羊鏈球菌病防治技術(shù)規(guī)范

ICS?11.220

CCSB41

DB63

青海省地方標(biāo)準(zhǔn)

DB63/T1287—2023

代替DB63/T1287-2014

羊鏈球菌病防治技術(shù)規(guī)范

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（報批稿）

××××-××-××發(fā)布××××-××-××實施

青海省市場監(jiān)督管理局發(fā)布

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羊鏈球菌病防治技術(shù)規(guī)范

1范圍

本文件規(guī)定了羊鏈球菌病的術(shù)語和定義、診斷、預(yù)防和治療等內(nèi)容。

本文件適用于羊鏈球菌病的防治。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，

僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本

文件。

NY/T471-2023綠色食品飼料及飼料添加劑使用準(zhǔn)則

NY/T472-2022綠色食品獸藥使用準(zhǔn)則

NY/T473-2016綠色食品畜禽衛(wèi)生防疫準(zhǔn)則

DB63/T453.4-2022肉羊飼養(yǎng)管理技術(shù)規(guī)程

3術(shù)語和定義

下列術(shù)語和定義適用于本文件。

3.1

羊鏈球菌病

是由C群馬鏈球菌獸疫亞種引起的一種急性熱性傳染病。綿羊最為易感，山羊次之。主要特征是全

身性出血性敗血癥及漿液性肺炎與纖維素性胸膜肺炎。

3.2

β溶血

是細(xì)菌在血平板上培養(yǎng)時，菌落周圍形成的寬大、界限分明、完全透明的溶血環(huán)。β溶血環(huán)中的紅

細(xì)胞完全溶解，是細(xì)菌產(chǎn)生的溶血素使紅細(xì)胞完全溶解所致，又稱完全溶血。

4診斷

4.1流行病學(xué)診斷

4.1.1易感動物

不同年齡羊均易感，綿羊比山羊易感。

4.1.2傳染源

1

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病羊和帶菌羊是主要傳染源。

4.1.3傳播途徑

主要通過空氣、直接接觸或污染的排泄物經(jīng)由呼吸道、消化道和損傷的皮膚感染，運輸工具及羊虱、

蠅等吸血昆蟲造成傳播。

4.1.4發(fā)病季節(jié)

多在冬、春季散發(fā)。

4.1.5流行特點

潛伏期為2d～7d，少數(shù)可長達(dá)10d。

4.2臨床診斷

4.2.1臨床癥狀

4.2.1.1急性型病程

病初體溫升高，食欲減退或廢絕，反芻停止，鼻液呈漿液性或膿性，咽喉腫脹、頜下淋巴結(jié)腫大，

呼吸困難，咳嗽。眼結(jié)膜充血潮紅、流淚或流出濃汁，孕羊流產(chǎn)。

4.2.1.2慢性型病程

食欲不振，消瘦，步態(tài)僵硬，出現(xiàn)咳嗽或關(guān)節(jié)炎。

4.2.2病理剖檢

4.2.2.1病羊主要臟器廣泛性出血，并呈彌漫狀態(tài)，漿膜面常覆有粘稠、絲狀的纖維素樣物質(zhì)。

4.2.2.2淋巴結(jié)腫大、出血、壞死。

4.2.2.3鼻、咽喉、氣管黏膜出血，肺水腫，氣腫，肺實質(zhì)出血，呈大葉性肺炎。

4.2.2.4肝臟腫大，表面有少量出血點、膽囊腫大，膽汁外滲。

4.2.2.5腎臟腫脹、質(zhì)脆、變軟。

4.2.2.6大網(wǎng)膜、腸系膜有出血點。

4.3實驗室診斷

4.3.1樣品采集

采集血液、鼻咽分泌物、胸水、病變臟器等。

4.3.2染色鏡檢

病料涂片染色鏡檢可見成對或3個～5個短鏈排列的革蘭氏陽性球菌，腹水或心包液中呈長鏈排列，

瑞氏染色可見莢膜。

4.3.3分離培養(yǎng)

