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TechnicalSpecificationforPurityIdentificationofRice目前 范 附錄A（規(guī)范性附錄）標記引物信 附錄B（規(guī)范性附錄）DNA提取方 GB/T3543.4-1995GB/T3543.5-1995《農作物種子檢驗規(guī)程真實性和品種純度鑒定》第1號修改單GB/T20396-2006DNA分析方法》GB/T6682《分析實驗室用水規(guī)格和實驗方法》NY/T1433-2014SSR標記法》3術語和定義HybridSeedsPolymerasechainSimplesequencePolyacrylamidegel以聚丙烯酰胺凝膠作為支持介質的一種常用電泳技術。聚丙烯酰胺凝膠由單體丙烯酰胺和甲叉雙（本規(guī)程使用的引物全部來源于NY/T1433-2014水稻品種鑒定技術規(guī)程SSR標記法，詳見附錄1）、1×TE緩沖液（100mMTris-HCl、10mMEDTA，使用時稀釋至1×）、30PAGE母液（丙烯酰胺:甲叉雙丙烯酰胺=29:1，配置為m/V=30%的溶液）、10%過硫酸銨溶液（m/V=10%的過硫酸銨溶液）、5×TBE溶液（5×TBE溶液包含54g/LTris、27.2g/L硼酸、10mMEDTA，調pH至8.3）、1×TBE溶液（5×TBE溶液稀釋為1×作電泳緩沖液）、0.2%硝酸銀溶液（m/V=0.2%的硝酸銀溶液）、1.5%氫氧化鈉＋0.2%甲醛溶液（m/V=1.5%0.2%的甲醛）、1%瓊脂溶液（微波爐加DNA檢測按GB/T20396-2006規(guī)定的方法進行，具體如下：按GB/T3543.4-1995規(guī)定的方法培育幼苗，或直接采集水稻植株葉片100mg，置于2.0mL離心管中，PCRForwardForwardReverse94℃5min；9430s，5530s，72℃20sfor30cycles；72℃10min；10forever。密封，等待10-15min使瓊脂凝固。燒杯中依次加入30%PAGE母液15mL，5×TBE10mL，H2O25mL，攪拌均勻后加入TEMED50μL和10%過硫酸銨溶液500μL，混勻后迅速灌入兩塊玻璃板之間，并防止梳，取1μLPCR產物加入點樣孔中，并注意點DNA分子標量。180V恒壓下電泳1.5h左右后進行染色。銀溶液中進行染色，輕搖10m

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