《植物組織培養(yǎng)》課件 項(xiàng)目4 常見(jiàn)植物組培方法與易發(fā)問(wèn)題的處理

任務(wù)一器官培養(yǎng)（一）莖段培養(yǎng)

任務(wù)二器官培養(yǎng)（二）植物的再生培養(yǎng)

任務(wù)三培養(yǎng)物的不良表現(xiàn)及改進(jìn)措施任務(wù)四花卉的組織培養(yǎng)任務(wù)五水果作物的組織培養(yǎng)任務(wù)六植物液體培養(yǎng)常見(jiàn)植物組配方法與易發(fā)問(wèn)題處理項(xiàng)目四常見(jiàn)植物組培方法與易發(fā)問(wèn)題的處理任務(wù)一器官培養(yǎng)（一）

一般掌握離體根培養(yǎng)的取材部位和培養(yǎng)基的選擇；掌握莖尖培養(yǎng)的種類和操作步驟；掌握莖段培養(yǎng)中材料的選擇、處理及培養(yǎng)基的調(diào)整；知識(shí)目標(biāo)123能夠根據(jù)不同植物及種類選擇合適的外植體進(jìn)行啟動(dòng)培養(yǎng)；能夠根據(jù)不同的植物器官及器官狀態(tài)，選擇合適的滅菌劑和適宜的滅菌時(shí)間，對(duì)外植體進(jìn)行表面處理與滅菌；會(huì)通過(guò)觀察試管苗的長(zhǎng)勢(shì)，大體判斷采取何種措施改善培養(yǎng)條件；熟練外植體滅菌的工藝操作流程；熟練各種試管苗繼代培養(yǎng)過(guò)程中的切割方式與技術(shù)；熟練無(wú)菌操作技術(shù)。技能目標(biāo)123456學(xué)習(xí)提示多動(dòng)手，勤實(shí)踐；多比較，多聯(lián)想，勤歸納；手、口、腦并用，學(xué)做合一。理論閱讀

植物器官培養(yǎng)主要是指離體的根、莖、葉、花器和果實(shí)、種子的無(wú)菌培養(yǎng)，是植物組織培養(yǎng)中最主要的一個(gè)方面。植物器官培養(yǎng)不僅是研究器官生長(zhǎng)、營(yíng)養(yǎng)代謝、生理生化、組織分化和形態(tài)建成的最好材料和方法，而且具有重要的應(yīng)用價(jià)值。理論閱讀實(shí)際應(yīng)用

植物器官培養(yǎng)可利用莖、葉和花器培養(yǎng)建立的試管培養(yǎng)物，進(jìn)行名優(yōu)特新品種的快速繁殖；利用莖尖培養(yǎng)可以得到脫毒試管苗，解決品種的退化問(wèn)題，提高產(chǎn)量和品質(zhì)；將植物器官作誘變處理，利用器官培養(yǎng)可得到突變株，進(jìn)行細(xì)胞的突變育種。實(shí)際應(yīng)用

離體根培養(yǎng)是進(jìn)行根系生理和代謝研究最優(yōu)良的實(shí)驗(yàn)體系。因?yàn)楦瞪L(zhǎng)快，代謝強(qiáng)，變異小，能根據(jù)研究需要，改變培養(yǎng)基的成分來(lái)研究其營(yíng)養(yǎng)吸收、生長(zhǎng)和代謝的變化。在工廠化生物反應(yīng)器系統(tǒng)中通過(guò)工藝調(diào)控實(shí)現(xiàn)大規(guī)模根培養(yǎng)，不受環(huán)境和季節(jié)的限制，隨時(shí)隨地生產(chǎn)根培養(yǎng)物，進(jìn)行藥物、微量活性物質(zhì)及一系列次生代謝產(chǎn)物的工廠化生產(chǎn)。另一方面，由根細(xì)胞可再生成植株用于生產(chǎn)實(shí)踐。第一節(jié)根的培養(yǎng)一、根無(wú)性繁殖系的建立1.外植體

根的培養(yǎng)材料一般來(lái)自無(wú)菌種子發(fā)芽產(chǎn)生的幼根或植株根系經(jīng)滅菌處理后的切段。2.根無(wú)性繁殖系的建立

將種子進(jìn)行表面消毒，在無(wú)菌條件下萌發(fā)，待根伸長(zhǎng)后從根尖一端切取長(zhǎng)1.2cm的根尖（或植株的根系經(jīng)表面滅菌后）接種于培養(yǎng)基中。這些根的培養(yǎng)物生長(zhǎng)甚快，幾天后發(fā)育出側(cè)根。待側(cè)根生長(zhǎng)約一周后，即切取側(cè)根的根尖進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)，它們又迅速生長(zhǎng)并長(zhǎng)出側(cè)根，又可切下進(jìn)行培養(yǎng)，如此反復(fù)，就可得到從單個(gè)根尖衍生而來(lái)的離體根的無(wú)性繁殖系。這種根可用來(lái)進(jìn)行根系生理生化和代謝方面的實(shí)驗(yàn)研究。油棕根培養(yǎng)（引自劉進(jìn)平，2005）油棕根培養(yǎng)（引自劉進(jìn)平，2005）二、培養(yǎng)方法一、植株再生培養(yǎng)根的離體培養(yǎng)也可以用來(lái)再生植株。第一步誘導(dǎo)形成愈傷組織；第二步在再分化培養(yǎng)基上誘導(dǎo)芽的分化，在愈傷組織上分化成小植株。

需要注意的是，愈傷組織如果先分化形成根則往往抑制芽的形成。再生培養(yǎng)流程再生培養(yǎng)流程圖再生培養(yǎng)視頻

視頻

二、固氮培養(yǎng)

通過(guò)分離和培養(yǎng)具有固氮作用的根瘤菌，接種到禾谷類等作物的試管苗根系中，可以實(shí)現(xiàn)谷物直接利用生物固氮的捷徑。通過(guò)選擇有效的適當(dāng)濃度的誘瘤劑誘導(dǎo)根瘤菌侵入試管苗根部結(jié)瘤固氮，固氮菌接種時(shí)要給根系創(chuàng)造傷口，以利于根瘤菌的侵入。接種根瘤菌形成的根瘤具有一定的固氮活性并向宿主提供氮素，能促進(jìn)植株生長(zhǎng)和氮營(yíng)養(yǎng)的改善，無(wú)論在株高、鮮重和葉綠素含量都有提高。

二、培養(yǎng)方法三、影響因素1.植物種類2.培養(yǎng)基多為濃度低的White培養(yǎng)基，許多植物在1/2MS培養(yǎng)基上能生根。糖的使用濃度應(yīng)稍低，如玫瑰生根蔗糖為2%。3.生長(zhǎng)物質(zhì)培養(yǎng)基中添加適宜濃度的生長(zhǎng)素有利于根的形成和生長(zhǎng)，常用生長(zhǎng)素為IAA、NAA、IBA，濃度范圍一般為0.0-1.0mg/L。三、影響因素4.pH根的培養(yǎng)適宜的pH范圍為5.0~6.0，5.光照大多數(shù)人認(rèn)為，黑暗有利于根的形成。試管苗的生根一般無(wú)需考慮光照的影響，有時(shí)加一點(diǎn)活性炭可減弱光照，對(duì)植物的生根比較有利。6.溫度生根溫度一般控制在16~25℃。第二節(jié)莖尖培養(yǎng)

意義：莖尖不僅生長(zhǎng)速度快、繁殖率高、不易產(chǎn)生遺傳變異，而且是獲得無(wú)病毒苗木的有效途徑，故莖尖培養(yǎng)是植物組織培養(yǎng)最常用的試材之一。類型：莖尖培養(yǎng)分為微莖尖培養(yǎng)和普通莖尖培養(yǎng)。微莖尖指帶有1～2個(gè)葉原基的生長(zhǎng)錐，其長(zhǎng)度不超過(guò)0.5mm。普通莖尖指較大的莖尖（如幾mm到幾十mm）、芽尖及側(cè)芽。這里主要講普通莖尖培養(yǎng)。這種培養(yǎng)技術(shù)簡(jiǎn)單，操作方便，莖尖容易成活，成苗所需時(shí)間短。一、普通莖尖培養(yǎng)1.取材

挑選雜菌污染少，生長(zhǎng)不久的莖尖。木本植物可在取材前對(duì)莖尖噴幾次滅菌藥劑。以保證材料不帶或少帶雜菌。用于普通莖尖培養(yǎng)，可先從植物的莖、藤或匍匐枝上切取2cm以上的頂梢。莖尖取材示意圖外植體采集與處理視頻外植體采集與處理視頻

莖尖的解剖構(gòu)造（引自劉進(jìn)平，2005）莖尖的解剖構(gòu)造一、普通莖尖培養(yǎng)2.滅菌將采到的莖尖切成0.5～1.0cm長(zhǎng)，并將大葉除去，休眠芽預(yù)先剝除鱗片。將莖尖置于流水沖洗2～4小時(shí)(視干凈程度），再在70%的酒精中處理10-30秒，然后在稀釋5～

10倍的次氯酸鈉（商品次氯酸鈉為10%）中浸10～15分鐘，最后用無(wú)菌水沖洗3～

4次，或者用0.1～

0.2%的氯化汞滅菌5～

10分鐘，無(wú)菌水沖洗5次以上。莖尖滅菌外植體滅菌視頻外植體滅菌視頻一、普通莖尖培養(yǎng)

3.接種

為了減少污染，可在接種前再剝掉一些葉片，使莖尖為0.5cm左右大小。有些植物的莖尖由于多酚氧化酶的氧化作用而發(fā)生褐化，使培養(yǎng)基變褐，影響材料的成活。所以在接種時(shí)，不能用生銹的解剖刀，動(dòng)作要敏捷，隨切隨接，減少傷口在空氣中暴露的時(shí)間，也可配制1～5%Vc液，將切下的莖尖材料浸入處理一下。接種視頻接種視頻一、普通莖尖培養(yǎng)

4.培養(yǎng)（1）培養(yǎng)基多數(shù)莖尖培養(yǎng)采用MS作為基本培養(yǎng)基或改良MS培養(yǎng)基。培養(yǎng)基中生長(zhǎng)素是必須的，如2,4-D，IAA，NAA等，一般用0.1mg/L左右，高于此濃度，往往產(chǎn)生畸變芽或形成愈傷組織。莖尖在培養(yǎng)過(guò)程中會(huì)出現(xiàn)生長(zhǎng)太慢、生長(zhǎng)太快和生長(zhǎng)正常等三種類型。

桑樹(shù)莖尖萌發(fā)

桑樹(shù)莖尖萌發(fā)

楊樹(shù)頂芽萌發(fā)成叢生芽楊樹(shù)頂芽萌發(fā)成叢生芽

一、普通莖尖培養(yǎng)

4.培養(yǎng)（2）初代培養(yǎng)

莖尖的初代培養(yǎng)主要是通過(guò)適宜的培養(yǎng)條件刺激頂芽和腋芽的生長(zhǎng)。外植體啟動(dòng)生長(zhǎng)的關(guān)鍵主要是培養(yǎng)基的激素配比與濃度，一般應(yīng)使用較高濃度的細(xì)胞分裂素和較低濃度的生長(zhǎng)素，解除頂端優(yōu)勢(shì)的抑制作用，生長(zhǎng)素濃度過(guò)高容易產(chǎn)生愈傷組織。初代培養(yǎng)視頻初代培養(yǎng)視頻一、普通莖尖培養(yǎng)

4.培養(yǎng)

