溶液，但細(xì)胞中的某些蛋白質(zhì)溶于酒精。（2）DNA的鑒定：在沸水浴的條件下，DNA遇二苯胺會(huì)被染成藍(lán)色?！窘獯稹拷猓篈、將洋蔥切碎加研磨液研磨、過(guò)濾后，濾液放置4℃冰箱中靜置幾分鐘后，DNA存在于上清液中，A錯(cuò)誤；B、常用二苯胺試劑在沸水浴條件下與DNA反應(yīng)呈現(xiàn)藍(lán)色來(lái)鑒定DNA，在鑒定過(guò)程中，只是利用了DNA的化學(xué)性質(zhì)與二苯胺試劑發(fā)生特定的顏色反應(yīng)，沒(méi)有破壞DNA的雙螺旋結(jié)構(gòu)，B正確；C、DNA分子在凝膠載樣緩沖液中帶正電荷或負(fù)電荷，可用于電泳；凝膠制備中加入的核酸染料能與DNA分子結(jié)合，在波長(zhǎng)為300nm的紫外燈下可以被檢測(cè)出來(lái)，即凝膠載樣緩沖液中加入的核酸染料能與DNA分子結(jié)合，便于在紫外燈下觀察，C錯(cuò)誤；D、PCR技術(shù)中，DNA復(fù)制遵循半保留復(fù)制原則。1個(gè)雙鏈DNA分子經(jīng)過(guò)n次循環(huán)后得到2?個(gè)DNA分子，需要的引物數(shù)量為2??1﹣2個(gè)（因?yàn)樽畛醯?個(gè)DNA分子各有2條模板鏈，不需要引物）。那么對(duì)2個(gè)雙鏈DNA分子進(jìn)行PCR擴(kuò)增，第n次循環(huán)后得到2??1個(gè)DNA分子，需要的引物數(shù)量為2??2﹣2個(gè)，而不是2??1個(gè)，D錯(cuò)誤。故選：B。【點(diǎn)評(píng)】本題主要考查DNA的粗提取與鑒定、DNA片段的擴(kuò)增與電泳鑒定的內(nèi)容，要求考生識(shí)記相關(guān)知識(shí)，并結(jié)合所學(xué)知識(shí)準(zhǔn)確答題。14．（2025?棗莊二模）下列與DNA有關(guān)的實(shí)驗(yàn)，說(shuō)法正確的是（）A．DNA粗提取時(shí)加入冷酒精出現(xiàn)白色絲狀物后不能用離心法收集 B．PCR緩沖液中Mg2+作用是激活DNA聚合酶，濃度越高，酶活性越大 C．DNA電泳指示劑需要加入到熔化之后凝固之前的瓊脂糖中 D．DNA電泳指示劑的作用主要用來(lái)指示何時(shí)停止電泳【考點(diǎn)】DNA的粗提取與鑒定；DNA片段的擴(kuò)增與電泳鑒定．【專題】正推法；PCR技術(shù)；理解能力．【答案】C【分析】DNA的粗提取和鑒定的原理：DNA不溶于酒精，但某些蛋白質(zhì)溶于酒精，利用這一原理，可以初步分離DNA和蛋白質(zhì)。DNA在不同濃度的NaCl溶液中溶解度不同，它能溶于2mol/L的NaCl溶液中。在一定溫度下，DNA遇二苯胺試劑會(huì)呈現(xiàn)藍(lán)色?！窘獯稹拷猓篈、DNA粗提取時(shí)加入冷酒精出現(xiàn)白色絲狀物后，可以用離心法收集，這樣能使DNA沉淀更集中，A錯(cuò)誤；B、PCR緩沖液中Mg2+作用是激活DNA聚合酶，但并不是濃度越高酶活性越大，濃度過(guò)高可能會(huì)對(duì)酶活性產(chǎn)生抑制作用，B錯(cuò)誤；C、DNA電泳指示劑需要加入到熔化之后凝固之前的瓊脂糖中，這樣指示劑會(huì)均勻分布在瓊脂糖凝膠中，便于后續(xù)觀察，C正確；D、DNA電泳指示劑的作用主要是指示DNA在凝膠中的遷移情況，通過(guò)觀察指示劑的位置來(lái)判斷DNA的大致遷移距離等，D錯(cuò)誤。故選：C?！军c(diǎn)評(píng)】本題考查PCR技術(shù)的相關(guān)知識(shí)，意在考查學(xué)生的識(shí)記能力和判斷能力、運(yùn)用所學(xué)知識(shí)綜合分析問(wèn)題的能力。15．（2025?常德校級(jí)一模）用PCR方法檢測(cè)轉(zhuǎn)基因植株是否成功導(dǎo)入目的基因時(shí)，得到以下電泳圖譜。其中1號(hào)為DNA標(biāo)準(zhǔn)樣液（Marker），10號(hào)為蒸餾水，PCR時(shí)加入的模板DNA如圖所示。據(jù)此作出的分析，不合理的是（）A．PCR產(chǎn)物的分子大小在250﹣500bp之間 B．3號(hào)樣品為不含目的基因的載體DNA C．9號(hào)樣品對(duì)應(yīng)植株不是所需的轉(zhuǎn)基因植株 D．10號(hào)確定反應(yīng)體系等對(duì)結(jié)果沒(méi)有干擾【考點(diǎn)】DNA片段的擴(kuò)增與電泳鑒定．【專題】模式圖；PCR技術(shù)．【答案】B【分析】PCR過(guò)程中，可以通過(guò)設(shè)計(jì)特定的引物來(lái)擴(kuò)增特定的DNA片段。4～9號(hào)是轉(zhuǎn)基因植株，理論上應(yīng)包含目的基因。9號(hào)PCR結(jié)果不包含250～500bp片段，所以不是所需轉(zhuǎn)基因植株?！