《臨床組織學切片》課件

臨床組織學切片探索微觀世界的臨床之門課程概述課程目標掌握臨床組織學切片基本理論與技術內(nèi)容安排理論學習與實驗操作相結合學習要求認真完成實驗報告與課后練習組織學切片概述定義將生物組織制成的薄片標本，用于顯微鏡觀察歷史發(fā)展從19世紀顯微技術發(fā)展至現(xiàn)代數(shù)字病理學臨床意義疾病診斷、治療監(jiān)測和預后評估的金標準組織學切片的基本原理觀察顯微鏡下觀察組織細胞結構切片將組織制成極薄切片保存保持組織原有結構與形態(tài)組織固定固定的目的防止組織自溶保持細胞形態(tài)增強組織硬度常用固定劑10%福爾馬林戊二醛乙醇固定方法浸泡固定法灌注固定法冷凍固定法脫水過程70%乙醇初始脫水95%乙醇中度脫水100%乙醇完全脫水二甲苯透明化處理透明處理透明的目的脫除乙醇，使組織與石蠟相容增加組織透明度，便于觀察常用透明劑二甲苯甲苯氯仿操作要點浸泡時間適中，避免組織硬化及時轉(zhuǎn)入石蠟，防止透明劑揮發(fā)浸蠟和包埋轉(zhuǎn)入液體石蠟60℃石蠟浴滲透組織更換石蠟2-3次更換確保充分滲透放入包埋盒調(diào)整方位確保切面正確冷卻凝固形成石蠟塊便于切片切片設備介紹輪轉(zhuǎn)切片機適用于常規(guī)石蠟切片冰凍切片機快速診斷和特殊染色滑動切片機大面積和硬組織切片超薄切片機電鏡樣本超薄切片石蠟切片技術固定切片塊將石蠟塊牢固安裝到切片機調(diào)整刀片設置角度通常為5-15度旋轉(zhuǎn)切片均勻轉(zhuǎn)動手輪進行切片控制厚度組織學通常為3-5μm冰凍切片技術組織快速冷凍液氮或冷凍噴霧快速凍結冰凍室切片-20℃環(huán)境下進行切片染色和觀察快速染色法立即診斷切片的收集和展平切片收集用毛筆輕取切片移至水面溫水展平40-45℃溫水使切片展平載玻片粘附斜插載玻片將切片粘附烘干固定37℃烘箱烘干固定切片染色技術概述顯示細胞結構使細胞核和胞漿等結構可見鑒別組織成分區(qū)分不同組織和細胞類型顯示特殊物質(zhì)特異性顯示某些病理產(chǎn)物顯示病原體特殊染色顯示微生物HE染色染料染色結構顏色蘇木精細胞核藍紫色伊紅胞漿粉紅色伊紅膠原纖維粉紅色伊紅紅細胞橘紅色特殊染色技術（一）PAS染色檢測糖原和粘多糖真菌壁顯示紅紫色Masson染色膠原纖維顯藍色肌肉組織顯紅色應用范圍肝糖原檢測纖維化程度評估特殊染色技術（二）銀染色嗜銀纖維呈黑色腎小球基膜顯示清晰神經(jīng)纖維可見彈力纖維染色彈力纖維呈黑色其他組織呈紅色血管壁觀察清晰臨床意義腎臟疾病診斷肺氣腫評估血管病變觀察免疫組織化學染色抗原修復高溫或酶修復暴露抗原一抗孵育特異性抗體識別靶抗原二抗孵育標記二抗結合一抗顯色反應底物與酶反應產(chǎn)生有色物質(zhì)熒光原位雜交（FISH）探針設計熒光標記的特異性核酸探針DNA變性高溫使雙鏈DNA分離雜交反應探針與靶序列特異結合熒光檢測熒光顯微鏡觀察信號電子顯微鏡技術0.05μm分辨率可觀察細胞超微結構50nm切片厚度超薄切片的典型厚度10000X放大倍數(shù)可觀察細胞器細節(jié)數(shù)字病理技術遠程診斷專家