（3）繼代培養(yǎng)

莖尖長(zhǎng)成的新梢，可切成若干小段，轉(zhuǎn)入到增殖培養(yǎng)基中。長(zhǎng)大后又可切成小段，再轉(zhuǎn)入新培養(yǎng)基，這樣一代一代繼續(xù)下去，便建立和維持了莖尖無(wú)性繁殖系。繼代培養(yǎng)的激素濃度要降低或用MS0培養(yǎng)基。有時(shí)也可邊進(jìn)行繼代培養(yǎng)邊進(jìn)行誘導(dǎo)生根。取比較長(zhǎng)的新梢（如2cm以上）轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基，余下較短的新梢繼續(xù)進(jìn)行繼代培養(yǎng)。繼代培養(yǎng)視頻繼代培養(yǎng)視頻一、普通莖尖培養(yǎng)

4.培養(yǎng)（4）誘導(dǎo)生根誘導(dǎo)生根多采用1/2MS培養(yǎng)基，即MS培養(yǎng)基的各種組成成份用量均減半的培養(yǎng)基。并加入一定的生長(zhǎng)素類調(diào)節(jié)物質(zhì)，如NAA、IBA等。也可將切下的新梢基部浸入50或100ppm的IBA溶液中處理4～8小時(shí)，然后轉(zhuǎn)移到無(wú)激素的生根培養(yǎng)基中。注意較高濃度的生長(zhǎng)素對(duì)生根有抑制作用。生根培養(yǎng)視頻生根培養(yǎng)視頻單芽莖段微繁示意圖

單芽莖段微繁示意圖單芽莖段增殖示意圖單芽莖段增殖示意圖叢生芽微繁示意圖（引自劉進(jìn)平，2005）叢生芽微繁示意圖叢生芽增殖示意圖叢生芽增殖示意圖（5）培養(yǎng)條件

每天照光16小時(shí)，照度1500～3000Lx即可，溫度通常為25±2℃。一般莖尖培養(yǎng)在40天左右可長(zhǎng)成新梢，進(jìn)行繼代培養(yǎng)。4.培養(yǎng)一、普通莖尖培養(yǎng)5．馴化移栽

生根培養(yǎng)一個(gè)月左右，多數(shù)新梢即可獲得生長(zhǎng)健壯而發(fā)達(dá)的根系。移植時(shí)可根據(jù)生根情況來(lái)進(jìn)行。若發(fā)現(xiàn)新梢基部生有較濃密的不定根，長(zhǎng)度在1cm以內(nèi)，就可移栽入土。移栽時(shí)通過(guò)幾天的煉苗過(guò)程，從試管中取出小植株，輕輕洗掉培養(yǎng)基。栽后給予較高的空氣濕度條件。一、普通莖尖培養(yǎng)馴化視頻馴化視頻

首先營(yíng)養(yǎng)缽的培養(yǎng)土要澆透水，所放置的床面也要澆濕，然后搭小拱棚，以減少水分的蒸騰，初期要常噴霧處理，保持拱棚薄膜上有水珠出現(xiàn)。當(dāng)發(fā)現(xiàn)小苗有生長(zhǎng)趨勢(shì)，可逐漸減少濕度將拱棚兩端打開(kāi)通風(fēng)，并且減少噴水次數(shù)。使小苗適應(yīng)濕度較小的條件。以后揭去拱棚的薄膜，并給予水分控制，少澆水或不澆水，促進(jìn)小苗長(zhǎng)得粗壯。馴化移栽

最適宜的溫度是16～20℃，春季地溫較低時(shí)，可用電熱線來(lái)加溫。光照管理上，初期可用較弱的光照，在小拱棚上加蓋遮陽(yáng)網(wǎng)或報(bào)紙等，以防陽(yáng)光灼傷小苗和增加蒸騰作用，后期可直接利用自然光照。為了提高馴化效率，可用育苗盤進(jìn)行馴化生根，選擇2cm左右孔徑的育苗盤即可?？籽ㄑb入蛭石：珍珠巖：草炭土為1︰1︰0.5的基質(zhì)。馴化移栽第三節(jié)莖段培養(yǎng)

莖段培養(yǎng)是指對(duì)植物帶有一個(gè)以上芽的外植體（包括塊莖、球莖、鱗莖的幼莖切段）進(jìn)行培養(yǎng)的技術(shù)。莖段培養(yǎng)的主要目的是進(jìn)行植物的離體快速繁殖。莖段培養(yǎng)用于快速繁殖的優(yōu)點(diǎn)在于：培養(yǎng)技術(shù)簡(jiǎn)單易行、繁殖速度較快；芽生芽方式增殖的苗木質(zhì)量好，且無(wú)病、變異小、性狀均一等。第三節(jié)莖段培養(yǎng)一、無(wú)菌培養(yǎng)物的建立1.取材

取生長(zhǎng)健壯無(wú)病蟲(chóng)的當(dāng)年生幼嫩枝條或鱗莖盤，去掉葉片，剪成3～4cm的小段。取材時(shí)注意莖的基部比頂部切段、側(cè)芽比頂芽的成活率低，所以應(yīng)優(yōu)先利用頂部的外植體，但由于每個(gè)新梢僅一個(gè)頂芽，也可利用腋芽，莖上部的腋芽培養(yǎng)效果較好。還應(yīng)注意盡量在生長(zhǎng)期取芽，如蘋果在3～6月取材的成活率為60%，7～11月下降到10%，12～2月都在10%以下。一、無(wú)菌培養(yǎng)物的建立

取材視頻取材視頻2.滅菌

20分鐘，如果材料表面有絨毛應(yīng)在消毒劑中滴加1-2滴土溫—20或80。因材料老嫩和蠟質(zhì)多少而定時(shí)間。最后用無(wú)菌水沖洗數(shù)次以致干凈，否則植物材料會(huì)受殘留滅菌劑的危害。一、無(wú)菌培養(yǎng)物的建立滅菌視頻滅菌視頻3.接種

消毒好的莖段用鋒利的解剖刀或剪刀剪去兩端消毒劑殺傷的部位，分切成單芽小段接種于預(yù)先配好的誘導(dǎo)側(cè)芽萌發(fā)的培養(yǎng)基中，一般每瓶接種一塊外植體，防止交叉感染。一、無(wú)菌培養(yǎng)物的建立接種視頻接種視頻二、培養(yǎng)方法和程序1.培養(yǎng)

最常用的基本培養(yǎng)基為MS培養(yǎng)基，加入3%蔗糖，用0.7%的瓊脂固化。培養(yǎng)條件保持25℃左右，給予充分的光照和光期。經(jīng)培養(yǎng)后莖段的切口特別是基部切口上會(huì)長(zhǎng)出愈傷組織，呈現(xiàn)稍許增大，而芽開(kāi)始長(zhǎng)長(zhǎng)，有時(shí)會(huì)出現(xiàn)叢生芽，從而得到無(wú)菌苗。

二、培養(yǎng)方法和程序

月季莖段側(cè)芽萌發(fā)（引自譚文澄、戴策剛，1991）月季莖段側(cè)芽萌發(fā)

在莖段培養(yǎng)中，促進(jìn)腋芽增殖用6-BA是最為有效的。生長(zhǎng)素雖不能促進(jìn)腋芽增殖，但可改善苗的生長(zhǎng)。GA對(duì)芽的伸長(zhǎng)有促進(jìn)作用。繼代擴(kuò)繁是莖段培養(yǎng)的主要一步。這可由二種途徑解決：一是促進(jìn)腋芽的快速生長(zhǎng)；二是誘導(dǎo)形成大量不定芽。二、培養(yǎng)方法和程序莖段快繁方式模式圖

第一種途徑的好處是不會(huì)產(chǎn)生變異，能保持品種優(yōu)良特性，且方法簡(jiǎn)便，可在各種植物上使用。每年從一個(gè)芽可擴(kuò)繁增殖10萬(wàn)株以上。莖段快繁方式模式圖第二種途徑（誘導(dǎo)形成大量不定芽）有時(shí)會(huì)產(chǎn)生變異。

繼代增殖過(guò)程所用培養(yǎng)基和生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑與初代培養(yǎng)相同，有時(shí)會(huì)稍低。二、培養(yǎng)方法和程序

生根培養(yǎng)主要是降低或除去細(xì)胞分裂素而加入生長(zhǎng)素。由于在苗增殖時(shí)施用了較高濃度的細(xì)胞分裂素，其苗中保持著一定的量，因此在生根培養(yǎng)中不需要加細(xì)胞分裂素。生長(zhǎng)素的濃度，NAA一般為0.01～1.0mg/L，IBA和IAA可稍高。

生根培養(yǎng)時(shí)最好在培養(yǎng)基中加0.3%活性炭，以促進(jìn)生根。二、培養(yǎng)方法和程序二、培養(yǎng)方法和程序2.移植

這是組織培養(yǎng)的關(guān)鍵一環(huán)。試管苗是在恒溫、濕度飽和、營(yíng)養(yǎng)豐富、激素適當(dāng)和無(wú)菌條件下生長(zhǎng)的。植物的組織發(fā)育程度不高，植株幼嫩，表皮角質(zhì)層變薄，抵抗力減弱。移植是一個(gè)由異養(yǎng)轉(zhuǎn)變?yōu)樽责B(yǎng)的過(guò)程。因此，在馴化時(shí)要進(jìn)行煉苗。然后洗凈瓊脂，小心移栽，初期濕度要大，基質(zhì)通氣良好，保濕保溫，更要精心管理等。二、培養(yǎng)方法和程序二、培養(yǎng)方法和程序馴化移栽視頻移栽成活大田定植二、培養(yǎng)方法和程序?yàn)槭裁凑f(shuō)植物器官培養(yǎng)是組織培養(yǎng)的一個(gè)最重要的方面？器官培養(yǎng)包括哪些類型？植物的離體根培養(yǎng)有何意義？普通莖尖培養(yǎng)時(shí)，怎樣取材和處理外植體？莖尖培養(yǎng)過(guò)程中會(huì)出現(xiàn)什么現(xiàn)象？怎樣解決？莖段培養(yǎng)與莖尖培養(yǎng)有什么主要區(qū)別？12345思考練習(xí)莖尖生長(zhǎng)出現(xiàn)癥狀及原因

莖尖在培養(yǎng)過(guò)程中出現(xiàn)生長(zhǎng)太慢的癥狀及可能原因：癥狀：接種后莖尖不增大，只是莖尖逐漸變綠，出現(xiàn)綠色小點(diǎn)，細(xì)胞逐漸老化而進(jìn)入休眠狀態(tài)，或者逐漸變褐死亡。原因：生長(zhǎng)素濃度太低，或是溫度過(guò)低或過(guò)高；莖尖生長(zhǎng)出現(xiàn)癥狀及原因

莖尖在培養(yǎng)過(guò)程中出現(xiàn)生長(zhǎng)太快的癥狀及可能原因：癥狀：接種后莖尖迅速增大，在莖尖基部產(chǎn)生愈傷組織，并迅速增殖，而莖尖不伸長(zhǎng)，久之莖尖也形成愈傷組織，從而喪失發(fā)育成苗的能力。原因：一是生長(zhǎng)素濃度過(guò)高，引起細(xì)胞瘋狂分裂而導(dǎo)致愈傷組織的形成。二是光照太弱或溫度太高。

