DB22-T2908-2018-長白山林蛙油的測定高效液相色譜法-吉林省

ICS67.050DB22X04吉林省地方標(biāo)準(zhǔn)DB22/T2908—2018長白山林蛙油的測定高效液相色譜法DeterminationofchangbaimountainranaeoviductusHPLCmethod吉林省市場監(jiān)督管理廳發(fā)布DB22/T2908—2018前言本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T1.1-2009和GB/T20001.4-2015給出的規(guī)則起草。本標(biāo)準(zhǔn)由吉林省林業(yè)廳提出并歸口。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：吉林大學(xué)。本標(biāo)準(zhǔn)起草人:王永生、徐陽、王詩涵、鮑慧瑋、趙中原、崔慶艷、肖瑤、劉敏、王艷偉、房永清、王道君、王仁祥、伊常青。IDB22/T2908—2018長白山林蛙油的測定高效液相色譜法1范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了用高效液相色譜法對(duì)長白山林蛙油（ChangbaimountainRanaeOviductus）進(jìn)行定性測定。本標(biāo)準(zhǔn)適用于長白山林蛙油的測定。2規(guī)范性引用文件下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T19507地理標(biāo)志產(chǎn)品吉林長白山中國林蛙油3術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。長白山林蛙油changbaimountainranaeoviductus長白山林蛙油是主產(chǎn)于長白山的林蛙油，即《中華人民共和國藥典》2015版一部收載的哈蟆油，為蛙科動(dòng)物中國林蛙RanatemporariachensinensisDavid雌蛙的輸卵管，經(jīng)采制干燥而得。4原理膽固醇對(duì)照品（供鑒別用）（C27H46O)。色譜乙腈（C2H3N）。1DB22/T2908—20186.340目篩。6.4圓底燒瓶（100mL）。6.5量筒（50mL）。6.6水浴鍋。6.7普通漏斗（100mL）。6.8濾紙。6.9圓底燒瓶（250mL）。6.10旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀。6.11循環(huán)水式真空泵。6.12容量瓶（2mL）。6.13微孔濾膜（0.45μm）。6.14容量瓶（100mL）。6.15高效液相色譜儀。6.16十八烷基鍵合硅膠色譜柱（4.6mm×250mm，5μm）。7樣品符合GB/T19507要求的長白山林蛙油。8試驗(yàn)步驟8.1試樣制備8.2.1精密稱定上述粉末約3g（6.1），置于100mL圓底燒瓶（6.4）中，加入無水乙醇（5.1）40mL（6.5），80℃水浴回流提取15min（6.6），放冷，過濾（6.7，6.8），濾渣再同法提取2次，合并濾液（6.9），減壓回收乙醇（6.10，6.11），得提取物。8.2.2取上述提取物（8.2.1），加入適量二氯甲烷（5.2）溶解，并轉(zhuǎn)移至2mL的容量瓶（6.12）中，揮干，加甲醇（5.3）定容至刻度，搖勻。用0.45μm微孔濾膜（6.13）濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。精密稱取膽固醇對(duì)照品（5.4）約10mg（6.1），置于10mL容量瓶中（6.14），加甲醇溶解并定容至刻度，配制成濃度為1mg/mL的對(duì)照品溶液。高效液相色譜儀（6.15），十八烷基鍵合硅膠色譜柱（6.16）；流動(dòng)相：乙腈（A）-水（B）梯度洗脫（5.5，5.6），洗脫條件見表1；檢測波長：215nm；柱溫：30℃；進(jìn)樣量：5μL。2DB22/T2908—2018時(shí)間min流動(dòng)相A%流動(dòng)相B%流速mL/min0～2020～2727～2929～4040～5555～6363～8000→1276100100→882412276240.5176→8585→10010024→1515→00228.5試樣測定分別精密吸取對(duì)照品溶液5μL（8.3）、供試品溶液5μL（8.2），注入高效液相色譜儀（6.15），按“8.4”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測定，記錄色譜圖。9試驗(yàn)數(shù)據(jù)處理供試品圖譜中應(yīng)有10個(gè)特征峰，與對(duì)照品參照物峰相應(yīng)的峰為S峰（見附錄A圖A,1），計(jì)算各特征峰與S峰的相對(duì)保留時(shí)間，其相對(duì)保留時(shí)間應(yīng)在規(guī)定值的±10%之內(nèi)。規(guī)定值為：0.10（峰1）、0.24（峰2）、0.28（峰3）、0.38（峰4）、0.67（峰5）、0.68（峰6）、0.71（峰7）、0.73（峰8）、0.74（峰9）、1.00（峰S）（見附錄A圖A.2）。積分參數(shù)斜率靈敏度為1.2；峰寬為0.1；最小峰面積為1.1；最小峰高為0.2。e)在試驗(yàn)過程中觀察到的任何異