DB22-T2959-2018-熒光定量基因快速檢測技術規(guī)程-吉林省

ICS11.220DB22C05吉林省地方標準DB22/T2959—2018熒光定量基因快速檢測技術規(guī)程TechnicalregulationsfordetectingDNArapidlybyfluorescencequantitationPCR吉林省市場監(jiān)督管理廳發(fā)布DB22/T2959—2018前言本標準按照GB/T1.1—2009給出的規(guī)則起草。本標準由吉林省衛(wèi)生健康委員會提出并歸口。本標準起草單位：吉林大學。本標準主要起草人：姜艷芳、張鵬、鄒紅雁、胡馨元、劉思文、邵丹、何佳雪、劉勇、李濤。IDB22/T2959—2018熒光定量基因快速檢測技術規(guī)程1范圍本標準規(guī)定了熒光定量基因快速檢測技術的檢測對象、樣本采集、檢測流程、檢測報告。本標準適用于結核分枝桿菌及利福平耐藥、金黃色葡萄球菌和耐甲氧西林金黃色葡萄球菌、艱難梭菌。2檢測對象2.1疑似為結核病的所有成人及兒童患者。2.2疑似金黃色葡萄球菌和耐甲氧西林金黃色葡萄球菌感染的患者。2.3疑似艱難梭菌和高致病性艱難梭菌感染的患者。3樣本采集3.1樣本類型3.1.1患者先用清水漱口2次，深吸氣后用力呼出，從肺部深處咳出痰液至少1ml于一次性無菌痰盒中。采集好的樣本標記后，在2℃～8℃冷藏條件，冷鏈運輸，運輸時間不得超過24小時。檢測實驗室應制定本實驗室樣本的接收要求，可拒絕接收以下樣本，并將拒收原因反饋給臨床科室：a)樣本量不滿足3.1要求或含血量過高，采集容器不滿足3.1要求；b)沒有按照3.2以及3.3規(guī)定保存及運輸?shù)臉颖尽?DB22/T2959—20184檢測流程4.1檢測應在生物安全柜內按照以下步驟進行操作：a)痰液、肺泡灌洗液、胸腹水、關節(jié)腔積液、淋巴穿刺組織、尿液等樣本檢測結核分枝桿菌及利福平耐藥：1)使用試劑盒內提供的專用無菌移液管轉移液化的樣本，樣本應足量；2)打開檢測盒的蓋子，將處理后的樣本由檢測盒的加樣孔緩緩加入；3)蓋緊檢測盒的蓋子，準備開始檢測；4)打開電腦，打開熒光定量基因快速檢測儀；5)運行熒光定量基因快速檢測儀系統(tǒng)軟件；6)在熒光定量基因快速檢測儀系統(tǒng)窗口，創(chuàng)建測試，掃描檢測盒的條形碼，系統(tǒng)軟件可以自動讀取以下信息：測試試劑、試劑批號標識、檢測盒序列號和有效期；7)在樣本編號框中，輸入樣本編號；8)開始測試；9)打開綠燈閃爍的儀器模塊門，放入檢測盒；10)關門，測試開始，綠燈停止閃爍，測試完成后，指示燈熄滅；11)反應結束后，等系統(tǒng)自動對該模塊解鎖，開門，取出檢測盒；12)處理使用過的檢測盒；13)打印報告。6)打開電腦，打開熒光定量基因快速檢測儀；7)運行熒光定量基因快速檢測儀系統(tǒng)軟件；8)在熒光定量基因快速檢測儀系統(tǒng)窗口，創(chuàng)建測試，掃描檢測盒的條形碼，系統(tǒng)軟件可以自動讀取以下信息：測試試劑、試劑批號標識、檢測盒序列號和有效期；9)在樣本編號框中，輸入樣本編號；1)從包裝中取出檢測盒、拭子、樣本處理液；2)將拭子短暫置入未成形糞便樣本中，拭子無需完全浸透；3)將拭子插入裝有樣本處理液的小瓶中；2DB22/T2959—20184)握住靠近小瓶邊緣的拭子管，將拭子從處理液小瓶底部提起幾毫米，將管子