窘獯稹拷猓篈、PCR過(guò)程中，可以通過(guò)設(shè)計(jì)特定的引物來(lái)擴(kuò)增特定的DNA片段。4～9號(hào)是轉(zhuǎn)基因植株，理論上應(yīng)包含目的基因，結(jié)合2號(hào)野生型和10號(hào)蒸餾水組的結(jié)果，推測(cè)包含目的基因的片段大小應(yīng)為250～500bp，A正確。B、3號(hào)PCR結(jié)果包含250～500bp片段，應(yīng)包含目的基因，B錯(cuò)誤。C、9號(hào)PCR結(jié)果不包含250～500bp片段，所以不是所需轉(zhuǎn)基因植株，C正確。D、10號(hào)放入蒸餾水，可排除反應(yīng)體系等對(duì)結(jié)果的干擾，D正確。故選：B?！军c(diǎn)評(píng)】本題結(jié)合題圖，意在考查PCR的相關(guān)知識(shí)，并能運(yùn)用所學(xué)知識(shí)做出合理判斷或正確結(jié)論的能力以及從圖形中獲取信息的能力。二．解答題（共5小題）16．（2025?海南模擬）通過(guò)從自然界中篩選、基因工程育種等方法可獲得不同類型和性能的酵母菌。回答下列問(wèn)題：（1）釀酒酵母菌種的性能是決定果酒品質(zhì)的重要因素。利用選擇培養(yǎng)基篩選高耐酸、高耐糖的酵母菌時(shí)，培養(yǎng)基的pH應(yīng)呈酸性，同時(shí)培養(yǎng)基中應(yīng)添加高濃度糖。（2）通過(guò)基因工程可培育乳酸乙酯（白酒香味的主要來(lái)源）高產(chǎn)酵母菌。利用同源重組技術(shù)在重組酶的作用下將釀酒酵母質(zhì)粒上的丙酮酸脫氫酶基因（PD）直接替換為植物乳桿菌中的乳酸脫氫酶基因（L﹣PG）。重組酶可催化PCR產(chǎn)物直接進(jìn)行重組連接，不需要酶切產(chǎn)生黏性末端。酵母菌質(zhì)粒與目的基因L﹣PG連接過(guò)程如圖1（AmpR表示氨芐青霉素抗性基因），L﹣PC基因結(jié)構(gòu)及相關(guān)引物如圖2。①圖1中L﹣PC與PD發(fā)生同源重組的前提條件是L﹣PC與PD具有同源序列。若要獲得如圖2所示的含PA和PB片段的L﹣PG基因并進(jìn)行PCR擴(kuò)增，則最好選擇圖2中的引物1和4。與傳統(tǒng)雙酶切法構(gòu)建基因表達(dá)載體相比，利用同源重組技術(shù)構(gòu)建基因表達(dá)載體的優(yōu)點(diǎn)是不需要酶切，操作簡(jiǎn)便（答出1點(diǎn)）。②AmpR可作為標(biāo)記基因用于酵母菌的篩選。③請(qǐng)?jiān)O(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)證明轉(zhuǎn)L﹣PG基因酵母菌獲得了產(chǎn)乳酸乙酯的能力。寫出簡(jiǎn)要的實(shí)驗(yàn)思路：將轉(zhuǎn)L﹣PG基因酵母菌和未轉(zhuǎn)基因酵母菌分別接種到相同的培養(yǎng)液中培養(yǎng)，在相同條件下培養(yǎng)一段時(shí)間后，檢測(cè)培養(yǎng)液中乳酸乙酯的含量?！究键c(diǎn)】基因工程的操作過(guò)程綜合．【專題】圖文信息類簡(jiǎn)答題；基因工程；理解能力．【答案】（1）酸性高濃度糖（2）L﹣PC與PD具有同源序列1和4不需要酶切，操作簡(jiǎn)便標(biāo)記基因?qū)⑥D(zhuǎn)L﹣PG基因酵母菌和未轉(zhuǎn)基因酵母菌分別接種到相同的培養(yǎng)液中培養(yǎng)，在相同條件下培養(yǎng)一段時(shí)間后，檢測(cè)培養(yǎng)液中乳酸乙酯的含量【分析】1、基因工程的操作步驟：目的基因的獲取、基因表達(dá)載體的構(gòu)建、目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞、目的基因的檢測(cè)與鑒定。2、PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因（1）原理：DNA雙鏈復(fù)制（2）過(guò)程：第一步：加熱至90～95℃使DNA解鏈；第二步：冷卻到55～60℃，引物結(jié)合到互補(bǔ)DNA鏈；第三步：加熱至70～75℃，耐高溫DNA聚合酶從引物起始互補(bǔ)鏈的合成?！窘獯稹拷猓海?）釀酒酵母菌種的性能是決定果酒品質(zhì)的重要因素。利用選擇培養(yǎng)基篩選高耐酸、高耐糖的酵母菌時(shí)，培養(yǎng)基的pH應(yīng)呈酸性，同時(shí)培養(yǎng)基中應(yīng)添加高濃度糖。（2）①圖1中L﹣PC與PD發(fā)生同源重組的前提條件是L﹣PC與PD具有同源序列。若要獲得如圖2所示的含PA和PB片段的L﹣PG基因并進(jìn)行PCR擴(kuò)增，則最好選擇圖2中的引物引物1和引物4，可以將PA和PB片段一起擴(kuò)增。