診斷學實驗操作指導

診斷學實驗操作指導本指導將幫助您掌握診斷學實驗操作的基本技能和規(guī)范。通過系統(tǒng)學習，您將成為一名合格的醫(yī)學檢驗人員。請仔細閱讀每個實驗步驟，確保操作準確無誤，數(shù)據(jù)記錄完整。作者：課程介紹基本概念診斷學實驗是醫(yī)學診斷的基礎。它通過實驗方法獲取客觀數(shù)據(jù)，為臨床診斷提供科學依據(jù)。課程目標掌握常規(guī)檢驗操作技能。培養(yǎng)嚴謹實驗態(tài)度。建立臨床思維能力。提高實驗安全意識。評分標準操作規(guī)范性占40%。數(shù)據(jù)準確性占30%。記錄完整性占20%。實驗報告占10%。實驗室規(guī)則嚴格遵守安全規(guī)范。保持環(huán)境整潔。愛護儀器設備。實驗完成后及時清理。實驗室安全規(guī)范通用安全守則實驗前閱讀安全手冊。禁止飲食。保持通風良好。遵守操作規(guī)程。勿在無人監(jiān)督時操作。個人防護裝備必須穿戴實驗服。配戴防護眼鏡。使用一次性手套。處理危險物質(zhì)時使用口罩。危險品處理化學品按類別存放。生物樣本專用容器處理。廢液集中收集。濺出物立即處理。緊急應對熟記應急出口位置。掌握滅火器使用方法。了解洗眼器位置。發(fā)生意外立即報告?；A實驗器材介紹玻璃器皿試管：用于盛裝少量液體樣本燒杯：大容量液體混合和加熱移液管：精確量取液體容量瓶：配制精確濃度溶液電子設備離心機：分離混合物組分分析天平：精確稱量恒溫水浴鍋：控溫反應酸度計：精確測量pH值測量儀器比色皿：光度測定血球計數(shù)板：細胞計數(shù)溫度計：監(jiān)測溫度量筒：測量液體體積樣本采集基礎血液樣本采集選擇合適靜脈。消毒皮膚。綁扎止血帶。正確使用采血針。按順序采集不同試管。尿液樣本收集提供清潔容器。指導中段尿收集法。收集晨尿效果最佳。樣本應在2小時內(nèi)檢測。組織樣本保存立即置入固定液。保持適當液固比例。標記完整信息。避免樣本干燥。污染預防操作前徹底洗手。避免采樣容器開口長時間暴露。防止交叉污染。標本不合格應重新采集。血液樣本處理全血收集選擇適當抗凝劑試管。采血后立即輕輕顛倒混勻8-10次。禁止劇烈震蕩避免溶血。靜置時間血清分離需靜置30分鐘。讓血液自然凝固。避免振動。保持室溫。離心分離3000rpm離心10分鐘。確保離心機平衡。分離血清或血漿上層。避免紅細胞污染。分裝保存使用無菌吸管轉移。分裝至小管。密封保存。血清4℃保存不超過24小時。尿液檢查基礎物理性質(zhì)檢查觀察顏色、透明度。測量比重和pH值。記錄尿量。注意異常氣味。化學性質(zhì)檢查使用尿試紙條檢測。觀察蛋白質(zhì)、糖分、酮體含量。檢測尿膽原和膽紅素。記錄亞硝酸鹽情況。尿沉渣鏡檢1500rpm離心10分鐘。棄上清保留沉淀。涂片制備。低倍和高倍鏡下觀察。結果判讀對照參考值范圍。記錄異常細胞種類和數(shù)量。觀察結晶形態(tài)。分析臨床相關性。顯微鏡操作技術目鏡調(diào)節(jié)調(diào)整目鏡間距。旋轉屈光度調(diào)節(jié)環(huán)。確保兩眼視野一致。固定目鏡位置。低倍鏡觀察先用低倍鏡尋找目標。調(diào)節(jié)粗準焦螺旋。觀察視野整體情況。選擇感興趣區(qū)域。高倍鏡觀察轉換為高倍物鏡。使用細準焦螺旋。避免物鏡觸碰載玻片。調(diào)整光圈大小。油鏡使用滴加一滴浸油。緩慢轉動物鏡轉盤。防止氣泡產(chǎn)生。使用后清潔鏡頭。血液細胞計數(shù)細胞類型計數(shù)方法稀釋液計數(shù)區(qū)域正常參考值紅細胞手工法/儀器法生理鹽水中央25個小方格男:4.5-5.5×1012/L白細胞手工法/儀器法2%醋酸四角大方格4-10×10?/L血小板手工法/儀器法1%草酸銨中央25個小方格100-300×10?/L血液涂片制備與染色血液涂片制備要點：角度30°。滴血量適中。動作輕快均勻。涂片厚度適中。Wright染色步驟：空氣干燥。加緩沖液。輕輕吹氣混勻。水洗干凈。自然晾干。血細胞形態(tài)學檢查正常血細胞形態(tài)紅細胞呈雙凹圓盤狀。中央淡染。大小一致。白細胞核形各異。血小板呈紫色顆粒。異常紅細胞形態(tài)大小不等癥。形態(tài)異常。鐮刀形細胞。靶形紅細胞?？梢姾思t細胞。白細胞分類中性粒細胞：分葉核。嗜酸性粒細胞：橘紅色顆粒。淋巴細胞：核大胞漿少。單核細胞：最大白細胞。血液生化檢驗基礎結果分析對照參考值判斷。分析臨床意義。考慮干擾因素。質(zhì)量控制每日校準儀器。運行質(zhì)控品。繪制質(zhì)控圖。操作流程樣本預處理。儀器調(diào)試。試劑加入。數(shù)據(jù)讀取。原理掌握了解反應原理。熟悉儀器構造。