遠程會診數(shù)據(jù)存儲數(shù)字切片長期保存3全切片掃描高分辨率數(shù)字化質(zhì)量控制切片質(zhì)量標準厚度均勻、無氣泡、染色清晰常見質(zhì)量問題皺褶、氣泡、染色不均改進措施規(guī)范操作流程、定期設備維護實驗室安全化學品安全甲醛、二甲苯等致癌物防護生物安全感染性樣本處理防護個人防護手套、口罩、防護服穿戴臨床應用：腫瘤診斷良性腫瘤特征邊界清晰分化良好核分裂少惡性腫瘤特征浸潤性生長異型性明顯核分裂多特殊染色輔助Ki-67增殖指數(shù)特異性標志物臨床應用：炎癥診斷急性炎癥中性粒細胞浸潤組織充血水腫1慢性炎癥淋巴細胞浸潤纖維組織增生2肉芽腫性炎上皮樣細胞聚集多核巨細胞形成3特殊類型炎癥壞死性炎癥纖維素性炎癥4臨床應用：代謝性疾病脂肪變性肝細胞內(nèi)脂滴油紅O染色陽性常見于脂肪肝淀粉樣變性剛果紅染色偏振光下呈蘋果綠色見于多器官糖原累積PAS染色陽性淀粉酶消化試驗常見于肝臟臨床應用：自身免疫性疾病1狼瘡性腎炎免疫復合物沉積I-V型病理分型2類風濕關節(jié)炎滑膜增生肥厚炎性細胞浸潤3干燥綜合征腺體淋巴細胞浸潤導管破壞臨床應用：神經(jīng)系統(tǒng)疾病阿爾茲海默病老年斑和神經(jīng)纖維纏結病毒性腦炎淋巴細胞浸潤和膠質(zhì)結節(jié)多發(fā)性硬化髓鞘脫失和軸突損傷臨床應用：心血管系統(tǒng)疾病心肌梗死纖維素樣壞死和中性粒細胞浸潤動脈粥樣硬化內(nèi)膜斑塊形成和鈣化心肌炎心肌纖維損傷和炎癥細胞浸潤臨床應用：肝臟疾病病毒性肝炎肝細胞氣球樣變和點灶性壞死酒精性肝病脂肪變和Mallory小體肝纖維化纖維間隔形成肝硬化假小葉形成和結節(jié)狀重建臨床應用：腎臟疾病膜性腎病基底膜增厚系膜增生性腎炎系膜細胞和基質(zhì)增多新月體性腎炎新月體形成臨床應用：皮膚疾病疾病主要組織學特征銀屑病表皮增厚，角化不全，Munro微膿腫濕疹海綿樣水腫，淋巴細胞浸潤天皰瘡棘層松解，表皮內(nèi)水皰基底細胞癌基底樣細胞巢，柵欄狀排列臨床應用：骨髓疾病白血病原始細胞增多正常造血抑制骨髓增生異常綜合征造血細胞發(fā)育異常環(huán)形鐵粒幼紅細胞多發(fā)性骨髓瘤異常漿細胞浸潤CD138染色陽性臨床應用：婦科疾病臨床應用：胃腸道疾病慢性萎縮性胃炎胃腺體減少，腸上皮化生潰瘍性結腸炎隱窩膿腫，黏膜層炎癥結直腸癌腺體異型，浸潤性生長臨床應用：呼吸系統(tǒng)疾病肺結核干酪樣壞死，郎漢斯巨細胞間質(zhì)性肺炎間質(zhì)纖維化，蜂窩狀改變肺腺癌腺樣結構，TTF-1常陽性臨床應用：內(nèi)分泌系統(tǒng)疾病甲狀腺乳頭狀癌乳頭狀結構，核溜核空甲狀腺濾泡腺瘤有包膜的濾泡結構Graves病濾泡上皮增高，膠質(zhì)減少甲狀腺炎淋巴細胞浸潤，濾泡破壞臨床應用：泌尿系統(tǒng)疾病膀胱尿路上皮癌乳頭狀或浸潤性生長分級為低級別和高級別CK20常呈陽性前列腺增生腺體和間質(zhì)增生無核異型基底細胞層完整前列腺癌小腺管浸潤生長Gleason評分系統(tǒng)基底細胞缺失臨床應用：骨骼肌肉系統(tǒng)疾病骨巨細胞瘤多核巨細胞和單核間質(zhì)細胞橫紋肌肉瘤肌管和橫紋，肌特異性標記陽性骨肉瘤惡性骨母細胞直接形成骨質(zhì)關節(jié)滑膜炎滑膜增厚，炎癥細胞浸潤臨床應用：傳染性疾病結核病干酪樣壞死，郎漢斯巨細胞真菌感染PAS或六胺銀染色顯示真菌寄生蟲病組織中可見蟲體或蟲卵臨床應用：兒科疾病腎母細胞瘤三相分化模式原始間葉細胞神經(jīng)母細胞瘤小圓藍細胞Homer-Wright花環(huán)兒童白血病骨髓原始細胞增多免疫表型分析臨床應用：老年病神經(jīng)退行性變神經(jīng)元丟失，老年斑形成心血管老化血管彈性下降，內(nèi)膜增厚骨質(zhì)疏松骨小梁稀疏變薄臨床應用：移植病理TT細胞介導排斥淋巴細胞浸潤管壁B抗體介導排斥C4d沉積血管內(nèi)皮ISHLT心臟移植排斥分級0R-3R四級評估分子病理技術DNA提取從石蠟組織中獲取DNAPCR擴增擴增特定基因靶點基因分型測序或雜交分析結果判讀確定突變或多態(tài)性人工智能在組織學診斷中的應用人工診斷準確率AI輔助診斷準確率三維組織重建技術連續(xù)切片采集獲取多層序列切片圖像獲取與配準每個切片拍攝并精確對齊三維重建專業(yè)軟件堆疊切片構建3D模型立體可視化交互式3D模型顯示活體組織成像技術多光子顯微鏡深層組織高分辨率成像光學相干斷層掃描非侵入性微結構成像光聲成像組織聲光反應顯示組織芯片技術區(qū)域選擇從供體蠟塊選擇代表性區(qū)域組織取樣使用打孔器提取組織柱陣列構建將組織柱按序排列于受體蠟塊單細胞測序技術1單細胞轉(zhuǎn)錄組分析單細胞基因表達譜2單細胞基因組檢測單細胞DNA變異組織細胞分離酶消化和單細胞懸液制備組織透明化技術組織工程與再生醫(yī)學支架材料生物降解高分子水凝膠種子細胞干細胞分化細胞組織學評估組織結構形成功能蛋白表達液體活檢技術循環(huán)腫瘤DNA循環(huán)腫瘤細胞外泌體血小板RNA其他組織代謝組學質(zhì)譜成像原位分析組織代謝物分布1氣相色譜-質(zhì)譜揮發(fā)性代謝物分析2液相色譜-質(zhì)譜極性代謝物與脂質(zhì)檢測3核磁共振代謝物結構鑒定4組織學在藥物研發(fā)中的應用30%藥效評估藥物靶點結合與功能變化40%毒性篩查組織損傷和器官毒性評估25%生物分布藥物在組織中的分布與代謝組織學在法醫(yī)學中的應用死亡時間估計組織自溶程度炎癥反應特征細胞變性階段損傷分析生前與死后損傷區(qū)分創(chuàng)傷時間推斷損傷原因判定中毒檢測特殊染色顯示毒物組織特異性損傷模式結合毒理學檢測組織學在考古學中的應用古代骨骼研究年齡、疾病和營養(yǎng)狀況分析木乃伊研究防腐技術與疾病歷史探索古DNA分析結合組織學樣本提取古代DNA組織學在動物研究中的應用動物模型研究領域組織學特點小鼠基因功能敲除基因表型分析大鼠毒理學組織毒性反應評估猴神經(jīng)科學腦結構與人類相似斑馬魚發(fā)育生物學透明胚胎實時觀察組織學教育的新方法虛擬顯微鏡數(shù)字切片在線交互學習VR/AR技術三維立體組織結構體驗2遠程教學實時共享顯微鏡圖像游戲化學習組織學識別與診斷模擬游戲組織學研究的倫理問題知情同意確?；颊?/p>