4.3.3.1取病死羊肝、腎、肺等組織劃線接種于血瓊脂平板，置37℃培養(yǎng)24h。形成露滴狀細(xì)小、灰

白色，表面光滑、邊緣整齊，有光澤、透明濕潤、黏稠的菌落，直徑0.5mm～1.0mm，呈β溶血，菌

落涂片鏡檢，可見呈短鏈狀排列的革蘭氏陽性球菌。

2

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4.3.3.2在血清肉湯中培養(yǎng)24h～48h，初期渾濁，后期形成粘稠沉淀，上清透明，取菌液涂片鏡檢，

可見長鏈狀排列的革蘭氏陽性球菌。

4.3.4生化試驗

純化培養(yǎng)后接種于生化鑒定管中，37℃培養(yǎng)16h～48h。

C群馬鏈球菌獸疫亞種能發(fā)酵葡萄糖、蔗糖、麥芽糖、乳糖、半乳糖、山梨醇、水楊苷，產(chǎn)酸不產(chǎn)

氣，不發(fā)酵菊糖、鼠李糖、棉實糖、海藻糖、七葉苷、甘露醇、高鹽培養(yǎng)基。

4.3.5動物接種試驗

4.3.5.1將病料制成5倍～10倍生理鹽水懸液或血清肉湯24h培養(yǎng)物經(jīng)稀釋后，接種家兔和小鼠，劑

量為兔腹腔注射1mL～2mL，小鼠皮下注射0.2mL～0.3mL。

4.3.5.2接種后的家兔于12h～26h死亡；小鼠于18h～24h死亡。

4.3.5.3死后采心血、腹水、肝、脾抹片鏡檢，見有大量單個、成對或3個～5個菌體相連的革蘭氏

陽性鏈球菌。

4.3.6分子生物學(xué)診斷

診斷方法見附錄A。

4.4鑒別診斷

鑒別診斷參照附錄B表B.1。

4.5確診

根據(jù)流行病學(xué)、臨床癥狀及病理變化作出初步診斷，根據(jù)實驗室診斷結(jié)果確診。

5預(yù)防

5.1用羊敗血性鏈球菌活疫苗進行預(yù)防接種，6月齡以上羊每只皮下注射1毫升，免疫期12個月。

5.2飼養(yǎng)管理符合DB63/T453.4的規(guī)定，飼料和飼料添加劑的使用符合NY/T471的規(guī)定。

5.3對調(diào)入羊只嚴(yán)格檢疫。引種時，需進行30d隔離飼喂，檢疫合格后方可混群飼養(yǎng)。

5.4對患病羊立即隔離；病死羊立即進行無害化處理。

5.5保持羊圈及場地清潔，全場用10%的石灰乳或3%的來蘇兒嚴(yán)格消毒，糞便堆積發(fā)酵。具體消毒藥

的選擇和消毒程序按NY/T472和NY/T473的規(guī)定執(zhí)行。

6治療

6.1治療原則

早發(fā)現(xiàn)，早治療；聯(lián)合用藥，防止產(chǎn)生抗藥性；藥物治療與消毒、疫苗免疫等措施相結(jié)合。

6.2藥物與方法

6.2.1發(fā)病后，對病羊和可疑羊分別隔離治療。

6.2.2可用青霉素類、頭孢類、磺胺類藥物，同時給病羊飲口服補液鹽和維生素C。

6.2.3病情嚴(yán)重的用5%葡萄糖鹽水、安鈉咖、維生素C、地塞米松、靜脈滴注。

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AA

附錄A

（規(guī)范性）

分子生物學(xué)診斷

采用雙重PCR診斷方法，用16SrRNA和種屬特異性基因sodA進行鑒定，試驗所用的器材、方法、

反應(yīng)體系、擴增程序和結(jié)果判定如下：

——器材：細(xì)菌基因組DNA提取試劑盒、PCR擴增儀、生物安全柜、高速低溫離心機、移液器、

離心管等；

——方法：用市售基因組DNA提取試劑盒，按試劑盒說明書操作，提取基因組DNA，立即進行PCR

反應(yīng)或－20℃保存；

——16SRNA和種屬特異性基因sodA引物序列：見表A.1；

——引物濃度均配制成10μmol/L；