莖尖在培養(yǎng)過(guò)程中生長(zhǎng)正常癥狀：

原因：接種后莖尖基部稍增大并形成少量愈傷組織，莖尖顏色逐漸變綠，并逐漸伸長(zhǎng)，葉原基發(fā)育成可見(jiàn)的小葉，進(jìn)而形成小苗。

莖尖生長(zhǎng)出現(xiàn)癥狀及原因任務(wù)一器官培養(yǎng)（一）莖段培養(yǎng)任務(wù)二器官培養(yǎng)（二）植物的再生培養(yǎng)任務(wù)三培養(yǎng)物的不良表現(xiàn)及改進(jìn)措施任務(wù)四花卉的組織培養(yǎng)任務(wù)五水果作物的組織培養(yǎng)任務(wù)六植物液體培養(yǎng)常見(jiàn)植物組配方法與易發(fā)問(wèn)題處理項(xiàng)目四常見(jiàn)植物組培方法與易發(fā)問(wèn)題的處理任務(wù)二器官培養(yǎng)（二）植物的再生培養(yǎng)

掌握離體葉片的培養(yǎng)步驟；掌握花器和種子的選擇、處理；一般掌握胚胎培養(yǎng)的類型與各自的注意事項(xiàng)。123能夠根據(jù)不同植物及種類選擇合適的外植體進(jìn)行啟動(dòng)培養(yǎng)；能夠根據(jù)不同的植物器官及器官狀態(tài)，選擇合適的滅菌劑和適宜的滅菌時(shí)間，對(duì)外植體進(jìn)行表面處理與滅菌；會(huì)通過(guò)觀察試管苗的長(zhǎng)勢(shì)，大體判斷采取何種措施改善培養(yǎng)條件；熟練外植體滅菌的工藝操作流程；熟練各種試管苗繼代培養(yǎng)過(guò)程中的切割方式與技術(shù)；熟練無(wú)菌操作技術(shù)。123456

葉的組織培養(yǎng)再生成植株的方式有二種：一種是直接誘導(dǎo)形成芽，另一種是先誘導(dǎo)形成愈傷組織，再經(jīng)愈傷組織分化成植株。后一種方式比較普遍。第四節(jié)葉的培養(yǎng)一、培養(yǎng)程序和方法1.取材與滅菌

取植物的幼嫩展開(kāi)葉片沖洗干凈，用70%酒精漂洗約10秒，再在1-2%次氯酸鈉中浸10～15分鐘，或在0.1%升汞中浸5～8分鐘，用無(wú)菌水沖洗數(shù)次，無(wú)菌的干濾紙上吸干水分。對(duì)一些粗糙或帶茸毛的葉片要延長(zhǎng)滅菌時(shí)間。一般地說(shuō)，同一葉片的柵欄組織比海綿組織處于較成熟狀態(tài)。2.接種

把滅菌過(guò)的葉組織切成約0.5cm見(jiàn)方小塊或薄片（如葉柄和子葉），接種在MS或其它培養(yǎng)基上。培養(yǎng)基中附加BA1～3mg/L，NAA0.25～1mg/L，有些植物的葉片需要加2，4-D0.5-1.0mg/L。葉片的切割方式3.培養(yǎng)

葉接種后培養(yǎng)條件為每天10～12小時(shí)光照，光強(qiáng)1500～3000Lx。培養(yǎng)約2周至4周，葉切塊開(kāi)始增厚腫大，進(jìn)而形成愈傷組織。這時(shí)應(yīng)轉(zhuǎn)移到再分化培養(yǎng)基上進(jìn)行分化培養(yǎng)，分化培養(yǎng)基的細(xì)胞分裂素含量為2mg/L左右，約10天左右，愈傷組織開(kāi)始轉(zhuǎn)綠出現(xiàn)綠色芽點(diǎn)，繼續(xù)培養(yǎng)將發(fā)育成無(wú)根苗。幼葉比成熟葉易培養(yǎng)，子葉比葉片易培養(yǎng)。其次要添加適當(dāng)?shù)纳L(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素，保證利于葉組織的脫分化和再分化。驅(qū)蚊草葉片愈傷組織分化出芽

影響的主要因素是激素的種類和濃度。但葉片的培養(yǎng)常常需要多種激素的配合使用，不同培養(yǎng)階段需要更換不同的激素組合。如杏離體葉培養(yǎng)使用1/2MS培養(yǎng)基，ZT與2，4-D的組合可誘導(dǎo)愈傷組織的產(chǎn)生，BA與NAA的組合可從愈傷組織中誘導(dǎo)不定芽的產(chǎn)生。但有些植物比較簡(jiǎn)單，可以一步直接產(chǎn)生芽，如驅(qū)蚊草在MS+6-BA0.5-1.0+IAA0.1-0.2mg/L中可以直接使葉片產(chǎn)生愈傷組織并分化出芽。二、影響離體葉培養(yǎng)的因素視頻4-2-1再生培養(yǎng)一、花器官培養(yǎng)二、種子培養(yǎng)第五節(jié)花器和種子培養(yǎng)

花器官培養(yǎng)是指對(duì)植物的整朵花或花的組成部分（如花托、花瓣、花絲、花柄、子房、花藥等）的無(wú)菌培養(yǎng)。一、

花器官培養(yǎng)1．取材從健壯植株上取未開(kāi)放的花蕾，已經(jīng)開(kāi)花的不宜用，因?yàn)橄纠щy。先用75%酒精消毒約30秒鐘，再用次氯酸鈉浸10～15分鐘，取出用無(wú)菌水沖洗數(shù)次[或氯化汞]。2．接種培養(yǎng)

用整個(gè)花蕾培養(yǎng)時(shí)，只要把花梗插入培養(yǎng)基中。若用花器的某個(gè)部分，則分別取下，切成小片，放入培養(yǎng)基中。要把花器官部分培育成小植株，要加入生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素，誘導(dǎo)形成愈傷組織或胚狀體，再分化培養(yǎng)成植株。如菊花的花瓣切片接種在含6-BA

2mg/L、NAA

0.2mg/L的MS培養(yǎng)基上，在26℃、1500Lx光照，每天光照10小時(shí)，培養(yǎng)約2周，形成少量愈傷組織。再經(jīng)1個(gè)月就分化出綠色芽點(diǎn)。非洲菊花托形成愈傷組織非洲菊花托分化出芽接種后生長(zhǎng)

種子培養(yǎng)是指對(duì)受精后發(fā)育完全的成熟種子和發(fā)育不完全的未成熟種子的無(wú)菌培養(yǎng)。利用種子培養(yǎng)可以打破種子休眠，特別對(duì)一些休眠期長(zhǎng)的植物，可以作為大量生產(chǎn)試管苗的好材料，它具有植株分化容易，無(wú)菌操作方便等特點(diǎn)。二、種子培養(yǎng)

1．種子滅菌

種皮厚或不飽滿的種子，宜用0.1%升汞消毒10～20分鐘。幼嫩的或發(fā)育不全的種子，宜用飽和漂白粉消毒15～30分鐘。若種子上有絨毛或蠟質(zhì)，應(yīng)先用95%酒精或吐溫--40處理，提高消毒效果。對(duì)殼厚難萌發(fā)的種子，可去殼培養(yǎng)。

馬藺種子的去殼培養(yǎng)2．培養(yǎng)基

若以促進(jìn)種子萌發(fā)為目的的種子培養(yǎng)，培養(yǎng)基的成分要求較簡(jiǎn)單，可不加或少加生長(zhǎng)激素。當(dāng)然，對(duì)某些發(fā)育不全的無(wú)胚乳的種子培養(yǎng)，應(yīng)提供適當(dāng)?shù)纳L(zhǎng)激素。種子培養(yǎng)的糖濃度可稍低，一般1～3%。3．接種培養(yǎng)

種子培養(yǎng)的接種較容易，把種子按每瓶3～5粒放入培養(yǎng)瓶中，均勻排列，放在20～28℃的條件下暗培養(yǎng)，發(fā)芽后盡快轉(zhuǎn)移光下，要求1000～2000Lx光強(qiáng)，每天光照10小時(shí)。一、胚胎培養(yǎng)的意義二、胚珠、子房和胚乳的培養(yǎng)

第六節(jié)胚培養(yǎng)１．克服遠(yuǎn)緣雜種的不親和性

２．使胚發(fā)育不全的植物獲得后代３．打破種子休眠，縮短育種年限一、胚胎培養(yǎng)的意義培養(yǎng)部位取材時(shí)間培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件胚珠球形胚Nistch，White，2，4-D，BA，IAA子房開(kāi)花前1-5天N6，Nistch，2，4-D，BA，IAA胚乳授粉后4～8天MS、White，0.5-3mg/L的BA及少量NAA二、胚珠、子房和胚乳的培養(yǎng)

胚與胚乳所處的位置花器官培養(yǎng)通常指花的哪些部分培養(yǎng)？常用的基本培養(yǎng)基是什么？植物胚胎培養(yǎng)分為哪些類型？各有何特點(diǎn)和要求？胚胎培養(yǎng)有何重要意義？1234Theend!任務(wù)一器官培養(yǎng)（一）莖段培養(yǎng)任務(wù)二器官培養(yǎng)（二）植物的再生培養(yǎng)任務(wù)三培養(yǎng)物的不良表現(xiàn)及改進(jìn)措施任務(wù)四花卉的組織培養(yǎng)任務(wù)五水果作物的組織培養(yǎng)任務(wù)六植物液體培養(yǎng)常見(jiàn)植物組配方法與易發(fā)問(wèn)題處理項(xiàng)目四常見(jiàn)植物組培方法與易發(fā)問(wèn)題的處理任務(wù)三培養(yǎng)物的不良表現(xiàn)及改進(jìn)措施知識(shí)目標(biāo)植物組織培養(yǎng)培養(yǎng)物的不良表現(xiàn)及改進(jìn)措施任務(wù)講解一、初始培養(yǎng)階段

二、繼代培養(yǎng)階段三、生根階段1.培養(yǎng)物水浸狀、變色、壞死、莖斷面附近干枯

可能原因：表面殺菌劑過(guò)量，消毒時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，外植體選用不當(dāng)（部位或時(shí)期）。一、初始培養(yǎng)階段

調(diào)換其他殺菌劑或降低濃度，縮短消毒時(shí)間，試用其他部位，生長(zhǎng)初期取材。

改進(jìn)措施：改進(jìn)措施2.培養(yǎng)物長(zhǎng)期培養(yǎng)幾乎無(wú)反應(yīng)

可能原因：基本培養(yǎng)基不適宜，生長(zhǎng)素不當(dāng)或用量不足，溫度不適宜。2.培養(yǎng)物長(zhǎng)期培養(yǎng)幾乎無(wú)反應(yīng)原因

改進(jìn)措施：

更換基本培養(yǎng)基或調(diào)整培養(yǎng)基成分，尤其是調(diào)整鹽離子濃度，增加生長(zhǎng)素用量，試用2,4-D，調(diào)整培養(yǎng)溫度。3.愈傷組織生長(zhǎng)過(guò)旺、疏松，后期水浸狀

可能原因：激素過(guò)量，溫度偏高，無(wú)機(jī)鹽含量不當(dāng)。

改進(jìn)措施：

減少激素用量，適當(dāng)降低培養(yǎng)溫度，調(diào)整無(wú)機(jī)鹽（尤其是銨鹽）含量，適當(dāng)提高瓊脂用量增加培養(yǎng)基硬度。4.愈傷組織太緊密、平滑或突起，粗厚，生長(zhǎng)緩慢