與傳統(tǒng)雙酶切法構(gòu)建基因表達(dá)載體相比，利用同源重組技術(shù)構(gòu)建基因表達(dá)載體的優(yōu)點(diǎn)是不需要酶切，操作簡(jiǎn)便。②AmpR可作為標(biāo)記基因用于酵母菌的篩選。③實(shí)驗(yàn)?zāi)康淖C明轉(zhuǎn)L﹣PG基因酵母菌獲得了產(chǎn)乳酸乙酯的能力，自變量是轉(zhuǎn)L﹣PG基因酵母菌和普通酵母菌，因變量是乳酸乙酯的產(chǎn)量，簡(jiǎn)要的實(shí)驗(yàn)思路如下：將轉(zhuǎn)L﹣PG基因酵母菌和未轉(zhuǎn)基因酵母菌分別接種到相同的培養(yǎng)液中培養(yǎng)，在相同條件下培養(yǎng)一段時(shí)間后，檢測(cè)培養(yǎng)液中乳酸乙酯的含量。若轉(zhuǎn)基因酵母菌培養(yǎng)液中乳酸乙酯含量顯著高于未轉(zhuǎn)基因酵母菌，則證明轉(zhuǎn)L﹣PG基因酵母菌獲得了產(chǎn)乳酸乙酯的能力。故答案為：（1）酸性高濃度糖（2）L﹣PC與PD具有同源序列1和4不需要酶切，操作簡(jiǎn)便標(biāo)記基因?qū)⑥D(zhuǎn)L﹣PG基因酵母菌和未轉(zhuǎn)基因酵母菌分別接種到相同的培養(yǎng)液中培養(yǎng)，在相同條件下培養(yǎng)一段時(shí)間后，檢測(cè)培養(yǎng)液中乳酸乙酯的含量【點(diǎn)評(píng)】本題考查基因工程的相關(guān)知識(shí)，意在考查學(xué)生的識(shí)記能力和判斷能力，學(xué)生具備運(yùn)用所學(xué)知識(shí)綜合分析問(wèn)題的能力是解答本題的關(guān)鍵。17．（2025?泰安一模）磷脂酸（PA）是調(diào)節(jié)植物生長(zhǎng)發(fā)育和逆境響應(yīng)的重要信使物質(zhì)。為了解植物細(xì)胞中PA的動(dòng)態(tài)變化，研究人員用無(wú)縫克隆技術(shù)將高度專一的PA結(jié)合蛋白（PABD）基因與綠色熒光蛋白（GFP）基因融合，構(gòu)建有效監(jiān)測(cè)細(xì)胞PA變化的熒光探針，并測(cè)定擬南芥細(xì)胞內(nèi)PA含量。無(wú)縫克隆技術(shù)連接DNA片段的機(jī)理和構(gòu)建熒光探針表達(dá)載體的過(guò)程如圖。（1）無(wú)縫連接時(shí)，過(guò)程①中使用T5核酸外切酶目的是沿5'→3'的方向水解DNA形成黏性末端。過(guò)程③所需的酶有DNA聚合酶和DNA連接酶。（2）PCR技術(shù)分別擴(kuò)增PABD和GFP基因時(shí)，配制的兩個(gè)反應(yīng)體系中不同的有模板和引物。引物R1的設(shè)計(jì)需依據(jù)PABD基因一端的核苷酸序列和載體一端的核苷酸序列的核苷酸序列。據(jù)圖分析引物F1和R2分別為AC（填序號(hào)）。A．5'﹣TCCGGACTCAGATAGC﹣3'B．5'﹣AGGCCTGAGTCTATCGTTATGTCCGGACTCAGATAGC﹣3'C．5'﹣GCTATCTGACTCCGGACTTGTACAGCTCGTCGTCTCA﹣3'D．5'﹣TCCGGACTCAGATAGCTATCGATGCGCAGCTGACGA﹣3'（3）將PCR產(chǎn)物片段與線性質(zhì)粒載體混合后，在重組酶作用下可形成環(huán)化質(zhì)粒，直接用于轉(zhuǎn)化細(xì)菌。這一過(guò)程與傳統(tǒng)重組質(zhì)粒構(gòu)建過(guò)程相比，無(wú)需使用的酶主要是限制性核酸內(nèi)切酶。（4）利用農(nóng)桿菌花序侵染法轉(zhuǎn)化擬南芥，將獲得的種子（T1）進(jìn)行表面消毒，均勻鋪在含有草胺膦的MS培養(yǎng)基上進(jìn)行篩選。T1代陽(yáng)性植株自交，按單株收種并播種后獲得的T2代中抗性幼苗占比為34，說(shuō)明T1可能為單個(gè)位點(diǎn)插入的轉(zhuǎn)基因株系。通過(guò)觀測(cè)轉(zhuǎn)基因擬南芥根尖細(xì)胞中綠色熒光點(diǎn)的分布，了解PA【考點(diǎn)】基因工程的操作過(guò)程綜合；DNA片段的擴(kuò)增與電泳鑒定．【專題】圖文信息類簡(jiǎn)答題；基因工程；理解能力．【答案】（1）沿5'→3'的方向水解DNA形成黏性末端DNA聚合酶和DNA連接酶（2）模板和引物PABD基因一端的核苷酸序列和載體一端的核苷酸序列AC（3）限制性核酸內(nèi)切酶（4）草胺膦34【分析】PCR由變性﹣退火﹣延伸三個(gè)基本反應(yīng)步驟構(gòu)成：（1）模板DNA的變性：模板DNA經(jīng)加熱至93℃左右一定時(shí)間后，使模板DNA雙鏈或經(jīng)PCR擴(kuò)增形成的雙鏈DNA解離，使之成為單鏈，以便它與引物結(jié)合，為下輪反應(yīng)作準(zhǔn)備。