掌握方法特點。血糖測定3.9-6.1正?？崭寡欠秶?mmol/L)空腹8小時后測定<7.8正常餐后2小時血糖(mmol/L)葡萄糖負荷后測定4.0-8.0糖化血紅蛋白參考范圍(%)反映近3個月血糖控制1-2%測定允許誤差范圍質(zhì)量控制要求血脂檢測肝功能檢查轉氨酶測定ALT、AST測定反映肝細胞損傷程度1膽紅素測定總膽紅素與直接膽紅素區(qū)分肝膽疾病類型蛋白測定白蛋白與球蛋白比例反映肝臟合成功能結果分析綜合多指標判斷肝功能狀態(tài)和疾病類型腎功能檢測尿素氮測定反映機體蛋白質(zhì)代謝和腎臟排泄功能。正常值為2.9-8.2mmol/L。升高提示腎功能不全。肌酐檢測穩(wěn)定反映腎小球濾過功能。男性53-106μmol/L，女性44-97μmol/L。受肌肉量影響較小。腎小球濾過率通過計算評估腎功能。eGFR=186×(Scr)-1.154×(年齡)-0.203。女性再×0.742。心肌酶學檢測肌酸激酶(CK)心肌、骨骼肌損傷標志物。心肌梗死后4-8小時開始升高。24-36小時達高峰。參考范圍：男50-310U/L，女40-200U/L。肌酸激酶同工酶(CK-MB)心肌特異性更高。AMI后3-6小時升高。12-24小時達峰值。參考范圍：0-24U/L，或總CK的0-6%。肌鈣蛋白(cTnI/cTnT)心肌損傷最敏感特異標志物。AMI后2-4小時升高。持續(xù)14天以上。參考范圍：cTnI<0.1ng/mL，cTnT<0.01ng/mL。免疫學檢驗基礎抗原抗體反應特異性結合是免疫檢測基礎檢測方法選擇根據(jù)敏感性和特異性需求選擇結果分析定性或定量判讀臨床意義血型鑒定血型紅細胞抗原血清抗體人群分布(%)A型A抗-B27B型B抗-A23AB型A、B無5O型無抗-A、抗-B45酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)包被抗原或抗體包被于固相載體加樣加入待測樣本結合特異性抗原抗體結合顯色加入底物顯色測定測定吸光度值免疫熒光技術直接免疫熒光(DIF)熒光素標記抗體直接與組織中抗原結合。操作簡單，步驟少。適用于檢測已知抗原。敏感性較低。背景熒光干擾較多。間接免疫熒光(IIF)非標記一抗與抗原結合，再用標記二抗檢測。敏感性高?？煞糯笮盘?。適用于多種抗原檢測。步驟稍復雜。分子診斷基礎核酸提取裂解細胞釋放核酸去除蛋白質(zhì)和脂質(zhì)沉淀純化DNA/RNA質(zhì)量控制檢測濃度純度PCR擴增設計特異性引物制備反應體系設置正確擴增程序陽性和陰性對照電泳分析準備適當濃度凝膠加樣并設置電壓染色顯示DNA條帶使用Marker判斷大小微生物學檢驗標本采集無菌條件采集。使用適當容器。避免污染。及時送檢。接種培養(yǎng)使用火焰滅菌接種環(huán)。選擇合適培養(yǎng)基。按劃線分離法接種。正確培養(yǎng)條件。菌落觀察記錄菌落形態(tài)。觀察大小、形狀、顏色。注意特殊性狀。進行計數(shù)。4鏡檢染色制備菌懸液。涂片干燥固定。進行染色。顯微鏡觀察形態(tài)。革蘭氏染色革蘭氏染色步驟：結晶紫染色1分鐘。碘液媒染1分鐘。酒精脫色15秒。復紅復染30秒。革蘭陽性菌：呈紫色。細胞壁肽聚糖層厚。革蘭陰性菌：呈紅色。脂質(zhì)含量高易脫色。藥敏試驗2紙片擴散法制備菌液并涂布。放置抗生素紙片。孵育18-24小時。測量抑菌圈直徑。對照標準判斷敏感性。微量稀釋法系列稀釋抗生素。加入標準菌液。孵育后觀察濁度。確定最低抑菌濃度(MIC)。結果判讀S(敏感)：適合臨床使用。I(中介)：增大劑量可能有效。R(耐藥)：無臨床治療價值。報告解讀考慮藥物體內(nèi)濃度。注意器官特異性。關注不良反應。優(yōu)先選擇窄譜抗生素。實驗結果記錄與分析1標準記錄格式記錄日期時間和操作者。使用統(tǒng)一模板。注明檢測方法和儀器。數(shù)據(jù)精確到要求位數(shù)。2數(shù)據(jù)整理分類匯總原始數(shù)據(jù)。計算平均值和標準差。繪制相關圖表。標注異常值并分析原因。3異常結果分析與正常值范圍比較?？紤]生理和病理因素。分析前分析、分析和后分析誤差。必要時重復檢驗。4報告撰寫使用規(guī)范術語?？陀^陳述結果。提供適當臨床解釋。標注異常值。及時簽發(fā)報告。質(zhì)量控制質(zhì)控值上限下限實驗室信息系統(tǒng)使用數(shù)據(jù)錄入正確輸入患者信息。掃描條碼識別樣本。錄入檢驗結果。標記異常值。結果審核檢查數(shù)據(jù)合理性。比對歷史結果。標記需復查項目。添加備注說明。報告發(fā)布審核后自動或手動發(fā)布。選擇報告格式。打印紙質(zhì)報告。電子簽名確認。實驗室錯