可能原因：細(xì)胞分裂素用量過(guò)多，糖濃度過(guò)高，生長(zhǎng)素過(guò)量。

改進(jìn)措施：

減少細(xì)胞分裂素用量，調(diào)整細(xì)胞分裂素與生長(zhǎng)素比例，降低糖濃度。5.側(cè)芽不萌發(fā),皮層過(guò)于膨大,皮孔長(zhǎng)出愈傷組織

可能原因:枝條過(guò)嫩,生長(zhǎng)素、細(xì)胞分裂素用量過(guò)多。改進(jìn)措施：減少激素用量，采用較老化枝條。1.苗分化數(shù)量少、速度慢、分枝少、個(gè)別苗生長(zhǎng)細(xì)高

可能原因：細(xì)胞分裂素用量不足，溫度偏高，光照不足。二、繼代培養(yǎng)階段

改進(jìn)措施：

增加細(xì)胞分裂素用量，適當(dāng)降低溫度，改善光照，改單芽繼代為團(tuán)塊（叢芽）繼代。2.苗分化過(guò)多，生長(zhǎng)慢，有畸形苗，節(jié)間極短，苗叢密集，微型化

可能原因：細(xì)胞分裂素用量過(guò)多，溫度不適宜。

減少或停用細(xì)胞分裂素一段時(shí)間，調(diào)節(jié)溫度。

改進(jìn)措施：3.分化率低,畸形,培養(yǎng)時(shí)間長(zhǎng)時(shí)苗再次愈傷組織化

可能原因:減少生長(zhǎng)素用量，適當(dāng)降溫。改進(jìn)措施：生長(zhǎng)素用量偏高,溫度偏高。4.葉粗厚變脆可能原因：

改進(jìn)措施：

適當(dāng)減少激素用量，避免葉片接觸培養(yǎng)基。

生長(zhǎng)素用量偏高，或兼有細(xì)胞分裂素用量偏高。5.再生苗的葉緣、葉面等處偶有不定芽分化出來(lái)

可能原因：細(xì)胞分裂素用量偏高，或表明該種植物適于該種再生方式。

改進(jìn)措施：

適當(dāng)減少細(xì)胞分裂素用量，或分階段地利用這一再生方式。6.叢生苗過(guò)于細(xì)弱，不適于生根或移栽

可能原因：細(xì)胞分裂素濃度過(guò)高或赤霉素使用不當(dāng)，溫度過(guò)高，光照短，光強(qiáng)不足，久不轉(zhuǎn)移，生長(zhǎng)空間窄。

改進(jìn)措施：

減少細(xì)胞分裂素用量，免用赤霉素，延長(zhǎng)光照時(shí)間，增強(qiáng)光照，及時(shí)轉(zhuǎn)接，降低接種密度，更換封瓶紙的種類。7.幼苗淡綠，部分失綠

可能原因：無(wú)機(jī)鹽含量不足，PH值不適宜，鐵、錳、鎂等缺少或比例失調(diào)，光照、溫度不適。

改進(jìn)措施：

針對(duì)營(yíng)養(yǎng)元素虧缺情況調(diào)整培養(yǎng)基，調(diào)好PH值，調(diào)控溫度、光照。8.幼苗生長(zhǎng)無(wú)力、發(fā)黃落葉、有黃葉、死苗夾于叢生苗中

可能原因：瓶?jī)?nèi)氣體狀況惡化，PH值變化過(guò)大，久不轉(zhuǎn)接導(dǎo)致糖已耗盡，營(yíng)養(yǎng)元素虧缺失調(diào)，溫度不適，激素配比不當(dāng)。8.幼苗生長(zhǎng)無(wú)力、發(fā)黃落葉、有黃葉、死苗夾于叢生苗中

改進(jìn)措施：

及時(shí)轉(zhuǎn)接、降低接種密度，調(diào)整激素配比和營(yíng)養(yǎng)元素濃度，改善瓶?jī)?nèi)氣體狀況，控制溫度。改進(jìn)措施1.培養(yǎng)物久不生根，基部切口沒(méi)有適宜的愈傷組織

可能原因：生長(zhǎng)素種類、用量不適宜；生根部位勇氣不良；生根程序不當(dāng)；PH值不適，無(wú)機(jī)鹽濃度及配比不當(dāng)。三、生根階段

改進(jìn)措施：

改進(jìn)培養(yǎng)程序，選用適宜的生長(zhǎng)素或增加生長(zhǎng)素用量，適當(dāng)降低無(wú)機(jī)鹽濃度，改用濾紙橋液培養(yǎng)生根等。2.愈傷組織生長(zhǎng)過(guò)快、過(guò)大，根莖部腫脹或畸形，幾條根并聯(lián)或愈合?？赡茉颍荷L(zhǎng)素種類不適，用量過(guò)高，或伴有細(xì)胞分裂素用量過(guò)高，生根誘導(dǎo)培養(yǎng)程序不對(duì)。

改進(jìn)措施：

調(diào)換生長(zhǎng)素種類或幾種生長(zhǎng)素配合使用，降低使用濃度，附加VB2或PG等減少愈傷，改變生根培養(yǎng)程序等。植物組織培養(yǎng)不同生長(zhǎng)階段，都有哪些不良表現(xiàn)，可能原因是什么，它們改進(jìn)的措施有哪些？Theend!任務(wù)一器官培養(yǎng)（一）莖段培養(yǎng)任務(wù)二器官培養(yǎng)（二）植物的再生培養(yǎng)任務(wù)三培養(yǎng)物的不良表現(xiàn)及改進(jìn)措施任務(wù)四花卉的組織培養(yǎng)任務(wù)五水果作物的組織培養(yǎng)任務(wù)六植物液體培養(yǎng)常見(jiàn)植物組配方法與易發(fā)問(wèn)題處理項(xiàng)目四常見(jiàn)植物組培方法與易發(fā)問(wèn)題的處理任務(wù)四花卉的組織培養(yǎng)掌握百合生物學(xué)特性和快速繁殖方法；掌握蘭科植物組培的大致過(guò)程；掌握胡蝶蘭花梗組培的方法。123大花蕙蘭的繼代增殖示意圖任務(wù)導(dǎo)入第一節(jié)百合的組織培養(yǎng)第二節(jié)蘭花的組織培養(yǎng)技術(shù)第三節(jié)蝴蝶蘭的培養(yǎng)

全世界已發(fā)現(xiàn)百合約89余種，主要分布地區(qū)是中國(guó)、日本、北美和歐洲等溫帶地區(qū)。北美百合協(xié)會(huì)將百合園藝品種劃分為10個(gè)種系，觀賞栽培的主要是4個(gè)種系，即亞洲百合雜種系；茶香百合雜種系；東方百合雜種系；麝香百合雜種系。株形端正，花色清白給人以清純、高雅的印象，是切花中的佳品。第一節(jié)百合的組織培養(yǎng)第一節(jié)百合的組織培養(yǎng)第一節(jié)百合的組織培養(yǎng)

我國(guó)近年來(lái)，昆明、上海、深圳的百合切花生產(chǎn)發(fā)展較快，已形成三大生產(chǎn)基地。目前國(guó)內(nèi)切花栽培的百合大多是亞洲型，主要從荷蘭、日本引進(jìn)，經(jīng)過(guò)幾年的栽培試驗(yàn)，已篩選出一批適合我國(guó)生產(chǎn)的品種。第一節(jié)百合的組織培養(yǎng)一、形態(tài)特性和生物學(xué)習(xí)性

百合是百合科百合屬植物的統(tǒng)稱，為多年生的草本植物。鱗莖無(wú)皮，廣卵形，直徑5~8cm，白色或黃白色，莖高30~90cm，直立，葉多而散生，披針形，光滑?；▎紊驍?shù)花橫向著生莖頂，花朵呈喇叭狀、筒狀，有清香?；ū幌榷送饩恚ū煌采钐幍G色。百合屬于球根花卉，要求肥沃、疏松和排水良好的沙壤土，以有利于鱗莖發(fā)育膨大。二、繁殖方法1.分球百合老鱗莖(母球)生長(zhǎng)過(guò)程中，于莖軸上逐漸形成小鱗莖，稱"莖生小球"，經(jīng)一年栽培，可分生1~3個(gè)甚至7~9個(gè)小球，適當(dāng)深栽及摘除花蕾，均有助于子球發(fā)生，小鱗莖待明春播于苗床，大者1年，小者培養(yǎng)2~3年可當(dāng)種球。2.鱗片扦插取成熟健壯的老鱗莖，陰干數(shù)日后剝下鱗片，斜插于濕潤(rùn)木屑或顆粒泥炭中，溫度以20~25℃為適，一般8~9月插，經(jīng)2~4個(gè)月生根發(fā)葉，并在鱗片基部生長(zhǎng)出小磷片，基質(zhì)含水量在60％~80％，前期高水分，后期低水分，過(guò)分濕潤(rùn)易腐爛。為防止病菌感染，應(yīng)盡量除去外層鱗片，1片鱗片可獲50～60個(gè)子球，自鱗片扦插、生根、發(fā)芽至植株開(kāi)花，一般需2~3年。三、百合的組織培養(yǎng)

百合的組織培養(yǎng)繁殖自20世紀(jì)70年代后期開(kāi)始，日本人以葉片為外植體誘導(dǎo)出大花卷丹的小植株，我國(guó)于80年代初由蘭洲百合的花藥、花絲等培育出完整小植株。80年代以后，培養(yǎng)出去病毒的百合種苗和通過(guò)胚培養(yǎng)獲得遠(yuǎn)緣雜交的新品種。1.花器的組織培養(yǎng)(1)取材和滅菌采取開(kāi)花前數(shù)日的花蕾。花蕾的表面用酒精滅菌，再在酒精燈上灼燒數(shù)秒鐘，以后放在無(wú)菌培養(yǎng)皿內(nèi)剝開(kāi)花蕾，花絲，子房，花柱等分別切取3～5mm長(zhǎng)，接種到培養(yǎng)基上。也可用花瓣和萼片培養(yǎng)。

(2)培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件采用MS，KC等培養(yǎng)基，蔗糖濃度以7.0％為適，這樣發(fā)芽和子球形成率可達(dá)90％左右。光照度2000Lx，每天照用15h，保溫20℃。

培養(yǎng)條件

花柱、花梗、莖段等用MS+IAAl+BA0.2培養(yǎng)基，葉片用MS+NAAI+BA0.1；分化植株時(shí)，MS+NAA2+IBA0.4+Kt0.05，培養(yǎng)基內(nèi)均加蔗糖3％和瓊脂0．7％，pH值5.8—6.5。

(3)生長(zhǎng)情況花器部位從百合花器不同部位的培養(yǎng)來(lái)看，以花絲的部位為好，成活率很高，發(fā)芽較多，再是子房和花柱部分?？蓮母鞑课话l(fā)芽，形成子球，通常是經(jīng)過(guò)兩個(gè)途徑，一個(gè)是從切中處形成愈傷組織，以后再發(fā)芽；再是從切口直接產(chǎn)生芽。麝香百合花器培養(yǎng)得到的植株，生長(zhǎng)約6個(gè)月即可開(kāi)花，未發(fā)現(xiàn)不正常現(xiàn)象，只是母株的花較大，且全株無(wú)病毒癥狀。

百合鱗片等培養(yǎng)，對(duì)于擴(kuò)大培養(yǎng)材料來(lái)源，加快繁殖速度和培養(yǎng)得到無(wú)病毒苗等皆有重要意義。2.鱗片組織培養(yǎng)