（2）模板DNA與引物的退火（復(fù)性）：模板DNA經(jīng)加熱變性成單鏈后，溫度降至55℃左右，引物與模板DNA單鏈的互補(bǔ)序列配對(duì)結(jié)合。（3）延伸：DNA聚合酶由降溫時(shí)結(jié)合上的引物開(kāi)始沿著DNA鏈合成互補(bǔ)鏈。此階段的溫度依賴于DNA聚合酶。該步驟時(shí)間依賴于聚合酶以及需要合成的DNA片段長(zhǎng)度?！窘獯稹拷猓海?）結(jié)合圖示可知，過(guò)程①使用T5核酸外切酶目的是沿5'→3'的方向水解DNA形成黏性末端。過(guò)程③缺口處DNA鏈的補(bǔ)齊，可以看作DNA分子的復(fù)制過(guò)程，所需的酶有DNA聚合酶（DNA聚合酶將脫氧核苷酸加到子鏈3′﹣OH末端）和DNA連接酶（將兩個(gè)DNA片段進(jìn)行連接）。（2）PCP擴(kuò)增需要模板、原料、引物和TaqDNA聚合酶，擴(kuò)增PABD和GFP這兩種不同的基因，分別需要兩種基因的單鏈DNA作為模板，即所需的模板不同，引物是根據(jù)目的基因復(fù)制起始端序列人工合成的，不同種類的基因所需的引物不同，綜上分析，配制的兩個(gè)反應(yīng)體系中不同的有模板和引物。用于PCR擴(kuò)增的引物是根據(jù)一段已知目的基因（PABD基因）的核苷酸序列來(lái)設(shè)計(jì)的，由圖可知，PABD基因（目的基因）需要用載體進(jìn)行連接，因此PCR擴(kuò)增PABD基因時(shí)需依據(jù)PABD基因一端的核苷酸序列和載體一端的核苷酸序列引物R1。由重組DNA圖可知，GFP基因和PABD基因進(jìn)行連接，PCR擴(kuò)增GFP基因時(shí)需根據(jù)GFP基因一端的核苷酸序列和PABD基因一端的核苷酸序列引物R2，而設(shè)計(jì)引物F1僅需根據(jù)PABD基因一端的核苷酸序列，因此引物F1的堿基序列比引物R2的堿基序列短，因此擴(kuò)增目的片段的引物F1對(duì)應(yīng)于下表中的A。PCR擴(kuò)增GFP基因時(shí)需根據(jù)GFP基因一端的核苷酸序列和PABD基因一端的核苷酸序列引物R2，即引物R2的一部分能與引物F1進(jìn)行堿基互補(bǔ)配對(duì)，綜上所述，R2對(duì)應(yīng)于下表中的C。（3）傳統(tǒng)的酶切再連法需要用特定的限制性核酸內(nèi)切酶將目的基因和質(zhì)粒先進(jìn)行切割，再用DNA連接酶對(duì)目的基因和質(zhì)粒進(jìn)行連接，而無(wú)縫克隆技術(shù)構(gòu)建重組質(zhì)粒是不需要限制性核酸內(nèi)切酶，使用的是限制性核酸外切酶和DNA連接酶。（4）由圖可知，bar（草胺膦抗性基因）為標(biāo)記基因，位于T﹣DNA上，農(nóng)桿菌中的Ti質(zhì)粒上的T﹣DNA可轉(zhuǎn)移至受體細(xì)胞，并且整合到受體細(xì)胞染色體的DNA上，因此利用農(nóng)桿菌花序侵染法轉(zhuǎn)化擬南芥，將獲得的種子（T1）進(jìn)行表面消毒，均勻鋪在含有草胺膦的MS培養(yǎng)基上進(jìn)行篩選和鑒定。若T1為單位點(diǎn)插入的轉(zhuǎn)基因株系，假設(shè)抗性基因用A表示，非抗性為a，則T1的基因型為Aa，T1代自交獲得的T2代幼苗的基因型及比例為A_：aa＝3：1，因此抗草胺膦：不抗草胺膦＝3：1，T2代中抗性幼苗占比為34。由題意“將高度專一的PA結(jié)合蛋白（PABD）基因與綠色熒光蛋白（GFP）基因融合，構(gòu)建有效監(jiān)測(cè)細(xì)胞PA變化的熒光探針，并測(cè)定擬南芥細(xì)胞內(nèi)PA含量”可知，通過(guò)觀測(cè)轉(zhuǎn)基因擬南芥根尖細(xì)胞中綠色熒光點(diǎn)的分布，了解PA故答案為：（1）沿5'→3'的方向水解DNA形成黏性末端DNA聚合酶和DNA連接酶（2）模板和引物PABD基因一端的核苷酸序列和載體一端的核苷酸序列AC（3）限制性核酸內(nèi)切酶（4）草胺膦34【點(diǎn)評(píng)】本題主要考查基因工程的操作以及DNA片段的擴(kuò)增的相關(guān)知識(shí)，意在考查學(xué)生對(duì)基礎(chǔ)知識(shí)的理解掌握的能力，難度適中。18．（2025?遂寧校級(jí)二模）紅薯感染甘薯羽狀斑駁病毒后會(huì)使老葉出現(xiàn)褪綠斑或紫環(huán)斑，影響紅薯生長(zhǎng)，降低塊根的品質(zhì)。研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)擬南芥感染病毒后，在其體內(nèi)R基因的作用下會(huì)發(fā)生超敏感反應(yīng)（HR），引起病毒感染區(qū)域以及周圍組織發(fā)生細(xì)胞凋亡，將病毒釋放并殺死，從而不會(huì)擴(kuò)散到其他健康組織。