小麥粉及其制品中過(guò)氧化苯甲酰的測(cè)定 編制說(shuō)明

1《小麥粉及其制品中過(guò)氧化苯甲酰的測(cè)定》編制說(shuō)明準(zhǔn)（項(xiàng)目計(jì)劃編號(hào)：20233880-T-449）由河南省食品和鹽業(yè)檢驗(yàn)技術(shù)研究院（河南省糧油飼料產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)中心）作為第一起草單位牽頭起草，協(xié)作單位包括國(guó)家糧食和物資儲(chǔ)備局科學(xué)研究院、西藏自治區(qū)糧食局糧油中心化驗(yàn)室、上?？泼Z油食品質(zhì)量檢測(cè)有限公司、山東省糧油檢測(cè)中心、河南工業(yè)大學(xué)、廣東省糧食科學(xué)無(wú)過(guò)氧化苯甲酰，作為一種關(guān)鍵的食品添加劑，具備抑制酶的活性以避免蛋白質(zhì)的分解、以及促進(jìn)小麥粉熟化等特性，從而提高小我國(guó)小麥粉產(chǎn)品監(jiān)督檢驗(yàn)作出了很大的貢獻(xiàn)。但有大量行色譜標(biāo)準(zhǔn)方法存在著一些技術(shù)缺陷，影響了檢測(cè)結(jié)果2作組召開(kāi)第一次標(biāo)準(zhǔn)修訂線上工作會(huì)議，討論修改了標(biāo)準(zhǔn)修并進(jìn)行了方法學(xué)驗(yàn)證（包括檢測(cè)方法的線性范圍、定量限、檢出主要起草人為孫志遠(yuǎn)、王佳雅、丁云杰、路輝麗、高海軍、謝剛、彭星星、尹成華、王雅楠、蔣朋麗、李敏、任凌云、劉曉斌、朱雪慶、何詠怡。其中尹成華、孫志遠(yuǎn)、王佳雅等負(fù)責(zé)標(biāo)準(zhǔn)調(diào)研、研究方案設(shè)計(jì)、組織實(shí)施、標(biāo)準(zhǔn)文本的編寫(xiě)等工作，丁云杰、高海軍、謝剛等參與標(biāo)準(zhǔn)調(diào)研及研究方案的制定、標(biāo)準(zhǔn)文本的編寫(xiě)工作；路輝麗、彭星星、王雅楠等參與標(biāo)準(zhǔn)研究工作計(jì)劃的制定、實(shí)施、標(biāo)準(zhǔn)文本的編寫(xiě)等工作，其他起草人主要負(fù)責(zé)標(biāo)準(zhǔn)涉及到標(biāo)準(zhǔn)方法的驗(yàn)證、標(biāo)準(zhǔn)文本審核與技3進(jìn)行編制的，標(biāo)準(zhǔn)框架、結(jié)構(gòu)和內(nèi)容等方面均符合上述標(biāo)準(zhǔn)要求。本標(biāo)準(zhǔn)建立的方本標(biāo)準(zhǔn)在制定過(guò)程中遵循“科學(xué)性、適用性、規(guī)范發(fā)、條件優(yōu)化、性能考察等工作，并本文件描述了甲酰的氣相色譜法和液相色譜法。本文件適用于本標(biāo)準(zhǔn)氣相色譜方法原理為將試樣中的過(guò)氧化苯甲酰用硫代硫酸鈉還原生成苯甲酸。試樣中的苯甲酸經(jīng)提取凈化后，用氣相色譜儀測(cè)其含量，再折算成過(guò)氧化苯本標(biāo)準(zhǔn)液相色譜方法原理為過(guò)氧化苯甲酰經(jīng)甲醇提取，被碘化鉀還原生成苯甲1增加了小麥粉制品的測(cè)定，并增加了對(duì)應(yīng)的樣品制備方23將氣相色譜法作為第一法，液相色譜法作為第二法,取消4②氣相色譜法增加了毛細(xì)管柱色譜條件,液相色譜法增加4本標(biāo)準(zhǔn)方法的檢出限、定量限、正確度、精密度、回收率等方法學(xué)參數(shù)經(jīng)過(guò)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)和實(shí)驗(yàn)室間驗(yàn)證，符合GB5009.295－更是日常檢測(cè)試樣中過(guò)氧化苯甲酰使用較多的方法。