壓向小瓶邊緣并將其折斷，確保拭子足夠短，以使蓋能蓋緊；5)蓋上蓋，高速漩渦震蕩10秒鐘；6)打開檢測盒蓋，使用潔凈的移液管，將全部樣本試劑檢測盒中，蓋上檢測盒蓋；7)打開電腦，打開熒光定量基因快速檢測儀；8)運行熒光定量基因快速檢測儀系統(tǒng)軟件；9)在熒光定量基因快速檢測儀系統(tǒng)窗口，創(chuàng)建測試，掃描檢測盒的條形碼，系統(tǒng)軟件可以自動讀取以下信息：測試試劑、試劑批號標識、檢測盒序列號和有效期；10)在樣本編號框中，輸入樣本編號；11)開始測試；12)打開綠燈閃爍的儀器模塊門，放入檢測盒；13)關門，測試開始，綠燈停止閃爍，測試完成后，指示燈熄滅；14)反應結束后，等系統(tǒng)自動對該模塊解鎖，開門，取出檢測盒；15)處理使用過的檢測盒；16)打印報告。4.2質量控制4.2.1樣本處理質控4.2.1.1在每個檢測盒中，樣本處理質控均包含干孢子盒形式的非傳染性孢子或球芽孢桿菌孢子，用于判斷樣本是否得到充分處理。4.2.1.2如果存在有機體，樣本處理質控可確認結核分枝桿菌、金黃色葡萄球菌、耐甲氧西林金黃色葡萄球菌以及艱難梭菌已經(jīng)裂解，并可確認樣本處理是否充分，反應是否完整。4.2.1.3樣本處理質控可監(jiān)測PCR反應體系中是否存在基因擴增抑制因子。樣本處理質控在陰性樣本中必須為陽性，在陽性樣本中可能為陰性也可能為陽性。4.2.1.4如果樣本處理質控符合標準，則樣本處理質控為“合格”，如果在陰性測試中沒有檢測到樣本處理質控，則檢測結果為“無效”。在PCR反應開始前，熒光定量基因快速檢測儀會測量從探針發(fā)出的熒光信號，用以監(jiān)測凍干珠的復溶、反應管加樣、探針的完整性以及染料的穩(wěn)定性。如果探針質控符合標準，則視為“合格”。5.1檢測報告須經(jīng)由具備臨床醫(yī)學檢驗技術的醫(yī)務人員審核并簽發(fā)，報告模板見附錄B。5.2報告應包括以下信息：3DB22/T2959—2018a)患者的姓名、性別、年齡、樣本類型；b)診斷、科室、住院號、條碼號；c)病區(qū)、床號、樣本號、送檢醫(yī)生；d)每一個檢測項目的測定結果、正常參考范圍；e)采樣時間、接收時間、報告時間；f)檢測者、審核者；g)其他相關提示。4DB22/T2959—2018AA附錄A（資料性附錄）實驗樣本記錄表結核分枝桿菌及利福平耐藥快速檢測、金黃色葡萄球菌和耐甲氧西林金黃色葡萄球菌核酸（DNA）檢測、艱難梭菌核酸（DNA）檢測實驗樣本記錄表A.1。表A.1實驗樣本記錄表檢驗項目名稱：姓名性別年：本樣本狀開單開單診斷科室醫(yī)生流水號：檢測結果序號年齡住院條碼接收樣類型號/門號診號日期態(tài)男女男女男女男女男女男女男女男女男女男女男女男女男女男女男女男女男女男女男女正常___正常___正常___正常___正常___正常___正常___正常___正常___正常___正常___正常___正常___正常___正常___正常___5DB22/T2959—2018BB附錄B（資料性附錄）報告模板結核分枝桿菌及利福平耐藥快速檢測報告單見表B.1。表B.1結核分枝桿菌及利福平耐藥快速檢測報告單姓名：性別：年齡：樣本種類：診斷：科室：門診：送檢醫(yī)生：樣本號：病區(qū)：床號：條碼號：檢測項目測定結果參考范圍陰性結核分枝桿菌復合物DNA利福平耐藥ropB基因突變采樣時間：陰性接收時間：報告時間：檢