HR是植物局部抗病的表現(xiàn)，這種局部抗性繼而又引發(fā)整株植物對(duì)病毒的廣譜抗性，基因序列相同或相似的病毒將不能感染遠(yuǎn)離感染區(qū)的新生組織?？茖W(xué)家欲將擬南芥的R基因轉(zhuǎn)入紅薯細(xì)胞中，培育出抗病毒紅薯，以抵御該病毒的侵染?；卮鹣铝杏嘘P(guān)問(wèn)題：（1）甘薯羽狀斑駁病毒屬于RNA病毒，以該病毒的遺傳物質(zhì)為模板獲得cDNA時(shí)需要用到逆轉(zhuǎn)錄酶，該酶發(fā)揮作用時(shí)，模板鏈上的堿基A將與子鏈上的堿基T互補(bǔ)配對(duì)。（2）科學(xué)家在構(gòu)建重組質(zhì)粒時(shí)，用限制酶SpeⅠ、EcoRⅤ對(duì)R基因進(jìn)行切割，形成的末端為5'-A3'-TGATC和5'-GAT3'-CTA，T4（填“T4”或“E.coli”）DNA連接酶連接5'-GAT3'-CTA末端的效率更高。寫出限制酶SpeI的識(shí)別序列，注明5'（3）R基因上的兩個(gè)限制酶切割位點(diǎn)如圖所示，若R基因轉(zhuǎn)錄時(shí)以圖中A鏈為模板鏈，則插入質(zhì)粒時(shí)，酶切位點(diǎn)2（填“1”或“2”）離啟動(dòng)子更近，原因是轉(zhuǎn)錄時(shí)以A鏈為模板鏈，轉(zhuǎn)錄的方向是從模板鏈的3'→5'，mRNA的延伸方向?yàn)?'→3'，啟動(dòng)子更靠近A鏈的3'端?！究键c(diǎn)】基因工程的操作過(guò)程綜合．【專題】正推法；基因工程；理解能力．【答案】（1）逆轉(zhuǎn)錄T（2）T4可防止切割后的目的基因與質(zhì)粒自身環(huán)化和反向連接（3）2轉(zhuǎn)錄時(shí)以A鏈為模板鏈，轉(zhuǎn)錄的方向是從模板鏈的3'→5'，mRNA的延伸方向?yàn)?'→3'，啟動(dòng)子更靠近A鏈的3'端【分析】基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等。DNA重組技術(shù)的基本工具包括“分子手術(shù)刀”——限制酶、“分子縫合針”——DNA連接酶、“分子運(yùn)輸車”——基因進(jìn)入受體細(xì)胞的載體。DNA連接酶主要有兩類①E?coliDNA連接酶，來(lái)源于大腸桿菌，可用于連接黏性末端；②T4DNA連接酶：來(lái)源于T4噬菌體，可用于連接黏性末端和平末端，但連接平末端效率低。基因工程育種的優(yōu)點(diǎn)：①克服遠(yuǎn)緣雜交不親和的障礙；②可以定向改造生物的遺傳性狀?！窘獯稹拷猓海?）以RNA為模板獲得cDNA的過(guò)程需要逆轉(zhuǎn)錄酶催化，該過(guò)程中，模板鏈中的堿基A會(huì)與子鏈上的堿基T互補(bǔ)配對(duì)。（2）5'-GAT3'-CTA為平末端，T4DNA連接酶連接平末端的效率更高。限制酶識(shí)別序列均為反向回文序列，根據(jù)SpeI酶對(duì)（3）轉(zhuǎn)錄時(shí)以A鏈為模板鏈，轉(zhuǎn)錄的方向是從模板鏈的3'→5'，mRNA的延伸方向?yàn)?'→3'，插入質(zhì)粒時(shí)，酶切位點(diǎn)2離啟動(dòng)子更近。故答案為：（1）逆轉(zhuǎn)錄T（2）T4可防止切割后的目的基因與質(zhì)粒自身環(huán)化和反向連接（3）2轉(zhuǎn)錄時(shí)以A鏈為模板鏈，轉(zhuǎn)錄的方向是從模板鏈的3'→5'，mRNA的延伸方向?yàn)?'→3'，啟動(dòng)子更靠近A鏈的3'端【點(diǎn)評(píng)】本題考查基因工程的相關(guān)知識(shí)，意在考查學(xué)生的識(shí)記能力和判斷能力、運(yùn)用所學(xué)知識(shí)綜合分析問(wèn)題的能力。19．（2025?定州市校級(jí)一模）由P基因編碼的P蛋白是一種水通道蛋白，該蛋白在植物調(diào)節(jié)水分吸收方面發(fā)揮著重要作用?？蒲腥藛T利用基因工程技術(shù)培育出了高表達(dá)P蛋白的轉(zhuǎn)基因玉米，圖1表示P基因片段和農(nóng)桿菌的Ti質(zhì)粒及幾種限制酶的識(shí)別序列和切割位點(diǎn)?；卮鹣铝袉?wèn)題：（1）若b鏈為P基因轉(zhuǎn)錄的模板鏈，則擴(kuò)增P基因時(shí)，應(yīng)選擇的引物是引物2和引物3。構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，切割Ti質(zhì)粒應(yīng)選用的兩種酶為EcoRⅠ和SpeI。（2）用含重組Ti質(zhì)粒的農(nóng)桿菌侵染玉米后，應(yīng)在含潮霉素的培養(yǎng)基中進(jìn)行篩選。科研人員進(jìn)一步用PCR驗(yàn)證P基因是否成功導(dǎo)入玉米細(xì)胞，電泳結(jié)果如圖2所示。其中①為P基因，作為陽(yáng)性對(duì)照，②為陰性對(duì)照，③為檢測(cè)結(jié)果，由此可驗(yàn)證P基因成功導(dǎo)入了玉米細(xì)胞。