初代培養(yǎng)：

由于其鱗莖材料都生長(zhǎng)在土中，受土壤微生物的影響，所以污染率相當(dāng)高。為此外植體消毒要嚴(yán)加注意，可應(yīng)用幾種消毒劑并用的方法。取0．5cm2鱗片小塊接人MS+2，4-D1+IAAI+Kt0．5誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，置于20土2℃，照光9-10h／d，光強(qiáng)1200Lx條件下培養(yǎng)。

接種后2周，即有98％左右的鱗片切塊在近軸面或邊緣上有淡黃色的不定芽原基呈環(huán)狀突起，多數(shù)每塊上有2~4個(gè)，這些不定芽原基繼續(xù)生長(zhǎng)4周后，可形成中間抽出綠色的白色小鱗莖，在小鱗莖基部發(fā)生一些粗壯的根。將幼苗切成1.5~2cm長(zhǎng)的片斷，接種到誘導(dǎo)愈傷組織的培養(yǎng)基上。3周后葉子的基部、葉脈、葉緣上均可誘導(dǎo)出一團(tuán)團(tuán)淡黃色的愈傷組織。初代培養(yǎng)

繼代培養(yǎng)（分化培養(yǎng)）可用MS+NAA2+IBA0．4+Kt0.05培養(yǎng)基。將愈傷組織轉(zhuǎn)移到分化培養(yǎng)基上，10周后，愈傷組織逐漸膨大，分化出許多大小不等的鱗莖，并在小鱗莖的基部長(zhǎng)出許多粗壯的根。有少數(shù)的小鱗莖中間可長(zhǎng)出綠芽。將小鱗莖分離出以后，留下的愈傷組織轉(zhuǎn)移到相同的新鮮分化培養(yǎng)基上，一段時(shí)間后仍能分化出小鱗莖。

試管苗移栽時(shí)首先應(yīng)把根部的培養(yǎng)基清洗干凈。移栽前，放在4~10℃低溫條件下鍛煉2～3周，這樣移栽后的幼苗生長(zhǎng)更加健壯。移栽幼苗最好用消毒的腐殖土或泥炭土加蛭石的混合基質(zhì)，育苗盤必須清洗消毒。同時(shí)，移栽后注意濕度管理，相對(duì)濕度控制在80％~90％。同時(shí)要防止烈日曝曬，后期幼苗不宜澆水過(guò)多，并及時(shí)噴灑藥劑預(yù)防病蟲(chóng)危害。繼代培養(yǎng)（分化培養(yǎng)）

百合切花栽培中首先要解決的技術(shù)問(wèn)題是：避免因球根的休眠而導(dǎo)致發(fā)芽率不高及盲花。由于同一圃場(chǎng)生產(chǎn)的球根，其休眠狀態(tài)各種各樣，尤其休眠深的球根，僅靠貯藏?zé)o法打破休眠。

需要人工打破休眠

四、打破休眠的方法1.冷藏

13～15℃預(yù)冷，3～5℃冷藏6-7周。2.溫水浸泡開(kāi)始于48℃的溫水中，每隔2～3min提起再泡入，反復(fù)2～3次，然后在45℃溫水中浸泡1h。嚴(yán)格掌握水溫。3.激素處理采用1000xGA溶液浸泡，為避免發(fā)根阻礙，可先將球根倒置浸泡一半，而后恢復(fù)正常位置予以靜置。四、打破休眠的方法第二節(jié)蘭花的組織培養(yǎng)技術(shù)

蘭花系蘭科植物，在自然條件下主要靠分株繁殖，繁殖率一年只有幾倍，所以無(wú)法大量繁殖生產(chǎn)，而且由于長(zhǎng)期進(jìn)行無(wú)性繁殖，帶病毒株增多，逐漸使種性降低，影響生長(zhǎng)。

法國(guó)Morel(1952年)等以大麗花莖尖進(jìn)行培養(yǎng)試驗(yàn)，得到了無(wú)病毒植株。后來(lái)他觀察到虎頭蘭的莖尖在無(wú)菌培養(yǎng)基上能形成扁圓形的小球體，這些小球體與種胚發(fā)育成的原球體非常相似，故稱為原球莖。原球莖增殖很快，并可形成幼苗。這一方法和技術(shù)很快在蘭花生產(chǎn)上得到了廣泛的應(yīng)用，成為“蘭花工業(yè)”。

蘭花培養(yǎng)成功的關(guān)鍵，首先是形成無(wú)性繁殖系原球莖。國(guó)蘭原球莖的增殖國(guó)蘭原球莖發(fā)芽圖

蘭科植物可以培養(yǎng)的部位主要是頂芽和側(cè)芽，個(gè)別可從葉片培養(yǎng)得植株。

1.新芽的莖尖莖尖是細(xì)胞分裂最旺盛的部分，也是培養(yǎng)成功率最高的部位。

2.花梗當(dāng)蘭花開(kāi)花約一個(gè)月后，剪取其花梗頂端及若干個(gè)花梗腋芽。一、培養(yǎng)部位1.芽的準(zhǔn)備和滅菌取2～6cm大小切取下來(lái)，流水沖洗，并把最外面的1～2片苞葉去掉，再用10％次氯酸鈉或漂白粉溶液(10g漂白粉溶解于140ml水中，充分?jǐn)嚢鑴蚝?，靜置約20min，取上清液)中浸10～15min。剝離和切割。容易產(chǎn)生褐變的，在切割時(shí)應(yīng)將芽放在無(wú)菌水中操作，這樣會(huì)比在空氣中褐變的機(jī)會(huì)少些。以消除病毒為目的時(shí)要盡量小些，可以小到0.1mm：若以繁殖為目的，培養(yǎng)物可在2～5mm左右。二、莖尖的選取、滅菌和接種2.接種

莖尖接種以固體培養(yǎng)基為好，但因?qū)俣?，如蕙蘭屬在液體培養(yǎng)基培養(yǎng)形成原球莖后則用固體培養(yǎng)基進(jìn)行繼代培養(yǎng)，而卡德蘭屬和石斛屬這一類易變褐枯死的屬，以在液體培養(yǎng)基為好。2.接種3.繼代培養(yǎng)接種后1～2個(gè)月培養(yǎng)的莖尖即可形成原球莖球狀體，以后即發(fā)芽生根長(zhǎng)葉。應(yīng)在其發(fā)芽前把它切成小塊進(jìn)行轉(zhuǎn)移，讓它繼續(xù)不斷地形成原球莖球狀體。這樣連續(xù)的進(jìn)行繼代培養(yǎng)，短時(shí)間可以得到大量的原球莖球狀體。4.培養(yǎng)基對(duì)于許多蘭花來(lái)說(shuō)，MS培養(yǎng)基最好。另外KnudsonC(KC)培養(yǎng)基也不錯(cuò)。

5.試管苗的移栽苗有3～4葉大小，根2～3條時(shí)可移植。(1)從試管內(nèi)取的苗用水將瓊脂沖洗掉，沖洗不徹底會(huì)發(fā)生霉菌腐爛。(2)經(jīng)水沖洗的苗放在舊報(bào)上，吸干水分陰晾1h再定植。(3)管理上，50％的弱光，溫度20～25℃，保持一定的濕度，不能完全密閉，也要注意通風(fēng)。根在開(kāi)始生長(zhǎng)后可1周澆一次1000倍的復(fù)合肥料。第三節(jié)蝴蝶蘭的培養(yǎng)(1)將芽除去葉后，用水沖洗，10％的漂白粉滅菌15min。除去葉原基后，用5％的漂白粉滅菌l0min，以后用無(wú)菌水沖洗3~5次。(2)切取莖尖和各葉基部的腋芽，約2~3mm大小，接種到培養(yǎng)基中。(3)培養(yǎng)基采用VW培養(yǎng)基，添加15％CM進(jìn)行液體培養(yǎng)，或進(jìn)行固體培養(yǎng)。1.莖尖的培養(yǎng)莖尖圖示(4)培養(yǎng)條件為溫度25℃，光照強(qiáng)度2000Lx，照明16～24h。液體培養(yǎng)基用60r／min的速度進(jìn)行振蕩培養(yǎng)，培養(yǎng)7～10d再轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)基，培養(yǎng)1個(gè)月后轉(zhuǎn)移到固體培養(yǎng)基。在這種條件下培養(yǎng)1個(gè)月即可形成原球莖球狀體，以后再進(jìn)行繼代培養(yǎng)，不斷繁殖原球莖球狀體。1.莖尖的培養(yǎng)(1)采芽將帶腋芽的花梗進(jìn)行沖洗，用10％的漂白粉溶液表面滅菌20min，除去腋芽的苞葉，再在5％的漂白粉溶液中表面滅菌3min，無(wú)菌水沖洗凈。

(2)不帶花梗組織，僅取腋芽，接種到培養(yǎng)基上。2.花梗腋芽的培養(yǎng)蝴蝶蘭圖示(3)培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件：誘芽培養(yǎng)基：MS+BA3誘導(dǎo)原球莖：MS+BA5+NAA0.5增殖：MS+BA3+NAA0.2+炭1.5克/L生根：1/2MS+BA1+NAA0.5PH：5.4培養(yǎng)條件是光照強(qiáng)度2000Lx，光照時(shí)間每天13h，保持恒溫25℃。2.花梗腋芽的培養(yǎng)條件

生根之前可以進(jìn)行過(guò)渡培養(yǎng)，不加激素。試管苗的移栽用苔蘚作基質(zhì)。2.花梗腋芽注意事項(xiàng)

百合的生物學(xué)特性怎樣?怎樣用鱗莖進(jìn)行組織培養(yǎng)?

蘭科植物培養(yǎng)過(guò)程包括哪幾個(gè)環(huán)節(jié)?

蝶蘭怎樣用花梗組織培養(yǎng)方法繁殖?123Theend!任務(wù)一器官培養(yǎng)（一）莖段培養(yǎng)任務(wù)二器官培養(yǎng)（二）植物的再生培養(yǎng)任務(wù)三培養(yǎng)物的不良表現(xiàn)及改進(jìn)措施任務(wù)四花卉的組織培養(yǎng)任務(wù)五水果作物的組織培養(yǎng)任務(wù)六植物液體培養(yǎng)項(xiàng)目四常見(jiàn)植物組培方法與易發(fā)問(wèn)題的處理任務(wù)五水果作物的組織培養(yǎng)

掌握草莓微莖尖培養(yǎng)的大致過(guò)程，了解鑒定草莓無(wú)毒病苗的方法；掌握莖尖培養(yǎng)的種類和操作步驟；掌握莖段培養(yǎng)中材料的選擇、處理及培養(yǎng)基的調(diào)整；123第一節(jié)草莓的組織培養(yǎng)第二節(jié)葡萄的組織培養(yǎng)第三節(jié)無(wú)花果的組織培養(yǎng)第一節(jié)草莓的組織培養(yǎng)視頻4-6-1草莓組培流程

草莓為重要的漿果植物，栽培分布很廣，其總產(chǎn)量在漿果類中僅次于葡萄，居世界第二位。草莓果實(shí)柔軟多汁，含豐富的糖、酸、礦物質(zhì)，維生素等。草莓可鮮食，也可加工成果醬，果酒等。其顏色鮮艷，是良好的配餐食品。一、形態(tài)特性和生物學(xué)特性

草莓繁殖容易，結(jié)果早，收效快。尤其是近年的促成栽培，利用塑料大棚、日光溫室，使草莓的成熟期大大縮短，從11月份到次年的6月份，都有新鮮的草莓上市，填補(bǔ)了水果的淡季市場(chǎng)。一、形態(tài)特性和生物學(xué)特性