在使用溫度的降低，試樣中苯甲酸檢測(cè)結(jié)果也會(huì)降低，不能反映樣為保證過(guò)氧化苯甲酰添加的均勻性，同時(shí)保證質(zhì)狀態(tài)存在，而不是主要以分解產(chǎn)物苯甲酸形式存在，本溶解，配成相應(yīng)濃度的溶液，測(cè)定添加時(shí)移取相應(yīng)當(dāng)量質(zhì)量物123456過(guò)氧化苯5物50苯甲酸50作環(huán)境溫度的降低而降低，而當(dāng)添加物為苯甲酸時(shí)，方法的回收率隨著溫度的降低基本上保持不變，均在85%以上，說(shuō)明原國(guó)標(biāo)方法中鐵粉與鹽酸反應(yīng)生成的氫對(duì)過(guò)氧化苯甲酰的還原能力不足，反應(yīng)受環(huán)境溫度影響較大；經(jīng)查資料表明，用吸熱反應(yīng),Kθ隨溫度的上升而增大，增加溫度對(duì)正向反應(yīng)有利；同時(shí)本反應(yīng)較慢，增加溫度也能增加反應(yīng)速率，但國(guó)標(biāo)的前處理中，反應(yīng)時(shí)間為放置過(guò)夜，再增加時(shí)長(zhǎng)會(huì)嚴(yán)重影響實(shí)驗(yàn)效率；這些進(jìn)一步說(shuō)明樣品中過(guò)氧化苯甲酰的殘留量會(huì)影響實(shí)驗(yàn)GB/T18415-2001第二篇?dú)庀嗌V法(Ⅱ)雖然提取時(shí)間短，但是色譜分析所進(jìn)樣品測(cè)試液中脂溶性雜質(zhì)太多，柱分離要求高，進(jìn)樣口、色譜柱極易受到污染，為了簡(jiǎn)化方法，減少不同萃取相之間的來(lái)回轉(zhuǎn)換帶來(lái)的損失，盡量采取一次萃取相的轉(zhuǎn)換，同時(shí)達(dá)到反應(yīng)、提取、凈化的效果。因此，直接用水相試劑提取還原615硫代硫酸鈉與過(guò)氧化苯甲酰已經(jīng)反應(yīng)完畢，表4不同反應(yīng)提取時(shí)間對(duì)過(guò)氧化苯甲酰回收率影響5在小麥粉過(guò)氧化苯甲酰的添加量為60.0mg/kg時(shí)對(duì)不同振蕩提取溫度（0℃、10℃、20℃、30℃、40℃、50℃、60℃、70℃)生成目標(biāo)物苯甲酸的峰面積進(jìn)行比動(dòng)均在±1%范圍內(nèi)，可視為沒(méi)有發(fā)生變化，但是當(dāng)溫度達(dá)到70℃時(shí)，目標(biāo)物峰面積這是因?yàn)楫?dāng)硫代硫酸鈉加熱到一定溫度時(shí)會(huì)發(fā)生分解反應(yīng)，在這個(gè)過(guò)程中，硫代硫會(huì)降低硫代硫酸鈉的濃度，影響過(guò)氧化苯甲酰生成苯甲酸。同時(shí)結(jié)果表明本方法不7受低溫環(huán)境的影響，低溫并不會(huì)減緩方法反應(yīng)的速率。因此本試驗(yàn)反應(yīng)提取溫度不宜超過(guò)70℃,室溫反應(yīng)提取即可。溫度/℃0―00-0.3-0.3分別收集不同基質(zhì)的典型性樣品空白圖譜、樣品加標(biāo)圖譜，以確定分析方法檢8a小麥粉樣品空白g濕面條樣品空白9近無(wú)雜峰出現(xiàn)，加標(biāo)樣品圖譜中苯甲酸峰型尖銳、對(duì)稱性好，附近無(wú)雜峰出現(xiàn)，說(shuō)信噪比S/N=10的添加濃度作為估算定量限。測(cè)定個(gè)以上進(jìn)行驗(yàn)證，當(dāng)目標(biāo)分析物的檢出概率不低于95%時(shí)定為檢出限；對(duì)于平行樣品，并進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析，若在該濃度的測(cè)定結(jié)果的正確度和精密度均滿足選取小麥粉空白基質(zhì)樣品，向其中添加過(guò)氧化苯甲酰，按照新方法對(duì)其中過(guò)氧小麥粉基質(zhì)中新方法的估算檢出限為0.25mg/kg，信噪比S/N=10時(shí)估算定量限為123456789的要求。由于目前國(guó)家取消了過(guò)氧化苯甲酰能作為食品添加粉及其制品中不得添加過(guò)氧化苯甲酰，若把前限過(guò)氧化苯甲酰作為面粉處理劑，在2007版食品添加劑衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定限量為從此過(guò)氧化苯甲酰不得再作為食品添加劑使用。