（3）為了驗(yàn)證玉米植株中是否成功表達(dá)出P蛋白，可用抗原一抗體雜交技術(shù)進(jìn)行檢測(cè)。（4）侵染后的玉米外植體需要先進(jìn)行脫分化，然后在含有生長(zhǎng)素、細(xì)胞分裂素（填植物激素）的培養(yǎng)基上誘導(dǎo)生根和生芽。從遺傳學(xué)的角度看，玉米外植體能形成完整植株的原因是玉米外植體細(xì)胞含有發(fā)育成完整個(gè)體的全部遺傳信息?！究键c(diǎn)】基因工程的操作過(guò)程綜合；植物的組織培養(yǎng)．【專題】圖文信息類簡(jiǎn)答題；植物的組織培養(yǎng)；基因工程；解決問(wèn)題能力．【答案】（1）引物2和引物3EcoRⅠ和SpeI（2）潮霉素P基因成功導(dǎo)入了玉米細(xì)胞（3）抗原一抗體雜交（4）生長(zhǎng)素、細(xì)胞分裂素玉米外植體細(xì)胞含有發(fā)育成完整個(gè)體的全部遺傳信息【分析】基因工程的基本操作步驟主要包括四步：①目的基因的獲取；②基因表達(dá)載體的構(gòu)建；③將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞；④目的基因的檢測(cè)與表達(dá)。其中，基因表達(dá)載體的構(gòu)建是基因工程的核心。引物是一小段能與DNA母鏈的一段堿基序列互補(bǔ)配對(duì)的短單鏈核酸。用于PCR的引物長(zhǎng)度通常為20～30個(gè)核苷酸；轉(zhuǎn)化是指目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞內(nèi)，并且在受體細(xì)胞內(nèi)維持穩(wěn)定和表達(dá)的過(guò)程?！窘獯稹拷猓海?）啟動(dòng)子在基因的左邊，b鏈為P基因轉(zhuǎn)錄的模板鏈，則b鏈的5'端在右邊，3'端在左邊；a鏈的5'端在左邊，3'端在右邊。引物結(jié)合在模板鏈的3'端，所以選擇的引物應(yīng)該為引物2和引物3。構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，切割Ti質(zhì)粒的其中一種限制酶不能選用XbaⅠ，否則會(huì)切下終止子，故限制酶只能在EcoRⅠ、SpeI及MunI中選擇。MunI在T﹣DNA的邊界序列以外，故應(yīng)該選擇EcoRⅠ和PSeI。（2）潮霉素抗性基因位于T﹣DNA內(nèi)，用含重組Ti質(zhì)粒的農(nóng)桿菌侵染玉米后，應(yīng)在含潮霉素的培養(yǎng)基中篩選出含P基因的玉米細(xì)胞。經(jīng)過(guò)電泳圖譜比較，③待測(cè)玉米細(xì)胞中有一條條帶與①的陽(yáng)性對(duì)照相同，說(shuō)明P基因成功導(dǎo)入了玉米細(xì)胞。（3）為了驗(yàn)證玉米植株中是否成功表達(dá)出P蛋白，常用抗原一抗體雜交技術(shù)進(jìn)行檢測(cè)。（4）侵染后的玉米外植體需要先進(jìn)行脫分化，然后在含有生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素等的培養(yǎng)基上誘導(dǎo)生根和生芽。從遺傳學(xué)的角度看，玉米外植體能形成完整植株的原因是玉米外植體細(xì)胞含有發(fā)育成完整個(gè)體的全部遺傳信息。故答案為：（1）引物2和引物3EcoRⅠ和SpeI（2）潮霉素P基因成功導(dǎo)入了玉米細(xì)胞（3）抗原一抗體雜交（4）生長(zhǎng)素、細(xì)胞分裂素玉米外植體細(xì)胞含有發(fā)育成完整個(gè)體的全部遺傳信息【點(diǎn)評(píng)】本題考查基因工程的相關(guān)知識(shí)，意在考查學(xué)生的識(shí)記能力和判斷能力，運(yùn)用所學(xué)知識(shí)綜合分析問(wèn)題的能力是解答本題的關(guān)鍵。20．（2025?江蘇模擬）血漿外泌體是由活細(xì)胞分泌到血液中的囊泡。研究發(fā)現(xiàn)，阿爾茨海默?。ˋD）患者血漿外泌體上蛋白質(zhì)Aβ1﹣42含量顯著升高，為快速診斷AD，科研人員開(kāi)發(fā)了免疫磁珠外泌體聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（iMEP）技術(shù)。請(qǐng)回答下列問(wèn)題。（1）外泌體可參與細(xì)胞間的通訊，其上蛋白質(zhì)的成熟常發(fā)生在高爾基體（填細(xì)胞器）。圖1為外泌體與抗體—磁珠偶聯(lián)物及DNA抗體偶聯(lián)物的結(jié)合示意圖，外泌體與DNA抗體偶聯(lián)物特異性結(jié)合的原理是抗原、抗體的特異性結(jié)合。選擇CD63蛋白制備抗體磁珠的原因是外泌體上存在CD63蛋白，且與CD63抗體特異性結(jié)合。