草莓屬多年生草本植物，植株矮小，呈半平臥叢狀生長(zhǎng)，須根系，在土壤中分布較淺。草莓的莖呈短縮狀，分地上和地下部分，地上短縮莖節(jié)間極短，節(jié)密集，其上密集輪生葉片，葉腋部位著生腋芽。1.形態(tài)特性1.形態(tài)特性

地下短縮莖為多年生，是貯藏營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的器官，也可發(fā)育成不定根。匍匐莖是草莓的特殊地上莖，是其營(yíng)養(yǎng)繁殖器官，莖細(xì)，節(jié)間長(zhǎng)，一般座果后期發(fā)生。葉屬于基生三出復(fù)葉，呈螺旋狀排列，在當(dāng)年生新莖上總?cè)~柄部與新莖連接部分，有兩片托葉頂端膨大，圓錐形且肉質(zhì)化。1.形態(tài)特性

離生雄蕊20～35枚。雌蕊離生，呈螺旋狀排列在花托上，數(shù)目從60～600不等?；ㄐ?yàn)槎缇蹅慊ㄐ蛑炼嗥缇蹅慊ㄐ?。果?shí)為假果，主要是花托膨大肉質(zhì)化形成，瘦果以聚合果形成生于花托上。果實(shí)成熟時(shí)果肉紅色，粉紅色或白色。1.形態(tài)特性

草莓根系在土壤溫度達(dá)到2℃時(shí)開(kāi)始活動(dòng)，在10℃時(shí)開(kāi)始形成新根，根系生長(zhǎng)的最適溫度為15～20℃，秋季溫度降低到7～8℃時(shí)生長(zhǎng)減弱。春季氣溫達(dá)5℃時(shí)植株開(kāi)始萌芽，莖葉開(kāi)始生長(zhǎng)。草莓的根系分布較淺，加上植株矮小，葉片較大，因此蒸發(fā)量大。在整個(gè)生長(zhǎng)季節(jié)，葉片幾乎都在不斷地進(jìn)行老葉死亡、新葉發(fā)生的過(guò)程，葉片更新頻繁。2.生物學(xué)習(xí)性2.生物學(xué)習(xí)性

草莓是喜光植物但又比較耐陰。光照充足，植物生長(zhǎng)旺盛，葉片顏色深，花芽發(fā)育好，能獲得較高的產(chǎn)量。相反光照不良，植株生長(zhǎng)勢(shì)弱，葉柄及花序柄細(xì)。葉片色淺，花朵小，果實(shí)小，著色不良。2.生物學(xué)習(xí)性

這些特點(diǎn)，決定了草莓對(duì)水分要求較高，但在不同的生長(zhǎng)發(fā)育時(shí)期，對(duì)水分的要求不同。開(kāi)花期土壤的含水量應(yīng)不低于最大田間持水量的70%。果實(shí)膨大及成熟期土壤含水量應(yīng)不低于80%，而秋季9、10月份，土壤持水量達(dá)60%即可，草莓不耐澇，要求土壤既有充足的水分供應(yīng)，又要有良好的通氣條件。草莓對(duì)土壤適應(yīng)性強(qiáng)，在各種土壤上都能生長(zhǎng)。但由于是淺根性作物，要求肥沃、疏松、透水、通氣的中性微酸性或微堿性土壤。2.生物學(xué)習(xí)性1.熱處理脫毒將草莓植株在40～41℃溫度下處理4～6周，然后取微莖尖培養(yǎng)。二、草莓脫毒苗的培養(yǎng)二、草莓脫毒苗的培養(yǎng)

(1)初代培養(yǎng)：下午取草莓匍匐莖上的頂芽，用自來(lái)水流水沖洗2～4h，然后剝?nèi)ネ鈱尤~片，在無(wú)菌條件下，用0.5%次氯酸鈉溶液表面消毒5min，并不停地?cái)噭?dòng)促進(jìn)藥液的滲透。在無(wú)菌條件和解剖顯微鏡下剝?nèi)∏o尖分生組織，以帶有一個(gè)葉原基的莖尖為度。0.2mm的莖尖無(wú)病毒率可達(dá)到100%，但接種后的成活率下降，并延長(zhǎng)培養(yǎng)時(shí)間。2.微莖尖脫毒2.微莖尖脫毒

莖尖分離后，迅速接入MS+BA0.25+NAA0.25或MS+BA0.5+NAA0.2培養(yǎng)基中。培養(yǎng)條件為22～25℃，光照16～18h，3000lx。經(jīng)2～3個(gè)月的培養(yǎng)，可生長(zhǎng)分化出芽叢。注意在低溫和短日照下，莖尖有可能進(jìn)入休眠，所以較高的溫度和充足的光照時(shí)間必須保證。2.微莖尖脫毒

(2)繼代培養(yǎng)

把芽叢割成芽叢小塊，轉(zhuǎn)入MS+BA0.5+NAA0.01培養(yǎng)基中,待苗長(zhǎng)大到1～2cm時(shí)，可將芽叢小塊分成單株，再轉(zhuǎn)入前述的分化培養(yǎng)基中，又會(huì)重復(fù)上述過(guò)程，達(dá)到擴(kuò)大繁殖的目的。2.微莖尖脫毒(3)生根培養(yǎng)

1/2MS+IBA0.1生根。

(4)馴化用鑷子把草莓苗從試管瓶中取出，洗掉根系附帶瓊脂培養(yǎng)基。事先備好8×8cm或6×6cm的塑料營(yíng)養(yǎng)缽，內(nèi)裝等量的腐殖土和河砂。栽前壓實(shí)，澆透水，用竹簽在缽中央打一小孔，將試管苗插入其中，壓實(shí)苗基部周圍基質(zhì)，栽后輕澆薄水，以利幼苗基部和基質(zhì)密合。要“深栽淺埋”，即根要深栽、根莖略高于地面。2.微莖尖脫毒

栽后的試管苗要培養(yǎng)在濕度較大的空間內(nèi)，一般加設(shè)小拱棚保濕，并經(jīng)常澆水，以增加棚內(nèi)濕度，以見(jiàn)到塑料薄膜內(nèi)表面分布均勻的小水珠為宜。約過(guò)7～10d后。當(dāng)檢查有一定的根系生出，可逐漸降低濕度和土壤含水量，進(jìn)入正常幼苗的生長(zhǎng)發(fā)育管理階段。2.微莖尖脫毒

花藥培養(yǎng)操作簡(jiǎn)單，因經(jīng)愈傷組織途徑，再分化得到的即為無(wú)病毒苗，所以可免去病毒鑒定工作。3．花藥培養(yǎng)

（1）取材與培養(yǎng)取花粉發(fā)育單核期的花蕾，置于潔凈培養(yǎng)皿中，內(nèi)放一層濾紙，滴蒸餾水?dāng)?shù)滴保濕。將處理放入3～4℃冰箱中低溫保存3～4d。經(jīng)預(yù)處理的花蕾先在70%酒精中浸泡半分鐘，取出放入新配制的飽和漂白粉上清液中消毒10min，用無(wú)菌水沖洗3次。然后在超凈工作臺(tái)上剝?nèi)』ㄋ?，立即接種?；ǚ郯l(fā)育時(shí)期可采用醋酸洋紅壓片鑒定?；ㄋ幣囵B(yǎng)

培養(yǎng)基為MS+2，4-D0.4+IAA2。去分化階段培養(yǎng)條件為24～26℃，10h/d，1500lx,20d后可產(chǎn)生乳白色的愈傷組織。（1）取材與培養(yǎng)

（2）植株分化將誘導(dǎo)出的花藥愈傷組織轉(zhuǎn)移到1/2MS基本培養(yǎng)基，添加GA0.5，BA0.5和三十烷醇4。愈傷組織經(jīng)培養(yǎng)后很快轉(zhuǎn)綠，以后微帶淡紫紅色，15d后在表面分化出半球形小突起，轉(zhuǎn)為綠色。20d后分化出幼葉、幼莖，并有不少突起物，以后陸續(xù)分化出新梢。（2）植株分化

草莓花藥培養(yǎng)得到的為無(wú)病毒苗，而用生長(zhǎng)點(diǎn)培養(yǎng)得到的植株，則必須經(jīng)過(guò)病毒鑒定，確定其不帶病毒，才可以大量繁殖，用于生產(chǎn)。四、草莓無(wú)病毒苗的鑒定四、草莓無(wú)病毒苗的鑒定

草莓病毒主要有四種，為斑駁病毒，皺葉病毒，脈結(jié)病毒和輕型黃邊病毒。因草莓的病毒通過(guò)汁液接種不感染，所以通常采用小葉嫁接法來(lái)進(jìn)行鑒定。1.草莓病毒的種類1.草莓病毒的種類

首先從被鑒定的草莓采集長(zhǎng)成不久的新葉，除去兩邊的小葉，中央的小葉帶1～1.5cm的葉柄，把它削成楔形作接穗。而指示植物則除去中間的小葉，在葉柄的中央用刀切入1～1.5cm，再插入接穗，用線把接合部位包扎好。為了防止干燥，在接合部位涂上少量的凡士林。為保證成活，在2周內(nèi)，可罩上塑料袋，置于半見(jiàn)光的場(chǎng)所。約經(jīng)2周時(shí)間，撤去塑料袋。若帶有病毒，嫁接后1～2個(gè)月，在新展開(kāi)的葉、匍匐莖或老葉上會(huì)出現(xiàn)病癥。1.草莓病毒的種類指示植物待鑒定植物病毒鑒定示意圖指示植物嫁接后的植物接穗病毒鑒定示意圖

1.防止蚜蟲(chóng)的危害草莓無(wú)病毒苗的繁殖重要的是要防止無(wú)病毒苗的再度污染。由于草莓病毒主要是蚜蟲(chóng)傳播的，所以要搞好防蚜蟲(chóng)工作。草莓病毒通過(guò)蚜蟲(chóng)吸吮汁液而得到傳播，短時(shí)間即可完成。防治時(shí)可使用馬拉松乳劑，氧化樂(lè)果乳劑等接觸殺蟲(chóng)劑，防治期5~6月，9～10月，特別是9～10月一次，可防止蚜蟲(chóng)的越冬。為保證種苗的無(wú)病毒，在原種種苗生產(chǎn)階段，應(yīng)在隔離網(wǎng)室中進(jìn)行。傳播草莓病毒的蚜蟲(chóng)較小，可以通過(guò)大于1mm網(wǎng)眼，故應(yīng)采用0.4～0.5mm大小的規(guī)格，其中以300號(hào)防蟲(chóng)網(wǎng)為好。五、草莓無(wú)病毒苗的繁殖和利用

2．繁殖程序及提高繁殖率的措施草莓無(wú)病毒苗的繁殖程序可分五步，包括：脫病毒鑒定生產(chǎn)出無(wú)毒苗、原種種苗培養(yǎng)、原種種苗繁殖、良種種苗繁殖，生產(chǎn)用苗繁殖和栽培苗繁殖，前四步在隔離室中進(jìn)行，后一步在露地進(jìn)行。為提高無(wú)病毒母株的繁殖株數(shù)可采用赤霉素處理和摘蕾的方法。在5月上旬和6月上旬分兩次進(jìn)行。摘蕾可減輕母株的營(yíng)養(yǎng)負(fù)擔(dān)，促進(jìn)匍匐莖的大量發(fā)生，田間地每一株可繁殖150~200株。五、草莓無(wú)病毒苗的繁殖和利用第二節(jié)葡萄的組織培養(yǎng)組培苗葡萄的組培苗