因此，本文選擇高于前限量標(biāo)準(zhǔn)3量限，0.84mg/kg）已驗(yàn)證（詳見(jiàn)表7），本文則另外選定過(guò)氧化苯甲酰添加含量分樣品，測(cè)定其回收率，并以苯甲酸的峰面積作為縱坐標(biāo)，以苯甲酸的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，計(jì)算線性回歸方程及相關(guān)系數(shù)，以驗(yàn)證測(cè)定范圍內(nèi)的準(zhǔn)確性及質(zhì)量濃度跟峰注：過(guò)氧化苯甲酰添加系列濃度點(diǎn)：5mg/kg、10mg/kg、20mg/kg、50mg/kmg/kg可知，在四種常見(jiàn)小麥粉及其制品基質(zhì)中不同含量濃度的過(guò)氧化苯甲酰（定量限以本文采用標(biāo)準(zhǔn)添加樣品驗(yàn)證方法的正確度。在小麥粉、掛面、饅頭、濕面條空123456小麥粉濕面條在國(guó)標(biāo)文本草案平行測(cè)試結(jié)果誤差要求(≤10%）的范圍內(nèi)，同時(shí)說(shuō)明文本草案對(duì)實(shí)準(zhǔn)偏差（%）123456小麥粉00000000面0000式和其相同，苯甲酸標(biāo)準(zhǔn)使用液目標(biāo)物存在方式相同、濃度和其接近，因此，本文制的相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)溶液，按相同處理方式和色譜條件測(cè)定的峰面積進(jìn)行比對(duì)，苯甲酸標(biāo)在實(shí)際工作中我們可能會(huì)遇到樣品處理后不能及時(shí)上機(jī)檢測(cè)的情況，為此，我們考察了不同濃度樣品處理液和標(biāo)準(zhǔn)曲線前處理溶液在一定時(shí)間內(nèi)的穩(wěn)定情況，將不同濃度的小麥粉基質(zhì)樣品和標(biāo)準(zhǔn)曲線前處理液分成一式三份，密封于冰箱中冷藏保存，分別在0h、24h和48h進(jìn)行測(cè)定，測(cè)含量測(cè)定值相對(duì)0h/////////////////////////低00中0高0h時(shí)內(nèi)的變化范圍為-4.9%~1.4%，濃度越高，其峰面積越大，在48小時(shí)內(nèi)的變化范圍的為0%~1.5%，表明樣品提取液在48h冷藏條件下是穩(wěn)定的，由于現(xiàn)行國(guó)標(biāo)氣相法受實(shí)驗(yàn)環(huán)境溫度影響較大，也提醒我們對(duì)新修訂文本氣相來(lái)驗(yàn)證新修訂文本在不同環(huán)境溫度條件下的穩(wěn)定性及其產(chǎn)生影響的原因，統(tǒng)計(jì)結(jié)果過(guò)氧化苯甲酰50苯甲酸50苯甲?；蛘弑郊姿釙r(shí)，新修訂文本方法的回收率隨著溫度的降低基本上保持不變，硫酸鈉還原過(guò)氧化苯甲酰的能力不隨溫度發(fā)生變化，目標(biāo)物的萃取效率也不受環(huán)境（w%）碘化鉀水溶液，即可充分完成氧化反應(yīng)。過(guò)高的碘化鉀水溶液濃度，不但會(huì)嚴(yán)重減少色譜柱壽命，還會(huì)造成色譜峰對(duì)稱因子的降低。查閱大量文獻(xiàn)后，本起草），10g/LKI溶液a市售樣品干擾峰（流動(dòng)相：甲醇+乙酸銨=10:90）b樣品峰與干擾峰分離（流動(dòng)相：甲醇+乙b.標(biāo)準(zhǔn)曲線濃度的修改以小麥粉、掛面、饅頭、濕面條為基質(zhì)制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，將苯甲酸標(biāo)準(zhǔn)溶液配制以苯甲酸的峰面積作為縱坐標(biāo)，以苯甲酸的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸方程小麥粉、掛面、饅頭、濕面條由此得到回歸曲線方程分別為y=2.9132x+0.0106、y=2.0681x+0.1114、y=2.2信噪比S/N=10的添加濃度作為估算定量限。