（2）圖2為實(shí)時(shí)熒光定量PCR的過(guò)程示意圖，除所示組分外，實(shí)時(shí)熒光定量PCR的反應(yīng)體系中還需加入dNTP、緩沖液和Mg2+。設(shè)計(jì)TaqMan探針的序列的依據(jù)是模板DNA的中部序列，不選擇兩端序列的原因是影響引物和模板鏈的結(jié)合。若PCR循環(huán)中過(guò)程①溫度設(shè)置過(guò)高，會(huì)導(dǎo)致相同循環(huán)次數(shù)下總熒光強(qiáng)度降低。R基團(tuán)與Q基團(tuán)距離近時(shí)，R的熒光能量被Q吸收，檢測(cè)不到熒光信號(hào)。過(guò)程②中，TaqDNA聚合酶可催化TaqMan探針的磷酸二酯鍵鍵斷裂，導(dǎo)致位于探針5′（填5′或3′）端的R基團(tuán)遠(yuǎn)離Q基團(tuán)，其能量不再被吸收，從而發(fā)出熒光信號(hào)。（3）圖3為PCR循環(huán)次數(shù)與實(shí)時(shí)熒光定量PCR反應(yīng)體系中熒光強(qiáng)度的關(guān)系圖，其中Ct值為達(dá)到閾熒光強(qiáng)度時(shí)的循環(huán)次數(shù)。PCR的循環(huán)次數(shù)達(dá)到一定次數(shù)后，再進(jìn)行PCR，總熒光強(qiáng)度基本不增加，出現(xiàn)平臺(tái)期，原因是受探針數(shù)、引物數(shù)、dNTP數(shù)及TaqDNA聚合酶的活性（至少答2點(diǎn)）等的限制。若利用iMEP技術(shù)檢測(cè)時(shí)，甲和乙兩位待測(cè)者的達(dá)到Ct值的循環(huán)次數(shù)分別為10和30，其中甲更可能為AD患者，甲、乙體內(nèi)血漿外泌體中Aβ1﹣42含量比約為220。利用iMEP技術(shù)可快速診斷AD的機(jī)制是利用DNA抗體偶聯(lián)物可將蛋白質(zhì)信號(hào)轉(zhuǎn)變?yōu)楹怂嵝盘?hào)，并通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR的靈敏性實(shí)現(xiàn)定量檢測(cè)。【考點(diǎn)】DNA片段的擴(kuò)增與電泳鑒定；基因工程的操作過(guò)程綜合．【專題】圖文信息類簡(jiǎn)答題；基因工程；理解能力．【答案】（1）高爾基體抗原、抗體的特異性結(jié)合外泌體上存在CD63蛋白，且與CD63抗體特異性結(jié)合（2）dNTP、緩沖液和Mg2+影響引物和模板鏈的結(jié)合降低5′（3）探針數(shù)、引物數(shù)、dNTP數(shù)及TaqDNA聚合酶的活性（至少答2點(diǎn)）甲220利用DNA抗體偶聯(lián)物可將蛋白質(zhì)信號(hào)轉(zhuǎn)變?yōu)楹怂嵝盘?hào)，并通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR的靈敏性實(shí)現(xiàn)定量檢測(cè)【分析】PCR是聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的縮寫，它是一項(xiàng)根據(jù)DNA半保留復(fù)制的原理，在體外提供參與DNA復(fù)制的各種組分與反應(yīng)條件，對(duì)目的基因的核苷酸序列進(jìn)行大量復(fù)制的技術(shù)。【解答】解：（1）根據(jù)題意“血漿外泌體是由活細(xì)胞分泌到血液中的囊泡”可知，外泌體上的蛋白質(zhì)經(jīng)過(guò)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體的依次加工，故外泌體上蛋白質(zhì)的成熟常發(fā)生在高爾基體中。圖1為外泌體與抗體﹣磁珠偶聯(lián)物及DNA抗體偶聯(lián)物的結(jié)合示意圖，由圖1可知，外泌體與DNA抗體偶聯(lián)物特異性結(jié)合依賴于外泌體上的Aβ1﹣42與DNA抗體偶聯(lián)物上的抗Aβ1﹣42抗體的特異性結(jié)合。由于外泌體上存在CD63蛋白，CD63蛋白可以與CD63抗體特異性結(jié)合，故選擇CD63蛋白制備抗體磁珠。（2）圖2為實(shí)時(shí)熒光定量PCR的過(guò)程示意圖，圖中顯示已經(jīng)加入引物、TaqMan探針和TaqDNA聚合酶，除此之外，實(shí)時(shí)熒光定量PCR的反應(yīng)體系中還需加入dNTP（原料）、緩沖液和Mg2+。由于引物要結(jié)合在模板鏈的兩端，故設(shè)計(jì)TaqMan探針的序列的依據(jù)是模板DNA的中部序列，以避免影響引物和模板鏈的結(jié)合。圖2中過(guò)程①為復(fù)性，若PCR循環(huán)中過(guò)程①溫度設(shè)置過(guò)高，會(huì)導(dǎo)致探針不能與待測(cè)目標(biāo)有效結(jié)合，故相同循環(huán)次數(shù)下總熒光強(qiáng)度會(huì)降低。