葡萄在全世界的果品生產(chǎn)中，產(chǎn)量及栽培面積一直居于首位。其果實(shí)除作為鮮果食用外，主要用于釀酒，還可制成葡萄汁、葡萄干和罐頭等加工品。葡萄不僅味美可口，而且營(yíng)養(yǎng)價(jià)值較高。成熟的漿果中含有15%～25%的葡萄糖和果糖以及多種對(duì)人體有益的礦物質(zhì)和維生素。一、形態(tài)特征和生物學(xué)習(xí)性一、形態(tài)特征和生物學(xué)習(xí)性

(1)形態(tài)特性葡萄屬落葉木質(zhì)藤本植物，葡萄地上部分的莖細(xì)長(zhǎng)柔弱，髓部較大，組織較疏松。節(jié)上具有卷須，使新梢可以纏繞其他樹(shù)木或支架上向上攀援。葉近圓型或卵型，3～5裂，基部心形。圓錐花序。一、形態(tài)特征和生物學(xué)習(xí)性

(2)生物學(xué)習(xí)性：葡萄是深根性作物，大多數(shù)情況下，根系垂直分布最密集的范圍，是在20～80cm的深度內(nèi)，但在不同的栽培管理?xiàng)l件下，根系的分布也將隨著發(fā)生變化。葡萄的根富含肉質(zhì)，髓射線發(fā)達(dá)，能貯藏大量的有機(jī)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，如糖、蛋白質(zhì)和單寧等。葡萄的枝蔓上很容易產(chǎn)生不定根，故在生產(chǎn)上多采用扦插法繁殖。在大氣潮濕的情況下，枝蔓上往往長(zhǎng)出氣生根。葡萄原產(chǎn)于溫帶地區(qū)，不太抗寒。葡萄的根系抗寒力很弱，大部分歐洲種葡萄的根系在－5～7℃時(shí)即受凍，某些美洲種能忍受－11～12℃左右的低溫。一、形態(tài)特征和生物學(xué)習(xí)性

1.選材接種從田間生長(zhǎng)旺盛的葡萄新梢頂端取1～2㎝的莖尖。除去幼葉后在5%次氯酸鈉溶液中浸泡2～3min，消毒滅菌，以后用無(wú)菌水沖洗3次，再在0.1%升汞溶液中浸泡約2min，以后用無(wú)菌水沖洗4次。在無(wú)菌條件下分離出約2㎜長(zhǎng)的莖尖，接種到培養(yǎng)基上。二、葡萄的組織培養(yǎng)二、葡萄的組織培養(yǎng)2.培養(yǎng)基葡萄莖尖分化培養(yǎng)基以MS培養(yǎng)基（無(wú)機(jī)鹽減半為好），再添加BA1～2，NAA0.01，LH100，蔗糖2%，瓊脂0.6%。二、葡萄的組織培養(yǎng)3.莖尖的分化葡萄1～2㎜莖尖接種后成活率較高，接種成活的莖尖1個(gè)月左右開(kāi)始分化幼葉和側(cè)芽，2個(gè)月左右，由于側(cè)芽的不斷增生，形成芽叢。由于不同品種對(duì)BA和NAA的反應(yīng)不同，故生長(zhǎng)有明顯區(qū)別，巨峰、大粒白香蕉、赤霞珠等品種，由于頂端優(yōu)勢(shì)強(qiáng)，側(cè)芽生長(zhǎng)勢(shì)弱，故增殖率低，但成苗率高；白羽、貴人香等大多數(shù)品種側(cè)芽分生能力強(qiáng)，可在幼莖上多次分枝，故成苗率低。二、葡萄的組織培養(yǎng)

4.莖尖苗的生長(zhǎng)在莖尖分化培養(yǎng)中產(chǎn)生的成苗率低和成苗困難，密集生長(zhǎng)的芽叢，可將分化培養(yǎng)基中的BA濃度減低至0.5，同時(shí)添加GA30.2，則經(jīng)1個(gè)月的培養(yǎng)，就可長(zhǎng)成2~3㎝高的幼莖。此外黑暗處理對(duì)幼莖的伸成，提高成苗率，也有明顯的效果。二、葡萄的組織培養(yǎng)

5、生根與移栽切取2～3cm的莖尖苗，接種到MS+IAA0.4+NAA0.05培養(yǎng)基中，進(jìn)行生根培養(yǎng)，1～2周后幼苗開(kāi)始生根，1個(gè)月形成完整的根系，同時(shí)具備5～6片新葉。移栽時(shí)洗去根上的培養(yǎng)基，栽到蛭石基質(zhì)內(nèi)，使根系具有良好的通氣條件，蓋上塑料薄膜，經(jīng)7～10d鍛煉適應(yīng)后可去掉，移栽成活率在90%左右。二、葡萄的組織培養(yǎng)

提高葡萄試管苗移栽成活率要注意：1、幼苗生長(zhǎng)要健壯；2、要保持空氣濕度；3、根際通氣良好；4、要盡量減少雜菌污染；5、澆灌的溶液濃度不能過(guò)高。二、葡萄的組織培養(yǎng)

葡萄受到26種病毒的危害。由于病毒的危害，葡萄的長(zhǎng)勢(shì)減弱，產(chǎn)量降低，果實(shí)的糖分含量減少，風(fēng)味變劣。葡萄卷葉病是危害最大的病毒病，在不同品種上表現(xiàn)不同，但多數(shù)葉片變紅，自基部起向內(nèi)卷，似革質(zhì)增厚，粗糙易脆；有的葉脈綠色，葉肉黃色；有的品種則表現(xiàn)矮化。此病可減產(chǎn)10～50%，造成果實(shí)糖分含量降低，成熟期推遲2周，紫葡萄果色變綠?，F(xiàn)在已廣泛用莖尖組織培養(yǎng)和熱處理結(jié)合的方法來(lái)培育葡萄無(wú)病毒苗。莖尖脫毒的方法也兼有短期大量繁殖的作用，所以應(yīng)用上具有很大的意義。三、葡萄無(wú)病毒苗的培養(yǎng)1、熱處理理脫毒

2、組織培養(yǎng)脫毒技術(shù)從被病毒感染的植株上取材，在5℃下冷藏保存。以后在25℃，相對(duì)濕度80%，16h的長(zhǎng)日照條件下水培。再?gòu)拈L(zhǎng)出新芽經(jīng)消毒后切取莖尖進(jìn)行培養(yǎng)，大小約0.2～0.3mm（帶一個(gè)葉原基）。實(shí)驗(yàn)結(jié)果以1/2MS，添加NAA0.1，BA1.0，Kt0.5，腺嘌呤4.0，蔗糖30g/L，瓊脂6.0，pH5.8為好。三、葡萄無(wú)病毒苗的培養(yǎng)

3、無(wú)病毒苗的大量繁殖處于小葉展開(kāi)期的材料，莖葉常集中在一起，成為叢狀，可以一個(gè)個(gè)進(jìn)行分離，再接種到1/2MS培養(yǎng)基上，添加IAA0.2，BA1，KT0.6，腺嘌呤4.0，蔗糖15g/L的培養(yǎng)基，即可使小葉展開(kāi)、伸長(zhǎng)，得到植株。這樣反復(fù)繼代培養(yǎng)，可繁殖得到大量的無(wú)病毒苗。三、葡萄無(wú)病毒苗的培養(yǎng)第三節(jié)無(wú)花果的組織培養(yǎng)第三節(jié)無(wú)花果的組織培養(yǎng)新疆無(wú)花果無(wú)花果圖無(wú)花果圖1、形態(tài)特征無(wú)花果為?？?、無(wú)花果屬的落小喬木，是一種亞熱帶果樹(shù)，葉掌狀3～5裂，大而粗糙，背面被柔毛?；▎涡?，隱于囊狀總花花托內(nèi)，果實(shí)由總花托和其他花器官組成，呈扁圓狀或卵形，成熟后頂端開(kāi)裂，肉質(zhì)柔軟，味甜。具有觀賞和藥用兼?zhèn)涞膬r(jià)值。一、特性和生物學(xué)習(xí)性一、特性和生物學(xué)習(xí)性2、生物學(xué)特性用無(wú)性繁殖法繁殖的無(wú)花果，通常于栽植后2～3年開(kāi)始結(jié)果。6～7年進(jìn)入盛果期。以后樹(shù)冠不斷擴(kuò)大，產(chǎn)量逐漸增長(zhǎng)，經(jīng)濟(jì)年限可延續(xù)40～70年，甚至100年。無(wú)花果的生長(zhǎng)勢(shì)很強(qiáng)。幼樹(shù)的新梢或徒長(zhǎng)枝年生長(zhǎng)量可達(dá)到2m以上。無(wú)花果不耐寒，冬季溫度達(dá)-12℃時(shí)新梢頂端就開(kāi)始受凍死亡。無(wú)花果能耐較高的溫度而不致受害。一、特性和生物學(xué)習(xí)性

由于無(wú)花果扦插繁殖成活率低，用帶腋芽的莖段培養(yǎng)成完整植株，可以為大量繁殖提供途徑。無(wú)花果繁殖的方法是將采來(lái)的健壯的嫩莖削去大葉片，留下帶腋芽的莖段，切成3～4cm長(zhǎng)的小段，用流水沖洗3h,以清除表面污染物。然后放入75%酒精中，再用0.1%氯化汞消毒7～10分鐘，最后用無(wú)菌水沖洗4～5次，在無(wú)菌條件下將莖段橫切成長(zhǎng)約1cm，按原生長(zhǎng)方向接種到MS+BA0.5～1.0長(zhǎng)芽培養(yǎng)基中。二．無(wú)花果的莖段培養(yǎng)二．無(wú)花果的莖段培養(yǎng)8天后外植體接觸培養(yǎng)基的一端切口周圍長(zhǎng)出嫩綠色、質(zhì)地緊密的愈傷組織，同時(shí)腋芽展開(kāi)，愈傷組織和腋芽的誘導(dǎo)率均為100%。叢生芽增殖培養(yǎng)基MS+BA1～2+NAA0.1-0.2中。腋芽萌生成綠色簇生狀，每個(gè)腋芽上可生出15～28個(gè)芽叢，逐漸長(zhǎng)成苗叢。當(dāng)一部分芽長(zhǎng)高至2～3cm時(shí)，切取單苗轉(zhuǎn)移到生根培養(yǎng)基上MS+NAA0.2上，11天左右開(kāi)始生根。20d左右長(zhǎng)成具有根系的完整植株，這時(shí)可取出移栽，成活率達(dá)98%。二．無(wú)花果的莖段培養(yǎng)

培養(yǎng)溫度23～31℃，12～14h/d，光照強(qiáng)度為1700～2400LX左右。若要繼代培養(yǎng)，只需將小苗剪下，用莖尖或帶腋芽的莖段接種到叢生芽增殖培養(yǎng)基上，即可得到以上的結(jié)果。二．無(wú)花果的莖段培養(yǎng)簡(jiǎn)述草莓微莖尖培養(yǎng)的大致過(guò)程。簡(jiǎn)述莖尖培養(yǎng)的種類和操作步驟。簡(jiǎn)述莖段培養(yǎng)中材料的選擇、處理及培養(yǎng)基的調(diào)整

123Theend!任務(wù)一器官培養(yǎng)（一）莖段培養(yǎng)任務(wù)二器官培養(yǎng)（二）植物的再生培養(yǎng)任務(wù)三培養(yǎng)物的不良表現(xiàn)及改進(jìn)措施任務(wù)四花卉的組織培養(yǎng)任務(wù)五水果作物的組織培養(yǎng)任務(wù)六植物液體培養(yǎng)常見(jiàn)植物組配方法與易發(fā)問(wèn)題處理項(xiàng)目四常見(jiàn)植物組培方法與易發(fā)問(wèn)題的處理任務(wù)六植物的液體培養(yǎng)