測(cè)定添個(gè)以上進(jìn)行驗(yàn)證，當(dāng)目標(biāo)分析物的檢出概率不低于95%時(shí)定為檢出限；對(duì)于平行樣品，并進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析，若在該濃度的測(cè)定結(jié)果的正確度和精密度均滿足選取小麥粉空白基質(zhì)樣品，向其中添加過(guò)氧化苯甲酰，按照方法對(duì)過(guò)氧化苯甲1234567896123456果果果123456789123456表19小麥粉添加過(guò)氧化苯甲酰標(biāo)準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)溶液加標(biāo)回收率和精表20小麥粉添加過(guò)氧化苯甲酰標(biāo)準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)溶液加標(biāo)回收率和精表21掛面添加過(guò)氧化苯甲酰標(biāo)準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)溶液加標(biāo)回收率表22掛面添加過(guò)氧化苯甲酰標(biāo)準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)溶液加標(biāo)回收率表23饅頭添加過(guò)氧化苯甲酰標(biāo)準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)溶液加標(biāo)回收率表24饅頭添加過(guò)氧化苯甲酰標(biāo)準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)溶液加標(biāo)回收率表25濕面條添加過(guò)氧化苯甲酰標(biāo)準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)溶液加標(biāo)回收率和精表26濕面條添加過(guò)氧化苯甲酰標(biāo)準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)溶液加標(biāo)回收率和精本方法目前已由5家實(shí)驗(yàn)室驗(yàn)證，見(jiàn)表27，實(shí)驗(yàn)室間聯(lián)合驗(yàn)證統(tǒng)計(jì)表，見(jiàn)表28-標(biāo)準(zhǔn)偏差RSDr＜10%，說(shuō)明本方法在各實(shí)驗(yàn)室的重復(fù)性良好；再現(xiàn)性相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差并且饅頭和濕面條測(cè)定結(jié)果不但能反映小麥制品的測(cè)定值果)值差))--------- 32439本標(biāo)準(zhǔn)共選取上?？泼Z油食品質(zhì)量檢測(cè)有限公司、山東省糧油檢測(cè)中心、鄭州市產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)檢測(cè)中心、河南工業(yè)大學(xué)質(zhì)量檢測(cè)中心、廣東省糧食科學(xué)研究所色譜法進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)室間驗(yàn)證。標(biāo)準(zhǔn)起草單位制備得到添加濃度分別為低、中和高三種濃度的添加小麥樣品、發(fā)酵面制品樣品（饅頭）、生干面制品（掛面），共計(jì)檢饅頭和濕面條測(cè)定結(jié)果（干基）與小麥粉測(cè)定結(jié)果（干基）相比較計(jì)算回收率，回群值，結(jié)果見(jiàn)表29-表31，重復(fù)性的變異系數(shù)小于10%，再現(xiàn)性變異系數(shù)小于15%，（折水分%）（折水（折水分%）/////////心////////////心//////43/////////223332///////2//1心////1//