延伸時(shí)，脫氧核苷酸的添加方向?yàn)?′到3′，故探針的左側(cè)為5′端。過(guò)程②中，TaqDNA聚合酶可催化TaqMan探針的磷酸二酯鍵鍵斷裂，導(dǎo)致位于探針5'端的R基團(tuán)遠(yuǎn)離Q基團(tuán)，其能量不再被吸收，從而發(fā)出熒光信號(hào)。（3）由于探針數(shù)、引物數(shù)和dNTP的數(shù)目有限，以及受TaqDNA聚合酶的活性的影響，PCR的循環(huán)次數(shù)達(dá)到一定次數(shù)后，再進(jìn)行PCR，總熒光強(qiáng)度基本不增加，會(huì)出現(xiàn)平臺(tái)期。熒光信號(hào)強(qiáng)度達(dá)到設(shè)定的閾值時(shí)所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)越少，說(shuō)明待測(cè)樣本中含有的Aβ1﹣42的密度越大，故甲更可能為AD患者。由于甲循環(huán)10次就可達(dá)到乙循環(huán)30次的Ct值，二者相差了20次循環(huán)的量，故甲、乙體內(nèi)初始的Aβ1﹣42含量比約為220。說(shuō)明甲結(jié)合圖2和圖3可知，利用DNA抗體偶聯(lián)物可將蛋白質(zhì)信號(hào)轉(zhuǎn)變?yōu)楹怂嵝盘?hào)（圖2顯示），并通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR的靈敏性實(shí)現(xiàn)定量檢測(cè)（圖3顯示），故利用iMEP技術(shù)可快速診斷AD。故答案為：（1）高爾基體抗原、抗體的特異性結(jié)合外泌體上存在CD63蛋白，且與CD63抗體特異性結(jié)合（2）dNTP、緩沖液和Mg2+影響引物和模板鏈的結(jié)合降低5′（3）探針數(shù)、引物數(shù)、dNTP數(shù)及TaqDNA聚合酶的活性（至少答2點(diǎn)）甲220利用DNA抗體偶聯(lián)物可將蛋白質(zhì)信號(hào)轉(zhuǎn)變?yōu)楹怂嵝盘?hào)，并通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR的靈敏性實(shí)現(xiàn)定量檢測(cè)【點(diǎn)評(píng)】本題考查基因工程的相關(guān)知識(shí)，意在考查學(xué)生的識(shí)記能力和判斷能力、運(yùn)用所學(xué)知識(shí)綜合分析問(wèn)題的能力。

考點(diǎn)卡片1．探究酵母菌的呼吸方式【知識(shí)點(diǎn)的認(rèn)識(shí)】一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?、了解酵母菌的無(wú)氧呼吸和有氧呼吸情況2、學(xué)會(huì)運(yùn)用對(duì)比實(shí)驗(yàn)的方法設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)二、實(shí)驗(yàn)原理：1、酵母菌是一種單細(xì)胞真菌，在有氧和無(wú)氧的條件下都能生存，屬于兼性厭氧菌，因此便于用來(lái)研究細(xì)胞呼吸的不同方式．2、CO2可使澄清石灰水變混濁，也可使溴麝香草酚藍(lán)水溶液由藍(lán)變綠再變黃．根據(jù)石灰水混濁程度或溴麝香草酚藍(lán)水溶液變成黃色的時(shí)間長(zhǎng)短，可以檢測(cè)酵母菌培養(yǎng)CO2的產(chǎn)生情況．3、橙色的重鉻酸鉀溶液，在酸性條件下與乙醇（酒精）發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，在酸性條件下，變成灰綠色．三、實(shí)驗(yàn)裝置圖四、方法步驟：提出問(wèn)題→作出假設(shè)→設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)→（包括選擇實(shí)驗(yàn)材料、選擇實(shí)驗(yàn)器具、確定實(shí)驗(yàn)步驟、設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)記錄表格）→實(shí)施實(shí)驗(yàn)→分析與結(jié)論→表達(dá)與交流．1）酵母菌培養(yǎng)液的配制取20g新鮮的食用酵母菌，分成兩等份，分別放入錐形瓶A（500mL）和錐形瓶B（500mL）中，再分別向瓶中注入240mL質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5%的葡萄糖溶液．2）檢測(cè)CO2的產(chǎn)生用錐形瓶和其他材料用具組裝好實(shí)驗(yàn)裝置（如圖），并連通橡皮球