一般掌握液體培養(yǎng)基與固體培養(yǎng)基的區(qū)別；掌握液體培養(yǎng)基的配制方法及流程；

掌握馬鈴薯莖段液體接種的流程及要點(diǎn)。知識(shí)目標(biāo)123能夠根據(jù)不同植物及種類選擇液體培養(yǎng)；能夠根據(jù)不同的植物器官及器官狀態(tài)，進(jìn)行液體培養(yǎng)；會(huì)通過(guò)觀察試管苗的長(zhǎng)勢(shì)，大體判斷采取何種措施改善培養(yǎng)條件；熟練液體培養(yǎng)組培苗的轉(zhuǎn)接操作流程；熟練各種試管苗繼代培養(yǎng)過(guò)程中的切割方式與技術(shù)；技能目標(biāo)12345學(xué)習(xí)提示多動(dòng)手，勤實(shí)踐；多比較，多聯(lián)想，勤歸納；手、口、腦并用，學(xué)做合一。理論閱讀

植物液體培養(yǎng)主要在植物細(xì)胞培養(yǎng)中應(yīng)用廣泛，主要是離體條件下將愈傷組織或其他易分散的組織置于液體培養(yǎng)基中，將組織振蕩分散成游離的懸浮細(xì)胞，通過(guò)繼代培養(yǎng)使細(xì)胞增殖來(lái)獲得大量細(xì)胞群體。液體培養(yǎng)可分為靜止培養(yǎng)和振蕩培養(yǎng)等兩類。靜止培養(yǎng)不需要任何設(shè)備，適合于某些原生質(zhì)體和輕質(zhì)植物莖段的培養(yǎng)。振蕩培養(yǎng)需要搖床或轉(zhuǎn)床等設(shè)備使培養(yǎng)物和培養(yǎng)基保持充分混和以利于氣體交換。

液體培養(yǎng)有以下優(yōu)點(diǎn)：（1）增加培養(yǎng)細(xì)胞與培養(yǎng)液的接觸面，改善營(yíng)養(yǎng)供應(yīng)；（2）可帶走培養(yǎng)物產(chǎn)生的有害代謝產(chǎn)物，避免有害代謝產(chǎn)物局部濃度過(guò)高等問(wèn)題；（3）保證氧的充分供給。所以，液體培養(yǎng)的生長(zhǎng)條件比固體培養(yǎng)有很大的改善。實(shí)際應(yīng)用

植物莖段的液體培養(yǎng)基同固體培養(yǎng)基的種類及成分大體一致，唯一不同在于固體培養(yǎng)基含有瓊脂等作為支撐物，液體培養(yǎng)及不含瓊脂等。

第一節(jié)液體培養(yǎng)基的配制一、根無(wú)性繁殖系的建立1.外植體

根的培養(yǎng)材料一般來(lái)自無(wú)菌種子發(fā)芽產(chǎn)生的幼根或植株根系經(jīng)滅菌處理后的切段。2.根無(wú)性繁殖系的建立

將種子進(jìn)行表面消毒，在無(wú)菌條件下萌發(fā)，待根伸長(zhǎng)后從根尖一端切取長(zhǎng)1.2cm的根尖（或植株的根系經(jīng)表面滅菌后）接種于培養(yǎng)基中。這些根的培養(yǎng)物生長(zhǎng)甚快，幾天后發(fā)育出側(cè)根。待側(cè)根生長(zhǎng)約一周后，即切取側(cè)根的根尖進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)，它們又迅速生長(zhǎng)并長(zhǎng)出側(cè)根，又可切下進(jìn)行培養(yǎng)，如此反復(fù)，就可得到從單個(gè)根尖衍生而來(lái)的離體根的無(wú)性繁殖系。這種根可用來(lái)進(jìn)行根系生理生化和代謝方面的實(shí)驗(yàn)研究。油棕根培養(yǎng)（引自劉進(jìn)平，2005）二、培養(yǎng)方法一、植株再生培養(yǎng)根的離體培養(yǎng)也可以用來(lái)再生植株。第一步誘導(dǎo)形成愈傷組織；第二步在再分化培養(yǎng)基上誘導(dǎo)芽的分化，在愈傷組織上分化成小植株。

需要注意的是，愈傷組織如果先分化形成根則往往抑制芽的形成。再生培養(yǎng)流程再生培養(yǎng)視頻

視頻4-1-1再生培養(yǎng)

二、固氮培養(yǎng)

通過(guò)分離和培養(yǎng)具有固氮作用的根瘤菌，接種到禾谷類等作物的試管苗根系中，可以實(shí)現(xiàn)谷物直接利用生物固氮的捷徑。通過(guò)選擇有效的適當(dāng)濃度的誘瘤劑誘導(dǎo)根瘤菌侵入試管苗根部結(jié)瘤固氮，固氮菌接種時(shí)要給根系創(chuàng)造傷口，以利于根瘤菌的侵入。接種根瘤菌形成的根瘤具有一定的固氮活性并向宿主提供氮素，能促進(jìn)植株生長(zhǎng)和氮營(yíng)養(yǎng)的改善，無(wú)論在株高、鮮重和葉綠素含量都有提高。

二、培養(yǎng)方法三、影響因素1.植物種類2.培養(yǎng)基多為濃度低的White培養(yǎng)基，許多植物在1/2MS培養(yǎng)基上能生根。糖的使用濃度應(yīng)稍低，如玫瑰生根蔗糖為2%。3.生長(zhǎng)物質(zhì)培養(yǎng)基中添加適宜濃度的生長(zhǎng)素有利于根的形成和生長(zhǎng)，常用生長(zhǎng)素為IAA、NAA、IBA，濃度范圍一般為0.0-1.0mg/L。三、影響因素4.pH根的培養(yǎng)適宜的pH范圍為5.0~6.0，5.光照大多數(shù)人認(rèn)為，黑暗有利于根的形成。試管苗的生根一般無(wú)需考慮光照的影響，有時(shí)加一點(diǎn)活性炭可減弱光照，對(duì)植物的生根比較有利。6.溫度生根溫度一般控制在16~25℃。第二節(jié)莖尖培養(yǎng)

意義：莖尖不僅生長(zhǎng)速度快、繁殖率高、不易產(chǎn)生遺傳變異，而且是獲得無(wú)病毒苗木的有效途徑，故莖尖培養(yǎng)是植物組織培養(yǎng)最常用的試材之一。類型：莖尖培養(yǎng)分為微莖尖培養(yǎng)和普通莖尖培養(yǎng)。微莖尖指帶有1～2個(gè)葉原基的生長(zhǎng)錐，其長(zhǎng)度不超過(guò)0.5mm。普通莖尖指較大的莖尖（如幾mm到幾十mm）、芽尖及側(cè)芽。這里主要講普通莖尖培養(yǎng)。這種培養(yǎng)技術(shù)簡(jiǎn)單，操作方便，莖尖容易成活，成苗所需時(shí)間短。一、普通莖尖培養(yǎng)1.取材

挑選雜菌污染少，生長(zhǎng)不久的莖尖。木本植物可在取材前對(duì)莖尖噴幾次滅菌藥劑。以保證材料不帶或少帶雜菌。用于普通莖尖培養(yǎng)，可先從植物的莖、藤或匍匐枝上切取2cm以上的頂梢。莖尖取材示意圖視頻4-1-2外植體采集與處理視頻外植體采集與處理視頻

莖尖的解剖構(gòu)造（引自劉進(jìn)平，2005）一、普通莖尖培養(yǎng)2.滅菌將采到的莖尖切成0.5～1.0cm長(zhǎng)，并將大葉除去，休眠芽預(yù)先剝除鱗片。將莖尖置于流水沖洗2～4小時(shí)(視干凈程度），再在70%的酒精中處理10-30秒，然后在稀釋5～10倍的次氯酸鈉（商品次氯酸鈉為10%）中浸10～15分鐘，最后用無(wú)菌水沖洗3～4次，或者用0.1～0.2%的氯化汞滅菌5～10分鐘，無(wú)菌水沖洗5次以上。莖尖滅菌視頻4-1-3外植體滅菌外植體滅菌視頻一、普通莖尖培養(yǎng)

3.接種

為了減少污染，可在接種前再剝掉一些葉片，使莖尖為0.5cm左右大小。有些植物的莖尖由于多酚氧化酶的氧化作用而發(fā)生褐化，使培養(yǎng)基變褐，影響材料的成活。所以在接種時(shí)，不能用生銹的解剖刀，動(dòng)作要敏捷，隨切隨接，減少傷口在空氣中暴露的時(shí)間，也可配制1～5%Vc液，將切下的莖尖材料浸入處理一下。視頻4-1-4接種接種視頻一、普通莖尖培養(yǎng)

4.培養(yǎng)（1）培養(yǎng)基多數(shù)莖尖培養(yǎng)采用MS作為基本培養(yǎng)基或改良MS培養(yǎng)基。培養(yǎng)基中生長(zhǎng)素是必須的，如2,4-D，IAA，NAA等，一般用0.1mg/L左右，高于此濃度，往往產(chǎn)生畸變芽或形成愈傷組織。莖尖在培養(yǎng)過(guò)程中會(huì)出現(xiàn)生長(zhǎng)太慢、生長(zhǎng)太快和生長(zhǎng)正常等三種類型。

桑樹(shù)莖尖萌發(fā)

桑樹(shù)莖尖萌發(fā)

楊樹(shù)頂芽萌發(fā)成叢生芽楊樹(shù)頂芽萌發(fā)成叢生芽

一、普通莖尖培養(yǎng)

4.培養(yǎng)（2）初代培養(yǎng)

莖尖的初代培養(yǎng)主要是通過(guò)適宜的培養(yǎng)條件刺激頂芽和腋芽的生長(zhǎng)。外植體啟動(dòng)生長(zhǎng)的關(guān)鍵主要是培養(yǎng)基的激素配比與濃度，一般應(yīng)使用較高濃度的細(xì)胞分裂素和較低濃度的生長(zhǎng)素，解除頂端優(yōu)勢(shì)的抑制作用，生長(zhǎng)素濃度過(guò)高容易產(chǎn)生愈傷組織。視頻4-1-5初代培養(yǎng)初代培養(yǎng)視頻一、普通莖尖培養(yǎng)

4.培養(yǎng)

（3）繼代培養(yǎng)

莖尖長(zhǎng)成的新梢，可切成若干小段，轉(zhuǎn)入到增殖培養(yǎng)基中。長(zhǎng)大后又可切成小段，再轉(zhuǎn)入新培養(yǎng)基，這樣一代一代繼續(xù)下去，便建立和維持了莖尖無(wú)性繁殖系。繼代培養(yǎng)的激素濃度要降低或用MS0培養(yǎng)基。有時(shí)也可邊進(jìn)行繼代培養(yǎng)邊進(jìn)行誘導(dǎo)生根。取比較長(zhǎng)的新梢（如2cm以上）轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基，余下較短的新梢繼續(xù)進(jìn)行繼代培養(yǎng)。視頻4-1-6繼代培養(yǎng)繼代培養(yǎng)視頻一、普通莖尖培養(yǎng)

4.培養(yǎng)（4）誘導(dǎo)生根誘導(dǎo)生根多采用1/2MS培