——PCR反應(yīng)體系：見表A.2；

——PCR擴增程序：94℃5min；94℃60s，56℃60s，72℃2min，30個循環(huán)；72℃10min；

——結(jié)果判定：PCR產(chǎn)物經(jīng)1%瓊脂糖凝膠電脈，得到大小為1500bp左右和235pb左右的目的條帶，

與預(yù)期擴增片段大小相符，見圖A.1。

表A.116SrRNA和種屬特異性基因sodA引物序列

引物名稱引物序列（5′→3′）擴增片段大?。╞p）

16S-F5'-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3'

1500

16S-R5'-AAGGAGGTGATCCAGCCGCA-3'

sodAequi/zooep-F5'-CAGCATTCCTGCTGACATTCGTCAGG-3'

235

sodAequi/zooep-R5'-CTGACCAGCCTTATTCACAACCAGCC-3'

表A.2PCR反應(yīng)體系

組分1個檢測體系的加入量

2×TaqPCRMasterMix25μL

上游引物各1μL

下游引物各1μL

模板2μL

無菌無核酸酶水19μL

總體系50μL

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注：

M——DNA分子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)Trans2000；

1——羊敗血性鏈球菌病活疫苗株（馬鏈球菌獸疫亞種）；

2——質(zhì)控菌株（金黃色葡萄球菌：ATCC25923）；

3——質(zhì)控菌株（羊快疫：腐敗梭菌）；

4——質(zhì)控菌株（羊腸毒血癥：D型產(chǎn)氣莢膜梭菌）；

5——質(zhì)控菌株（羊巴氏桿菌：多殺性巴氏桿菌）；

6——陰性對照（生理鹽水）。

圖A.1圖A.116SrRNA和種屬特異性基因sodA引物PCR反應(yīng)圖

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BB

附錄B

（資料性）

鑒別診斷

表B.1給出了羊鏈球菌病與羊快疫、羊炭疽、羊腸毒血癥以及羊巴氏桿菌病的鑒別診斷。

表B.1羊鏈球菌病與羊快疫、羊炭疽、羊腸毒血癥以及羊巴氏桿菌病的鑒別診斷

病名致病菌臨床癥狀剖檢變化染色鏡檢

鼻液呈漿液性或膿性，咽主要臟器廣泛性出血，并呈成對或3個～5個短

羊鏈球菌病鏈球菌喉腫脹、頜下淋巴結(jié)腫大，彌漫狀態(tài)，漿膜面常覆有粘鏈排列的革蘭氏陽

呼吸困難，咳嗽稠、絲狀的纖維素樣物質(zhì)性球菌

皮下帶血，胸腔、腹腔有大

突然死亡，四肢張開，尸革蘭氏陽性長桿狀

羊快疫腐敗梭菌量淡紅色混濁液，肝臟、心

體腐爛快或長絲狀桿菌

臟如煮熟狀

病程急，多發(fā)于夏季，天

見竹節(jié)狀革蘭氏陽

羊炭疽炭疽桿菌然孔出血，血液呈煤焦油不可剖檢

性大桿菌

狀且凝固不良

皮下很少見帶血膠樣浸潤，革蘭氏陽性厭氧粗

羊腸毒血癥D型產(chǎn)氣莢膜梭菌四肢常呈游泳狀，血樣便

腎臟軟化，大腸內(nèi)出血嚴(yán)重大桿菌

革蘭氏陰性兩極濃

羊巴氏桿菌多殺性巴氏桿菌高熱、呼吸困難皮下膠樣浸潤

染短桿菌

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參考文獻(xiàn)

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國農(nóng)業(yè)出版社,2018.

[5]B?verudV,Johansso